2017年淮南市外环境H7N9病毒HA和NA基因特征分析

目的分析淮南市2017年外环境标本中H7N9禽流感病毒血凝素基因(hemagglutinin,HA)及神经氨酸酶基因(neuraminidase,NA)的基因特征。方法采集活禽市场禽类咽拭子、肛拭子、粪便、笼具、台面或砧板、脱毛机、禽类饮水、污水等标本,进行禽流感病毒Real-time PCR分型检测,选取H7N9核酸阳性标本(CT值≤28),对其HA和NA基因进行特异性扩增,并对扩增产物进行基因序列测定。采用Bioedit5.0.9、DNASTAR7.1软件对测序结果拼接,并选取国内外H7N9参考序列使用Mega 6.06软件构建HA和NA基因遗传进化树。结果淮南市外环境3株H7N9禽流感毒株HA基因其核苷酸同源性为98.7%~100.0%,氨基酸序列同源性为99.3%~100.0%,基因进化分析显示,该3株H7N9禽流感毒株与安徽、江苏、浙江分离毒株亲缘性较近,处于长三角分支内,与2017年安徽株A/Anhui/13449/2017/H7N9(EPI258029)核苷酸同源性为98.7%~99.9%,氨基酸同源性为99.3%~100.0%,HA发生G186V、Q226L突变;NA基因核苷酸同源性为98.3%~100.0%,氨基酸同源性为99.5%~100.0%;基因进化分析显示,淮南株HN-3、HN-4与2017年安徽分离株A/Anhui/13449/2017/H7N9(EPI 258029)亲缘性最近,核苷酸同源性为98.7%~99.7%,氨基酸同源性为99.5%~100.0%,NA蛋白R294K耐药位点无变异,NA茎区69~73位缺失了"QISNT"序列。结论淮南市活禽市场外环境H7N9病毒HA基因和NA基因与人感染H7N9安徽株(EPI 258029)A/Anhui/13449/2017/H7N9高度同源,处于同一进化分支,有共同的进化来源;HA受体结合位点氨基酸发生G186V、Q226L变异,NA茎区69~73位缺失"QISNT"序列均加强了病毒感染人类的能力。