毒蕈碱样胆碱能受体在慢性阻塞性肺疾病中的作用

慢性阻塞性肺疾病（COPD）以中央气道黏液分泌增加,小气道壁损伤和修复反复发生导致气道重塑,引起固定性气道阻塞及不可逆性肺泡结构丧失为主要的病理特征。毒蕈碱样胆碱能受体（m AchR,简称M受体）是气道中主要的副交感神经递质,通过胆碱能神经释放的乙酰胆碱（Ach）调节气道平滑肌张力和黏液的分泌,是COPD患者气道最主要的可逆性成分。

毒蕈碱样胆碱能受体结构的研究进展

毒草碱样胆碱能受体存在多种亚型,近年已推测了它们的氨基酸序列,证明不同的亚型有着各自相对应的基因编码。毒蕈碱样胆碱能受体是一种糖蛋白,其构象不恒定,可在其它因素影响下发生改变,表现出不同的结合性质。在正常生理状态下,此种受体与鸟苷酸调节蛋白相偶联,镶嵌在细胞膜的磷脂双分子层中。

毒蕈碱样胆碱能受体与变应性鼻炎关系研究进展

变应性鼻炎是机体暴露于变应原后主要由Ig E介导的鼻黏膜非感染性慢性炎性疾病。毒蕈碱样胆碱能受体(M受体)作为一种G蛋白偶联受体,广泛分布在鼻黏膜神经细胞、上皮细胞、腺细胞、血管内皮细胞和平滑肌细胞等细胞膜上,且与变应性鼻炎的发生发展关系密切。M受体拮抗药在变应性鼻炎中具有减少鼻分泌、缓解鼻塞、降低气道高反应性和抗炎等药理作用,其中M3受体在鼻黏膜中分布最广、作用最多。了解M受体(尤其是M3受体)与变应性鼻炎的关系,可为研究变应性鼻炎的发病机制和治疗方法提供新的思路。

毒蕈碱样乙酰胆碱受体及其信号转导

毒蕈碱样乙酰胆碱受体 (MAChRs)是G蛋白偶联受体 (GPCRs)超家族中的一员 ,具有该家族特征性的结构和信号转导方式。GTP结合蛋白 (G proteins)是一类具有GTP酶活性的蛋白质 ,由α、β、γ三个亚基构成。其中α亚基结合GDP或GTP ,分别代表G蛋白的非活化和活化状态。M受体与Gi/Go或Gq/ 11间的作用机制仍在探讨中 ,但基本过程与Gs介导的信号转导模式相似。激动剂持续作用后 。

电针肾俞穴对肾阳虚近视豚鼠视网膜M1受体表达的影响

目的:观察电针肾俞穴对肾阳虚近视豚鼠生长发育、视力及视网膜毒蕈碱样乙酰胆碱(mAChR)M1受体表达的影响,为肾阳虚近视的治疗提供依据。方法:将60只豚鼠随机分为正常对照(NC)组、透镜诱导近视(LIM)组、肾阳虚近视假穴(KYDM+SHAM)组、肾阳虚近视电针(KYDM+EA)组,每组15只。NC组不采取干预措施;LIM组豚鼠右眼配戴-6.00 D透镜构建近视模型;其余两组在戴镜基础上连续2周腹腔注射氢化可的松(剂量10 mg/kg)构建肾阳虚近视模型,造模2周后,KYDM+EA组电针豚鼠双侧肾俞穴,KYDM+SHAM组电针豚鼠臀部假穴,共4周。观察造模不同时间各组豚鼠一般情况,测量体质量和肛温,检测双眼屈光度和眼轴长度,检测血清游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)、睾酮(T)、雌二醇(E_(2)),并在造模结束后采用定量聚合酶链反应(Q-PCR)、免疫组织化学和蛋白质印迹法检测视网膜M1受体mRNA和蛋白表达水平。结果:造模2周后,KYDM+SHAM组和KYDM+EA组豚鼠出现毛发枯槁、无光泽及消瘦、拱背眯眼、倦怠懒动、畏寒肢冷等肾阳虚症状,血清FT3、FT4、T水平低于LIM组,E_(2)高于LIM组,体质量、肛温以及右眼屈光度均低于LIM组,眼轴长度长于LIM组,差异均有统计学意义(P<0.05)。电针4周后,KYDM+EA组豚鼠肾阳虚症状有效改善,血清激素水平趋于正常,与KYDM+SHAM组相比,体质量、肛温、右眼屈光度均明显升高,右眼眼轴长度缩短,视网膜M1受体mRNA和蛋白表达水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与LIM组相比,KYDM+EA组豚鼠体质量增加,差异有统计学意义(P<0.05);肛温、右眼屈光度和眼轴长度、视网膜M1受体mRNA和蛋白表达水平差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:电针肾俞穴有利于促进肾阳虚近视豚鼠生长发育恢复及视力改善,机制可能与降低视网膜中M1受体表达有关。

氨甲酰胆碱和毛果芸香碱对血管内皮细胞M受体基因表达的调节作用

目的：比较氨甲酰胆碱和毛果芸香碱对血管内皮细胞M受体基因表达调节作用的异同点。方法：氨甲酰胆碱和毛果芸香碱分别孵育培养的牛主动脉内皮细胞10h后，提取细胞总RNA，RT-PCR方法测定M受体5个亚型mRNA的表达。结果：M_1～M_5受体mRNA在牛主动脉内皮细胞上均有表达，氨甲酰胆碱和毛果芸香碱孵育后表达量均增加，但二者之间无差异。结论：氨甲酰胆碱和毛果芸香碱对M受体5个亚型的基因表达均发生了相同的影响，两者对M受体可能的作用尚不能解释其对血管张力的影响。

中枢乙酰胆碱受体及其功能研究进展

近半个世纪的所有科学发展中,神经化学是发展最快的科学分支之一。自1921年Loewi在蛙心灌流实验中,证明神经末梢释放化学物质作用于心肌,揭开神经化学帷幕以来,对这类化学物质即神经递质的研究已达到相当深度和广度。不仅相继证实了如5—羟色胺、多巴胺、去甲肾上腺素、内源性阿片样肽等神经递质,而且揭示了它们有着广泛的生理功能。

不同浓度乙酰胆碱对骨骼肌干细胞增殖、分化的影响

目的探讨不同浓度乙酰胆碱对骨骼肌干细胞增殖和分化的影响及可能的机制。方法培养小鼠骨骼肌干细胞C2C12细胞。(1)采用实时定量PCR法及Western blotting法检测C2C12细胞毒蕈碱样乙酰胆碱受体M1~M5亚型表达情况。(2)将C2C12细胞分为对照组、乙酰胆碱1组、乙酰胆碱2组、乙酰胆碱3组、乙酰胆碱4组,分别加入乙酰胆碱0、10-8、10-7、10-6、10-5mol/L,分别培养24、48、72 h后,采用CCK8法检测细胞增殖情况,采用实时定量PCR法检测细胞增殖标志基因Pax7 mRNA表达。(3)取用诱导分化1 d后的C2C12细胞,分为对照2组、乙酰胆碱5组、乙酰胆碱6组、乙酰胆碱7组、乙酰胆碱8组,分别加入乙酰胆碱0、10-8、10-7、10-6、10-5mol/L,培养5 d,采用光学显微镜观察法观察各组肌管的形成情况,采用实时定量PCR法检测细胞分化相关基因生肌调节因子(MyoD)、肌细胞生成蛋白(MyoG)、生肌调节因子(MYf5)mRNA表达。结果 (1)M2受体mRNA及蛋白表达均为最高,M3受体mRNA及蛋白表达均为最低(P均<0.05)。(2)与对照组比较,乙酰胆碱1~4组各时点细胞增殖及Pax7 mRNA表达差异均无统计学意义(P均>0.05)。(3)光镜下发现,与对照2组相比,乙酰胆碱5组C2C12细胞分化明显,且肌管数目略有增多;乙酰胆碱6~8组C2C12细胞分化被抑制,以乙酰胆碱8组分化为成熟肌管数目减少最明显。乙酰胆碱5、6组MyoG mRNA表达均高于对照2组(P均<0.05)。乙酰胆碱7、8组MyoG、MyoD、Myf5 mRNA表达均低于对照2组,且乙酰胆碱8组MyoG、MyoD、Myf5 mRNA表达均低于乙酰胆碱7组(P均<0.05)。结论高浓度乙酰胆碱可抑制C2C12细胞分化及其肌管形成,其机制可能与抑制分化相关基因MyoG、MyoD、Myf5的表达有关。

M 受体配基结合位点与其细胞外氨基末端的多肽有关

目的：探讨Ｍ受体配基结合位点的分子特点。方法：人工合成ｍ１和ｍ２胆碱受体蛋白在细胞外侧的一段多肽，联接蛋白ＫＬＨ后免疫家兔，制备出抗血清。经ＥＬＩＳＡ法，该抗血清具有效价高和特异性强的特点。观察该抗体对Ｍ受体配基结合位点的影响。结果：特异抗体可影响３Ｈ－ＱＮＢ与Ｍ受体的结合。结论：Ｍ受体的配基结合位点与其细胞外氨基末端的氨基酸序列有关。人工抗原制备高效价特异性Ｍ受体亚型抗体对进一步了解药物与Ｍ受体相互作用的分子机制以及建立新型Ｍ受体的检测方法均有重要意义。

小肠平滑肌功能紊乱机制研究进展

胃肠动力紊乱性疾病的观察和研究在儿科仍属初级阶段,小肠平滑肌毒蕈碱样胆碱能受体平衡的变化、L型钙离子通道活力改变及Cajal间质细胞网络和数量的改变在小肠平滑肌功能紊乱发病机制中有着重要的意义。该文重点阐述毒蕈碱样胆碱能受体、L型钙离子通道及Cajal间质细胞三大因素在导致小肠动力紊乱中的作用机制。

M受体的研究进展

M受体是机体中最重要的受体之一 ,根据药理学分类可分为M1,M2 ,M3和M4 4种药理学亚型 ,根据分子克隆技术可将其分为m1,m2 ,m3,m4 和m5,其中M1,M2 和M3分别对应于m1,m2 和m3。各种亚型基本结构相似 ,主要差别在于胞浆内 3环 (i3环 )的不同 ,这决定了它们功能的不同。m1,m3和m5结构功能相似 ,可激活PI系统和cAMP ,m2 和m4 则可抑制腺苷酸环化酶系统。不同部位各种亚型的分布和功能也有所不同。M受体亚型的分布和功能及其活性药物对临床具有重要意义。

电针对负透镜诱导型近视豚鼠视网膜M1受体表达的影响

目的探讨电针对负透镜诱导型近视豚鼠视网膜中毒蕈碱样乙酰胆碱M1受体表达的影响。方法 48只3周龄豚鼠随机分为4组:正常对照组、近视模型组、近视电针组与近视假穴组,后3组豚鼠右眼配戴-10.00 D透镜片,建立透镜诱导型近视豚鼠动物模型,近视电针组戴镜同时给予针刺豚鼠的合谷穴和太阳穴,近视假穴组针刺臀部无穴位处。于造模前及造模后4周测量各组眼轴长度和屈光度,同时取视网膜组织,利用RT-PCR的方法检测各组豚鼠视网膜中M1受体mRNA的相对表达量,ELISA法检测M1受体的蛋白含量。结果造模4周后,近视模型组右眼屈光度为(-3.40±0.55)D,明显低于正常对照组右眼的(1.20±0.24)D和自身对照眼左眼的屈光度(1.25±0.32)D(均为P<0.05);近视模型组右眼眼轴长度为(8.74±0.38)mm,明显大于正常对照组的右眼眼轴长度(8.23±0.21)mm,也大于自身对照眼左眼的眼轴长度(8.16±0.43)mm(均为P<0.05);近视模型组、近视电针组和近视假穴组右眼的眼轴长度和屈光度比较差异均无统计学意义(均为P>0.05)。正常对照组、近视模型组、近视电针组、近视假穴组视网膜中M1受体的mRNA相对表达量分别为59.17±4.02、74.50±4.64、64.83±6.05和74.67±3.93,M1受体蛋白含量分别为(984.67±44.69)ng·L-1、(1172.00±41.91)ng·L-1、(1027.00±41.08)ng·L-1和(1153.50±56.40)ng·L-1,统计学分析显示正常对照组与近视电针组相比差异无统计学意义(P>0.05),两组分别与近视模型组和近视假穴组相比差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论负透镜诱导型近视豚鼠视网膜中M1受体表达增高,针刺合谷穴和太阳穴可以减少其视网膜中M1受体表达,这可能是针刺改善近视患者远视力的机制之一。

润燥活血汤对干燥综合征模型小鼠血清及颌下腺M3R表达的影响

目的观察润燥活血汤对干燥综合征(SS)模型小鼠血清及颌下腺毒蕈碱样乙酰胆碱3型受体(M3R)表达的影响。方法8周龄雄性BALB/c小鼠47只,按区组随机选出5只处死摘取颌下腺,剩余的小鼠随机分为正常组10只,模型组32只。参照文献的方法,采用背部皮内5个部位多点注射抗原的方法进行免疫,建立SS小鼠模型。在造模后第5周随机选取2只造模小鼠处死,通过病理形态学观察判定造模成功。另30只小鼠随机分为模型组10只,润燥活血汤组10只和羟氯喹(HCQ)组10只。润燥活血汤组小鼠按11.4g·kg^(-1)·d^(-1)剂量灌胃润燥活血汤,模型组小鼠灌胃等量生理盐水,HCQ组小鼠按0.06g·kg^(-1)·d^(-1)剂量灌胃HCQ混悬液(HCQ与生理盐水混合液),每天1次;正常组小鼠常规饲养;同时观测各组小鼠唾液量、饮水量。连续用药30天后眼眶取血后处死小鼠,摘取颌下腺、脾脏。采用苏木素-伊红(HE)染色评价颌下腺淋巴细胞浸润情况,采用ELISA法测定血清M3R水平,免疫组化法检测颌下腺M3R表达水平。结果与正常组比较,模型组小鼠血清、颌下腺M3R表达增加[血清M3R:(12.23±10.10)pg/mL比(2.72±1.21)pg/mL,P<0.05;颌下腺M3R:(2.23±0.11)%比(1.21±0.11)%,P<0.01];颌下腺淋巴细胞浸润程度增加,病理评分明显增高[(2.42±0.22)分比(0.18±0.05)分,P<0.01];与模型组比较,润燥活血汤组、HCQ组小鼠血清、颌下腺M3R表达降低[血清M3R:(3.30±6.25)pg/mL、(3.17±0.87)pg/mL比(12.23±10.10)pg/mL,P均<0.05;颌下腺M3R:(1.62±0.40)%、(1.53±0.06)%比(2.23±0.11)%,P均<0.05];颌下腺淋巴细胞浸润浸润程度减轻,病理评分明显降低[(1.21±0.33)分、(1.08±0.09)分比(2.42±0.22)分,P均<0.05];润燥活血汤组和HCQ组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。与模型组比较,润燥活血汤组小鼠唾液量增加[(25.53±4.27)mg比(22.42±2.52)mg,P<0.05];润燥活血汤组小鼠唾液量与HCQ组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论润燥活血汤治疗干燥综合征(SS)作用机制可能与下调M3R表达,抑制颌下腺淋巴细胞浸润,改善腺体分泌功能有关。

新蛋白质合成介导知母活性成分对M_2受体稳定性的调节作用

目的探讨知母活性成分ZMS提高CHOm2细胞毒蕈碱样乙酰胆碱2型受体(M2受体)mRNA表达的机制。方法体外培养至80%～90%融合的CHOm2细胞分为ZMS1组(单纯添加1×10-5mol/LZMS作用24h)、ZMS2组(添加1×10-5mol/LZMS作用24h后加入1μg/mL环己酰亚胺作用12h)、ZMS3组(加入1μg/mL环己酰亚胺预处理4h后加入1×10-5mol/LZMS作用24h),以上各组分别设立对照组(以等体积DMSO替代ZMS,其他处理与相应ZMS组相同)。各组细胞培养基中均加入放线菌素D抑制mRNA合成,于不同时间点收集CHOm2细胞,Real-time PCR检测M2受体mRNA相对表达量并计算半衰期。结果与相应对照组比较,ZMS1组和ZMS2组CHOm2细胞M2受体mRNA的半衰期明显延长,分别为(4.75±0.54)hvs(2.13±0.23)h和(5.43±1.13)hvs(2.46±0.09)h(均P<0.05);添加1μg/mL环己酰亚胺预处理的ZMS3组CHOm2细胞M2受体mRNA半衰期的(3.06±0.23)h与其相应对照组的(3.00±0.20)h比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论ZMS提高M2受体mRNA的稳定性需要有新蛋白质合成的参与。

不容忽视的慢性阻塞性肺病(二)

2．稳定期慢阻肺的药物治疗 抗胆碱能药物 例如异丙托溴铵和噻托溴铵．对毒蕈碱样乙酰胆碱受体有阻断作用，现有的短效抗胆碱能药物主要激动M3和M1受体和阻断节后迷走神经传出支．长效抗胆碱能药物噻托溴铵选择性作用于M3和M1受体。

气道细胞的胆碱能调控机制

乙酰胆碱（ACh）是气道副交感神经递质,非神经细胞亦可合成释放之。几乎所有的气道细胞均可表达烟碱样乙酰胆碱（N）和毒蕈碱样乙酰胆碱（M）受体。综述了气道平滑肌细胞以外的细胞,如神经细胞、上皮细胞、分泌细胞、成纤维细胞和炎症细胞的胆碱能调控机制及对气道功能的影响。M受体激动剂和迷走神经刺激能够导致气道黏液水和电解质分泌增加,增加纤毛摆动的频率。N受体和M受体调节上皮细胞间的连接、黏着,N受体兴奋胶原基因表达和纤维结合蛋白合成。兴奋N受体抑制肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、细胞因子（如IL-6I、L-10、IL-12）和组织胺的产生,表现出明显的抗炎效应。ACh的释放增加与气道阻塞性疾病有关,M受体拮抗剂是有价值的治疗选择。尽管M受体拮抗剂对气道平滑肌的肌紧张的急性抑制作用是必需和有益的,其能抑制气道黏液分泌和纤毛摆动,可降低气道的清洁,然而M受体拮抗剂抑制气道的重塑过程的作用使其能够发挥一个长期的,缓解疾病的积极作用。

益气养阴祛瘀方对干燥综合征NOD小鼠颌下腺AQP5、M3R表达的影响

目的研究益气养阴祛瘀方(黄芪、生地黄、玄参、丹参、益母草等)对干燥综合征NOD小鼠颌下腺水通道蛋白5(AQP5)以及毒蕈碱样胆碱能受体3(M3R)表达的影响。方法将30只NOD小鼠随机分为5组:模型组、西药组(硫酸羟氯喹60 mg·kg^(-1))及益气养阴祛瘀方低、中、高剂量组(11.147、22.295、44.590 g·kg^(-1)),每组6只。每日灌胃给药1次,连续给药8周。给药后第0、4、8周连续测量小鼠每日饮水量;给药结束后,分离小鼠双侧颌下腺并称定其质量,计算小鼠颌下腺指数;采用HE染色法进行颌下腺组织病理学观察,计算灶性指数评分;RT-qPCR法检测小鼠颌下腺组织AQP5、M3R mRNA表达水平;Western Blot法检测小鼠颌下腺组织AQP5、M3R蛋白表达水平;免疫组化法检测颌下腺组织AQP5蛋白表达水平;ELISA法检测血清干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素10(IL-10)含量。结果给药前,与模型组比较,益气养阴祛瘀方低、中、高剂量组及西药组NOD小鼠的日饮水量无明显变化(P>0.05);给药第4、8周,与模型组比较,益气养阴祛瘀方低、中、高剂量组及西药组NOD小鼠的日饮水量均显著减少(P<0.01)。模型组小鼠颌下腺淋巴细胞浸润明显并形成较多浸润灶;与模型组比较,益气养阴祛瘀方低、中、高剂量组及西药组NOD小鼠的颌下腺淋巴细胞浸润情况得到明显改善,浸润灶数量明显减少,灶性指数评分显著降低(P<0.01),颌下腺组织AQP5、M3R蛋白表达水平明显升高(P<0.05,P<0.01),血清IL-10水平明显升高(P<0.05,P<0.01);益气养阴祛瘀方高剂量组和西药组NOD小鼠的颌下腺指数明显升高(P<0.05);益气养阴祛瘀方中、高剂量组和西药组NOD小鼠颌下腺组织AQP5、M3R mRNA表达明显上调(P<0.05,P<0.01),血清IFN-γ含量显著降低(P<0.01)。结论益气养阴祛瘀方对NOD小鼠唾液腺损伤具有改善作用,可能通过上调AQP5、M3R表达,抑制颌下腺淋巴细胞浸润,改善唾液分泌功能,从而减缓干燥综合征进程。

益气养阴祛瘀方含药血清对干燥综合征人颌下腺细胞AQP5和M3R表达的影响

目的观察益气养阴祛瘀方含药血清对干燥综合征(■;gren′s syndrome, SS)人颌下腺细胞(human submandibular gland cells, HSG cells)中水通道蛋白5(aquaporin protein-5, AQP5)和毒蕈碱样胆碱能受体3(type 3 muscarinic acetylcholine receptors, M3R)表达的影响。方法制备益气养阴祛瘀方含药血清,将对数生长期的HSG细胞随机分为空白组(RPMI 1640培养液)、空白血清组(10%的空白血清+RPMI 1640培养液)、含药血清组(10%的益气养阴祛瘀方含药血清+RPMI 1640培养液)、IFN-γ组(IFN-γ+RPMI 1640培养液)、IFN-γ+IFN-γ拮抗剂组(IFN-γ+IFN-γ拮抗剂+RPMI 1640培养液)、IFN-γ+含药血清组(IFN-γ+10%益气养阴祛瘀方含药血清+RPMI 1640培养液),共6组。培养24 h后,Western blot法检测HSG细胞中AQP5和M3R蛋白表达;RT-PCR法检测HSG细胞AQP5 mRNA和M3R mRNA表达;免疫荧光法观察HSG细胞AQP5蛋白通道表达变化。结果与空白血清组比较,含药血清组AQP5、M3R蛋白及AQP5 mRNA和M3R mRNA表达升高(P<0.05)。与IFN-γ组比较,空白组、空白血清组、含药血清组、IFN-γ+IFN-γ拮抗剂组AQP5、M3R蛋白及mRNA表达均升高(P<0.05)。结论益气养阴祛瘀方具有与IFN-γ拮抗剂类似功效,能上调主管水运的AQP5、M3R表达,增加唾液量的分泌。