毒蕈碱型胆碱能受体M2亚型去整合素金属蛋白酶8及骨膜蛋白与支气管哮喘患儿小气道功能的相关性分析

目的 分析毒蕈碱型胆碱能受体M2亚型(M2受体)、去整合素金属蛋白酶8(ADAM8)及骨膜蛋白与支气管哮喘患儿小气道功能的相关性。方法 选择2021年3月—2022年3月湖州市中心医院收治的112例支气管哮喘患儿为支气管哮喘组,同时选取通过健康体检的50例儿童为对照组。采用酶联免疫吸附试验测定血清M2受体、骨膜蛋白水平,采用实时荧光定量PCR法测定ADAM8相对表达量,使用常规通气法测定小气道功能相关指标。对比两组各指标表达水平、各指标在支气管哮喘组疾病不同时期、不同严重程度中的表达,并分析M2受体、ADAM8、骨膜蛋白与支气管哮喘患儿小气道功能的相关性。结果 支气管哮喘组M2受体、ADAM8、骨膜蛋白水平[(1.94±0.75)U/ml,(1.64±0.24),(84.65±12.66)μg/L]均高于对照组[(1.31±0.42)U/ml,(0.83±0.11),(70.42±9.12)μg/L],小气道功能指标用力呼气25%流速(FEF25)、用力呼气50%流速(FEF50)、用力呼气75%流速(FEF75)、最大呼气中期流量(MMEF)水平均低于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。M2受体、ADAM8、骨膜蛋白水平及小气道功能指标在支气管哮喘患儿疾病不同时期表达差异均有统计学意义(均P<0.05)。支气管哮喘患儿疾病不同严重程度M2受体、ADAM8、骨膜蛋白水平及小气道功能指标表达对比差异均有统计学意义(均P<0.05)。相关性分析发现:支气管哮喘患儿M2受体、ADAM8、骨膜蛋白与小气道功能均呈负相关(均P<0.05)。结论 M2受体、ADAM8及骨膜蛋白在儿童支气管哮喘中均为高表达,且与患儿小气道功能有关,检测M2受体、ADAM8及骨膜蛋白水平有助于评价支气管哮喘患儿小气道功能。

毒蕈碱型胆碱能受体M3调控肝癌细胞侵袭转移的研究

目的探讨毒蕈碱型胆碱能受体M3(muscarinic cholinergic receptors 3,ChRM3)活化对人肝癌细胞侵袭、转移能力的影响及其分子机制。方法 Western blot检测两种人肝癌细胞株Hep G2和SMMC-7721中ChRM3受体的表达;采用氯贝胆碱(Beth)及达菲那新(UK88525)处理肝癌Hep G2和SMMC-7721细胞,分为空白对照组、Beth组、Beth+UK88525组、UK88525组,经处理48 h后,Transwell实验检测两种肝癌细胞经不同分组处理后侵袭、迁移能力的变化,Western blot检测各组细胞中上皮-间质转化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)标志蛋白的表达及下游信号通路PI3K/Akt的变化;采用shRNA干扰质粒经Lipofectamine 2000TM转染肝癌细胞Hep G2以沉默ChRM3,分为空白对照组、Beth组、Beth+sh ChRM3组、sh ChRM3组,分别检测细胞的侵袭、转移能力及EMT、下游PI3K/Akt的改变。结果 Hep G2和SMMC-7721两种肝癌细胞中均有ChRM3受体的表达;Transwell实验显示:Beth单独处理组对肝癌细胞的迁移和侵袭有明显的促进作用,而UK88525能够抑制Beth对肝癌细胞迁移侵袭能力的促进作用(P<0.05);Western blot结果显示:Beth单独处理组能够上调EMT标志蛋白N-Cadherin和Vimentin,下调E-Cadherin的表达,UK88525处理后能够明显抑制Beth促进Hep G2细胞EMT的过程(解除Beth对Hep G2细胞EMT的促进过程),同时也能够抑制PI3K/Akt的活化(P<0.05);干扰质粒沉默ChRM3受体同样能够抑制Beth促肝癌细胞迁移、侵袭的作用,并且抑制Beth诱导的EMT和下游PI3K/Akt的活化(P<0.05)。结论 ChRM3活化能够通过PI3K/Akt信号通路促进肝癌细胞的侵袭和转移。

毒蕈碱型M5受体亚型及生物学特性

M5是最后一个被克隆出的乙酰胆碱毒蕈碱型受体亚型,具有G蛋白偶联受体家族的基本结构特征, 其信号转导方式既可以与G蛋白偶联,激活多种效应酶 (腺苷酸环化酶、磷脂酶C、磷脂酶A2 )产生相应的生物学效应,又可作用于离子通道来调节细胞间的信号传递。M5生理作用主要与调节中枢NO的生成和DA的释放有关,可能为药物滥用成瘾、DA系统功能障碍性疾病、阿尔采末病、脑缺血等的药物治疗提供一个新靶标。

激活α7烟碱型乙酰胆碱能受体(α7nAchR)增加小鼠海马组织M2型小胶质细胞数量并减轻脓毒症脑病

目的检测α7烟碱型乙酰胆碱能受体(α7nAchR)对M2型小胶质细胞的影响,探索其减轻脓毒症脑病(SAE)的机制。方法采用盲肠结扎穿刺术(CLP)于2月龄雄性C57BL/6小鼠构建SAE模型,比较两组小鼠学习记忆能力的改变。采用Western blot法检测海马组织中α7nAchR的表达变化。给予腹腔注射α7nAchR的激动剂二甲氧基苯亚胺基假木贼碱(GTS-21),观察给予激动剂后海马组织中α7nAchR的表达变化,同时探索GTS-21是否能减轻SAE小鼠的学习记忆障碍。通过免疫荧光细胞化学染色法检测精氨酸酶1(ARG1)、离子钙结合接头蛋白1(Iba-1)的表达确定SAE小鼠M2型小胶质细胞数量的变化,以及GTS-21对M2型小胶质细胞数量的影响。结果SAE小鼠的新物体识别及恐惧记忆能力显著下降,小鼠海马组织中α7nAchR表达显著降低。GTS-21可改善SAE小鼠的学习记忆障碍,增加脑组织中α7nAchR的表达。同时,脓毒症小鼠海马组织中M2型小胶质细胞显著减少,而GTS-21可显著增加M2型小胶质细胞的数量。结论SAE小鼠海马组织中α7nAchR表达降低,使抑制炎症反应的M2型小胶质细胞减少,GTS-21可显著增加M2型小胶质细胞数量,减轻SAE小鼠的学习记忆障碍。

M型磷脂酶A2受体抗体及免疫球蛋白IgG亚型在乙型肝炎病毒相关膜性肾病中的检测

目的通过比较原发性膜性肾病(IMN)和乙型肝炎病毒相关膜性肾病(HBV-MN)患者血清中M型磷脂酶A2受体抗体(PLA2R)水平及肾活检组织中IgG亚型沉积情况,探讨PLA2R抗体和IgG亚型对HBV-MN诊断的意义。方法应用ELISA法检测了10例IMN患者和25例HBV-MN患者血清中浓度,以同期7例微小病变肾病(MCD)患者血清检测作为阴性对照。通过免疫荧光方法检查免疫球蛋白IgG亚型在IMN和HBV-MN患者肾活检组织中的沉积。结果在IMN组,患者血清M型PLA2R抗体浓度显著高于HBV-MN组患者,分别是(15.4±7.2)和(10.3±5.7)μg/mL,差异有统计学意义(P<0.05)。IgG亚型(IgG1、IgG2、IgG3和IgG4)在IMN组和HBV-MN组患者肾活检组织肾小球毛细血管壁的沉积无显著性区别。结论检测血清M型PLA2R抗体水平对区分HBV-MN和IMN患者具有一定价值,而IgG亚型在HBV-MN和IMN患者肾活检组织的分布则未发现明显不同。

糖尿病肾病患者治疗前后血清中抗AT1、α1、β1及M2受体水平变化及其临床意义

目的探讨糖尿病肾病(DN)患者治疗前后血清中抗血管紧张素Ⅱ受体1型(AT 1-受体)、α1-肾上腺素受体(α1-受体)、β1肾上腺素受体(β1-受体)及M 2胆碱能受体(M 2-受体)水平变化及其临床意义。方法纳入DN患者115例(DN组)、2型糖尿病(T2DM)患者65例(T2DM组)和健康体检者46例(NC组),检测DN组、T2DM组治疗前及治疗8周后和NC组的相关实验室指标和自身抗体阳性率,分析两者相关性及不同疗效对自身抗体阳性率的影响,并将治疗前AT 1、α1、β1及M 2受体水平诊断DN做ROC曲线分析。结果治疗后,DN组、T2DM组的尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、尿白蛋白排泄率(Urea)值显著降低(P<0.05),肾小球过滤率(GFR)显著提高(P<0.05),差异均有统计学意义(P<0.05);治疗后,DN组AT 1、α1、β1及M 2受体阳性率显著降低(P<0.05),显著低于治疗前(P<0.05)、T2DM组治疗后(P<0.05)和NC组(P<0.05),差异有统计学意义(P<0.05);DN组患者中,AT 1受体、α1受体、β1受体、M 2受体与血BUN、血Scr、尿Urea呈显著正相关性(P<0.05),与GFR呈显著负相关性(P<0.05);DN治疗有效组的AT 1、α1、β1及M 2受体阳性率显著低于无效组(P<0.05);治疗前AT 1、α1、β1及M 2受体水平诊断DN做ROC曲线分析发现,四者受体和其联合诊断DN的曲线下的面积(AUC)分别为0.669、0.676、0.711、0.675和0.724,灵敏度分别为87.7%、90.8%、89.2%及92.3%和92.3%,特异性分别为53.9%、55.7%、47.0%及57.4%和50.4%。结论AT 1、α1、β1及M 2受体不仅可反映DN患者慢性肾功能不全情况,还可预测DN疗效,临床诊断价值确切。

吴茱萸碱抑制M2型巨噬细胞功能的机制研究

目的:吴茱萸碱是中药吴茱萸重要生物碱成分之一,其具有明显的抗炎作用,但具体机制不清。研究显示瞬时受体电位香草醛亚型1受体(Transient Receptor Potential Vanilloid Type 1 Channel,TRPV1)对炎症反应具有明显的抑制作用,而吴茱萸碱可激活TRPV1受体。本研究以人单核细胞(THP-1)培养模型,探明吴茱萸碱对M2型巨噬细胞功能的影响及TRPV1受体参与该过程中的作用,从而阐明吴茱萸碱抑制炎症反应的分子生物机制。方法:在THP-1细胞培养模型上,观察吴茱萸碱对白介素-4(Interleukin-4,IL-4)诱导的M2型巨噬细胞功能的影响,以及特异性TRPV1受体拮抗剂Capsazepine(CAPZ)对该过程的影响,并分别利用ELISA、荧光定量PCR和western blot确定M2型巨噬细胞功能指标,其中包括TGF-β1的产生、Arginase-1和Mannose Receptor m RNA和蛋白的表达。结果:本研究发现吴茱萸碱明显抑制IL-4诱导的M2型巨噬细胞功能亚型,其主要表现为TGF-β1分泌产生下降(P<0.05),同时伴有Arginase-1和Mannose Receptor m RNA和蛋白表达的降低(P<0.05),以上结果可被特异性TRPV1受体拮抗剂CAPZ所阻断(P<0.05)。结论:本研究显示吴茱萸碱通过激活TRPV1受体抑制M2型巨噬细胞功能反应,从而实现其抑制炎症反应的作用。

IgG亚型、PLA2R及血清抗体检测在特发性膜性肾病诊断中的意义

目的研究特发性膜性肾病(IMN)患者肾组织IgG亚型、PLA2R及血清抗体表达,并评估PLA2R及抗体在IMN诊断中的价值。方法选取经肾活检证实的65例IMN患者,同时选取乙型肝炎相关膜性肾病(HBV-MN)、肿瘤相关膜性肾病等继发性膜性肾病28例及其他肾病25例(IgAN、微小病变肾病等)作为对照。本实验我们采用免疫组化荧光染色观察肾组织PLA2R及IgG亚型的表达,ELISA法检测血清抗PLA2R抗体,并将其与患者肾功能做相关分析。结果IgG4在IMN患者肾组织表达最多;肾组织PLA2R在IMN组、继发性膜性肾病组及其他肾病组阳性比例分别为76.92%、10.7%、4.0%,其诊断IMN的敏感度为76.9%,特异性为92.5%;血清抗PLA2R在IMN组、继发性膜性肾病组及其他肾病阳性比例分别为70.7%、7.1%、4.0%,其诊断IMN的敏感度为70.7%,特异性为94.3%;肾组织PLA2R及血清抗PLA2R抗体阳性比例在IMN患者的表达显著高于其他肾病,差异有统计学意义(P<0.05);且血清抗PLA2R抗体与血清ALB成负相关(r=-0.500)、与24 h尿蛋白成正相关(r=0.617)。结论肾组织IgG4、PLA2R及其血清抗PLA2R抗体可能作为特发性膜性肾病患者诊断标志物,用于IMN的诊断及病情的评估。

肿瘤相关膜性肾病：抗足细胞自身抗体与肾组织IgG亚型的检测

目的:观察肿瘤相关膜性肾病(MN)的临床病理特点,并探讨肿瘤与MN的关系。方法:回顾分析临床与病理诊断为MN的患者10例,均在肾活检同时或1年内确诊为恶性肿瘤,观察其临床病理特点及转归。检测肾活检时血清抗M型磷脂酶A2受体(PLA2R)自身抗体,并进行肾小球IgG亚型免疫荧光染色。结果:10例患者中男性9例,女性1例。起病年龄40～65岁,平均年龄(53.6±6.67)岁。导致MN的恶性肿瘤均为实体瘤,其中肺癌(5例)、胃癌(2例)及结肠癌、舌癌,喉癌各1例。肾活检时仅3例患者分别有咯血、呕血及大便潜血阳性等肿瘤相关症状,余7例患者在常规检查中或随访中发现肿瘤。肾脏主要临床表现为蛋白尿和水肿,其中8例表现为肾病综合征(NS),肾功能均正常。光镜下部分患者可见少量单个核细胞和中性粒细胞浸润,无明显肾小管间质急性损伤。10例中3例患者抗PLA2R自身抗体阳性;8例患者肾组织以IgG1沉积为主(IgG4阴性),2例抗PLA2R自身抗体阳性患者肾组织IgG1和IgG4沉积强度相同。随访中,7例抗PLA2R抗体阴性患者中2例肿瘤切除术后蛋白尿转阴,2例未能行手术NS持续,3例因肿瘤恶化死亡。3例抗PLA2R抗体阳性患者均行手术切除肿瘤,1例术后蛋白尿始终未好转,2例手术后蛋白尿曾转阴,但半年后复发。结论:导致MN的恶性肿瘤主要来自上皮细胞的肿瘤,其临床表现及病理特点与特发性膜性肾病(IMN)并无明显差异。多数恶性肿瘤相关性MN患者血清抗PLA2R抗体阴性,肾组织以IgG1沉积为主提示其发病机制不同于IMN。而少数患者血清中存在抗PLA2R抗体,肾组织IgG1、IgG4均有沉积提示可能为IMN合并肿瘤。

胆碱能抗炎效应介导醒脑静对脓毒症相关性脑病的保护作用

目的探讨胆碱能抗炎效应是否介导了醒脑静注射液对脓毒症相关性脑病(SAE)的神经保护作用.方法用随机数字表法将8周龄雄性Wistar大鼠分为脓毒症组、醒脑静组及对照组,每组18只.通过腹腔注射脂多糖(LPS)10mg/kg制备脓毒症大鼠模型;对照组给予等量生理盐水.醒脑静组于制模前30min经腹腔注射醒脑静注射液5mL/kg;对照组及脓毒症组给予等体积生理盐水.制模后24h,用尼氏染色法检测海马神经元细胞损伤情况;用原位末端缺刻标记法(TUNEL)检测细胞凋亡情况;用免疫荧光染色分析胆碱乙酰转移酶(ChAT)及毒蕈碱型乙酰胆碱受体M1(CHRM1)表达以评估胆碱能神经功能.结果脓毒症组大鼠神经元细胞出现明显损伤以及细胞凋亡〔凋亡率(%):59.0±10.7比2.3±0.6,P<0.01〕,并伴随着ChAT及CHRM1表达降低〔ChAT(荧光强度):0.042±0.011比0.071±0.013,CHRM1(荧光强度):0.018±0.004比0.322±0.067,均P<0.01〕.醒脑静组神经元细胞损伤以及细胞凋亡程度较脓毒症组显著减轻〔凋亡率(%):31.9±6.9比59.0±10.7,P<0.01〕,并伴随着ChAT及CHRM1表达增加〔ChAT(荧光强度):0.087±0.016比0.042±0.011,CHRM1(荧光强度):0.253±0.053比0.018±0.004,均P<0.01〕.结论脓毒症导致的神经元细胞损伤、细胞凋亡以及胆碱能神经功能异常参与了SAE的发病机制,而胆碱能抗炎效应可能介导了醒脑静注射液的神经保护作用.

莨菪烷类化合物拮抗M_3受体、抑制中性粒细胞弹性蛋白酶活性的研究

目的·设计、合成5个新莨菪烷类化合物,测试其拮抗M3受体、抑制中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)的活性,初步分析2种活性的构效关系。方法·对莨菪烷母核的C-3α位、N原子进行结构改造,以3α-羟基莨菪烷(A0)为起始物,合成A1~A3、B1、C1。选取豚鼠气道环为测试样本,通过离体组织功能实验,测试目标物对M3受体的拮抗活性。利用NE催化底物PGlu-Pro-ValPNA的水解反应,测定有色产物硝基苯胺(PNA)的吸光度值[D(405 nm)],获得目标物对NE的抑制活性。结果·5个新化合物对M3受体都具有较强的拮抗作用,其中A2的拮抗活性最大,拮抗参数pA_2(M_3)=9.004;并且A2对NE具有较明显的抑制作用(抑制率Y_(A2)=20.29%)。结论·在莨菪烷母核的C-3α位引入强吸电子基团磺酰基和大体积疏水基团时,有利于同时提高化合物拮抗M_3受体、抑制NE的活性。

肝炎平对肝纤维化大鼠肝组织中M1型胆碱能受体和β_2型肾上腺素能受体表达的影响

[目的]研究肝炎平对肝纤维化大鼠肝细胞神经递质受体的作用,探讨其抗肝纤维化的可能机制。[方法]将38只Wistar大鼠分为3组:正常对照(N)组8只、肝炎平(G)组15只及模型(M)组15只。采用光镜及电镜观察肝组织病理学改变;免疫组织化学SP法检测各组肝组织M1型胆碱能受体(M1-AChR)和β2肾上腺素能受体(β2-AR)的表达水平。[结果]G组病理改变较M组明显改善,G组M1-AChR的表达较M组降低而β2-AR的表达较M组显著升高(P<0.05)。[结论]肝炎平能通过抑制肝组织M1-AChR的表达同时增加β2-AR的表达,从而调节神经递质在肝纤维化中的作用。

M受体的研究进展

M受体是机体中最重要的受体之一 ,根据药理学分类可分为M1,M2 ,M3和M4 4种药理学亚型 ,根据分子克隆技术可将其分为m1,m2 ,m3,m4 和m5,其中M1,M2 和M3分别对应于m1,m2 和m3。各种亚型基本结构相似 ,主要差别在于胞浆内 3环 (i3环 )的不同 ,这决定了它们功能的不同。m1,m3和m5结构功能相似 ,可激活PI系统和cAMP ,m2 和m4 则可抑制腺苷酸环化酶系统。不同部位各种亚型的分布和功能也有所不同。M受体亚型的分布和功能及其活性药物对临床具有重要意义。

M_3受体与呼吸系统疾病研究进展

毒蕈碱型乙酰胆碱受体在机体分布广泛,作用重要。目前对其亚型中的毒蕈碱型乙酰胆碱受体1、毒簟碱型乙酰胆碱受体2受体研究较多,但对毒蕈碱型乙酰胆碱受体3受体的研究,特别在呼吸系统疾病中的表达尚处在起步阶段。毒蕈碱型乙酰胆碱受体3受体广泛分布在气道平滑肌和腺体上,研究表明毒蕈碱型乙酰胆碱受体3受体的改变可影响气道疾病的严重程度与治疗效能。因此,寻找特异性、高度选择性的毒蕈碱型乙酰胆碱受体3受体拮抗剂,将是今后开始治疗呼吸系统疾病专用新药的又一突破口。

不典型膜性肾病患者血清M型磷脂酶A2受体抗体及肾组织IgG亚型分布的研究

目的通过检测不明原因的不典型膜性肾病（UAMN）患者血清中M型磷脂酶A2受体（PLA2R）抗体及肾组织中IgG亚型的分布，研究UAMN患者血清中PLA2R抗体及肾组织中IgG亚型的分布特点。方法人选2004年2月至2011年11月于北京大学人民医院肾内科诊断为UAMN的患者20例。对照组包括特发性膜性肾病（IMN）患者20例，继发性膜性肾病（SMN）患者13例。其中SMN组中包括狼疮膜性肾病（LMN）5例，乙肝病毒相关性膜性肾病（HBV-MN）8例。分析入选患者的临床及病理资料，检测血清PLA2R抗体及肾组织中IgG亚型的分布特点。结果（1）UAMN组患者肾活检时平均年龄为（37．9±3．8）岁，IMN组为（50．1±3．0）岁，SMN组为（49．5±4．5）岁，其中UAMN组平均年龄显著低于IMN组（P=0．0178）。UAMN组、IMN组和SMN组的女／男比例分别为0．8：1、0．7：1和0．6：1，差异无统计学意义。（2）与SMN组比较，UAMN组24h尿蛋白定量更低（3．47g比7．89g，P=0．023），大量蛋白尿患者的比例也更低（50．0％比84．6％，P=0．043），血清IgG水平更低[（8．40±3．58）g／L比（10．09±4．69）g／L，P=0．025]，血清ANA阳性率也更低（10．0％比53．8％，P=0．006）。人血白蛋白、血肌酐、eGFR、血清HBsAg阳性率、血清HBeAg阳性率、血清抗HCV阳性率以及低白蛋白血症、肾病综合征患者比例在3组中的差异均无统计学意义。（3）。肾脏病理免疫荧光结果示，与IMN组比较，UAMN组IgA、IgM和C1q荧光阳性率更高，差异有统计学意义（均P〈0．01）；与SMN组比较，则两组的IgA、IgG、IgM、C1q和c3荧光阳性率及荧光强度差异均无统计学意义。（4）在所有53例患者血清中，仅有10例IMN组患者血清抗PLA2R自身抗体检测为阳性，在IMN组PLA2R自身抗体检出率为50％。3组间的PLA2R自身抗体检出率差异有统计学意义（P〈0．01）。（5）对肾组织IgG亚型的检测：UAMN组中IgG1亚型阳性率最高（40％），IgG3亚型阳性率最低（15％）。IMN组中，IgG4亚型阳性率最高（60％），其次为IgG1（15％），IgG2及IgG3亚型阳性率最低（均为5％）。SMN组中，IgG1亚型阳性率最高（76．9％），IgG4亚型阳性率最低（30．8％）。UAMN组IgG1、IgG3亚型阳性率与IMN及SMN组比较差异均无统计学，IgG2亚型阳性率表现出与SMN组差异有统计学意义（30．0％比69．2％，P〈0．05），IgG4亚型阳性率与IMN组差异有统计学意义（20％比60％，P〈0．05）。SMN组IgG1、IgG2和IgG3亚型的阳性率均显著高于IMN组（分别为76．9％、69．2％、46．2％比15％、5％、5％，均P〈0．01）。IMN组IgG4亚型在。肾小球沉积的阳性率高于SMN及UAMN组，但仅与UAMN组差异具统计学意义（P=0．0225）。UAMN组显示出了与IMN及SMN组的不同，更类似于SMN组特点。结论UAMN组患者抗PLA2R自身抗体检测均为阴性，肾组织以IgG1亚型沉积为主，表现了类似SMN的特点，但在临床指标上又显示了与SMN的不同。因此要加强临床的长期随访,深入对这一类疾病的研究。

限制性内切酶策略鉴定CRISPR/Cas9介导的Chrm3基因敲除小鼠

CRISPR/Cas9技术是近年发展起来的快速基因编辑技术。通过该技术已对多种生物的基因组进行了编辑。由此产生的基因编辑动物的建系与鉴定是随之而来较为繁琐的工作。单导向RNA(single-guide RNA,sgRNA)靶序列的设计和确定不仅影响后续靶向基因组的效率,还可作为优化鉴定、筛选方法的参考。本研究在选取sgRNA靶序列时,不仅依据软件的评分,还分析了sgRNA靶序列是否含有酶切位点,以便对后续纯合子/杂合子进行鉴定。结果显示,以特异引物扩增的野生型小鼠Chrm3基因片段可被限制性内切酶BanⅡ切为两个片段;而纯合子小鼠"丢失"该酶切位点,其PCR产物不能被切开;杂合子小鼠PCR产物被不完全切开,凝胶电泳结果可见三条带。本研究结果提示该策略可有效简化基因编辑动物建系鉴定工作,提高鉴定效率及改善阳性动物辨识效果。

肾小球PLA2R检测在膜性肾病诊断中的应用

目的分析血清抗M型磷脂酶A2受体(PLA2R)抗体、肾小球PLA2R表达及IgG亚型沉积在膜性肾病中的作用,探讨其在膜性肾病中的诊断价值。方法选取经肾活检术诊断的膜性肾病79例,其中特发性膜性肾病(IMN)65例,继发性膜性肾病(SMN)14例(其中11例Ⅴ型狼疮肾炎,2例乙型肝炎病毒相关性膜性肾病,1例梅毒相关性膜性肾病)。血清抗PLA2R抗体应用欧蒙间接免疫荧光实验(IIFT)检测,肾小球PLA2R表达及IgG亚型沉积采用免疫荧光法,并比较特发性膜性肾病和继发性膜性肾病2组患者临床资料是否有差异。结果 65例IMN患者中,肾小球PLA2R表达阳性者57例(87.7%);血清抗PLA2R抗体阳性者47例(72.3%);IgG4亚型沉积阳性者59例(90.8%)。14例SMN患者肾小球PLA2R表达均阴性,血清抗PLA2R抗体阳性者2例(14.3%),IgG4亚型沉积阳性者4例(28.6%)。肾小球PLA2R表达阳性诊断IMN灵敏度为87.7%,特异度为100%;血清抗PLA2R抗体阳性诊断IMN灵敏度为72.3%,特异度为85.7%。IMN患者中肾小球PLA2R表达、血清抗PLA2R抗体、IgG4亚型沉积阳性比例高于SMN。2组患者临床资料在性别构成比存在统计学差异,年龄、白蛋白、血肌酐、总胆固醇、24小时尿蛋白定量、肾小球滤过率2组差异无统计学意义(P>0.05)。结论 IMN患者中肾小球PLA2R表达阳性率高,在膜性肾病鉴别诊断中具有优势作用。

CHRM3基因T-149C多态性与2型糖尿病患者体重和血脂水平的关联研究

目的探讨毒蕈碱乙酰胆碱受体亚型3（CHRM3）基因T-149C多态性与2型糖尿病发病风险及代谢紊乱的相关性。方法用PCR—RFLP技术在573例上海地区汉族人中检测该基因位点的多态性，计算基因频率分布及比较不同基因型亚组间的各种临床代谢参数。结果（1）基因频率分布在2型糖尿病组和正常糖耐量组之间的差异无统计学意义。（2）在2型糖尿病组中，TT基因型人群体重指数显著高于TC＋CC基因型[（26．99±3．59vs25．34±3．48）kg／m^2，P=0．001]。（3）2型糖尿病组体重指数≥25kg／m^2亚组中TT基因型人群总胆固醇水平高于TC＋CC型[（5．75±1．26vs5．27±1．14）mmol／L，P=0．030]。结论CHRM3基因T-149C多态位点可能参与2型糖尿病患者体重和脂代谢调节。