食源性混合病原菌生物被膜行为对金黄色葡萄球菌毒素因子转录水平的影响

以食源性病原菌(金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和肠炎沙门氏菌)形成的混合菌生物被膜为研究对象,对其定性和定量检测,通过实时荧光定量PCR方法分别检测单一菌和混合菌生物被膜中金黄色葡萄球菌28种目的毒素基因转录水平的变化。结果表明,结晶紫染色法、银染法和扫描电镜法均表明混合菌在培养24 h时达到最大黏附度;混合菌生物被膜中3种细菌的活菌数均低于单菌生物被膜中的活菌数;28种毒素基因在金黄色葡萄球菌中均被检出,且混合菌相对于单一菌生物被膜,上调量显著的有肠毒素基因sep、ser,显著下降的有溶血素基因hla和脱皮毒素基因etd,肠毒素基因seb表达量相等。

鲎制剂中的抗内毒素因子

鲎阿米巴细胞中存在许多能与细菌内毒素发生相互作用的物质。本文主要阐鲎抗脂多糖（ＬＰＳ）因子（ＬＡＬＦ）、内毒素结合蛋白－蛋白酶抑制物（ＬＥＢＰ－ＰＩ）及鲎结合素等的分子生物学特性及其与内毒素相互作用及其机理，以及动物试验抗内毒素作用的结果。

鲎抗内毒素因子模拟肽中和内毒素的体外研究

目的体外研究以评价鲎抗内毒素因子模拟肽(modelingpeptidesfromthelimulusanti-lipopolysaccharidefactor,MPLALFs,Ms)中和内毒素(lipopolysaccharide/endotoxin)的活性。方法Ms结合内毒素的活性采用生物传感器技术测定,结合力以反应速率值(Kon)和Kd值表示;中和内毒素活性以鲎试验动态浊度法进行分析。结果生物传感器技术测定结果表明,M1、M2、M3、M4、M6、M8、M10、M0与LPS055∶B5的亲和力反应速率分别为(840±5·716)、(549±6·532)、(842±6·530)、(627±2·450)、(996±5·716)、(814±8·982)、(556±1·633)和(635±2·449)arcsecond(弧度/秒),以M4活性最强,M1活性最弱。M4与LPS的反应Kd值为72·377μmol/L。鲎试验结果与生物传感器测定结果基本一致。结论M4具有较强的体外中和内毒素活性。

鲎抗内毒素因子模拟肽4的体外生物活性实验研究

目的研究鲎抗内毒素因子模拟肽4(m ode ling peptide 4 from the L im u lus an ti-lipopo lysaccharide factor,M 4)体外中和内毒素的活性。方法研究以对内毒素高亲和力的多粘菌素B(po lym yx in B,PM B)为对照,M 4设80、40、20、10、5μm o l/L浓度,结合内毒素的活性以生物传感技术分析;中和内毒素的能力以鲎试验动态浊度法测定;对LPS刺激THP-1细胞释放TNF-α的影响采用EL ISA试剂盒定量观察。结果M 4具有较好的内毒素亲和力和中和活性,在5、10、20、40和80μm o l/L浓度时对内毒素2EU/m l(1EU约等于100pg)的中和率分别为43.44%、47.76%、63.12%、81.54%和84.54%,呈明显的浓度梯度效应,20μm o l/L以上浓度时与PM B作用相当。对THP-1细胞释放TNF-α的影响结果显示,M 4可明显抑制LPS刺激的TNF-α释放,但M 4本身具有诱导THP-1细胞释放TNF-α的作用。结论M 4具有较强的中和内毒素活性,值得进一步深入研究。

幽门螺杆菌毒素因子与儿童胃十二指肠疾病的相关性研究

目的 研究贵阳地区儿童幽门螺杆菌感染的CagA蛋白及VacA蛋白的感染状况 ,以及不同Hp菌株类型与胃肠黏膜病理组织学改变的关系。方法 采用免疫印迹法 (WesternBlot)对 6 7例Hp阳性及 32例Hp阴性患儿血清进行Hp毒素因子的测定及血清学菌株分型 ,参照悉尼胃炎分类标准 ,对不同Hp菌株类型进行病理组织学对比研究。结果 本地区Ⅰ型高毒力Hp菌株检出率 6 8.6 % ,中间型Hp菌株为 2 6 8% ,Ⅱ型Hp低毒力菌株为 4 4 %。Ⅰ型Hp菌株 1 0 0 %存在胃肠黏膜组织学改变 ,胃窦黏膜以中度炎症为主 ,占 73 9% ,重度炎症占 1 1 % ,活动性占 73 9%。十二指肠球部黏膜以中 重度炎症为主 ,占77 3% ,活动性占 6 6 4 %。中间型Hp菌株 72 %存在黏膜组织学改变 ,胃窦黏膜以轻度炎症为主 ,占 5 5 6 % ,活动性占 5 5 % ,十二指肠球部黏膜以轻 中度炎症为主 ,占 5 5 1 % ,活动性占 1 1 1 %。Ⅰ型Hp菌株与中间型Hp菌株在致黏膜炎症改变程度及活动性方面有差异性 (P <0 0 5 )。在淋巴滤泡形成方面 ,Ⅰ型Hp菌株较中间型Hp菌株有显著性差异 (P <0 0 1 )。结论 本地区Hp感染菌株类型以Ⅰ型为主 ,占 6 8 6 % ,同时存在 2 6 8%的中间型菌株及 4 4 %的Ⅱ型菌株的感染。

鲎抗内毒素因子模拟肽REMP2体外中和内毒素及抗菌活性的研究

目的了解鲎抗内毒素因子模拟肽REMP2体外中和内毒素及抗菌活性的作用。方法以多黏菌素B（PMB）为阳性对照，将REMP2、PMB与内毒素／脂多糖（LPS）溶液混合，使REMP2、PMB反应终浓度分别为100．00、10．00、1．00、0．10、0．01μmol／L，LPS为1EU／mL。测定各溶液中LPS浓度，计算其中和率；以等渗盐水（NS）作为对照，分别将REMP2及PMB配制成10、20、40、80μmol／L溶液，LPS配制成100μg／L，分别作用于LPS刺激的小鼠单核巨噬细胞，采用酶联免疫吸附测定法检测其肿瘤坏死因子α（TNF—α）含量；将REMP2加入大肠杆菌标准菌株菌液中，终浓度为40μmol／L，于加入后10、20、40min在透射电镜下观察大肠杆菌的形态学变化。结果浓度为0．10、10．00、100．00μmol／L的REMP2对LPS的中和率与阳性对照的PMB值相近（P〉0．05）；浓度为10、20、40、80μmol／L的REMP2作用于细胞后，其TNF—α含量[（1175±162）、（859±122）、（645±142）、（489±102）ng／L]均低于对照组[（3463±218）ng／L，P〈0．01]。REMP2作用后透射电镜下大肠杆菌内外膜变模糊、毛糙，菌体肿胀，胞质空泡变性。结论REMP2具有良好的中和LPS活性及杀菌作用。

A型肉毒毒素对大鼠前列腺增生组织中缺氧诱导因子-1α及血管内皮细胞生长因子表达的影响

目的探讨A型肉毒毒素(BTX-A)对大鼠前列腺增生组织中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达的影响。方法取60只大鼠,实验组45只,空白对照组15只。实验组大鼠均制作前列腺增生模型,1周后两组均随机处死5只大鼠观察建模是否成功。实验组剩余大鼠随机分为高剂量组(注射10U/0.1ml BTX-A)、中剂量组(注射6U/0.1ml BTX-A)、低剂量组(注射2U/0.1ml BTX-A)、阴性对照组(注射0.1ml0.9%氯化钠溶液),术后各组继续给予长效雄激素(十一酸睾酮针4mg·kg^(-1)·d^(-1))维持。空白对照组仍给予等量橄榄油皮下注射。4周后处死各组大鼠,取出前列腺称重,免疫组化法检测比较各组大鼠前列腺组织中HIF-1α和VEGF的表达情况。结果大鼠前列腺增生模型建立成功。实验组大鼠HIF-1α在细胞质与细胞核均有表达,在新生血管周围表达明显增强,而VEGF的表达主要在细胞质中。与空白对照组比较,其他各组大鼠前列腺湿重均发生明显变化,差异均有统计学意义(均P<0.05);与阴性对照组比较。低、中、高剂量组大鼠前列腺湿重均发生明显增加,差异均有统计学意义(均P<0.05)。空白组及阴性对照组均未见HIF-1α的表达;与空白对照组比较,高、中、低剂量组VEGF及HIF-1α的阳性表达率及灰度值、阴性对照组VEGF灰度值均发生明显变化(均P<0.05);与阴性对照组比较,中、低剂量组VEGF及HIF-1α的阳性表达率和高、中、低剂量组VEGF及HIF-1α的灰度值均发生明显变化(均P<0.05);与低剂量组比较,高、中剂量组VEGF及HIF-1α的阳性表达率及灰度值均发生明显变化(均P<0.05);与中剂量组比较,高剂量组VEGF的阳性表达率及灰度值和HIF-1α的阳性表达率均发生明显变化(均P<0.05)。实验组大鼠HIF-1α与VEGF的表达呈明显正相关关系(r=0.575,P<0.01)。结论前列腺内注射BTX-A可以通过抑制HIF-1α和VEGF的表达,从而抑制前列腺组织的血管形成.促使前列腺缩小。

热休克因子1对内毒素所致G-CSF基因表达的影响

为探讨热休克因子1(heatshockfactor 1,HSF1)活化和过表达对内毒素(endotoxin ,ET)所致粒细胞集落刺激因子(granulocyte colonystimulatingfactor,G CSF)基因表达的影响,采用大肠杆菌内毒素即脂多糖(lipopolysaccharide ,LPS)处理RAW2 6 4 7巨噬细胞,并通过热休克预处理诱导HSF1活化,采用Western印迹检测HSP70的表达观察HSF1的活化情况,RT PCR检测热休克反应(heatshockresponse ,HSR)对G CSFmRNA表达的影响;构建HSF1的pcDNA3 1真核表达质粒,采用脂质体转染法建立HSF1过表达RAW 2 6 4 7巨噬细胞株,用免疫细胞化学和Western印迹观察HSF1的表达,RT- PCR及Northern印迹进一步研究HSF1对G CSF基因表达的可能影响.发现LPS诱导巨噬细胞中G- CSFmRNA表达增多,并随时间的延长,表达量逐渐增加;与单纯内毒素处理组相比,热休克预处理后,LPS诱导的巨噬细胞G- CSFmRNA的表达明显被抑制;建立的稳定表达HSF1的RAW 2 6 4 7细胞株中有HSF1蛋白的核移位;HSF1过表达可明显抑制LPS诱导的RAW2 6 4 7巨噬细胞G -CSFmRNA的表达.上述结果表明热休克预处理能抑制LPS诱导的巨噬细胞G- CSFmRNA的表达;HSF1过表达可抑制内毒素诱导的巨噬细胞G CSFmRNA的表达.

CLP-19预处理RAW264.7细胞对炎性因子的调节作用初探

目的探讨CLP-19对RAW264.7细胞的免疫调节及其在炎症中的作用。方法以50μg/ml的CLP-19作用于RAW264.7细胞后不同时间(0.5、1、2.5、5、10和20 h),及不同质量浓度(1、10、50、100和200μg/ml)的CLP-19作用于RAW264.7细胞20 h,观察细胞TNF-α、IL-10、MCP-1、ICAM-1的mRNA水平的变化情况。另用50μg/ml的CLP-19预处理细胞5、10、和20 h后,再以LPS刺激,4 h后提取细胞RNA,观察上述细胞因子的变化,以CLP-19与LPS预混组为对照。结果 CLP-19单独作用于RAW264.7细胞后,CLP-19对MCP-1的mRNA调节呈显著的时间依赖性和剂量依赖性,高剂量的CLP-19可上调ICAM-1、TNF-α和IL-10的mRNA水平。以CLP-19预处理RAW264.7细胞不同时间(5、10和20 h)后,均可显著抑制LPS所刺激的炎症因子上调,各预处理组间无统计学差异。结论 CLP-19能改变细胞的免疫状态,并抑制LPS诱导的免疫反应。

淋巴毒素αNcoⅠ、AspHⅠ基因多态性与胃十二指肠疾病幽门螺旋杆菌的感染无关

目的 :研究我国湖北汉族人LTαNcoⅠ、AspHⅠ基因多态性与胃十二指肠疾病幽门螺旋杆菌 (Hp)感染的相关性 ,探讨宿主对Hp感染的易感性。 方法 :采用PCR 限制性片段长度多态性方法 ,检测 1 1 4例 (5 9例慢性胃炎、38例胃十二指肠溃疡以及 1 7例胃癌 )胃十二指肠疾病患者以及 1 6 4例正常对照者的LTαNcoⅠ、AspHⅠ基因型以及基因频率分布。Hp感染通过胃镜快速尿素酶试验、HpAb IgG及1 4 C 呼气试验综合性诊断。结果 :Hp阳性组LTαNcoⅠ、AspHⅠ基因型和等位基因频率与Hp阴性组、正常对照组差异无显著性。此LTα基因多态性与胃十二指肠疾病亦无相关性。结论 :LT(NcoⅠ。

山仙颗粒对单剂量黄曲霉毒素B_1致大鼠肝癌影响的实验研究

目的:观察山仙颗粒对黄曲霉毒素B1致大鼠肝癌模型动物肝组织形态学变化及胎盘型谷胱甘肽-S-转移酶(GST-P)的影响,并来探讨其对化学诱导性肝癌的药理功效。方法:采用单剂量黄曲霉毒素B1致大鼠肝癌短期实验模型,动物随机分为空白组(A组)、模型组(B组)、大剂量山仙颗粒组(C组)、小剂量山仙颗粒组(D组)及对照组(E组),每组10只,于实验第6周末,麻醉后,取肝脏进行肝组织学检查和GST-P免疫组化染色。结果:C组动物肝脏病变程度明显较其余造模各组轻,D组与E组动物肝脏病变类似,但程度较E组略重。C组动物肝癌标志酶GST-P表达明显较B组减弱(P<0.01)。结论:大剂量山仙颗粒对诱发性大鼠肝癌有抑制作用。

持续性血液净化加灌流对腹部外伤海水浸泡犬血浆炎性细胞因子的影响

目的探讨持续性血液净化(CRRT)加灌流对腹部外伤合并海水浸泡实验犬血浆内毒素(ETX)、白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平的影响。方法16只实验犬致伤后随机分为治疗组和对照组。对照组伤后给予生理盐水持续静脉滴注维持,治疗组给予持续性血液净化加用树脂罐灌流。分别于致伤前及伤后3、6、9、12、18h取血测定血浆ETX、IL-6、TNF-α水平。结果对照组和治疗组在伤后6h ETX开始明显升高,IL-6和TNF-α在伤后12h升高显著,但治疗组在伤后ETX、IL-6和TNF-α水平明显低于对照组。对照组在12h以后血浆肌酐、尿素氮水平升高明显,同炎性因子的变化相一致,而治疗组则无明显变化。对照组动物死亡率明显高于治疗组。结论持续性血液净化加灌流技术可以明显减轻实验犬血浆炎性因子水平,有利于稳定内环境。

产气荚膜梭菌群体感应系统研究进展

产气荚膜梭菌是一种分布广泛的条件致病菌,可以导致人与动物多种疾病,其中包括坏死性肠炎、气性坏疽、食物中毒等主要病症。群体感应是细菌之间一种重要的通讯机制,参与调节细菌毒素分泌和致病相关等重要过程。通过对产气荚膜梭菌的群体感应研究现状进行系统介绍,主要描述该菌所含群体感应系统的种类,各个群体感应与生物膜、毒素等致病相关表型的调控机制。产气荚膜梭菌已被证明具有两种群体感应系统,参与该菌毒素产生、生物被膜形成、孢子形成等致病性状。本研究进展为今后进一步研究产气荚膜梭菌致病相关机理提供一定理论基础,同时也为产气荚膜梭菌的生物防控提供新的思路。今后研究应绘制出产气荚膜梭菌完整的QS系统,进一步寻找安全有效的抗感染疗法。

慢性乙型肝炎中医证型的客观化判别分析

目的:探索慢性乙肝中医证候的微观辨证体系。方法:选取慢性乙肝患者100例,严格按照《病毒性肝炎中医辨证标准》进行中医分型并分组,抽血测定其血浆内毒素(ET)含量、血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)及肝功能(ALT、AST、TBIL)含量,与同期20例健康体检者作对照。并运用逐步判别分析法制定判别方程。结果:慢性乙肝各中医证型组血浆ET、血清TNF-α、IL-6及肝功能(ALT、AST、TBIL)之间呈显著正相关。通过逐步判别分析,筛选出ALT、TBIL、ET、TNF-α、IL-6五项判别能力强、显著性水平高的指标,建立的数学判别模型经回顾性检验,判断正确率为84.6%。结论:ET、ALT、TBIL及TNF-α、IL-6五项指标为慢性乙肝中医辨证有价值的指标。运用判别分析建立的判别方程式,为慢性乙肝中医辨证提供了客观的依据。

大承气汤对烫伤大鼠肠黏膜上皮细胞超微结构变化的影响

目的:了解和揭示大承气汤对SD大鼠烫伤后1周内血浆肿瘤坏死因子、内毒素、肠组织细胞凋亡的影响,观察烫伤大鼠小肠上皮细胞超微结构的变化,探讨本方对肠黏膜屏障保护作用机制。方法:将SD大鼠70只随机分成3组,60只大鼠制备成烫伤模型随机分成中药治疗组(30只)和对照组(30只),中药治疗组给予大承气汤,对照组给予生理盐水灌胃;第3组为正常组10只。治疗组和对照组在给药后第1、3、7天各处死10只,均检测血浆肿瘤坏死因子、内毒素的含量,观察大鼠肠组织细胞凋亡的变化,给药后第7天观察大鼠小肠上皮细胞超微结构变化。结果:大承气汤可明显抑制烫伤大鼠内毒素易位,减少肿瘤坏死因子的产生,抑制肠组织细胞凋亡,明显修复和改善烫伤大鼠肠黏膜细胞超微结构的损伤。结论:中药方剂大承气汤有较理想的肠道屏障保护作用,是预防和治疗肠道屏障功能障碍引发的多器官、多系统功能衰竭的有效的方药。

LeTx抑制MEK通路对体外血管紧张素诱导的VEGF分泌的影响

目的:体外观察血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)对视网膜色素上皮细胞(retinal pigmented epithelium,RPE)VEGF分泌的影响以及能否通过炭疽毒素致死因子(lethalfactor,LF)通过阻断MEK/MAPK通路对VEGF分泌的影响。方法:体外培养人RPE细胞分为A,L和N组。A组用含100μmol/LAngⅡ及25mL/L小牛血清的低糖DMEM培养液刺激。L组于A组培养液刺激细胞前,先用10μmol/LEF与100nmol/LLF联合处理细胞24h;N组细胞培养于仅含25mL/L小牛血清的DMEM培养液。作用不同时间梯度后收集细胞上清。采用ELISA法测定各组VEGF浓度。结果:AngⅡ刺激RPE45min即能诱导VEGF分泌,这种作用在刺激3h达到最强,约为对照组7.9倍。预先用LeTx处理的RPE细胞并不能够对AngⅡ的刺激产生反应。在任一刺激时段,细胞培养液中VEGF浓度始终维持在较低水平。结论:LeTx通过抑制MEK通路对AngⅡ刺激的VEGF分泌有抑制作用。

猪腹部火器伤肠管穿透后TNF-α在肝细胞凋亡中的作用

目的:探讨TNF-α在腹部火器伤肠管穿透后肝细胞凋亡中的作用机制。方法:健康长白仔猪42只随机等分为对照组和伤后1、2、4、8、12和24h组。伤后各组建立腹部火器伤肠管穿透模型。用显色基质鲎试剂法检测各组血浆内毒素水平,用免疫组织化学图像分析法测定各组肝内TNF-α含量,采用双抗体夹心ELISA法测定各组血清TNF-α水平,同时测定肝细胞凋亡情况。结果:伤后各组血浆内毒素水平、血清TNF-α水平、肝组织TNF-α的表达及肝细胞凋亡指数均明显高于对照组(P<0.05)。血浆内毒素水平于伤后8h出现高峰,伤后12h仍维持在高峰值水平。血清TNF-α在伤后12h达到高峰(94.36±10.18)ng/L,肝内TNF-α活性和肝细胞凋亡指数均于伤后2h和12h出现2个高峰,与伤后血浆内毒素水平变化基本一致。相关分析表明,伤后肝组织TNF-α含量与血浆内毒素水平及肝细胞凋亡指数均存在正相关(P<0.05)。结论:腹部火器伤肠管穿透后内毒素血症可引起肝内和血液内TNF-α增高,介导肝细胞凋亡的发生。

阻塞性黄疸对肾功能损害的临床研究

目的:研究阻塞性黄疸患者在手术前后血液中内毒素、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、心钠素等物质浓度改变的情况及其对患者肾功能的影响程度。方法:观察阻塞性黄疸患者手术前3、1d,手术后1、3、7d5个时段内毒素、TNF-α、心钠素浓度的变化情况。并与非阻塞性黄疸的胆石症患者相比较。结果:观察组中术后1d血浆内毒素浓度较术前明显降低(P<0.05),并呈进行性下降。但术后7d仍较对照组的浓度高(P<0.05)。手术前观察组血浆心钠素含量高于对照组(P<0.01),在手术后呈进行性下降,于第7天与对照组相比差异无统计学意义。观察组血清TNF-α浓度在术前3、1d,术后1、3d均高于对照组(P<0.05),术后7d差异无显著性。结论:阻塞性黄疸患者发病过程中内毒素血症、TNF-α浓度升高是肾功能损害的重要原因,手术解除胆道梗阻能阻断病情进展,是治疗的根本方法。

基于生物信息学数据分析ELTD1在肾透明细胞癌组织中的表达、甲基化水平及其临床意义

目的:探讨表皮生长因子蛛毒素受体7穿膜结构域蛋白1(ELTD1)在肾透明细胞癌(ccRCC)组织中的表达、甲基化水平及其与患者临床病理特征和预后的相关性。方法:通过公共数据库分析ccRCC组织中ELTD1表达和甲基化的差异水平,探讨ELTD1表达水平与患者临床病理特征和预后的相关性。通过TIMER2.0数据库评估ccRCC免疫细胞浸润,筛选ELTD1相关免疫检查点基因,进行GO功能和KEGG通路富集分析,通过基因共表达分析、筛选与ELTD1相关的基因。结果:与癌旁组织比较,ELTD1在ccRCC组织中呈高表达(P<0.05)。TCGA-KIRC队列中,ELTD1的甲基化水平与其表达呈负相关(R=-0.37,P<0.01)。ELTD1转录表达在ccRCC患者年龄、T分期、M分期、临床分期及病理分级组间存在显著差异(均P<0.01),且高表达ELTD1与较长的OS和PFS密切相关(HR=0.55、0.63,均P<0.01),ELTD1高表达是ccRCC的独立保护因素。ELTD1表达与B细胞、CD4^(+)T细胞、CD8^(+)T细胞、巨噬细胞和嗜中性粒细胞的免疫浸润呈显著负相关(R=-0.16、-0.27、-0.25、-0.31、-0.27,均P<0.01)。GO功能和KEGG通路富集分析结果显示,血管生成及肿瘤相关信号通路在ELTD1高表达表型中显著富集(均P<0.01)。ELTD1共表达基因的生存分析提示,其肿瘤抑制作用与共表达网络有关。结论:ELTD1在ccRCC组织中高表达和低甲基化是患者预后良好的指标,且与免疫浸润相关。