IBV肾型毒株与呼吸型疫苗株鉴别方法的建立与应用

【目的】建立基于鸡传染性支气管炎病毒(IBV)S1基因的反转录-复合PCR方法,为IBV流行毒株和呼吸型疫苗株的分型鉴定提供技术支持。【方法】根据IBVN基因序列设计合成1对特异性通用引物,建立IBV的分子生物学检测方法,用以对IBV进行检测。通过对GenBank上公布的IBVS1基因全序列的分析比对,找出呼吸型疫苗株和地方肾型流行毒株相对保守的差异序列,设计合成2对引物,建立可以对这2类IBV毒株进行鉴别的反转录-复合PCR方法,同时对该方法的敏感性和重复性进行检测,并对该方法进行了实际应用。【结果】建立了区别IBV肾型毒株和呼吸型毒株的分型方法,该方法敏感性好,能检出经106稀释后的基因组RNA,且具有可重复性;临床应用显示,该方法对呼吸型毒株和近年来的地方肾型分离株具有较好的分型效果,而对较早时期的肾型分离株(YI株和澳大利亚T株)的扩增结果为阴性;经鉴定,近年来感染鸡群并引起高死亡率的分离毒株主要为肾型IBV。【结论】建立了区别IBV肾型毒株和呼吸型毒株的分型方法,该方法特异性强、敏感性高、重复性好,能将我国地方流行的肾型IBV毒株与呼吸型疫苗株完全区分开来。

新型冠状病毒高效价中和血清的快速制备及应用

目的制备新型冠状病毒高效价中和血清。方法使用重组表达的新型冠状病毒RBD蛋白作为免疫原,免疫SPF级家兔,制备抗血清。通过ELISA和微量中和试验检测抗血清效价。将制备的抗血清分发至我国多家新冠灭活疫苗研发企业,检测抗血清效价。结果经3次免疫后,抗血清的ELISA效价大于160万,中和效价为8192。5家企业返回微量中和效价检测结果的几何平均效价为6950。结论成功制备了新型冠状病毒高效价中和血清,并分发至我国多家新型冠状病毒灭活疫苗生产企业用于毒株鉴别及外源病毒因子检测,解决了制约疫苗快速研发的技术瓶颈。