基于核酸序列依赖性扩增反应比色法检测沙门氏菌

本文以食源性致病菌中危害居于前列的沙门氏菌侵袭蛋白A基因作为检测靶标,通过改进传统的核酸序列依赖性扩增反应,开发了针对长链DNA的纳米金比色检测方法。本方法利用限制性内切酶和连接酶将T7启动子和终止子序列连接至靶标序列上,形成小型环状双链DNA,在T7 RNA聚合酶的作用下,转录出大量单链RNA序列进行NASBA反应,反应终产物能够促发纳米金探针发生交联聚集,溶液颜色从红色变成蓝色,从而实现对沙门氏菌的定量分析。

基于金纳米和杂交链式反应可视化检测植物病毒RNA

植物病毒病危害严重,严重制约着农业的可持续发展,可造成巨大的经济损失。监测植物健康和及早检测病毒病原对于减少疾病传播至关重要。为实现对植物病毒病的早期田间检测,本文将基于金纳米(AuNPs)的比色法与杂交链式反应(HCR)相结合,设计了一种灵敏、特异与高效的植物病毒RNA可视化检测技术。以烟草花叶病毒(tobacco mosaic virus,TMV)为模型,根据TMV特异性保守片段设计2个具有单链尾的发夹结构H1/H2,TMV可打开发夹结构,使之交替形成长的双直链DNA。HCR反应前后核酸的2种状态与AuNPs之间的结合差异性致使比色信号产生,从而实现对TMV的可视化检测。经过对Tris-HAc浓度、发夹结构浓度、HCR反应时间等进行优化,得到最佳检测条件。在最优条件下,进一步分析了该技术的灵敏性、特异性以及进行了真实样本检测。结果表明,AuNPs的吸光度比值(A 620/A 520)与0~10 nmol/L范围内的目标片段浓度存在线性关系,最低检出限可达412 pmol/L;在实际样本检测中,该技术能从众多病样中准确检出目标病毒,且AuNPs的吸光度比值与0~40ng/μL的TMV也存在良好的线性关系,线性方程为y=0.00827x+0.14606,R 2=0.96405,检出限为4.68 ng/μL,裸眼检出限也可达10 ng/μL。所建立的检测技术具有快速简易、成本低廉、特异性强和灵敏度高等优点,能实现对植物病毒RNA的早期快速可视化检测,具有广阔的应用前景。

放大反应比色法测定食品中碘的研究

放大反应比色法测定食品中的含碘量,检出限为3.4μg/g,测定的线性范围为0.2～0.9mg/L;回收率达到96%～104%,具有灵敏度较高、仪器要求不高等优点。对30多种常见食品和4种食盐样品进行检测,结果表明海产品、鸡肉和鸡蛋等食品含碘较高。

基于盐酸-镁粉反应比色法的梭洞学中总黄酮含量的测定

[目的]对梭洞学(Polygonam capitarum D.Don)全草中的总黄酮含量进行测定。[方法]以槲皮素为对照品,采用盐酸-镁粉反应比色法测定总黄酮含量。[结果]样品中总黄酮在浓度0.007143～0.07143mg/ml范围内与吸光度呈良好的线性关系,回归方程为y=1.1760x+0.0076(R2=0.9998),回收率为99.54%,RSD=0.95%(n=5)。[结论]该方法准确,简便,可用于梭洞学中总黄酮含量的测定。

酶反应比色法检测NK细胞介导的细胞毒作用问题的初步探讨

〔目的与方法〕采用 5 1 Cr释放法对 MTT比色法及 NAG释放法测定恶性肿瘤患者 NK细胞介导的细胞毒活性的价值进行初步探讨。结果 :(1)两种非同位素方法所测外周血 NK细胞活性与5 1 Cr释放法之间均无相关性 (P均 >0 .0 5 ) ;(2 )正常对照组效应细胞 5 1 Cr释放水平低于靶细胞 (P<0 .0 1) ,肿瘤化疗组效应细胞5 1 Cr释放水平则高于靶细胞(P<0 .0 1) ,且靶细胞与效应细胞的结果无相关性 (P>0 .0 5 )。〔结论〕我们认为酶反应比色法不宜用于 NK细胞介导的细胞毒活性测定。

偶氮反应比色法胆红质定量分析时Cu^(2+)的干扰作用

胆红质定量分析的偶氮反应比色法,其“加速剂”有许多种。笔者在工作中以苯甲酸钠—脲溶液为“加速剂”(呈色液吸收峰为520nm),发现当样本测定管加入“加速剂”后,偶而出现呈色液红色消褪并转变为紫、蓝色,使测定结果明显偏低的现象。

基于比色光谱和SVM快速检测白菜中氧乐果农残方法

为快速安全地检测白菜中氧乐果农药残留,用改进的氯化钯乙酸溶液作比色剂,和氧乐果农药发生比色反应,利用分光光度计在300～1 100nm采集吸光度谱图.将氧乐果乳油农药和白菜汁混合,利用乙醇萃取,在0.5～ 400 mg/kg随机配置了60个样本,分别和等量的乙酸氯化钯溶液反应.实验证明,当样本质量比大于50 mg/kg时,吸光度曲线的走势发生变化,且和质量比的相关性较差;当样本质量比大于90 mg/kg时,吸光度曲线和样本质量比相关性更差.引入支持向量机SVM进行三分类建模,利用5-折交叉验证,当光谱数据归一化为[0,1],核函数采用径向基RBF函数时,测试集样本质量比范围的预测效果最好,准确率达到96.774 2％,为快速检测蔬菜中氧乐果的质量比范围提供了可行的方法.

比色法测定缓释片中羟丙甲纤维素

目的 建立测定制剂中羟丙甲纤维素 (HPMC)含量的方法。方法 采用二苯胺和HPMC在高温下显色反应 ,分光光度法测定。结果 具良好的线性范围和回收率 ,测定方法可靠。结论 能作为制剂中HPMC含量测定的方法。

紫外光终点比色法测定血清丙氨酸氨基转移酶

目的:建立一种血清丙氨酸氨基转移酶终点比色测定法。方法:在UV-LDH连续监测法的基础上建立终点比色法,研究酶终止剂的组成。结果:由0.2mol/L Tris、0.3mol/L NaOH、10mmol/L EDTANa2组成的酶终止剂效果好(△A/min=-0.00114A),碱性介质ε(ε340nm～ε380nm)为4.943。反应速度与时间呈线性关系(r=-0.9998),酶活性浓度在1000U/L以内线性关系良好(r=0.9998),精密度(CV)2.28%(120.1U/L)和1.29%(905.5U/L),与UV-LDH连续监测法对比相关性好(r=0.9977,n=44),正常参考值范围(±1.96s)为5.6～54.5U/L。结论:本法简易快速,结果准确、重复性好,适合批量测定。

可见分光光度法检测苹果中毒死蜱农药残留的研究

为研究苹果中毒死蜱农药残留的快速安全的检测方法,用氯化钯乙酸溶液作比色剂,和毒死蜱农药发生比色反应,对比色条件进行了优化。实验证明,用乙酸代替常用的浓盐酸作为氯化钯溶剂时实验效果更好。在最佳波长415nm处和最佳条件下,毒死蜱浓度在0.5～16mg/kg范围内,吸光度的对数相关系数R2=0.992 8。文中确定了氯化钯乙酸溶液比色体系的最佳反应条件为：温度45℃,时间2min,样品回收率为92%～105.3%,为以后开发便携式农药残留检测仪的光源提供了可行的依据。

苦参汤有效部位总黄酮含量测定方法研究

目的 :建立苦参汤有效部位中总黄酮含量测定方法。方法 :以黄芩苷为对照品 ,采用盐酸 镁粉反应比色法测定总黄酮含量。结果 :黄芩苷在 6 971～ 34 85 7μg/mL范围内与吸光度呈良好的线性关系 ,回归方程为C =0 0 2 2 1A +0 0 0 5 3(r =0 9994 )。黄芩苷平均回收率为 10 3 5 9% ,RSD =0 74 % (n =5 )。结论 :3批样品测定结果表明 ,所建立的方法简便、准确 。

3种方法提取洋葱中的类黄酮物质对肝癌细胞株HepG2的作用

目的研究3种方法提取洋葱中的类黄酮物质对肝癌细胞株HepG2的作用。方法采用水煎煮法、50%乙醇回流法及50%乙醇冷浸法从洋葱中提取类黄酮物质,将其分别加入处于对数生长期的HepG2肝癌细胞中培养,以PBS为对照组,20、30、40、50、70μg.ml-1的类黄酮物质为实验组,用MTT法分别测定给药前及给药72 h后各浓度组在490 nm处的吸光度。结果水煎煮法、50%乙醇回流法及50%乙醇冷浸法提取的类黄酮物质抑制HepG2肝癌细胞生长的起始浓度分别为40、50、40μg.ml-1,随着浓度的增加,抑制作用显著增强。结论洋葱中类黄酮物质对体外培养的HepG2肝癌细胞表现出明显的抗肿瘤活性,50%乙醇冷浸法所提类黄酮物质的抗肿瘤活性最强。

蓖麻油甾醇组成及其对大鼠蜕膜细胞的影响

目的进一步探明蓖麻油中的抗生育物质成分。方法利用皂化和萃取,从蓖麻油中提取甾醇,用GC-MS分析蓖麻油甾醇成分;用MTT法检测蓖麻油甾醇对原代培养大鼠蜕膜细胞活力的影响。结果蓖麻油总甾醇的主要成分为γ-谷甾醇(43.02%)、豆甾醇(27.15%)、岩藻甾醇(11.43%)、麦角甾-5-稀-3-醇(6.00%)和普罗布考(7.46%)。蓖麻油甾醇对细胞活力有抑制作用,其半抑制剂(IC50)剂量为:(88.45±3.196)μg/ml,r=+0.9549;抑制作用具有量-效关系。结论在蓖麻油甾醇的主要成分中,γ-谷甾醇(r-Sitosterol)可能是抑制原代培养大鼠蜕膜细胞活力的主要成分,而豆甾醇(stigmasterol)可能起协助的作用。

替莫唑胺联合分子靶向药物抗人脑胶质瘤细胞的体外试验研究

现今化疗药物种类繁多，但有效率均不理想，本实验应用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTT）法比较替莫唑胺（TMZ）联合分子靶向药物西妥昔单抗（C225）对人脑胶质瘤细胞的抑制作用，旨在探索一种有效、新型的化疗方案。

制备复合生长因子的缓释微球并考察其对细胞的影响

目的:制备复合碱性成纤维细胞生长因子的可降解缓释微球,考察其生物活性保存情况,以及其对上皮细胞的作用。方法:采用改良的乳化冷凝法交联制备明胶缓释微球,将其加入上皮细胞的培养液中,用细胞计数法、四甲基偶氮唑盐微量反应比色法(MTT法)测定细胞增殖情况。结果:缓释微球平均粒径12.36±3.56μm;培养1 d后各组细胞计数、吸光度(D)值差异均无显著性意义;5d后,缓释微球组细胞计数、吸光度(D)值明显高于对照组;7 d后,缓释微球组值仍高于其它组,但差异无显著性意义。结论:复合生长因子的缓释微球制备工艺简便,成球性好;能较长时间持续释放活性生长因子,明显促进细胞增殖。

扬子毛茛中总黄酮含量的测定

为了解扬子毛茛全草中的总黄酮含量,以槲皮素为对照品,采用盐酸-镁粉反应比色法测定其总黄酮含量。结果表明,样品中总黄酮在浓度0.006 25-0.037 5 mg/mL时与吸光度呈良好线性关系,样品中总黄酮平均含量为12.31 mg/g。回归方程为y=1.175 0x＋0.007 9（r=0.999 7）,回收率为100.03%,RSD=0.89%（n=5）。说明,该方法准确,简便,可用于扬子毛茛中总黄酮的含量测定。

应激状态下肠上皮细胞凋亡水平的变化及其机制

目的探讨在氧化应激状态下肠上皮细胞凋亡水平的变化以及凋亡异常发生的分子机制。方法使用过氧化氢(H2O2)处理培养的HT-29细胞模拟机体活性氧(ROS)损伤肠上皮细胞的体内状况,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)微量酶反应比色法进行细胞生存力的检测;采用流式细胞术进行细胞凋亡的检测;采用蛋白质免疫印迹法(Westernblot)检测凋亡相关蛋白的表达。结果H2O2可降低HT-29细胞生存率,且呈现剂量依赖性和时间依赖性(P均<0.05);与空白对照组相比,随着H2O2浓度的增高,细胞凋亡率增加(P均<0.05),随着作用时间的延长,细胞凋亡率也增加(P<0.05);以不同浓度H2O2刺激HT-29细胞24h后发现,与空白对照组相比,Bax的表达随着H2O2浓度的增高而增加,Bcl-2的表达随着H2O2浓度的增高而降低。以500μmol/L,浓度的H2O2刺激HT-29细胞发现,Bax表达随着H2O2作用时间延长而增加,Bcl-2表达随着H2O2作用时间延长而降低。结论应激状态下,肠上皮细胞氧化应激水平与其凋亡程度相关,凋亡调控蛋白Bcl-2/Bax比值失调可能是肠上皮细胞凋亡过度的机制之一。