三种蜘蛛粗毒对NG108-15细胞电压门控钠通道的抑制作用

利用小鼠神经细胞瘤×大鼠神经胶质细胞的杂交细胞 NG1 0 8-1 5,通过全细胞记录 ( whole-cellrecording)模式的膜片钳技术 ,检验了虎纹捕鸟蛛 ( Selenocosmia huwena)、海南捕鸟蛛 ( Selenocosmia hainana)和广西大疣蛛 ( Macrotheleguangxia sp)的粗毒对 NG1 0 8-1 5细胞膜上电压门控 TTX敏感型钠电流和延迟整流钾电流的作用 .结果表明 ,三种蜘蛛粗毒对外向延迟整流钾电流没有明显作用 ,但对 TTX敏感型的快钠电流表现出较强的抑制效应 .抑制效应呈量效关系 .三种粗毒抑制钠电流的 EC5 0 相应约为 :3.4 mg/L;1 .8mg/L和 1 1 .0 mg/L.

早期静脉注射葡萄糖酸钙对间斑寇蛛毒致痛大鼠行为学的影响

目的观察预先静脉注射葡萄糖酸钙溶液,对间斑寇蛛毒致痛大鼠行为学的影响;评估葡萄糖酸钙溶液对抑制间斑寇蛛毒致痛作用的疗效。方法将雄性SD大鼠80只随机分为葡萄糖酸钙治疗组与致痛组,治疗组大鼠预先尾部静脉注射葡萄糖酸钙溶液,两组大鼠随机分为5组,分别以低剂量(10μL/kg)、中低剂量(40μL/kg)、中剂量(100μL/kg)、高剂量(300μL/kg)的间斑寇蛛毒素及福尔马林(10%甲醛溶液)进行足底注射,观察记录两组大鼠注射后2、15、30min及2h缩足、舔足次数。结果 (1)中低剂量组和高剂量组的蛛毒致痛大鼠缩足次数在15min内均高于福尔马林致痛组,然而30min却低于福尔马林致痛组(P<0.05);(2)15min时致痛组及治疗组大鼠缩足次数均与毒素浓度呈显著的正相关(r2=0.597,P<0.05;r2=0.426,P<0.05);(3)葡萄糖酸钙治疗组与各毒素致痛组相比,大鼠缩足次数均减少(P<0.05)。结论间斑寇蛛毒素致痛大鼠的作用相对于福尔马林在30min内更为强烈,但是30min后则较福尔马林组有所减轻,预先静脉注射葡萄糖酸钙的方法对间斑寇蛛毒致痛有明显的镇痛作用。

钙剂对间斑寇蛛毒致痛大鼠行为学及致痛因子表达的影响

目的:观察预先注射葡萄糖酸钙、吗啡、安痛定对间斑寇蛛毒致痛大鼠行为学及致痛因子表达的影响,评估葡萄糖酸钙对抑制间斑寇蛛毒致痛作用的疗效。方法:将雄性SD大鼠120只随机分为钙剂实验组、吗啡对照组和安痛定对照组,实验组大鼠预先尾静脉注射葡萄糖酸钙溶液,吗啡和安痛定对照组大鼠分别预先皮下注射吗啡和安痛定溶液,随后三组大鼠分别足底注射4种浓度的间斑寇蛛毒素,记录三组大鼠不同时间缩足次数,并应用免疫组织化学分析大鼠脊髓致痛因子P2X3受体、P物质、CGRP的表达水平。结果:(1)当毒素浓度为10μl/kg,15 min时,吗啡的镇痛作用优于安痛定,而钙剂镇痛效果最差;1 h时,吗啡及安痛定的镇痛效果较15 min时明显,钙剂的作用更优于吗啡及安痛定(P<0.05)。毒素浓度为300μl/kg,15 min、30 min时钙剂的镇痛作用优于吗啡和安痛定(P<0.05)。(2)钙剂组大鼠脊髓背角神经元中P2X3受体的表达显著低于吗啡及安痛定组;P物质在三组实验大鼠脊髓背角神经元、神经胶质细胞的表达均为阴性;钙剂和安痛定相比于吗啡抑制CGRP表达的作用更强。结论:在不同毒素浓度和不同时间下,钙剂和吗啡、安痛定的镇痛效果各有优劣,钙剂通过抑制P2X3受体及CGRP的表达进而抑制疼痛的作用较吗啡及安痛定更强,三种镇痛药物均可抑制P物质的表达。

穴居狼蛛毒中抗菌活性物质的耐热及缔合性质

穴居狼蛛(Lycosa singoriensis)毒中的抗菌活性物质具有耐热性(在沸水浴中处理半小时活性不变)、耐酸性和耐碱性。但用透析袋(Visking 18/32)对毒腺提取物透析时,在中性及碱性条件下可全部被透析掉。当用Sephadex G-25柱对较少量样品进行层析时,在酸性条件下至少可被分出8个蛋白峰,其中峰4和峰8具抗菌活性,但随上柱样品量的增加,在层析图上峰4的面积增大,峰8的面积变小,甚至活性消失;反之,在中性或弱碱性条件下所得到的层析图上,则是峰8的面积大,抗菌活性明显,而峰4的面积小,甚至检不出抗菌活性。此峰8样品经热处理后,在酸性条件下经分子筛过滤,又可得到两个分子量不同的抗菌活性峰。这些结果提示,上述耐热和耐酸碱性强的抗菌物质在酸性环境中可能是以目身高聚体或与其它大分子蛋白非共价结合,随pH值的升高而解离成单体或低聚体。

间斑寇蛛毒致大鼠肾损伤的组织病理及超微结构观察

目的:观察间斑寇蛛毒对肾脏损伤的作用方式,为今后间斑寇蛛毒致肾损伤干预措施提供理论依据。方法:将雄性SD大鼠36只,随机分为对照组、(10μl/kg、40μl/kg、100μl/kg、300μl/kg)剂量毒素组,并以间斑寇蛛毒素进行足底注射,24h后处死后,对肾脏组织病理行光镜(HE、PAS、PASM、Masson染色、银染)和电镜检查。结果:①各剂量的毒素组均表现出肾小囊内出血,肾小管水肿的急性肾损伤特征。②100μl/kg、300μl/kg毒素剂量组观察到肾小囊内大量出血,部分肾单位内血球管萎缩消失,肾小管管壁正常结构消失,肾小管上皮细胞脱落,细胞核溶解消失。③各组肾单位内基膜、系膜及胶原纤维结构未观察到异常变化,无新月体的形成。④各剂量毒素组细胞超微结构均显示内皮细胞、系膜内有团块状电子致密物的沉积,肾单位内毛细血管腔阻塞。⑤100μl/kg、300μl/kg毒素剂量组观察到上皮细胞足突的消失,内质网吞噬体大量增加,滤过膜间隙增大,基膜及内皮细胞的脱落。结论:间斑寇蛛毒素可致大鼠的肾损伤,这种损伤作用是直接的,且损伤具有浓度依赖性。

家福捕鸟蛛粗毒对美洲蜚蠊和小鼠半致死剂量的测定

家福捕鸟蛛是一种生活在中国广西、云南等省山区,中等个体,产毒量较大蜘蛛新种.研究发现它的毒液中含有许多不同活性的成分.为了更好地开发利用该种生物资源,评估其毒性大小,测定了家福捕鸟蛛粗毒对美洲蜚蠊和小鼠的半致死剂量.家福捕鸟蛛粗毒对美洲蜚蠊具有较强的毒性,低剂量的粗毒对美洲蜚蠊具有一定的毒性,高剂量的粗毒能够使美洲蜚蠊在几分钟内致死.家福捕鸟蛛粗毒对美洲蜚蠊的半致死剂量为85.90μg/g.但家福捕鸟蛛粗毒对小鼠的毒性较弱,当注射剂量达到10 mg/kg体重时小鼠未见明显的中毒症状.当注射的粗毒剂量达到46.30 mg/kg时小鼠在24 min内死亡.家福捕鸟蛛粗毒可能主要是一类选择性作用于昆虫的蜘蛛毒素.

敬钊缨毛蛛蛛毒对人肝癌细胞BEL-7402细胞增殖、细胞周期和C-myc蛋白的影响

通过MTT方法可知敬钊缨毛蛛蛛毒对BEL 7402细胞增殖有较强的抑制作用(p<0.05),时效和量效关系良好.IC50为18mg/L.敬钊缨毛蛛蛛毒可以抑制BEL 7402细胞DNA的合成.流式细胞仪检测发现经过蛛毒作用的BEL 7402细胞凋亡率增加,细胞周期阻滞在G0/G1期.WesternBlot方法进一步检测到蛛毒作用BEL 7402细胞72h后,C myc蛋白表达减弱.实验结果表明,敬钊缨毛蛛蛛毒可以抑制人肝癌细胞BEL 7402的增殖和DNA的合成,其药理作用机理可能除了诱导凋亡外主要是使BEL 7402细胞周期相关蛋白C myc表达减弱,导致细胞周期的变化.

间斑寇蛛毒致痛大鼠脊髓神经元细胞中钙离子激活的内向整流钾通道蛋白表达

目的分析不同浓度间斑寇蛛毒致痛大鼠脊髓灰质神经元细胞中钙离子激活的内向整流钾通道（IK1）的蛋白表达变化。方法选取36只雄性sD大鼠，采用分层随机抽样法分为对照组（4只）和毒素组（32只），毒素组分别于右后足趾部皮下注射10、40、100、300μl／kg间斑寇蛛粗毒液，每种浓度各8只。观察毒素组大鼠注射毒液后的缩足反应。对照组不做处理。24h后将所有大鼠断颈处死，取样第4—5腰椎脊髓样本，采用苏木精一伊红（HE）染色法观察脊髓神经元细胞结构，采用链霉菌抗生物素蛋白一过氧化物酶连结（SP）法观察神经元细胞中IKl蛋白的表达情况，采用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测IK1 mRNA的表达水平。分析不同浓度下IK1 mRNA及蛋白表达的变化。采用Pearson相关性检验分析大鼠缩足次数与毒液浓度的相关性。结果注射间斑寇蛛毒15min后毒素组大鼠1h内的缩足次数分别为（44±16）、（64±9）、（69±19）、（91±35）次，Pearson相关性分析显示不同浓度下的1h缩足次数与毒液浓度呈正相关（F2=0．548，P〈0．05）。对照组及10、40、100、300μl／kg毒素组大鼠脊髓神经元细胞中平均IK1蛋白阳性细胞数分别为（2．0±1．0）、（5．0±2．0）、（6．0±1．0）、（6．0±2．0）、（7．0±1．0）个；各毒素组平均阳性细胞数均明显高于对照组，40、100、300μl／kg毒素组明显高于10μl／kg毒素组（均P〈0．05），40、100、300μl／kg毒素组之间差异无统计学意义（P〉0．05）。对照组及10、40、100、300bd／kg毒素组大鼠脊髓中IK1 mRNA的相对表达量分别为（0．56±0．16）、（0．62±0．27）、（1．27±0．10）、（1．53±0．29）、（1．61±0．86）；各毒素组IK1 mRNA表达水平均明显高于对照组，40、100、300bd／kg毒素组明显高于10μl／kg毒素组（均P〈0．05），40、100、300μl／kg毒素组之间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论问斑寇蛛毒具有急性致痛作用，与毒素呈浓度依赖性；其疼痛传递机制依赖于钙离子激活的IK1 mRNA及蛋白在脊髓神经元细胞中的表达。

有氧运动联合雷氏蛛毒对小鼠H_(22)肝肿瘤的干预研究

目的:观察有氧运动联合雷氏蛛毒干预对小鼠皮下诱发H22肿瘤的干预作用。方法:建模成功鼠随机分为5组:模型对照组,雷氏蛛毒低剂量、中剂量、高剂量组和有氧运动联合雷氏蛛毒干预组。计算抑瘤率;HE染色;免疫组化技术检测肿瘤组织中PTEN、Akt、mTOR蛋白水平差异表达;Real-time PCR技术检测PTEN、Akt、mTOR mRNA表达水平。结果:有氧运动联合雷氏蛛毒干预组可以抑制肿瘤生长;免疫组化显示PTEN阳性表达最高,而Akt、mTOR阳性表达最低;肿瘤组织内PTEN mRNA表达水平最高,Akt、mTOR mRNA表达较模型对照组低。结论:有氧运动联合雷氏蛛毒干预可能作用机制与其有效调控H22肿瘤组织内相关细胞因子的表达有关,从而达到抑制肿瘤增殖作用。

葡萄糖酸钙对间斑寇蛛毒液致痛大鼠脊髓致痛因子表达的影响

目的探讨葡萄糖酸钙对间斑寇蛛毒液致痛大鼠脊髓中致痛因子依赖于钙离子的钾离子通道蛋白（IK1）、降钙素基因相关肽（CGRP）、环氧合酶2（COX-2）、嘌呤能受体（P2X3）相对表达量的影响,研究葡萄糖酸钙在疼痛中的作用。方法将雄性SD大鼠80只随机分为福尔马林、10、40、100、300μL/kg毒液致痛组（40只）和钙剂治疗组（40只）,其中治疗组大鼠预先尾部静脉注射10%葡萄糖酸钙2 m L,然后两组大鼠均以5%福尔马林溶液150μL和4种剂量（10、40、100、300μL/kg）的间斑寇蛛毒液进行足底皮下注射,24 h后处死后,取L4~5脊髓标本,采用免疫组化、Western blot和荧光实时定量PCR技术分别从组织学、蛋白以及分子水平分析两组P2X3、CGRP、COX-2和IK1相对表达量。结果 （1）免疫组化结果显示300μL/kg毒液剂量时,治疗组P2X3和CGRP的表达显著低于致痛组,差异具有统计学意义（P〈0.05）,COX-2和IK1的表达差异无统计学意义（P〉0.05）。（2）Western blotting结果显示,与致痛组各剂量相比,10μL/kg剂量治疗组大鼠脊髓中P2X3和IK1表达量明显升高,CGRP和COX-2表达量降低,差异有统计学意义（P〈0.05）;40μL/kg剂量治疗组COX-2表达量降低,CGRP、P2X3和IK1的表达差异无统计学意义（P〉0.05）;100μL/kg剂量治疗组P2X3、CGRP和IK1表达量明显降低,COX-2的表达量升高,差异具有统计学意义（P〈0.05）;300μL/kg剂量治疗组大鼠脊髓中P2X3、CGRP、COX-2、IK1表达量明显降低,差异具有统计学意义（P〈0.05）。（3）荧光实时定量PCR结果显示：10μL/kg治疗组大鼠脊髓中P2X3和CGRP mRNA的表达高于致痛组,COX-2和IK1 mRNA的表达低于致痛组,差异有统计学意义（P〈0.05）;40μL/kg治疗组P2X3和IK1 mRNA的表达高于致痛组,CGRP mRNA的表达低于致痛组,差异有统计学意义（P〈0.05）,COX-2 mRNA的表达差异无统计学意义（P〉0.05）;100μL/kg治疗组P2X3、CGRP、和COX-2mRNA的表达均高于致痛组,IK1 mRNA的表达低于致痛组,差异有统计学意义（P〈0.05）;300μL/kg治疗组P2X3、CGRP、COX-2和IK1 mRNA的表达均高于致痛组,差异具有统计学意义（P〈0.05）。各致痛组间P2X3、CGRP、COX-2和IK1 mRNA表达差异无统计学意义（P〉0.05）。（4）3种方法结果显示福尔马林致痛组与治疗组致痛因子的表达差异无统计学意义（P〉0.05）。结论新疆间斑寇蛛毒的致痛机制可能与大鼠脊髓中致痛因子CGRP、P2X3、COX-2和IK1蛋白的高表达有关,葡萄糖酸钙能显著抑制部分高浓度毒素组致痛因子CGRP、P2X3、COX-2和IK1蛋白的表达量,缓解疼痛的传递。

穴居狼蛛毒中磷酸单酯酶和核酸酶的研究

本文分别用对硝基酚磷酸酯、3＇-[32p]标记的RNA和大肠杆菌噬菌体入DNA作底物测定了新疆产穴居狼蛛毒中与核酸代谢有关的酶,发现此毒中含有磷酸单酯酶、核糖核酸酶和脱氧核糖核酸酶。

广西虎纹捕鸟蛛毒成分的氨基酸测定及红外光谱定性分析

目的通过质量分析的方法初步鉴定蛛毒的毒素化学成分。方法采用氨基酸自动分析仪对蛛毒的多种氨基酸成分进行定性及定量的研究,并且辅以红外光谱法进行定性研究。结果通过氨基酸测定法从虎纹捕鸟蛛中鉴定到谷氨酸、胱氨酸、赖氨酸含量较多,分别为8.15%、7.86%、7.64%,氨基酸总量为55.93%;从样品粉末的红外光谱可知:该化合物可能含-C-H,-OH,NH,-CO-N-H,苯环等主要氨基酸基团。结论结果表明该鉴别方法操作简便、专属性强,可用于蛛毒的定性鉴别和含量测定,初步建立了虎纹蛛毒成分的定性鉴定研究方法。

颜氏大疣蛛蛛毒中多肽和蛋白质的多样性分析

对颜氏大疣蛛Macrothele yani蛛毒所富含的多肽与蛋白质多样性进行探索,采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和超高效液相色谱-电喷雾-四极杆-飞行时间质谱技术分离和鉴定颜氏大疣蛛蛛毒中的蛋白质和多肽,并对其相对分子质量分布多样性进行分析。结果显示:粗毒中所含蛋白质的相对分子质量主要分布在35kDa以上。在17~135kDa分离度较佳的共有11条电泳条带,主要集中于40~120kDa附近;在75kDa附近弥散着高丰度的蛋白条带,75kDa以上的蛋白质最丰富。粗毒经色谱分离后得到超过50个色谱峰,经质谱鉴定得到121个物质成分,其中,多肽类物质的相对分子质量呈双峰式分布,21%分布在500~2000 Da,76%分布在3000~5000Da,为粗毒中多肽含量最丰富的部分,且集中于35~60min的保留时间内被洗脱。研究结果表明,颜氏大疣蛛蛛毒中含有较为丰富的多肽和蛋白类物质,这些物质的相对分子质量分布特征与已报道的其他蜘蛛既有相似性又存在具体差异。本文展示了颜氏大疣蛛蛛毒的分子多样性,为后续该毒素的物质基础研究及药用价值开发提供参考。

蛛毒生物活性研究进展

通过对近年关于蛛毒研究的相关文献进行查阅和整理,从蛛毒的研究方法、分子多样性及多种生物活性等方面进行总结,为蛛毒相关研究提供参考和方向,也为蛛毒资源的开发利用提供指导。

广西产虎纹捕鸟蛛毒素对U251细胞的基因表达影响

目的：研究毒素对人脑胶质瘤U251细胞中基因Bcl-2/Bax的表达变化影响。方法：将U251细胞分为3组：空白组、顺铂组、加药组（虎纹捕鸟蛛毒素浓度为50，75，100 mg/L），蛛毒素对细胞作用24h，采用RT- PCR技术测定捕鸟蛛毒素对U251人脑胶质瘤细胞抑癌基因bax，癌基因bcl-2表达的影响。结果：虎纹捕鸟蛛毒素在浓度为50，75，100 mg/L时均显著增强基因bax的表达水平（P＜0.05或P＜0.01）；在浓度为50，75，100 mg/L时均显著降低癌基因bcl-2的表达水平（P＜0.05或P＜0.01）。结论：虎纹捕鸟蛛毒素能够显著增强抑癌基因bax的表达，其抗肿瘤作用可能与上调bax表达相关；且能够显著降低癌基因bcl-2的表达，其抗肿瘤作用可能与下调癌基因bcl-2表达相关。

穴居狼蛛生活习性之初步观察

穴居狼蛛 (Lycosasingoriensis)雌蛛平均体长 3 1 .9mm ,头胸长 1 5 .1mm ,腹长 1 7.2mm ,体重 4.2g。头胸部梨形 ,前部隆起 ,中间有黑、褐、白相间的辐射状斑 ,两侧被灰黄色毛 ,腹部椭圆形 ,背面密布黑色小斑点 ,中间有黑褐色心斑 ,并有 6对黄白色肌斑 ,胸板和腹部腹面密生黑色毛。雄蛛平均体长 2 6.8mm ,头胸长 1 4.6mm ,腹长 1 2 .9mm ,体重 2 .6g,形状与雌蛛相似 ,但体色较浅 ,腹部明显较小。新疆已知分布于 3 2个县市。生活在草原、森林、荒漠、农田、果园、山坡等地 ,筑穴而居 ,洞口圆形或椭圆形 ,平均直径 2 .65cm ,洞深 3 1 .6cm。白天多在洞中隐伏 ,傍晚或夜间在洞口附近猎食 ,用直接袭击法捕食各类昆虫。雄成蛛一般不筑洞穴 ,游猎生活 ,主动寻找洞穴中雌蛛在洞内或将其引出洞外交配。交配可分 3个阶段 ,即 :雄蛛求婚、雌雄交配、雄蛛离开 ,历时 1～ 1 .5h ,但实际交配时间仅 1 0～ 3 0min。未发现雌蛛在交配后残杀雄蛛的事例。雌蛛于 4～ 7月织卵袋产卵 ,卵袋椭圆形 ,灰白色 ,由两片组成 ,平均体积 2 0 .0×1 6.8× 1 4.3 (mm) 3 ,每袋平均含卵 466.3粒。卵自产出之日起至发育成若蛛并走出卵袋 ,平均需 2 1d。若蛛出袋后 ,先群聚于雌蛛腹背上 ,随雌蛛出外活动 ,有时下到地面吸水或采食雌蛛食?

蜘蛛对人类的新贡献

蜘蛛是一个大家族,全世界已知种类达35000余种,七大洲均有分布。大多数的蜘蛛以网立世,凭勤劳和猎技度日。自古以来,就与人类结下了不解之缘,它们的诚实劳动和独特本领,不断被人们所认识、所运用,为人类社会的文明不断做出新的贡献。

中国异纺蛛科蜘蛛研究进展

异纺蛛科Hexathelidae蜘蛛是一类结漏斗状网的,也是一类重要的产毒动物。多年的研究结果显示,我国现已记述异纺蛛科蜘蛛仅1属13种,即版纳大疣蛛Macrothele bannaensis Xu&Yin,2001、巨大疣蛛M.gigas Shimojana&Haupt,1998、贵州大疣蛛M.guizhouensis Hu&Li,1986、霍氏大疣蛛M.holsti Pocock,1901、勐仑大疣蛛M.menglunensis Li&Zha,2013、湖南大疣蛛M.hunanica Zhu&Song,2000、单卷大疣蛛M.monocirculata Xu et Yin,2000、触形大疣蛛M.palpator Pocock,1901、雷氏大疣蛛Macrothele raveni Zhu,Li&Song,2000、简大疣蛛M.simplicata(Saito,1933)、台湾大疣蛛M.taiwanensis Shimojana&Haupt 1998、颜氏大疣蛛M.yani Xu,Yin et Griswold,2002和云南大疣蛛M.yunnanica Zhu&Song,2000。通过对雷氏大疣蛛Macrothele raveni Zhu,Li&Song,2000蛛毒的研究,结果显示雷氏大疣蛛Macrothele raveni Zhu,Li&Song,2000的蛛毒具有较好的纤溶作用,并对人肝癌、肺癌、宫颈癌细胞具有明显的抑制作。本文对国内异纺蛛科蜘蛛的区系分类研究和蛛毒的开发利用研究进行综述。