酶联荧光免疫分析技术检测粪便中艰难梭菌毒素A/B

目的应用酶联荧光免疫分析(ELFIA)技术及PCR联合检测粪便标本中艰难梭菌毒素A/B(CDAB),分析不同临床表现的住院患者粪便标本中CDAB的检出情况。方法收集北京大学第一医院2010年8月～11月242位住院患者粪便标本,用ELFIA法检测CDAB,对检测结果为可疑的标本用PCR复测。将患者分为非抗生素相关腹泻组和抗生素相关腹泻组,对两组的CDAB阳性率进行χ2检验,并分析检测结果与临床表现的相关性。结果 242位患者中,22例ELFIA法CDAB检测为阳性,12例检测结果为可疑。12例可疑标本有10例进行了PCR复测,8例(80.0%)CDAB基因阳性。两法联合检测共计30例为CDAB阳性,阳性率为12.4%。抗生素相关腹泻组CDAB阳性率(24.0%)显著高于非抗生素相关腹泻组(6.9%)(χ2=14.21,P<0.01)。CDAB阳性组的年龄(68.2±23.6)岁高于CDAB阴性组(58.7±23.9)岁(P<0.05)。结论 ELFIA法检测CDAB,有商品试剂盒,方法简便可靠。可疑阳性标本用PCR法检测tcdA/tcdB基因,可进一步提高阳性率。艰难梭菌毒素在抗生素相关腹泻患者检出率较高,与临床表现具有较好的相关性。

志贺毒素A/B(ShT-A/B)亚单位基因的克隆与序列分析

应用PCR技术从Ⅰ型痢疾志贺茵(Shigella dysenteriae type Ⅰ)中,分别扩增出约895bp和225bp的成熟ShT-A,B基因片段,直接克隆至pGEM-T载体中,经蓝白斑筛选、PCR和双酶切鉴定正确后,命名为pGEM-ShTA_2和pGEM-ShTB_3。测序结果表明,插入的片段是ShT-A,ShT-B,且与GenBank中ShT-A,B核酸序列完全一致,从而为重组ShT-A,B的表达研究奠定了基础。

艰难梭菌毒素A/B、BD-PCR毒素基因及GDH检测对艰难梭菌相关性腹泻的诊断价值

目的探讨艰难梭菌毒素A/B及其相关毒素基因检测对艰难梭菌相关性腹泻的诊断价值。方法收集2015年1月至2015年10月我院ICU病房腹泻疑似艰难梭菌感染患者的粪便标本133例作为研究对象,分别采用艰难梭菌培养法、CDAB法、PCR毒素基因检测法及艰难梭菌毒素GDH检测法进行检测,以艰难梭菌培养法结果为金标准,计算各方法的诊断指标所包含有的特异度、敏感度、阴性预测值和阳性预测值等。结果本研究收集的133例粪便标本中,经过金标准粪便样本厌氧培养法检出阳性结果 20例,阴性结果 113例。CDAB法具有低敏感度(0.550)和高特异度(0.912),诊断符合率为0.932,BD-PCR毒素基因检测法具有高敏感度(0.950)和高特异度(0.929),诊断符合率为0.932,艰难梭菌毒素GDH检测法的高敏感度(0.900)和低特异度(0.779),诊断符合率为0.797。结论对于疑似艰难梭菌感染,可联合艰难梭菌GDH、艰难梭菌毒素A/B(CDAB)或进行荧光定量PCR毒素基因共同检测,有效降低检测时间,为临床医师及时提供准确的诊断依据,并制定行之有效的治疗措施。

台山地区艰难梭菌毒素A/B检测在院外和院内感染的临床应用

目的探讨艰难梭菌毒素A/B检测在台山地区院外和院内感染中的应用。方法收集2013年5月~2014年10月528例刚入院腹泻患者的粪便标本作为院外感染可疑病例组（院外感染组）,年龄段在8~75岁,男249例,女279例;收集同时间段523例住院超一周以上并使用抗生素3天以上的患者的粪便标本作为院内感染的可疑病例组（院内感染组）,年龄段在7~74岁,男209例,女314例。分别进行艰难梭菌毒素A/B检测,并结合细菌培养结果、临床诊断和疗效进行综合统计学分析。结果院外感染艰难梭菌率4%,院内使用抗生素后感染率16%。艰难梭菌毒素A/B检测对院外感染的检出率为85%,对院内感染的检出率为90%。结论艰难梭菌毒素A/B检测对台山地区院外和院内感染检测快速准确,值得在临床上推广应用。

腹泻患者艰难梭菌及其毒素A/B检出率分析

目的了解住院腹泻患者艰难梭菌及其毒素A/B的检出情况,为临床诊断抗生素相关性腹泻提供参考依据。方法收集2015年9月至2016年8月崇州市人民医院疑似抗生素相关性腹泻住院患者的粪便标本163份,用艰难梭菌快速检测试剂盒检测艰难梭菌特异性抗原谷氨酸脱氢酶(GDH);用酶联免疫荧光法检测GDH阳性标本中艰难梭菌毒素A/B的产生情况。结果 163份粪便标本中GDH阳性为34份,阳性率为20.86%。34份GDH阳性标本中艰难梭菌毒素A/B阳性率为41.18%(14/34),可疑阳性率为17.65%(6/34),阴性率为41.18%(14/34)。结论疑似抗生素相关性腹泻住院患者艰难梭菌GDH检出率较高,毒素A/B阳性率也比较高,提示临床应重视抗生素相关性腹泻患者艰难梭菌感染的诊断。

艰难梭菌谷氨酸脱氢酶抗原及毒素检测试剂盒的性能评估

目的对新产品艰难梭菌谷氨酸脱氢酶抗原及毒素检测试剂盒(免疫层析法,C.DIFF QUICK CHEK COMPLETE)进行性能评估。方法收集临床腹泻患者粪便标本130份,对腹泻粪便标本同时进行艰难梭菌毒素A/B检测试剂盒、艰难梭菌谷氨酸脱氢酶抗原及毒素检测试剂盒和毒素培养检测,以金标准毒素培养法结果作为参比标准,评价各种检测方法的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值,从而对艰难梭菌谷氨酸脱氢酶抗原及毒素检测试剂盒进行性能评估。结果毒素培养法检测艰难梭菌的阳性率为13.8%(18/130)。与金标准方法相比,艰难梭菌谷氨酸脱氢酶抗原及毒素检测试剂盒的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为55.6%、98.2%、83.3%和93.2%,艰难梭菌毒素A/B检测试剂盒的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为50.0%、95.6%、64.3%和92.1%。结论艰难梭菌谷氨酸脱氢酶抗原及毒素检测试剂盒特异性高,阳性预测值较高,且检测周期短,无需特殊仪器平台,可作为医院门、急诊艰难梭菌感染的初筛试剂盒。

住院腹泻患者艰难梭菌检测与分析

目的通过对住院腹泻患者粪便标本中的艰难梭菌进行筛查和不同时期检出率的比较,了解某院腹泻患者艰难梭菌的感染情况。方法收集该院2009年2—12月和2011年4—7月住院腹泻患者粪便标本106份,进行厌氧培养和API鉴定,对培养鉴定获得的菌株应用聚合酶链反应(PCR)扩增法进行A、B毒素及二元毒素基因检测;酶联荧光免疫法检测毒素A/B。结果 106份标本中,厌氧培养艰难梭菌阳性16株(15.09%)。16株菌经PCR扩增,A、B毒素均阳性,二元毒素均阴性。直接毒素A/B检测阳性率为12.26%(13/106),与厌氧培养阳性率比较,差异无统计学意义(χ2=0.16,P>0.05)。2009年2—12月和2011年4—7月两个时期的标本厌氧培养艰难梭菌阳性率分别为22.81%(13/57)、6.12%(3/49),两者比较,差异有统计学意义(χ2=5.73,P<0.05);毒素A/B检出率分别为17.54%(10/57)、6.12%(3/49),差异无统计学意义(χ2=3.18,P>0.05)。艰难梭菌检测阳性患者住院期间均使用过头孢类、喹诺酮类、碳青霉烯类、广谱青霉素、克林霉素等其中一种或多种抗菌药物。结论该院艰难梭菌相关性腹泻比较严重,抗菌药物的使用是诱使艰难梭菌感染的重要因素。

不同时期艰难梭菌感染状况分析

目的掌握医院艰难梭菌近几年的感染状况,为医院感染监测和防控提供现实依据。方法收集院内2014年1月至2014年12月106例住院腹泻患者粪便标本为前期组,同时选择2016年1月至2016年12月90例住院腹泻患者粪便标本为后期组,采用艰难梭菌显色平板筛选可疑菌落,通过镜检和质谱仪进行鉴定;同时对粪便标本通过酶免疫分析方法检测毒素A、B;对于培养阳性的菌株采用PCR扩增毒素A、B基因片段;比较两个时期艰难梭菌感染情况以及不同方法检出率的差异。结果两个检测方法厌氧培养及酶免疫分析监测艰难梭菌感染阳性率无统计学差异。同一时期不同方法阳性率比较无统计学意义,另外PCR扩增结果除后期组2株阴性外均产毒素A、B。结论两个时期艰难梭菌感染率均较高,说明我院艰难梭菌感染形势严峻,应高度关注,及时监测,防止传播和流行。

艰难梭菌的检测及临床分析

目的：了解我院艰难梭菌的感染流行情况,为防控院感爆发提供理论依据.方法：收集2016～2017年期间住院腹泻患者的大便标本,用艰难梭菌鉴别培养基显色培养,通过筛查菌落形态、 镜检,最终依赖质谱鉴定.同时对大便标本使用酶联荧光免疫测定艰难梭菌毒素A/B.收集阳性患者的临床资料,分析艰难梭菌感染相关的危险因素.结果：收集的大便标本经厌氧培养及鉴定,艰难梭菌培养阳性率为16.5％,艰难梭菌毒素检出率为12.3％,差异无统计学意义.单因素分析发现头孢一代、 头孢三代、 抗生素联用是引起艰难梭菌感染的潜在危险因素.多因素分析发现头孢三代的使用是感染艰难梭菌的独立危险因素.结论：我院艰难梭菌存在一定流行情况,同时存在易感因素,应严密监测,积极预防及控制.

艰难梭菌培养联合酶法检测毒素蛋白(A/B)的临床应用价值探索

目的通过对艰难梭菌培养及毒素检测方法比较,建立艰难梭菌培养联合酶法检测毒素蛋白(A/B)的检测流程,评估其临床应用。方法收集 2015 年-2017 年住院腹泻患者粪便标本 852份,采用显色培养法( ChromID^TM)培养艰难梭菌,阳性菌株用酶联免疫荧光法检测其毒素蛋白A/B( Clostridium difficile toxins A and B,CDAB);用酶联免疫荧光法检测毒素蛋白A/B及阳性菌株,用PCR方法检测其tcdA和(或)tedB基因进行比较,运用检出率、灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值进行效能评价。结果852 例粪便标本经显色培养共分离菌108株,粪便直接酶法A/B毒素蛋白检出率为5.99%(51/852);阳性菌株联合酶法检测A/B毒素蛋白检出率为10. 92%(93/852);108株阳性菌株联合PCR方法93株表达tcdA^+tcdB^+;6株表达tcdA^-tcdB^+;9株未表达,为tedA^-tcdB^-;阳性菌株用酶法检测毒素蛋白A/B结果93株阳性,15株阴性,且93株阳性经PCR检测基因均表达tedA^+tcdB^+;以PCR检测艰难梭菌毒素基因作为参考方法,培养阳性菌株联合酶法、粪便直接酶法检测毒素蛋白A/B的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为93. 94%、100%、100%.60%和51.52%、100%、100%、15. 79%;致性检验Kappa值分别为0.721和0. 150。结论显色培养后阳性菌株联合酶法检测艰难梭菌毒素蛋白A/B可以提高艰难梭菌检出率,与PCR毒素基因检测有较好一致性,操作简单,具有较好的临床应用价值。

103株艰难梭菌毒素基因检测及其流行病学意义

目的通过对本院住院患者粪便标本艰难梭菌培养和毒素分型,了解其感染情况及毒素型别。方法收集2021年1月—6月1000份患者粪便标本,对培养阳性并经质谱确认菌株应用PCR扩增法检测毒素A基因、B基因以及二元毒素基因。结果艰难梭菌培养阳性标本103份,阳性率为10.3%;患者平均年龄为60.3岁,平均住院天数为26.6 d。PCR检测产毒素tcd(A+B+)型67例(占65.1%);tcd(A-B+)型16例(占15.5%);tcd(A-B-)型20例(占19.4%),二元毒素(CDT)均为阴性。tcd(A+B+)型、tcd(A-B+)型、tcd(A-B-)型血液科分别有18例、4例、4例;消化科分别有16例、3例、2例。产毒素A+B+型粪便隐血试验结果≥1+的阳性率为27.3%,患者使用喹诺酮占比35.4%。结论本院艰难梭菌及毒素阳性者以老年患者居多,对有高危因素患者应加强检测和预防。同时临床抗感染应合理使用广谱抗生素,减少艰难梭菌的发病率。