抗柯萨奇病毒A组10型中和抗体检测用毒株的应用研究

目的研究抗柯萨奇病毒A组10型(Coxsackievirus A10,CV-A10)中和抗体检测用毒株的应用。方法对CV-A10毒株进行扩增培养,建立3级种子批并进行相关检定。采用3人9次独立测定病毒滴度,对工作种子批进行滴度标定,通过分别与肠道病毒71型(enterovirus A71,EV-A71)、CV-A16、CV-A6免疫血清进行交叉中和反应,评价该毒株的专属性。对CV-A10自然感染人血清和CV-A10小鼠免疫血清样品进行中和抗体效价检测,对其应用进行评价研究。结果获得1株CV-A10中和抗体检测用毒株,3级种子批的无菌检查、支原体检查等项目均符合中国药典2020年版三部相关要求;经标定,平均病毒滴度为每毫升7.903 lg半数细胞培养物感染量(50%cell culture infectious dose,CCID_(50))(95%置信区间:7.868~7.937 lgCCID_(50)/ml),变异系数为1.10%;与EV-A71、CV-A16、CV-A6免疫血清无交叉反应,专属性良好;检测CV-A10自然感染人血清和CV-A10小鼠免疫血清,中和抗体效价的最大值与最小值倍数差均小于4,中和抗体效价检测变异系数分别为6.38%和3.64%。结论抗CV-A10中和抗体检测用毒株具有较好的专属性,可用于后续抗CV-A10中和抗体的相关检测。

柯萨奇病毒A16型中和抗体检测毒株的制备及应用

目的制备柯萨奇病毒A16型(coxsackievirus A16,CV-A16)中和抗体检测毒株,并对其在中和抗体检测中的应用进行研究。方法对CV-A16检测毒株建立3级种子批并进行相关检定。由3名实验人员对工作种子批分别进行3次病毒标定,同时分别与其他3个型别(EV-A71、CV-A10、CV-A6)的免疫血清进行交叉中和。将检测毒株分别与对人自然感染血清和小鼠免疫血清样品进行6次中和抗体效价测定,计算中和抗体效价最大值与最小值的倍数差(Max-Min)和变异系数(coefficient of variation,CV)。用对比检测毒株对人自然感染血清进行3次中和抗体效价测定,与检测毒株进行比较。结果建立的CV-A16检测毒株的3级种子批无菌检查及支原体检查等均符合《中华人民共和国药典》2020版(三部)要求;经标定,平均病毒滴度为7.444 lgCCID_(50)/mL(95%CI:7.231~7.645 lgCCID_(50)/mL),CV为2.85%;与EV-A71、CV-A10、CV-A6这3种型别免疫血清均无交叉反应,特异性良好;人自然感染血清和小鼠免疫血清的中和抗体效价最大值与最小值的倍数差(Max-Min)均<4,CV为0.00%~12.79%。检测毒株与对比检测毒株检测的中和抗体效价结果差异无统计学意义(P<0.05)。结论本实验室筛选的CV-A16中和抗体检测用毒株具有较好的特异性,可以很好地应用于后续CV-A16中和抗体的相关检测。

高致病性猪蓝耳病疫苗免疫抗体效价试验报告

本试验选用30日龄非免仔猪188头,随机分为3个试验组。每个试验组选用不同厂家猪繁殖与呼吸综合征疫苗,分别在30日龄对非免仔猪进行首免,首免前采用前腔静脉采血检测母源抗体,首免后28天采血检测免疫抗体,及时进行强免,于强免后28天采血检测免疫抗体。采用猪繁殖与呼吸综合征(美洲毒株)ELISA抗体检测试剂盒进行检测;结果:第1、3组猪瘟疫苗免疫效果优于第2组。。要提高肉鸡经济效益,必须加强肉鸡的饲养管理。

A Quantitative Assay for Measuring of Bovine Immunodeficiency Virus Using a Luciferase-based Indicator Cell Line

In order to quantitate the bovine immunodeficiency virus line （BIVL） was established by transfecting baby hamster kidney （BIV） cells infection in vitro, a BIV indicator cell with reporter plasmids containing the firefly luciferase gene driven by a BIV long terminal repeat promoter. The BIV activates promoter activity of the LTR to express luciferase upon infection. BIV infection could therefore by quantified by detection of luciferase activity. Compared to standard assays used to detect BIV infection, the BIVL-based assay is 10 times more sensitive than the the CPE-based assay, and has similar sensitivity with the viral capsid protein Western blot assay BIV indicator cell line could detect BIV infection specifically. Luciferase activity of BIV infected BIVL cells showed a time dependent manner, and 60 h post infection is the optimal time to detect BIV infection. Luciferase activity of BIVL cells correlates with the BIV capsid protein expression. Moreover, a linear relationship was found between MOI and the activated intensity of luciferase expression. In brief, the BIV indicator cell line is an easy, robust and quantitive method for monitoring BIV infection.