有机磷类杀虫剂对毒蕈碱乙酰胆碱M_2受体磷酸化的影响

目的:研究有机磷类杀虫剂(OPs)对G蛋白结合受体激酶-2(GRK2)介导的毒蕈碱乙酰胆碱M2受体磷酸化的影响,进一步揭示有机磷类杀虫剂可能存在的其他作用途径。方法:利用亲和层析方法从猪脑中纯化毒蕈碱乙酰胆碱M2受体;将纯化的毒蕈碱乙酰胆碱M2受体,G蛋白结合受体激酶-2,[γ-p32]标记的ATP与不同浓度的对氧磷(PO)、氧毒死蜱(CPO)共同保温,聚丙烯酰胺凝胶电泳,凝胶片干燥后放射性自显影检测M2受体磷酸化结果。之后将干燥凝胶片中放射性标记的磷酸化M2受体蛋白带剪下,同位素液体闪烁计数器计数。结果:氧毒死蜱(CPO)完全抑制毒蕈碱乙酰胆碱M2受体的磷酸化,其IC50为70μM;毒死蜱(CPF)也抑制M2受体的磷酸化,而对氧磷(PO)与对硫磷(parath ion)不抑制M2受体的磷酸化。结论:不同的OPs对GRK2介导的毒蕈碱乙酰胆碱M2受体的磷酸化有完全不同的作用;毒死蜱阻断M2受体的磷酸化,提示OPs的毒性作用存在其他的可能作用途径。

激活毒蕈碱乙酰胆碱受体调控下颌下腺分泌的机制研究

下颌下腺作为三大唾液腺之一,其所分泌的唾液占静止性唾液的60%~65%,对维持摄食、味觉、抑制或杀灭病菌、保护口腔软组织及牙齿等起重要作用。全身性疾病如舍格伦综合征[又称干燥综合征(Sj gren’s syndrome, SS)]、IgG4相关性疾病等,以及局部疾病如慢性下颌下腺炎、下颌下腺放射性损伤等,可引起腺体的分泌功能低下,严重者不仅有明显的口腔黏膜干燥,还可继发猖獗龋和念珠菌感染等。2018年一项流行病学研究显示,唾液低分泌与日本社区老年男性10年死亡率呈正相关,可作为一个潜在的健康预测指标[1]。全面、深入地认识下颌下腺分泌的调控机制对探索有效的干预措施和防治唾液腺分泌功能低下具有重要的意义。

伏隔核的M_1和M_4型毒蕈碱乙酰胆碱受体参与吗啡奖赏记忆的表达

目的獉獉:探究M1受体的阻断剂及M4受体的激动剂对吗啡诱导的条件性位置偏爱表达的影响。方法獉獉:采用大鼠吗啡条件性位置偏爱(CPP)模型及脑部核团微注射的方法。结果獉獉:与生理盐水对照组相比,M1受体拮抗剂Pirenzepine可以增强吗啡CPP的表达,M4受体激动剂LY2033298也可以增强吗啡CPP的表达。结论獉獉:伏隔核的M1和M4型受体参与吗啡奖赏记忆的表达。

毒蕈碱乙酰胆碱受体新成员:孤儿受体m_5

m5受体是M受体家族一个新成员 ,与其它亚型相比 ,由于缺乏高选择性配体和标记条件以及富含m5受体的组织来源 ,目前对其分子结构、结合特性、组织分布、生理功能等知之甚少。随着免疫沉淀、原位杂交和药理学标记方法的发展 ,现已证实m5受体主要分布于大脑皮质最外层 ,海马齿状回、CA1、CA2区 ,嗅结节 ,横核以及外周血淋巴细胞、单核细胞、睫状肌等部位 ,提示m5受体在调节大脑和外周组织胆碱能神经活动方面具有独特而重要的作用 ,有可能成为治疗帕金森病、阿尔采末病、局灶性脑缺血等疾病新的药物靶点。

M5毒蕈碱乙酰胆碱受体参与药物成瘾的研究进展

M5受体是毒蕈碱乙酰胆碱受体家族的一个新成员，是毒蕈碱乙酰胆碱受体家族（M1-M5亚型）最后一个被克隆出来的，属于G蛋白偶联受体。免疫沉淀和m RNA原位杂交实验表明M5受体在中枢神经系统中特定区域表达，包括海马、丘脑、黑质和中脑腹侧背盖区（VTA）部位）^[1，2，3]。可是和其他M受体比较，M5受体表达水平较低，

毒蕈碱乙酰胆碱受体显像的分子探针

从两个方面讨论了用分子生物学技术设计的放射性标记的探针检测与疾病有关的受体浓度的变化：在技术水平上，通过分子生物学，加深了对体外实验中放射性标记探针的选择性的理解。在生理学水平上。

血清毒蕈碱乙酰胆碱受体m3自身抗体水平对甲胎蛋白阴性肝细胞癌的诊断价值

背景肝细胞癌(HCC)是一种恶性程度较高的癌症。甲胎蛋白(AFP)是临床常用的HCC诊断标志物,但其灵敏度仅为41%~65%,漏诊率较高,因此亟须寻找新的诊断标志物和诊断方法以提升AFP阴性患者等的HCC检出率。目的评估毒蕈碱乙酰胆碱受体m3自身抗体(m3AchR-Ab)对AFP阴性HCC患者的诊断效能,并探索m3AchR-Ab对HCC患者的诊断价值。方法选取2011年11月至2015年9月入库于新疆医科大学第一附属医院标本库的257例患者血清样本,其中90例已确诊为HCC患者的血清样本为HCC组,89例已确诊为良性肝病(肝硬化及肝血管瘤等肝病)患者的血清样本为良性肝病组,78例健康受试者的血清样本为对照组。使用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测并比较3组血清m3AchR-Ab水平,分析血清m3AchR-Ab水平与HCC患者性别、年龄、HCC肿瘤大小(最大直径)和数量、TNM分期、淋巴结转移、远处转移、乙肝表面抗原(HBsAg)的关系,采用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清m3AchR-Ab水平对AFP阴性HCC的诊断价值。结果HCC组血清m3AchR-Ab水平高于良性肝病组和对照组血清(P<0.05)。m3AchR-Ab水平与HCC肿瘤大小、TNM分期、淋巴结转移和HBsAg相关(P<0.05)。血清m3AchR-Ab水平诊断AFP阴性HCC的ROC曲线下面积为0.69〔95%CI(0.54,0.83)〕,最佳截断值为74.00 ng/ml,灵敏度为64.00%,特异度为91.02%。血清m3AchR-Ab联合AFP水平诊断HCC的ROC曲线下面积为0.90〔95%CI(0.85,0.95)〕,灵敏度为90.00%,特异度为88.02%。结论血清m3AchR-Ab水平对AFP阴性HCC具有一定的诊断价值,且使用m3AchR-Ab和AFP联合诊断可提高HCC诊断效能,这可为未来研究新型HCC诊断标志物提供更多参考。

对氧磷和氧毒死蜱对大鼠脑毒蕈碱乙酰胆碱M_2受体磷酸化的影响

目的研究有机磷类杀虫剂对氧磷(PO)和氧毒死蜱(CPO)对大鼠脑G蛋白偶联受体激酶2介导的毒蕈碱乙酰胆碱M2受体磷酸化的影响。方法制备亲和层析柱;利用亲和层析方法从大鼠脑中纯化毒蕈碱乙酰胆碱M2受体;将纯化的毒蕈碱乙酰胆碱M2受体或β2-肾上腺素受体、G蛋白偶联受体激酶-2、[γ-p32]ATP与对氧磷(PO)、氧毒死蜱(CPO)共同保温,聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白,放射性自显影检测M2受体磷酸化结果。结果氧毒死蜱完全抑制大鼠脑M2受体的磷酸化,其半数抑制浓度为(IC50)70μmol/L;对氧磷不抑制毒蕈碱乙酰胆碱M2受体的磷酸化;氧毒死蜱和对氧磷都不抑制β-肾上腺素受体的磷酸化。结论氧毒死蜱有选择性地抑制大鼠脑毒蕈碱乙酰胆碱M2受体的磷酸化,说明某些有机磷杀虫剂的毒性作用存在其他靶分子或作用途径。

激动剂和抑制剂影响m2毒蕈碱乙酰胆碱受体磷酸化的试验研究

目的 探讨受激活剂或抑制剂影响的G蛋白偶联受体激酶2（G-protein coupled receptor kinase 2,GRK2）介导的胆碱能m2受体磷酸化的调节机制.方法 本实验以纯化的大鼠脑毒蕈碱乙酰胆碱m2受体（muscarinic acetylcholine m2 receptor,mAChR2）为研究对象,观察氨甲酰胆碱、阿托品和肝素分别对m2受体磷酸化过程的影响.结果 显示氨甲酰胆碱明显增强m2受体的磷酸化,而阿托品或肝素（GRK2抑制剂）完全阻断了m2受体的磷酸化.m2受体的磷酸化是依赖激活剂作用发生的.结论 说明阿托品可以直接与m2受体结合.揭示了氨甲酰胆碱和阿托品等一些m2受体的激活剂及抑制剂对M2受体磷酸化的调节作用.

毒蕈碱乙酰胆碱受体在中枢神经系统中的作用

毒蕈碱乙酰胆碱受体(muscarinic acetylcholine receptor,mAChR)作为胆碱能受体家族的一员,广泛存在于副交感神经节后纤维支配的效应器细胞上。因其在中枢和外周神经系统中作用广泛而成为一直以来的研究热点。mAChR分为五种亚型(M1R^M5R),各亚型在脑内均有分布。得益于研究技术的不断发展,五种亚型在大脑内的分布情况日趋明朗。因此,近些年来在中枢神经系统方面,对于mAChR的研究越来越丰富。本文简要介绍了mAChR的主要类型、生理功能、在中枢神经系统中的分布及其与中枢神经系统疾病的关系。

昆虫毒蕈碱型乙酰胆碱受体的研究进展

毒蕈碱型乙酰胆碱受体(Muscarinic Acetylcholine Receptors,mAChRs)是昆虫神经系统中一类重要的G蛋白偶联受体。昆虫mAChRs可以分为A、B、C型三大类,它们通过偶联不同的G蛋白激活不同的第二信使,完成信号转导过程,从而发挥其功能。mAChRs参与调控昆虫多种生理反应和行为过程,如生长发育、运动、鸣声、嗅觉以及学习记忆等,是潜在的杀虫剂靶标,对昆虫mAChRs的全面研究有助于开发新型杀虫剂。本文较为全面地综述了近年来国内外昆虫mAChRs的组织分布、信号转导、药理学特性以及生理功能等方面的研究新进展,为今后研究该类受体提供参考。

毒蕈碱样乙酰胆碱受体及其信号转导

毒蕈碱样乙酰胆碱受体 (MAChRs)是G蛋白偶联受体 (GPCRs)超家族中的一员 ,具有该家族特征性的结构和信号转导方式。GTP结合蛋白 (G proteins)是一类具有GTP酶活性的蛋白质 ,由α、β、γ三个亚基构成。其中α亚基结合GDP或GTP ,分别代表G蛋白的非活化和活化状态。M受体与Gi/Go或Gq/ 11间的作用机制仍在探讨中 ,但基本过程与Gs介导的信号转导模式相似。激动剂持续作用后 。

昆虫毒蕈碱型乙酰胆碱受体的分子进化、功能及药理学研究

毒蕈碱型乙酰胆碱受体(muscarinic acetylcholine receptor,mAchR)是昆虫神经系统中一种十分重要的神经递质受体,属于G蛋白偶联受体超家族,与配体结合后激活G蛋白并通过胞内第二信使产生生物学效应,参与昆虫多种神经生理功能,是农药开发的一个潜在靶标。昆虫毒蕈碱型乙酰胆碱受体的研究,有助于提高昆虫神经生理及行为调节机制等方面的认识,并为以此为靶标的新型杀虫剂研制提供新思路。本文综述了国内外对昆虫毒蕈碱型乙酰胆碱受体的研究概况,并对GenBank中已上传的昆虫mAchR序列进行了分子进化分析,最后对昆虫mAchR研究中存在的问题及前景进行了分析和展望。

原发性干燥综合征患者毒蕈碱型乙酰胆碱受体亚型3及其受体的变化及临床意义

目的了解毒蕈碱型乙酰胆碱受体亚型3(muscarinic acetylcholine receptor M3,CHRM3)及毒蕈碱型乙酰胆碱受体3亚型抗体(M3 muscarinic acetylcholine receptor antibody,CHRM3-Ab)在原发性干燥综合征(primary Sjgren’s syndrome,pSS)发病过程中的可能作用。方法川北医学院附属医院风湿科2010年4月至2011年12月门诊及住院pSS患者43例为pSS组,同期29名健康体检女性为正常对照组。收集两组临床资料及实验室指标。实时荧光定量聚合酶链式反应检测pSS患者及健康体检者外周血单个核细胞CHRM3转录水平,酶联免疫吸附试验检测血浆CHRM3-Ab浓度,进行CHRM3转录水平、CHRM3-Ab与临床指标的相关性分析。结果 pSS组CHRM3转录水平与CHRM3-Ab浓度显著高于正常对照组,差异均有统计学意义[(0.00014±0.00030)vs(0.00009±0.00004),P<0.05;(227.29±154.81)pmol/Lvs(141.44±71.04)pmol/L,P<0.01]。Spearman相关性分析发现,pSS患者CHRM3-Ab浓度与血细胞沉降率及IgG均呈负相关(r分别=-0.452、-0.470,均P<0.05)。结论 CHRM3转录水平和CHRM3-Ab在pSS患者的高表达可能在疾病发生发展中发挥重要作用;CHRM3-Ab可能通过与CHRM3非竞争性结合而抑制乙酰胆碱与其受体作用,导致腺体分泌减少。加强对CHRM3和CHRM3-Ab研究,有望为诊治pSS带来新契机。

脊髓毒蕈碱型乙酰胆碱能受体介导吗啡依赖的神经生物学机制

作者在临床应用东莨菪碱成功治疗8000例海洛因依赖者的基础上系统研究了毒蕈碱型乙酰胆碱能受体(M)受体介导吗啡依赖神经生物学的机制.M受体拮抗剂减轻海洛因依赖者的戒断症状和吗啡依赖大鼠或猴纳络酮激发的戒断症状,提示M受体在阿片依赖中发挥重要作用.

西方蜜蜂毒蕈碱型乙酰胆碱受体基因的生物信息学分析

利用生物信息学方法分析了西方蜜蜂Apis mellifera毒蕈碱型乙酰胆碱受体的核酸和氨基酸序列,并对其组成成分、疏水/亲水区、跨膜拓扑结构域、分子系统进化关系进行了预测和推断。结果显示,该受体定位在第8条染色体上,由618个氨基酸组成,分子量69906.5D,等电点(pI)8.56;是G蛋白偶联型受体,含N-糖基化位点、蛋白激酶C磷酸化位点、cAMP/cGMP依赖蛋白激酶磷酸化位点。

洛伐他汀对大鼠海马神经元毒蕈碱样型乙酰胆碱受体的影响及与ERK信号通路的关系

目的:观察洛伐他汀对大鼠原代海马神经元毒蕈碱样型乙酰胆碱受体(mAChRs)及细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路的作用。方法:选择大鼠原代培养海马神经细胞,(1)将细胞分为对照组、Atropine处理组及U0126处理组,观察mAChRs拮抗剂Atropine及ERK1/2通路抑制剂U0126对M1 mAChR和ERK1/2信号通路的影响;(2)将细胞分为对照组、Atropine及洛伐他汀处理组、洛伐他汀组、U0126及洛伐他汀处理组,观察洛伐他汀联合Atropine或U0126对M1 mAChR和ERK1/2信号通路的影响;采用蛋白印迹法(Western blotting)检测M1 mAChR、总ERK1/2(p-ERK1/2)及磷酸化ERK(phospho-ERK1/2)蛋白表达水平。结果:(1)与对照组相比,Atropine和U0126分别处理细胞后,phospho-ERK1/2蛋白表达水平明显降低(P<0.05),M1 mAChR和pERK1/2表达水平未见明显改变;(2)与对照组相比,0.1μmol/L洛伐他汀处理神经细胞,M1 mAChR及phosphoERK1/2蛋白表达水平明显增高(P<0.05);与洛伐他汀处理组相比,联合应用洛伐他汀与Atropine处理细胞,M1 mAChR及phospho-ERK1/2蛋白表达水平的升高未受到明显影响,但联合应用洛伐他汀与U0126处理细胞,phospho-ERK1/2蛋白表达水平明显下降(P<0.01),M1 mAChR的升高未受到明显影响。结论 :洛伐他汀能够活化ERK1/2信号通路,并上调mAChRs表达水平,但洛伐他汀上调mAChRs表达水平的作用与ERK1/2信号通路无关。

洛伐他汀上调体外培养神经细胞毒蕈碱型乙酰胆碱受体及对抗β-淀粉样肽对该受体表达的抑制作用

目的观察洛伐他汀是否对毒蕈碱型乙酰胆碱受体(mAChRs)有上调作用,探讨其是否具有抗β-淀粉样肽(Aβ)的作用。方法选择原代培养的大鼠海马神经细胞和SH-SY5Y细胞,采用洛伐他汀和Aβ寡聚体(AβOs)分别或联合处理培养细胞24~48 h后,采用蛋白印迹法和实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测细胞中M1 mAChR和M3 mAChR蛋白及mRNA表达水平。结果免疫荧光染色显示原代大鼠海马神经细胞的体外培养纯度达85%以上;不同浓度洛伐他汀处理神经细胞24 h后,M1 mAChR和M3 mAChR蛋白及mRNA表达水平均明显高于对照组(P<0.05);0.5μmol/L AβOs处理神经细胞48 h后,其M1 mAChR和M3 mAChR蛋白及mRNA表达水平均明显下降(P<0.05);但预先用0.1μmol/L洛伐他汀处理神经细胞24 h,可减轻AβOs导致的M1 mAChR和M3 mAChR表达水平下降。结论洛伐他汀可能具有上调mAChRs表达水平的作用,对抗Aβ对该受体的作用。