天然药物中的毒蛋白,多肽及氨基酸的研究概况

简要介绍几种天然药物中存在的毒蛋白 ,多肽和氨基酸类化合物。对收集到的有关文献资料分析蓖麻毒素、相思子毒素、寄生毒素、蛇毒、蜂毒、蝎毒等毒素的分布 ,化学结构、性质及药理毒性。这类化合物对动物、完整细胞或细胞溶解物具有一定的毒性和生物活性 ,值得进行深入开发利用。

桑寄生毒蛋白的分离纯化与部分性质研究

中药桑寄生(Loranthas parasiticus Merr)中的毒蛋白(简称LPT)可以用DE—52离子交换层析和Sepbacryl—S—200分子筛过滤进行分离纯化.纯化的IPT进行还原及非还原SDS—PAGE,均呈现单一蛋白带且测得分子量为43,000d,表明LPT为一单链蛋白质.LPT对骨髓瘤细胞具有杀伤作用,其半致死量ID_(?)为1.O×10^(-7)mol/L.LPT对兔网织红细胞破碎中的蛋白质生物合成也具有抑作用,其半数抑制剂量为7.0×10^(-5)mo/L.

商陆毒蛋白与蓖麻毒蛋白A链作为免疫毒素“弹头”的比较研究

免疫毒素系由具有导向能力的载体和具有杀伤能力的毒素或药物偶联形成的复合物。单克隆抗体的问世使载休的高度特异性得到解决,选择合适的“弹头”

转Bt基因棉Bt毒蛋白表达量的时空变化

采用抗体夹心 EL ISA技术 ,对转 Bt基因抗虫棉植株中 Bt毒蛋白含量进行了测定。结果表明 ,Bt基因在所有检测到的器官中均有表达 ,但是不同器官中的 Bt毒蛋白含量明显不同。在苗期全展功能叶中 Bt毒蛋白含量最高 ,根、茎和叶柄中 Bt毒蛋白含量较低 ;在花铃期当日开花的子房中 Bt毒蛋白含量较高 ,雌雄蕊中 Bt毒蛋白较低 ,花瓣及苞叶 Bt毒蛋白含量最低。表明 Bt基因在不同器官中的表达强度存在差异。不同生育期的功能叶中 Bt毒蛋白含量差异显著 ,Bt毒蛋白含量在苗期叶片中最高 ,蕾期次之 ,花铃期最低。随着棉花生长发育进程的推进 ,Bt基因在叶片中的表达强度逐渐减弱。Bt基因在棉花体内的表达随着器官的不同、生育时期的不同而表现出时空动态变化。这可能是人们所观察到的转 Bt基因抗虫棉对棉铃虫抗性呈时空动态变化的根本原因。

转Bt基因棉Bt毒蛋白的ELISA检测方法的研究(英文)

利用纯化的Ｂｔ毒素蛋白（６７ｋＤａ）作为标准蛋白和免疫抗原，建立了检测转基因抗虫棉植株内Ｂｔ毒蛋白含量的抗体夹心ＥＬＩＳＡ方法。检测极限１μｇ·Ｌ－ １，线性范围１－ １５μｇ·Ｌ－ １，板内误差Ｃ．Ｖ．＜ ５％ ，板间误差Ｃ．Ｖ．＜ ５％ ，平均样品回收率９４．９４％ 。经稀释度试验等质量控制试验，表明所建立的ＥＬＩＳＡ方法是可靠的，可用于转基因棉花植株中Ｂｔ毒素蛋白含量的测定。

转Bt基因作物Bt毒蛋白在土壤中的安全性研究

商业化的转Bt基因作物获准在田间大面积种植 ,使其释放的Bt毒蛋白对土壤生态系统的生态风险性问题成为人们关注的焦点 .本文综述了转Bt抗虫作物以植株残体、根系分泌物、花粉等形式释放的Bt毒蛋白通过田间耕作等方式进入土壤后的一些安全性问题 ,包括土壤活性颗粒对Bt毒蛋白的吸附作用 ,Bt毒蛋白在土壤中的杀虫活性、存留 。

花粉管通道法将Bt毒蛋白基因导入优良玉米自交系

以杂交育种中广泛使用的优良玉米自交系为材料 ,用花粉管通道法介导质粒pGBIL0 4(actin Bt 35S bar)DNA的转化 ,经对T0 代 1 4 0 3株植株Basta抗性筛选和PCR分子鉴定 ,共获得 5株PCR阳性植株 ,分别为授粉后 8,1 2 ,1 4 ,1 8h导入所得 ,总的平均转化率为 0 36 %。结果表明 :只要掌握好导入时机 。

麻疯树毒蛋白(curcin)的抗真菌活性研究

以植物病原真菌水稻稻瘟病菌(PyriculariaoryzaeCav.)、松赤枯病菌(Pestalotiafunerea)、玉米纹枯病菌(RhizoctoniasolaniKuha)、油菜菌核病菌[Sclerotiniasclerotiorum(Lib)deBary]为实验菌,检测了麻疯树毒蛋白(curcin)的抗真菌活性。结果表明,5μg/mLcurcin能明显抑制菌丝生长和孢子的产生。浓度提高到50μg/mL时,水稻稻瘟病菌基本不形成孢子,对松赤枯病菌的孢子形成抑制率达83.8%。光镜下可见处理菌丝明显缩小、变形。SDS-PAGE显示,处理菌丝的蛋白质条带减少。curcin对菌丝生长和孢子发育的阻碍作用可能与curcin阻碍了蛋白质合成有关。

转基因抗虫棉组织中Bt毒蛋白表达量的ELISA测定

利用抗体－抗原－酶标抗体反应，建立了间接酶联免疫吸附测定法（ＥＬＩＳＡ），以检测转基因抗虫棉品系３１０幼叶Ｂｔ毒蛋白含量。初步测定结果：转基因抗虫棉幼叶中Ｂｔ毒蛋白含量为总可溶性蛋白质的（０．１２６±０．００８）％。提纯的伴胞晶体样品经ＥＬＩＳＡ法检测，其Ｂｔ毒蛋白最低可检值为２０ｎｇ／ｍｌ。这一检测技术既可对转基因抗虫棉组织中Ｂｔ毒蛋白表达量进行定性、定量测定，也为阐明转基因抗虫棉的抗虫特性提供了理论依据。

转BtCry3A基因杨树毒蛋白表达及对桑天牛抗性的研究

为探索转抗虫基因(BtCry3A)741杨对鞘翅目昆虫的抗虫性,以7个转基因株系为检测对象,从分子生物学检测、毒蛋白的表达以及抗虫性检测等方面对转抗虫基因(BtCry3A)741杨株系进行了比较分析。7个转基因株系的DNA经PCR扩增显示,已转入BtCry3A基因。不同时期测定转基因株系不同部位叶片的毒蛋白含量不同,5月份测定的毒蛋白含量在当年生枝条不同部位叶片中未表现出明显的差异,至9月份封顶前,毒蛋白含量明显降低,且顶部叶片含量显著高于中下部叶片。在枝条的木质部中,毒蛋白的相对含量明显高于韧皮部。转基因株系对桑天牛幼虫的致死率很低,但对幼虫的发育具有明显的抑制作用。

棉铃虫对Bt毒蛋白(Cry1Ac)抗性品系的选育

1997～ 2 0 0 0年 ,用含 Bt毒蛋白 (Cry1 Ac)的人工饲料对来自本所试验棉田的棉铃虫经过室内2 1代中 1 6代次的筛选 ,筛选后 F19代 L C50 值(4.3 6 4 6 g· L- 1)比筛选前 F2 代 L C50 值 (0 .2 972 g·L- 1)提高了 1 4.7倍。试验还发现雌性棉铃虫对Bt毒蛋白的敏感性大于雄性。对 Bt毒蛋白抗性品系筛选前后分别测定了其不同菌系 (商品制剂Dipel和 Xentari)的剂量 -死亡率回归线 。

蝮蛇毒蛋白C激活物的纯化与抗血小板活性

目的 研究蝮蛇毒蛋白C激活物 (PCA)组分对兔血小板聚集性的影响。方法 借助DEAE Cellulose、SP SephadexC 5 0及SP SephadexG 75柱层析 ,以离子交换和凝胶过滤法从江浙蝮蛇 (AHV)粗毒中分离纯化PCA抗凝组分 ;SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)检测其纯度和分子量。比浊法测定血小板聚集率。结果 从AHV分离纯化的PCA抗凝组分经SDS PAGE电泳测定为单一区带 ,相对分子质量为 14 0 0 0左右 ,等电点 pH 4 .7;该PCA在体外对由诱聚剂ADP诱导的血小板聚集呈剂量依赖性的抑制作用 ,其IC50 为 12 5 μg/ml。PCA(1.0mg/kg) 体内给药可逆性抑制血小板聚集反应。结论 从蝮蛇毒中纯化的这种PCA抗凝组分可通过抑制血小板聚集而影响血凝过程。

Cry1Ac毒蛋白对粘虫生长发育、繁殖及飞行能力的影响

为了更全面地评价转基因作物对粘虫Mythimna separata(Walker)(鳞翅目:夜蛾科)的影响,在室内用生测法研究了粘虫初孵幼虫连续取食含不同浓度的Cry1Ac毒蛋白的人工饲料后,其生长发育、繁殖及飞行能力的变化。结果表明:取食0(对照),3,6,12,24,48和96μg/gCry1Ac毒蛋白人工饲料6d后的幼虫头宽、体长、18d后的体重随着毒蛋白浓度的升高显著降低,幼虫发育历期显著延长,死亡率显著升高。取食含毒蛋白浓度>12μg/g饲料的幼虫不能正常化蛹;取食含0,3和6μg/g毒蛋白饲料的幼虫能正常化蛹、羽化,化蛹率随着毒蛋白浓度的升高而显著降低、蛹历期显著延长;取食含0,3和6μg/g毒蛋白饲料的幼虫羽化的成虫繁殖能力有显著差异,产卵前期随毒蛋白浓度的升高显著延长,产卵量显著降低;而1日龄成虫飞行能力(飞行距离、时间和速度)则随毒蛋白浓度的升高显著降低。这些结果表明,Cry1Ac毒蛋白对粘虫的生长发育、繁殖及飞行具有显著影响,从而为完善转Bt作物的生态安全性风险评估提供了重要的实验依据。

干旱胁迫下麻疯树毒蛋白的Western杂交分析

用 10 %～ 4 0 %聚乙二醇 (PEG 6 0 0 0 )处理麻疯树幼苗进行蛋白质诱导 .SDS PAGE显示 ,在根、茎、叶中分别诱导出分子量大约为 17和 30kD、17和 35kD及 15、17、32、5 3、5 6、6 1和 6 5kD的蛋白质多肽链 .用麻疯树毒蛋白(curcin)的抗血清与诱导蛋白进行Western杂交 .结果显示 ,在叶的诱导蛋白中出现分子量为 32和 6 5kD的阳性反应带 ,而在根、茎中无 .这一结果表明干旱胁迫下麻疯树蛋白质分子标记的存在 ,为逆境蛋白的研究奠定了实验基础 .

转cry1 Ab基因水稻中毒蛋白的表达、分泌及其在土壤中的残留

研究了转cry1Ab基因水稻 (克螟稻 )中Cry1Ab毒蛋白的表达、根系分泌及其在土壤中的残留规律 .结果表明 ,分蘖始期至成熟期 ,克螟稻地上部和根部中的Cry1Ab毒蛋白的表达量 (FW)分别为 3 2 3～ 8 2 2 μg/ g和 0 6 8～ 0 89μg/g .生育期间克螟稻根系分泌的Cry1Ab毒蛋白含量仅为 1 6 6～ 4 8 0 2ng/ (株·d) .试验证实 ,克螟稻根际土中的Cry1Ab毒蛋白残留含量低于检测限 (<0 5ng/ g干燥土 ) .生物测定还表明 ,克螟稻根际土及其提取液对棉铃虫初孵幼虫和 3龄幼虫不产生致死性效应 .相对于Cry1Ab毒蛋白的根系分泌转移 。

Bt毒蛋白在转Bt基因棉中的表达及其在害虫天敌间的转移

以常规棉泗棉 3号作为对照 ,采用酶联免疫生测法 (ELISA)和室内生物测定法 ,研究了转Bt基因棉新棉 33B和GK 12不同组织器官中Cry1Ac或Cry1Ab毒蛋白的表达及其向靶标害虫 (棉铃虫 )、非靶标害虫 (棉蚜 )以及天敌 (龟纹瓢虫 )的传递和影响。研究结果表明 ,新棉 33B各组织器官中Bt毒蛋白的表达量较高 ,为 79 7～ 1390 0ng g鲜重 ,GK 12较低为 16 5～ 2 6 4 0ng g鲜重。在花盛期 ,新棉 33B各组织器官中Bt毒蛋白的表达量依次为 :柱头、花药 >子房、花瓣 >群尖 ;而 5～ 7叶期的初展嫩叶、现蕾初期的幼蕾及花铃期的幼铃表达量相当 ,而且与花盛期群尖的表达量没有明显区别。同样处于花盛期的GK 12 ,其各组织器官中Bt毒蛋白的表达量依次为 :花药 >柱头 >花瓣 >群尖 >子房 ;而 5～ 7叶期的初展嫩叶、现蕾初期的幼蕾及花铃期的幼铃表达量相当 ,而且与花盛期群尖的表达量没有明显差异。常规对照棉的幼铃、花药、柱头以及子房中痕量Bt毒蛋白的存在可能与传粉昆虫等的活动有关。在转Bt基因棉田采集的棉蚜和棉铃虫老龄幼虫 ,其体内均可检测到Bt毒蛋白 ;在新棉33B棉田采集的龟纹瓢虫幼虫和成虫体内也可检测出Bt毒素。当以Bt棉田的棉蚜饲喂龟纹瓢虫时 ,龟纹瓢虫的生长发育、存活以及繁殖等基本没有受到影响。

不同光质LED光源对转基因杨树叶片Bt毒蛋白含量及叶绿素荧光参数的影响

为探明不同光质对杨树幼苗生长的影响,以转基因741杨株系Pb29为试材,利用LED精量调制光源,设置红光、蓝光、红蓝光、白光4个处理,测定不同光质处理下Pb29的Cry1Ac毒蛋白含量、形态指标、光合色素含量及叶绿素荧光参数。结果表明,蓝光处理下的Cry1Ac毒蛋白的表达量最大,白光次之。除了叶片长/宽的值在蓝光处理下最大外,红蓝光处理下的741杨叶片数、叶片长、叶片宽、叶面积及株高均高于其它处理。除叶绿素b的含量在红光处理下最大外,叶绿素a、叶绿素a+b、类胡萝卜素含量及叶绿素a/b比值均在白光处理下最大,红蓝光次之,且白光与红蓝光间无显著差异。叶绿素荧光参数(ΦPSⅡ、ETR、q P)在蓝光和红蓝光处理下高于其它处理,在白光和红蓝光处理下的Fv/Fm高于其它处理,q N在红光处理下最大。由此可知,不同光质对杨树幼苗的生长具有调控作用。本试验结果为深入研究不同光质对杨树的生长发育进行调控提供了科学依据。

不同转基因棉的抗虫性与Bt毒蛋白含量关系研究

转单价 Bt基因棉和转双价 ( Bt+ Cp TI)基因棉对棉铃虫抗性的时空动态及其 Bt毒蛋白含量变化表明 ,无论是单价 Bt基因还是双价 ( Bt+Cp TI)基因 ,对棉铃虫均有明显的抗性 ,呈现明显的时空动态变化。单价 Bt基因在花铃期以前抗性不如双价 ( Bt+ Cp TI)基因 ,在花铃期单价 Bt基因棉花营养器官的抗性稍好于双价 ( Bt+ Cp TI)基因 ,但生殖器官的抗性不如双价 ( Bt+ Cp TI)基因。转单价 Bt基因棉和转双价 ( Bt+ Cp TI)基因棉的 Bt毒蛋白含量时空动态变化趋势与各自的抗虫性相一致。但转双价 ( Bt+ Cp TI)基因棉的Bt毒蛋白表达量在棉株各生育期同一器官及同一生育期不同器官均比转单价 Bt基因棉略低 ,说明 Cp

赤霉酸和缩节胺对转Bt基因抗虫棉棉铃Bt毒蛋白表达及氮代谢的影响

以泗抗1号和泗杂3号为研究材料,于盛花结铃期,应用赤霉酸(GA3)、缩节胺(DPC)涂抹幼铃,探讨其对棉铃Bt毒蛋白表达及氮代谢影响。结果表明,DPC能显著提高花后10d和30d(DPA)棉铃Bt毒蛋白含量,GA3降低10DPA铃壳和子棉中Bt毒白含量,但提高30DPA棉铃Bt毒蛋白含量。DPC提高了硝酸还原酶(NR)、谷氨酸-丙酮酸转移酶(GPT)、谷氨酸-草酰乙酸转移酶(GOT)活性并增加了游离氨基酸、可溶性蛋白及全氮含量,GA3处理则降低了10DPA铃壳、棉子中上述酶活性和物质含量。相关分析表明,棉铃中Bt毒蛋白含量与NR、GPT和GOT活性呈极显著正相关(r1=0.8776**,r2=0.7172**,r3=0.7028**)。可见,转Bt基因抗虫棉开花后应用DPC或GA3可提高充实期棉铃,能促进棉铃氮代谢水平,从而促进Bt毒蛋白的表达。

麻疯树外植体愈伤组织中毒蛋白的Western-blot鉴定

The proteins from endosperm, root, stem, leaf, leafstalk of Jatropha curcas L. and their calli were hybridized to the seed toxin protein (curcin) of Jatropha curcas L. by western blot. The result showed that the curcin was specifically expressed in the endosperm and its calli, while it was not detected in root, stem, leaf, and leafstalk of Jatropha curcas L. and their calli . This study indicated that calli induced from endosperm can be used to produce curcin.