山东半岛地区高致病力禽Ⅰ型副粘病毒毒株分离与血清学特性研究

分离了山东半岛地区的4株禽Ⅰ型副粘病毒强毒株,并对其血清学特性进行了研究。结果表明:3株鸡源禽Ⅰ型副粘病毒属于强毒株,鸽源禽Ⅰ型副粘病毒对鸡不发病,对鸽则表现为强毒株。

生猪饲养场猪瘟监测及分离毒株同源性分析

猪瘟是一种具有高度传染性和致死性的病毒性疾病,为了及时发现和控制猪瘟的传播,生猪饲养场需要进行有效的猪瘟监测,并对分离的毒株进行同源性分析。技术限制、样本获取困难以及数据处理和解读的复杂性是当前面临的主要问题。此外,监测网络和报告机制的完善性也亟待改进。本文旨在探讨生猪饲养场猪瘟监测及分离毒株同源性分析的重要性,并提出相关的研究问题。

鹅副粘病毒强毒YNG_(-1)株的分离及人工感染试验

采用鸡胚接种法从云南省某鹅场发生烈性传染病的鹅群中分离到一株病毒,经HA、HI试验,鸡胚接种试验,血清中和鸡胚接种试验,确定所分离病毒为副粘病毒,鸡胚半数致死量(ELD50)为10-8.57/0.1ml。参照国际上规定的新城疫病毒毒力制定标准及其方法,测定该分离株的鸡胚最小致死量致死鸡胚的平均时间(MDT)54h,1日龄雏鸡脑内接种致病指数(ICPI)为1.71,6周龄鸡静脉内接种致病指数(IVPI)为2.36,表明该分离株具有与新城疫病毒速发型相类似的毒力,为强毒株,命名为YNG-1株。人工感染试验结果表明该分离株对6日龄鹅及16日龄鸡致死率均为100%,对6日龄肉鸭无致病性。

豫西地区鸡传染性法氏囊病病毒不同毒株的分离及VP2可变区序列的比较分析

鸡传染性法氏囊病(Infectious Bursal Disease,IBD)是由病毒引起的一种免疫抑制性疾病,该病在世界范围内流行,对养鸡业危害极大.长期以来,兽医工作者对该病的流行病学、临床症状、病理变化、诊断及防治等方面都作了不同层次的研究,使该病在一定程度上得到了控制.

同源性分析引发的启示——对鼠兔H9N2亚型禽流感毒株分离、基因序列分析及致病性研究的思考

本研究从青海省14个不同的地区捕捉到的138只鼠兔的817份组织样品中分离到一株H9N2亚型流感病毒。通过ＲT—PcR技术扩增H9N2流感病毒基因组的8个基因片段，并将进行序列分析，绘制系统进化树。结果显示，从鼠兔分离的H9N2亚型禽流感病毒属于美洲谱系，与A／Turkev／Wiscnflsill／1／1966（H9N2）进化距离最近。鸡静脉指数（IVPI）及氨基酸序列分析显示病毒具有弱毒株的特征。

猪流感福建流行毒株的分离、鉴定

疑似猪流感(SIV)病猪的鼻拭子尿囊腔接种10日龄SPF鸡胚,72 h后致死鸡胚.取尿囊液进行血凝试验,分离物能使多种禽类和哺乳动物红细胞发生凝集;取尿囊液接种鸭胚、鹅胚,48 h后即致死鸭胚、鹅胚;取尿囊液接种鸡、鸭、鹅胚等成纤维原代细胞和Vero、PK、BHK、MA-104等传代细胞,发现病毒能使成纤维细胞、Vero出现变圆、皱缩、脱落等病变;尽管PK、BHK21、MA-104等细胞接种后不出现病变,但培养上清能凝集鸡红细胞;亚型鉴定该株病毒属猪流感病毒H1N1.进行病毒对BALB/C小鼠、信鸽、8周龄仔猪的回归试验,发现该株流感病毒能使信鸽和8周龄仔猪发病;BALB/C小鼠接种病毒后临床上不表现症状,但体内产生针对该病毒的抗体.

我国新分离乙型脑炎病毒株毒力特征研究

将分离自不同年代的17株乙脑毒株在小鼠脑内传代,然后将病毒在BHK21细胞单层上观察不同毒株的空斑形成大小形态,小鼠脑内和皮下途径接种观察病毒的毒力,结果显示不同毒株在BHK21细胞上形成的噬斑大小不尽相同,减毒株形成的噬斑最小。所有毒株对小鼠的脑内毒力都很强,病毒滴度高达lg8.0/mL以上,毒株间无明显差异。毒株对9~11g小日龄小鼠的皮下毒力有一定差异但不明显,但对14~16g较大日龄小鼠则差别明显。PFU/LD50的对数值差异除一株(M47株)为8.44外,其余各株差别在3.94~0.45间。本研究结果证明自然界乙脑毒株存在明显的神经外毒力差异,毒力差异与分离年代和病毒基因型无关,但从人体分离到的毒株毒力表现较强。

传染性支气管炎病毒(IBV)国内分离毒株的分子流行病学分析

选择9个来自我国不同地区的传染性支气管炎病毒(IBV)地方毒株,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分别扩增出它们的完整S1基因,再将各扩增产物与T载体连接转化,筛选出相应毒株的阳性克隆,采用双脱氧链终止法测定基因序列。将这些国内分离毒株、我国常用疫苗毒株和国际上其他血清型的代表参考毒株一起,用DNAstar软件分别进行基因与氨基酸系统发生进化关系分析,结果将这些毒株分成3群:Ⅰ群内的毒株与疫苗毒株H120和M41的同源性很高,Ⅱ群内的毒株与其他毒株的同源性较低,Ⅲ群内的毒株与疫苗毒株有一定的同源性。3个群的毒株以疫苗毒株H120为核心,形成进化距离的梯度,提示弱毒疫苗的使用可能是我国IBV流行毒株的主要来源之一。分析结果还显示,我国IBV的分离毒株没有明显的时间和地理分布规律可循。

禽传染性支气管炎病毒分离毒株的血清型鉴定与免疫防制研究

应用基于单克隆抗体的间接免疫荧光实验（Ｍａｂ－ＩＦＡ）和病毒血清中和实验，分别对１１个禽传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）分离毒株进行血清型鉴定。其中３株为Ｍａｓ型，２株为Ａｒｋ型，２株为Ａｒｋ／Ｍａｓｓ混合型，其余４株为不可分类型或未知型。将４株不可分类型毒株混合制成ＩＢＶ分离毒株油乳灭能苗。经ＳＰＦ鸡免疫攻毒实验证明，这种不可分类型毒株灭能苗与Ｈ１２０弱毒苗合用能够有效抵抗各不可分类型毒株的攻毒感染，保护率为８４％～１００％。另外，ＳＰＦ实验鸡经Ｈ１２０和Ａｒｋ二联苗免疫后对Ａｒｋ型分离毒株和Ａｒｋ／Ｍａｓ混合型分离毒株的保护率为７５％～８５％。但是，虽经Ｈ１２０弱毒苗免疫ＳＰＦ鸡则不能抵抗ＩＢＶ不可分类型毒株。

J亚群禽白血病病毒安徽分离株的鉴定及其gp85基因序列分析

从安徽省的黄羽肉鸡和罗曼蛋鸡中各分离鉴定出1株J亚群禽白血病病毒,克隆获得了2条相应的gp85基因序列,并与参考毒株进行序列比对。结果表明,两分离毒株与J亚群参考毒株同源性为82.1%～99.4%,分离毒株之间同源性为85.4%。其中肉鸡分离毒株与J亚群原型毒株HPRS-103同源性为97.1%,与J亚群国内毒株SD09TA04、SDYC02J同源性均为99.4%;蛋鸡分离毒株与HPRS-103的同源性为89.0%,与SD09TA04和SDYC02J同源性仅为88.6%。两分离毒株的gp85氨基酸序列出现突变和缺失,在高变区hr1、hr2变异明显。进化分析进一步表明,2个分离毒株亲缘关系较远,可能来源于不同的原始病毒株。

传染性法氏囊病超强毒山东分离株SD0210的致弱研究

本研究将鸡传染性法氏囊病超强毒(vvIBDV)SD0210株经SPF鸡胚培育及鸡胚成纤维细胞(CEF)传代培养,获得了对CEF适应的细胞毒,并对细胞毒进行了致病性、回归动物的稳定性试验及免疫原性方面的试验,结果表明已成功获得了具有髙免疫原性且安全无毒力返强的致弱株,并初步揭示了vvIBDV在适应细胞、从超强毒力向弱毒力转化过程中,VP2高变区氨基酸序列的变化情况。SD0210株培养至18代开始适应细胞,出现细胞病变。21代细胞毒已对SPF鸡失去了致病性,在鸡体内连续传代15代毒力不返强,而且具有较高的免疫原性。

禽副粘病毒2型标准株和国内分离株的透射电镜及免疫电镜观察

将禽副粘病毒 2型的标准毒株Yucaipa病毒和国内分离株F4、F6和F8株分别接种SPF鸡胚 ,收获鸡胚尿囊液 ;经差速离心和蔗糖密度梯度离心后 ,分别制备电镜样品和免疫电镜样品 ;经 10 g/L醋酸双氧铀负染后电镜观察病毒粒子形态。电镜下病毒粒子大小差别较大 ,形态呈圆形或椭圆型 ,直径 15 0— 3 0 0nm ,有结构致密的基质蛋白膜 ,有的囊膜外可见纤突。免疫电镜样品中病毒明显集中 ,便于观察。

兔出血症病毒西藏野毒分离株的鉴定

对西藏农牧学院分离的一株兔出血症病毒(RHDV)西藏野毒进行血凝性、特异性和致病性进行鉴定。结果表明,此株RHDV野毒血凝价高达10240以上;RHDV抗血清可特异性抑制该株病毒对人“O”型红细胞的凝集;西藏株RHDV的最小致死量为10^(-5)/mL,是一株具有高致病力的RHDV强毒株。

我国部分地区猪繁殖与呼吸综合征病毒分离株ORF5基因的遗传变异分析

参考Genbank发表的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ATCC VR-2332的ORF5基因序列,设计 并合成了一对引物,对来自福建、浙江、山东等地的PRRSV分离毒株进行RT-PCR扩增,获得约748 bp的 DNA片断,将其分别克隆入pMD18-T载体中,并进行测序。应用DNAStar软件分析所测序列,并与ATCC VR-2332、CH-1a、MLV、LV等毒株的ORF5序列进行比较,结果表明:SHD1与FJ14、MLV、ATCCVR-2332 同源性高达98．5％,与CH-1a同源性为91．0％,与其它毒株同源性为86．6％-88．4%;FJ14与MLV、ATCC VR- 2332同源性为99．3％-99．7％,其余分离毒株在遗传关系上和CH-1a又分为明显的两个群,显示近年来各地 PRRSV分离毒株与CH-1a株的遗传差异越来越大。

鸡传染性支气管炎中国地方分离毒株LX4 mRNA1 ORF1的遗传变异特征

应用RT-PCR方法扩增了冠状病毒鸡传染性支气管炎中国分离毒株LX4的mRNA1ORF1,并将其进行了克隆、序列测定和分析。表明LX4mRNA1基因包含2个ORF,其中ORF1a由11916个核苷酸组成,编码一条3971个氨基酸残基组成的多肽。ORF1b由7950个核苷酸组成,编码2649个氨基酸残基组成的多肽。与美国Beaudette株对应的ORF1a核苷酸及推导的氨基酸序列同源性均为85%,与对应的ORF1b的同源性分别为89%和95%。二者ORF1a和ORF1b重叠区推测的"滑脱序列"(slipperysequence)核苷酸序列一致,"假结"(pseudoknot)基本结构相似。不同之处在于"假结"第2环中LX4的第7位为A,而Beaudette株在该位置为G。与Beaudette株比较,LX4ORF1a核苷酸变异最频繁的区域集中在第2656～3098位碱基处,且在该区域有60个碱基的插入,导致推导的氨基酸序列插入了20个氨基酸残基。LX4ORF1b序列缺失9个核苷酸,主要集中在第5168～5181位之间,导致对应的氨基酸缺失3个。但这些差异是否与病毒的生物学特性有关不明。

鸡传染性法氏囊病病毒LT0490和LC1090毒株的分离及法氏囊病的防治研究

从IBD爆发地分离出两株IBDV－LT0490和LC1090，二者的临床症状和病理变化不同，蚀斑测定毒价分别为4×10^7PFU／ml与3×10^7PFU／ml；制成细胞灭活疫苗，室内试验平均保护率为86．60％；用两株病毒人工感染鸡的法氏囊制成组织灭活苗保护率为98．71％－100％；高免蛋黄液室内试验治愈率为92．0％。对该病应从主动免疫、被动免疫和加强卫生管理及治疗并发症等方面进行综合性防治。

一株鸡肾型传染性支气管炎病毒的分离与鉴定

2004年从贵阳市某鸡场发生的以呼吸道症状、肾肿大、输尿管有尿酸盐沉积为特征的病鸡群采集样品(肝、脾、肾),接种鸡胚,盲传3代,进行病原分离并将分离病毒命名为IB2。分离病原经过鸡胚传代可见胚体卷曲、发育阻滞、肾肿大、肾小管和输尿管有尿酸盐沉积的典型胚胎病变特征,经血凝性检测、对新城疫增殖的干扰试验证明该分离毒株为肾型传染性支气管炎病毒。