人毒素原性大肠杆菌肠毒素ST、LT-B基因的融合

将毒素原性大肠杆菌(ETEC)编码耐热肠毒素(ST)的基因片段与编码热敏肠毒素B亚基(LT—B)的基因进行融合,并在此基础上进行不同数目ST基因的串联。ELISA检测融合基因表达蛋白产物,观察到ST与LT-B之间存在着相互影响。ST的检测滴度随基因串联个数增加而逐渐升高,而LT的ELISA滴度则减弱。本研究说明ST可以通过基因串联提高表达产物抗原活性。这为毒素原性大肠杆菌多价疫苗的研制提供了重要的研究基础。

应用辣根过氧化物酶化学发光法检测毒素原性大肠杆菌方法的建立

利用活化酶标复合物（HRP－PBQ－PEI＋－NH3＋）直接标记毒素原性大肠杆菌不耐热肠毒素（ETEC－LT）基因片段（0．8kb）作探针。HRP在戊二醛作用下与单链靶DNA形成DNA和酶的共价复合物，与DNA探针结合的辣根过氧化物酶（HRP）催化相应的发光刺，经增强型化学发光反应（ECL）在普通X光胶片上自显影（CPD）检测ETEC－LT。结果可检测到0．03pg的纯质粒DNA和103的ETEC菌细胞，dotblot杂交证明该酶标基因探针仅与产LT肠毒素的ETEC杂交，其余均未见杂交阳性反应。结果表明酶（HRP）标基因探针化学发光法检测ETEC是一种简便、快速、安全，高度敏感和特异的非放射性标记基因探针检测技术。