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沙门菌毒力基因spvB的原核表达及其多克隆抗体的制备
1
作者
燕婧
牛华
+2 位作者
李嫄渊
张跃华
黄瑞
《现代生物医学进展》
CAS
2016年第2期247-251,共5页
目的:构建沙门菌毒力基因spvB的原核表达载体,诱导表达纯化SpvB蛋白并以其为抗原免疫小鼠,制备多克隆抗体。方法:利用生物信息学软件对SpvB进行分析,选取抗原性较高、易表达的氨基酸序列作为克隆序列,以携带spvB基因的鼠伤寒沙门菌为模...
目的:构建沙门菌毒力基因spvB的原核表达载体,诱导表达纯化SpvB蛋白并以其为抗原免疫小鼠,制备多克隆抗体。方法:利用生物信息学软件对SpvB进行分析,选取抗原性较高、易表达的氨基酸序列作为克隆序列,以携带spvB基因的鼠伤寒沙门菌为模板,PCR扩增目的片段后与原核表达载体pET28a(+)连接;将质粒pET28a-SpvB转化大肠埃希菌BL21(DE3)后诱导表达并纯化。目的蛋白免疫小鼠,制备抗SpvB多克隆抗体,Western blot检测抗体特异性。结果:成功构建spvB原核表达载体,经IPTG诱导结果显示,重组蛋白表达且主要存在于包涵体中,将纯化后的蛋白免疫小鼠Western blot检测血清中抗体与SpvB特异性结合。结论:获得具有免疫原性的SpvB蛋白及其多克隆抗体,为进一步研究该基因的功能奠定基础。
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关键词
沙门菌
毒力基因spvb
原核表达
抗体
原文传递
鼠伤寒沙门菌spvB基因缺陷突变株的构建
被引量:
1
2
作者
邱桥成
叶颖
+3 位作者
储元元
廖莉
吴淑燕
黄瑞
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第12期180-183,共4页
高度保守的spvB基因,其编码产物具有ADP核糖基转移酶活性,是导致受染后细胞发生凋亡的重要毒力因子。为进一步研究该基因致病机制,构建了鼠伤寒沙门菌spvB基因缺陷突变株。根据GenBank鼠伤寒沙门菌spvB基因序列,用PrimerPremier 5.0设计...
高度保守的spvB基因,其编码产物具有ADP核糖基转移酶活性,是导致受染后细胞发生凋亡的重要毒力因子。为进一步研究该基因致病机制,构建了鼠伤寒沙门菌spvB基因缺陷突变株。根据GenBank鼠伤寒沙门菌spvB基因序列,用PrimerPremier 5.0设计PCR特异性引物,获得spvB基因缺陷性核苷酸片段后连接至自杀质粒PGMB151。将构建的自杀载体导入含有spvB基因的鼠伤寒沙门菌标准株SR-11中进行同源重组,PCR筛选缺陷突变株。经PCR和DNA序列测定,成功获得了spvB基因缺陷的鼠伤寒沙门菌突变株。
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关键词
鼠伤寒沙门菌
spvb
毒
力
基因
同源重组
基因
敲除
自杀质粒
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职称材料
题名
沙门菌毒力基因spvB的原核表达及其多克隆抗体的制备
1
作者
燕婧
牛华
李嫄渊
张跃华
黄瑞
机构
苏州大学医学部病原生物学系
出处
《现代生物医学进展》
CAS
2016年第2期247-251,共5页
基金
国家自然科学基金项目(81471572)
文摘
目的:构建沙门菌毒力基因spvB的原核表达载体,诱导表达纯化SpvB蛋白并以其为抗原免疫小鼠,制备多克隆抗体。方法:利用生物信息学软件对SpvB进行分析,选取抗原性较高、易表达的氨基酸序列作为克隆序列,以携带spvB基因的鼠伤寒沙门菌为模板,PCR扩增目的片段后与原核表达载体pET28a(+)连接;将质粒pET28a-SpvB转化大肠埃希菌BL21(DE3)后诱导表达并纯化。目的蛋白免疫小鼠,制备抗SpvB多克隆抗体,Western blot检测抗体特异性。结果:成功构建spvB原核表达载体,经IPTG诱导结果显示,重组蛋白表达且主要存在于包涵体中,将纯化后的蛋白免疫小鼠Western blot检测血清中抗体与SpvB特异性结合。结论:获得具有免疫原性的SpvB蛋白及其多克隆抗体,为进一步研究该基因的功能奠定基础。
关键词
沙门菌
毒力基因spvb
原核表达
抗体
Keywords
Salmonella
spvb
Prokaryotic expression
Antibody
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
R378.22 [医药卫生—病原生物学]
原文传递
题名
鼠伤寒沙门菌spvB基因缺陷突变株的构建
被引量:
1
2
作者
邱桥成
叶颖
储元元
廖莉
吴淑燕
黄瑞
机构
苏州大学医学部病原生物学系
苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第12期180-183,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目(30972768)
江苏省自然科学基金资助项目(L2134051511)
+1 种基金
江苏省青蓝工程(SR13400211)
高等学校博士学科点专项科研基金项目(20103201110009)
文摘
高度保守的spvB基因,其编码产物具有ADP核糖基转移酶活性,是导致受染后细胞发生凋亡的重要毒力因子。为进一步研究该基因致病机制,构建了鼠伤寒沙门菌spvB基因缺陷突变株。根据GenBank鼠伤寒沙门菌spvB基因序列,用PrimerPremier 5.0设计PCR特异性引物,获得spvB基因缺陷性核苷酸片段后连接至自杀质粒PGMB151。将构建的自杀载体导入含有spvB基因的鼠伤寒沙门菌标准株SR-11中进行同源重组,PCR筛选缺陷突变株。经PCR和DNA序列测定,成功获得了spvB基因缺陷的鼠伤寒沙门菌突变株。
关键词
鼠伤寒沙门菌
spvb
毒
力
基因
同源重组
基因
敲除
自杀质粒
Keywords
Salmonella typhimurium
spvb
gene Homologous recombination Gene deletion Suicide plasmid
分类号
S852.61 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
沙门菌毒力基因spvB的原核表达及其多克隆抗体的制备
燕婧
牛华
李嫄渊
张跃华
黄瑞
《现代生物医学进展》
CAS
2016
0
原文传递
2
鼠伤寒沙门菌spvB基因缺陷突变株的构建
邱桥成
叶颖
储元元
廖莉
吴淑燕
黄瑞
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2012
1
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职称材料
已选择
0
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参考文献
引证文献
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