血清以及基因分型技术在副猪嗜血杆菌流行病学和毒力鉴定中的研究进展

副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis,HPS）为猪上呼吸道中的一种共栖菌,只在特定条件下侵入机体引起严重的全身性疾病[1].区分临床中分离的HPS是“常驻菌”还是“致病菌”对HPS病的诊断和控制尤为重要.“常驻菌”或“致病菌”特性的分析需要利用血清学以及基因分型技术.分型技术的优劣取决于方法的鉴定能力、重复性、花费时间以及成本等.对细菌菌型的鉴定有着不同的应用,地方流行病学中用判定一次疫情暴发涉及的菌株数量,而全球流行病学则关注特定菌株与其他地区以及不同时间分离株间的关系.因此,地方流行病学需要确定疾病暴发的病原菌为一株还是多株引起,或者在持续感染情况下确定是否由一种强毒株引起感染.全球流行病学则通过研究不同地区菌株间关系,分析菌株的全球分布以及导致分布差异的原因[1].

蛋鸡非典型新城疫病原毒力鉴定

１９９７年３月下旬，上海市郊区某蛋鸡场３４周龄左右的罗曼蛋鸡群产蛋下降，我室通过临床调查、抗体测定、病毒分离与毒力鉴定，诊断为非典型新城疫。１概况上海市郊区某鸡场，６个鸡棚，间距５０ｍ。其中４号棚、６号棚各养罗曼蛋鸡４２００只（３５周龄）、１号棚５５...

中国大豆疫霉菌分布及毒力多样性研究

通过大豆疫霉根腐病发生的田间调查、从病株和土壤中分离大豆疫霉菌 ,对大豆疫霉菌在我国的分布进行了研究 ,结果表明 ,除东北地区外 ,我国黄淮流域和长江流域也存在大豆疫霉菌。应用 13个鉴别寄主 ,对来自不同地区的 83个大豆疫霉菌分离物进行毒力鉴定 ,证明我国大豆疫霉菌存在丰富的毒力多样性。与植株分离物相比 ,土壤分离物的毒力多样性程度更高。对不同地区来源分离物的毒力组成比较表明 ,长江流域分离物的毒力多样性最丰富 ,其次是黄淮流域 ,而东北地区分离物的毒力组成相对简单。

RT-PCR对新城疫病毒强弱毒株的快速鉴定

根据新城疫病毒(NDV)F蛋白基因结构的特点及强、弱毒株F蛋白基因裂解位点的序列差异设计了4条引物,并将其配成3对引物,采用RT-PCR试验对来自鸡和七彩山鸡的9株NDV野毒分离株,F48E8和LaSota 2株标准强、弱毒株进行了快速鉴定;并将RT-PCR鉴定结果与NDV常规致病性试验结果进行了比较。结果表明,RT-PCR试验能够快速将11个参试毒株区分为强毒株和弱毒株,其结果与传统致病性试验测定结果基本一致,该方法可以用于ND的快速诊断和强、弱毒株的快速鉴定。

应用质粒图谱分析大肠埃希氏菌毒力差异的研究

对 1株无致病性鸡源大肠埃希氏菌 (O2 1)和 5株已知毒力强弱的大肠埃希氏菌 (O2 、O1、X2 、14 8和O78)进行质粒图谱 (PP)分析。结果表明这 6个菌株属于不同的 6种质粒谱型 ,其毒力的强弱与其所携带质粒的数量和大小有关 ,但不同毒力株间也有少数几条相同大小的谱带。试验结果表明PP图谱法可作为大肠埃希氏菌分型和鉴别其毒力的间接分子生物学方法。

用PCR技术鉴定犬传染性肝炎病毒强、弱毒株的研究

根据Genebank中发表的犬传染性肝炎病毒 (ICHV)标准强毒株Glaxo和人工驯化的弱毒疫苗株CLL的保守序列间大小不同 ,按照引物设计的原则 ,设计合成了一对通用引物。该对引物可由ICHV强毒株扩增出 569bp的片段 ,而弱毒株可扩增出 2 4 4bp的片段。对PCR产物分别进行电泳、酶切和测序 ,证明PCR产物片段大小、酶切位点和核苷酸序列与设计的产物完全一致。正常DK细胞上清和犬传染性喉气管炎病毒 (CAV 2 )强、弱毒株细胞培养物均不能被该引物扩增 ,说明具有良好的特异性。其检测到的病毒量分别为 1 5TCID50 、 31TCID50 、说明该技术具有很高的敏感性。可用于ICHV强。

兔病毒性出血症病毒西藏分离株毒力的测定

对一株兔病毒性出血症病毒(RHDV)西藏株进行血凝性、特异性、致病性及毒力鉴定。结果表明:此株RHDV血凝价高达10240以上;RHDV抗血清可特异性抑制该株病毒对人“O”型红细胞的凝集;RHDV的最小致死量为10-5/mL。说明此分离株是一株具有高致病力的RHDV强毒株。

甘肃马铃薯晚疫病菌毒力类型及分布初探

对2009年采自甘肃省17个地点63个马铃薯晚疫病菌株进行毒力类型鉴定。结果表明,小种4.6.7.11出现频率达28.57%,出现频率最高,分布最广,是2009年甘肃省的优势毒力类型。从组成看,复合型毒力基因小种占据主导地位,小种1.3.4.5.6.7.8.10.11含有的毒力基因数目最多,单毒力基因小种只有4号小种,从小种毒力基因组成来看,毒力基因vir1、vir 4、vir6、vir7出现频率较高,均达鉴定菌株的50%以上,分布广泛,其次为毒力基因vir5、vir11,而vir3、vir8和vir10出现频率低,没有出现vir2、vir9毒力基因。

多重PCR技术对沙门菌毒力因子检测

为了检验多重PCR技术在沙门菌毒力鉴定中的临床应用效果，评价沙门菌在陕西关中地区的流行情况，从该地区多家养殖场分离获得19株细菌，分别利用生化试验与小鼠攻毒试验和多重PCR技术鉴定和检验了沙门茵及其毒力。结果表明，

狐狸源大肠杆菌毒力岛基因HPI、LEE的检测

为检测从狐狸体内分离的大肠杆菌的毒力岛基因和毒力,对从病死狐狸的肝脏、肺脏等器官分离的细菌进行了生化鉴定、毒力试验和毒力岛HPI(irp2、fyuA)与LEE(ler、eaeA)检测。结果表明:在所测的6株菌中有4株检测出HPI毒力岛基因,6株菌均未检测出LEE毒力岛基因,各注射菌液组小鼠均不同程度发病,且含有HPI毒力岛基因的菌株对小鼠的毒力较强,可见分离到的菌株对狐狸的健康养殖存在较大的危害。

鸡肾型传染性支气管炎病毒SF弱毒株的鉴定

针对IBV地方分离株SF株弱化毒进行鉴定,经特异性试验证实,SF株致弱毒能完全被本毒制备的血清所中和;血清交叉中和试验证明,SF株毒与Ark99株有高度的交叉保护;采用E1、E5代弱化毒接种SPF10日龄鸡胚,测定毒价EID50分别为10-6。88/0.1ml,10-6。68/0.1ml;同居感染试验未观察到健康鸡组织器官病变;连传SPF易感雏鸡5代无毒力返强;攻毒保护试验证实3000个EID50以上的免疫量使免疫雏鸡能耐受强毒攻击,达到完全保护;理化试验表明,该毒株对热、碱的耐受性较差,对乙醚、氯仿有机溶剂较为敏感,对酸有一定的耐受性;试验数据说明,SF株IBV已被成功弱化,抗原性好,毒力稳定、对雏鸡安全,不会产生毒力返强,并能产生较强的免疫力,是一株理想的弱毒苗株。

利用鸡胚致死试验评价粪肠球菌的毒力

粪肠球菌可导致家禽发生淀粉样变性（慢性关节炎），主要发生于褐壳蛋鸡。临床分离株一般采用脉冲凝胶电泳和多位点序列分型进行分型鉴定。但到目前为止还没有除动物实验之外可以快速便捷地鉴定毒力的分型方法。德国罗曼兽医研究所的科研人员采用了一种鸡胚致死试验对粪肠球菌分离株进行了毒力鉴定。他们将过去10年分离自不同国家发生关节炎的鸡只的9株粪肠球菌感染1日龄雏鸡，

应用抗多肽抗体鉴别新城疫病毒强弱毒株

:在克隆我国流行的新城疫病毒 ( NDV)强毒株 F4 8E8株、四平株及弱毒株长春株、V4株的 HN和 F基因并进行测序的基础上 ,针对我国流行的 NDV强毒株 F蛋白前体 ( F0 )的 F2片段的特异结构 ,人工合成特异性多肽 ,将其与小牛血清白蛋白 ( BSA)化学偶联制备成全抗原 ,免疫小鼠制备出抗多肽血清。经 ELISA检测 ,该抗体与 NDV强毒株呈强阳性反应 ,而与鸡痘病毒、鸡传染性法氏囊病病毒、NDV弱毒株长春株和 V4株呈阴性反应。试验结果表明 ,该抗体可以用于

猪链球菌9型分离鉴定及其对小鼠的致病性试验

为确定天津某猪场病猪死亡原因,以及了解分离到的菌株致病性及耐药性,试验通过采集病猪脑组织、肺组织及关节液进行细菌分离培养及生化特性鉴定,并通过PCR方法鉴定其血清型及毒力基因,对其中血清型毒力基因cps9H进行测序分析,并构建系统发育树,对分离的毒株进行小鼠致病性试验及药敏试验。结果显示,从病死猪体内分离到cps9H型猪源链球菌,与GenBank中登录的序列号为CP002007(中国重庆)的菌株同源性高达99%,毒力基因型为SrtA+mrp+orf2+和gapdh+,小鼠致病性试验表明菌株为强毒株。药敏试验结果表明,菌株对氨苄西林、阿莫西林、头孢曲松、头孢哌酮和头孢噻肟高度敏感;对新霉素、四环素、甲硝唑和庆大霉素等耐药。研究结果表明,本次疫病由猪链球菌9型引起。试验结果为天津地区9型链球菌的诊断和防控提供了试验基础。