云南省部分地区荷斯坦牛毕氏肠微孢子虫感染情况调查及分析

为了解毕氏肠微孢子虫在云南部分地区荷斯坦牛中的感染以及基因型分布情况,本实验从云南大理、昆明、曲靖和楚雄等牛养殖集中地区总共9个养殖场采集荷斯坦牛粪便样品547份,采用套式PCR结合测序检测并分析毕氏肠微孢子虫感染情况。结果显示,毕氏肠微孢子虫总感染率为4.57%(25/547);各地区的感染率为0~10.53%,其中昆明地区养殖场感染率最高,不同地区间感染率差异显著(P=0.025<0.05)。断奶前犊牛感染率为6.32%(23/364),高于其他月龄牛的感染率,但各月龄牛感染率差异不显著(P=0.052>0.05)。公牛感染率为7.84%(8/102)高于母牛3.82%(17/445),性别间感染率差异不显著(P=0.079>0.05)。进一步通过对样品扩增产物测序分析后鉴定其基因型,结果显示本研究共鉴定出5个基因型,I、J、BEB4为3个已知的基因型和YNY1、YNY22个新拟定的基因型,其中BEB4为优势基因型。在不同地区中,大理检出4种基因型(BEB4、I、YNN1、YNN2),昆明仅检出基因型BEB4,曲靖仅检出基因型J,大理地区基因型分布较为多样;在0~3月龄犊牛检出5种基因型,3~6月龄和成年牛分别只检出基因型BEB4和J;母牛检出4种基因型(BEB4、J、I、YNN1),公牛检出基因型BEB4和YNN2。采用MEGA 7软件中的邻接法(Neighbor-Joining)构建毕氏肠微孢子虫ITS基因的遗传进化树,结果显示基因型YNY1、YNY2和I、J、BEB4分别位于Group 1和Group 2,均具有人兽共患潜力。综上所述,本研究首次调查了云南省荷斯坦牛中毕氏肠微孢子虫的感染情况,并分析了其基因型分布,填补了云南荷斯坦牛毕氏肠微孢子虫的研究空白,为云南荷斯坦牛毕氏肠微孢子虫病的防控提供参考依据。

新疆策勒县野生喜马拉雅旱獭毕氏肠微孢子虫分子检测与鉴定

采集新疆策勒县野生喜马拉雅旱獭新鲜粪便样本50份,全部提取DNA后,基于毕氏肠微孢子虫内部转录间隔区(ITS)基因,用PCR法对DNA样本进行检测。发现27份样本呈毕氏肠微孢子虫PCR扩增阳性,阳性率为54.0%(27/50);27个阳性样本均测序成功,共鉴定出2种基因型,以已知基因型LQ10(n=26)为优势感染基因型,1个新基因型命名为XJHT1(n=1);基因型XJHT1序列与我国貉源毕氏肠微孢子虫基因型Peru8的序列存在3个碱基差异。构建遗传进化树显示,2个基因型均属组群1。研究结果为我国野生旱獭毕氏肠微孢子虫的流行情况提供参考。

长春地区梅花鹿毕氏肠微孢子虫分子流行病学调查

为了掌握长春地区梅花鹿毕氏肠微孢子虫(Enterocytozoon bieneusi)的感染率及基因型种类的分布情况,探究其在人与动物之间传播的源由,本研究于2018年12月-2019年12月期间采集长春地区8个养殖场共计538份梅花鹿粪便样品进行毕氏肠微孢子虫的流行病学调查及基因型分析,经PCR鉴定,测序分析、序列拼接比对以及系统进化分析。试验结果表明,长春地区梅花鹿毕氏肠微孢子虫的感染率为17.84%(96/538),不同养殖场的感染率为0~47.96%;研究共发现14种基因型(BEB6、EbpC、Ⅰ、JLD-Ⅲ、JLD-Ⅸ、JLD-ⅩⅤ、JLD-ⅩⅥ、JLD-ⅩⅦ、JLD-ⅩⅧ、JLD-ⅩⅨ、JLD-ⅩⅩ、JLD-ⅩⅪ、JLD-ⅩⅫ和JLD-ⅩⅩⅢ),其中BEB6为优势基因型。应用多位点序列分型(MLST)方法,选择MS1、MS3、MS4以及MS7位点对毕氏肠微孢子虫阳性样本进行多态性和群体遗传结构分析,结果显示,在96份阳性样品中,共有16份阳性分离株在至少2个位点同时扩增成功,形成10个多位点基因型(multilocus genotypes,MLGs),相同的基因型之间存在不同亚型,表明长春地区梅花鹿毕氏肠微孢子虫具有丰富的遗传多样性。本研究应用分子生物学方法对长春地区梅花鹿毕氏肠微孢子虫的流行病情况及基因型进行分析,研究结果不仅为梅花鹿毕氏肠微孢子虫防控提供科学依据,也为防控毕氏微孢子虫在人和动物间的传播提供基础数据,对保障公共卫生与健康意义重大。

马属动物毕氏肠微孢子虫研究进展

毕氏肠微孢子虫是一种引起人和动物腹泻的常见病原体,可通过食物和水源传播,具有重要的公共卫生意义。根据系统进化分析,已鉴定出近300个毕氏肠微孢子虫基因型,分为9个组群,组群1中的基因型大多数具有潜在人兽共患性;组群2~8中的基因型多数具有宿主特异性,部分也可感染人。研究表明,马属动物可感染37个毕氏肠微孢子虫基因型,具有一定人兽共患风险。论文就近年来感染马属动物的毕氏肠微孢子虫基因型、人兽共患风险、流行情况和致病性等进行综述。

动物园圈养大熊猫毕氏肠微孢子虫分子流行病学调查

为了解各地动物园圈养大熊猫的毕氏肠微孢子虫感染情况及其人畜共患风险,采用基于ITS基因的巢氏PCR方法,对江苏、福建、浙江等10个省(市、自治区)的动物园圈养大熊猫毕氏肠微孢子虫的感染情况及基因分型进行调查和检测。在31份大熊猫粪便样品中,共检测到毕氏肠微孢子虫阳性14份,总感染率45.2%,检测出SC02(13/14)和Peru6(1/14)两种毕氏肠微孢子虫基因型。种系发育分析表明,SC02和Peru6都属于具有人畜共患潜能的group 1b。本实验首次发现SC02基因型毕氏肠微孢子虫感染大熊猫,表明大熊猫可能作为毕氏肠微孢子虫的储存宿主引起人微孢子虫病,拓宽了基因型SC02的毕氏肠微孢子虫宿主范围。

云岭牛毕氏肠微孢子虫和芽囊原虫分子流行病学调查研究

为了探究云南省云岭牛毕氏肠微孢子虫和芽囊原虫的感染情况,从云南省昆明市和楚雄市随机采集云岭牛粪便样品391份。基于毕氏肠微孢子虫核糖体RNA内转录间隔区(ITS)序列和芽囊原虫的SSU rRNA基因序列,应用PCR扩增粪便DNA并对阳性产物进行测序,确定样品毕氏肠微孢子虫和芽囊原虫的感染情况。结果显示:共有17份样品为毕氏肠微孢子虫阳性,总感染率为4.35%(17/391);序列分析鉴定出2种已知基因型(1份为BEB8,16份为J);统计学分析显示云岭牛毕氏肠微孢子虫的感染率在不同年龄段的差异具有统计学意义(P<0.01);通过对芽囊原虫的检测,108份粪便样品为芽囊原虫阳性,总感染率达27.62%(108/391);经测序和序列比对,共发现4种芽囊原虫的基因亚型,分别为:ST1(n=4)、ST5(n=15)、ST10(n=84)、ST14(n=5),其中ST10为优势基因亚型;统计学分析发现,芽囊原虫的感染率与年龄(P<0.01)和性别(P<0.05)显著相关。本研究是国内外首次对云岭牛毕氏肠微孢子虫和芽囊原虫感染情况的调查和基因分型的研究,研究结果不仅扩展了毕氏肠微孢子虫和芽囊原虫的宿主范围,也为预防和控制云岭牛的这两种肠道原虫病提供了基础科学数据。

河南省部分地区奶牛毕氏肠微孢子虫和芽囊原虫分子流行病学调查

目的调查河南省奶牛毕氏肠微孢子虫和芽囊原虫流行情况及评估其人兽共患传播风险。方法基于毕氏肠微孢子虫SSU rRNA内部转录间隔区(ITS)和芽囊原虫核糖体小亚基(SSU rRNA)基因位点对从河南省5个地区,10个奶牛场共采集的1020份粪便样品进行PCR检测。结果奶牛毕氏肠微孢子虫和芽囊原虫的感染率分别为21.7%(221/1020)和19.2%(196/1020),其中混合感染率为3.5%(36/1020)。序列分析显示共鉴定了5种毕氏肠微孢子虫人兽共患基因型(D、J、I、BEB4、BEB6)和4种芽囊原虫人兽共患基因型(ST1、ST2、ST4、ST5)。结论本研究首次对河南地区奶牛芽囊原虫流行情况进行了调查,鉴定的人兽共患基因型具有重要公共卫生意义。

陕西部分地区山羊毕氏肠微孢子虫多位点基因分型研究

为了阐明山羊毕氏肠微孢子虫的遗传多样性,笔者采用基于微卫星(MS1、MS3、MS7)和小卫星(MS4)位点的多位点序列分型技术首次对不同用途山羊的122个毕氏肠微孢子虫分离株进行了多位点序列分型研究。结果发现,在MS1、MS4和MS7位点的扩增效率依次为27.9%(34/122)、18.0%(22/122)、50.8%(62/122),而在MS3位点所有样品均未获得有效扩增。核苷酸序列分析表明,所有样品的MS1、MS4和MS7位点分别具有16、9和18个基因型,共形成了14个MLGs。其中,50份绒山羊阳性样品3个位点扩增效率分别为10.0%(5/50)、14.0%(7/50)和90.0%(45/50),分别具有3、3和10个基因型,共形成了5个MLGs;56份奶山羊阳性样品3个位点的扩增效率依次为28.6%(16/56)、19.6%(11/56)和8.9%(5/56),分别组成4、4、1个基因型,共组成7个不同的MLGs;16份黑山羊阳性样品在3个位点的扩增效率依次为81.3%(13/16)、25.0%(4/16)、75.0%(12/16),分别具有9、2、7个基因型,构成2个MLGs。

江苏和云南部分地区山羊毕氏肠微孢子虫感染情况调查

为了调查江苏省和云南省部分地区山羊毕氏肠微孢子虫的感染情况和基因型,从江苏4个地区和云南9个地区羊场采集282份山羊新鲜粪样,提取基因组DNA,采用基于毕氏肠微孢子虫核糖体内转录间隔区(ITS)序列的特异套式PCR方法进行检测,对阳性扩增产物进行克隆、测序分析,以确定其基因型。结果显示,仅在云南昆明、江苏镇江和宿迁地区的山羊粪样中检出毕氏肠微孢子虫,各地区的感染率为0~22.7%。总感染率为2.8%(8/282),江苏感染率为6.3%(6/94),云南感染率为1.1%(2/188)。不同月龄羊间感染率差异不显著(P>0.05)。阳性扩增产物经克隆、测序分析,共获得2个基因型CHG1(n=3)和CHG3(n=5),进化树分析显示2个基因型均属Group 2亚群,无人畜共患性。

湖南省部分地区中华竹鼠毕氏肠微孢子虫基因分型研究

为了明确湖南省部分地区中华竹鼠毕氏肠微孢子虫的感染情况,从湖南省4个市的6个养殖场共采集中华竹鼠新鲜粪便样品480份,利用小亚基核糖体RNA(SSU rRNA)基因的套式PCR对这些样品中毕氏肠微孢子虫的感染率和遗传多样性进行研究。结果发现,25份粪便样品存在毕氏肠微孢子虫感染,总感染率为5.2%,除吉首市的中华竹鼠未检出阳性外,其余各采样点及各年龄段的中华竹鼠均有毕氏肠微孢子虫感染,但感染率差异不显著(P>0.05);进一步序列分析发现,所检测的中华竹鼠毕氏肠微孢子虫存在2种SSU rRNA基因型(Type 1和Type 2),其中Type 1为优势基因型;多位点序列分析发现,在MS1、MS3、MS7基因位点分别有7、1、14份样品成功扩增,呈现7、1、4个单倍型。本研究结果将为湖南省部分地区中华竹鼠微孢子虫病的防控提供基础数据。

从猪粪便中分离纯化毕氏肠微孢子虫的改良方法

为了从粪便样品中获得纯度更高的毕氏肠微孢子虫(Enterocytozoon bieneusi,E.bieneusi).我们从患腹泻病症的猪粪便中,通过改良网孔过滤、Percoll等密度离心以及蔗糖梯度离心等步骤,将粪便中的杂质去除,获得纯度更高的毕氏肠微孢子虫.同时在纯化的必要环节进行PCR法辅以韦伯氏染色法对获得的样品进行鉴定,从而进一步提高纯化的目的性和准确性.此方法大大提高了所获得毕氏肠微孢子虫的纯度,最高能达到占样品总微生物的15%.比现有报道的9%提高了近1倍.毕氏微孢子虫感染人类和牲畜,严重威胁公共卫生健康.但由于其在体外纯化和繁殖困难,关于它致病机理的研究非常有限.通过此改良方法获得更加纯化的毕氏肠微孢子虫,为开展更多更深入的研究提供了坚实的基础.

云南省怒江州部分地区独龙牛毕氏肠微孢子虫感染情况及基因分型研究

为了解云南省怒江州独龙牛毕氏肠微孢子虫感染情况,从怒江州的鸠门当、古泉村、亚左洛村、茨开镇、独龙江乡分四个季度(春、夏、秋、冬)采集独龙牛粪便样本1129份,采用分子生物学技术对其毕氏肠微孢子虫感染情况进行调查研究。结果发现,所调查地区独龙牛毕氏肠微孢子虫总感染率为1.68%(19/1129);各地点之间感染率差异显著(P<0.05),以独龙江乡感染率最高;4个季度中夏季感染率最高3.26%(9/276),春、秋和冬感染率分别为1.10%(3/272)、1.28%(4/312)和1.12%(3/269),但差异不显著(P>0.05)。序列分析发现,在19个阳性样本中成功鉴定出4种已知基因型(EbpC、BEB4、CHN3和CHN4)及2种新基因型(YNNJ1和YNNJ2),丰富了毕氏肠微孢子虫基因型数据。系统发育分析表明,所得6种基因型均为人兽共患基因型,提示怒江州独龙牛毕氏肠微孢子虫存在人兽互传的潜在风险。

猪隐孢子虫、贾第虫及毕氏肠微孢子虫的研究进展

隐孢子虫、贾第虫及毕氏肠微孢子虫均为人畜共患寄生性原生生物,且其宿主范围广泛,威胁动物和人类的健康。近年来,随着对家猪和野猪流行病学研究的深入,猪隐孢子虫、贾第虫及毕氏肠微孢子虫逐渐引起了人们的重视。本文主要就猪隐孢子虫、贾第虫及毕氏肠微孢子虫的检测方法和流行病学概况做一综述,为保护人类及猪提供理论依据。

河南省犊牛腹泻毕氏肠微孢子虫分子生物学鉴定与分析

本试验旨在了解毕氏肠微孢子虫在河南省腹泻犊牛中的感染以及基因型分布情况,并评估腹泻犊牛毕氏肠微孢子虫的人兽共患潜力。在河南省采集了140份0~6月龄的腹泻犊牛粪便,采用巢式PCR扩增毕氏肠微孢子虫核糖体内转录间隔区,并对阳性结果测序后进行聚类分析。结果显示,毕氏肠微孢子虫在腹泻犊牛中的感染率为6.43%(9/140),断奶前犊牛感染率高于断奶后犊牛,但差异不显著(P>0.05)。共检出5种基因型,分别为J(n=3)、I(n=2)、CHC8(n=2)、BEB4(n=1)和BEB6(n=1),基因型的分布有一定的地理差异,这5种基因型同处于2群,具有人兽共患风险。本试验结果对犊牛腹泻防控以及公共卫生有一定价值。

啮齿动物毕氏肠微孢子虫分子流行病学进展

毕氏肠微孢子虫是一种新现的人兽共患病原体,以前被认为是一种肠道原虫,最近被划分为真菌。该病原体主要侵染宿主小肠上皮细胞引起腹泻等临床症状,并且可通过食物和水源传播,具有重要公共卫意义。研究表明,啮齿动物可感染或携带多种毕氏肠微孢子虫基因型,对人类健康构成威胁。本文就近年来啮齿动物毕氏肠微孢子虫感染率、基因型、人兽共患风险等进行综述。

云南大理野鼠毕氏肠微孢子虫分子流行病学调查

为了解云南大理野鼠毕氏肠微孢子虫基因型的感染情况及基因型,本试验从大理采集到287份野鼠粪便标本,利用巢式PCR反应将粪便DNA标本进行扩增。结果显示:毕氏肠微孢子虫阳性样本有12份,感染率为4.18%。其中幼年组、亚成年组、成年组感染率分别为12.50%(2/16)、1.37%(1/73)、4.55%(9/198),雌性、雄性感染率分别为4.57%(8/175)、3.57%(4/112),各年龄组和性别间毕氏肠微孢子虫感染阳性率差异不显著(P>0.05)。共鉴定出3种毕氏肠微孢子虫基因型:EbpC、D、YNM1,其中YNM1是本试验鉴定出的新基因型,丰富了微孢子虫基因型数据库,且3种基因型均为人兽共患基因型。本试验结果表明,大理地区毕氏肠微孢子虫存在人兽共患的潜在风险。

南昌地区HIV/AIDS患者合并毕氏肠微孢子虫感染现状及基因型分析

目的了解南昌地区HIV/AIDS患者合并毕氏肠微孢子虫感染现状及其基因型,为HIV/AIDS患者治疗提供依据。方法采集南昌市辖区内的3个江西省艾滋病定点治疗医院的HIV/AIDS患者粪便样本,采用巢式PCR扩增毕氏肠微孢子虫的核糖体RNA内转录间隔区序列基因,可疑产物进行双向基因测序和比对,应用Mega 11.0软件基于邻接法绘制系统进化树,根据分析结果鉴定毕氏肠微孢子虫基因型,应用SPSS 22.0软件进行统计学分析。结果共调查382例HIV/AIDS患者,检出毕氏肠微孢子虫阳性6例,感染率为1.6%(6/382),6例阳性患者均为男性,不同性别、年龄、职业、文化程度、饮食及卫生习惯人群感染率差异均无统计学意义(P均>0.05);6个毕氏肠微孢子虫阳性样本经基因测序构建系统发育进化树,通过种群发育分析显示,所有基因型均属于组1。结论南昌地区HIV/AIDS患者检出的毕氏肠微孢子虫基因型均属于组1,应加强对南昌地区HIV/AIDS患者毕氏肠微孢子虫感染的监测力度。

云南省食蟹猴与猕猴毕氏肠微孢子虫和环孢子虫的分子流行病学研究

旨在探究云南省笼养食蟹猴与猕猴毕氏肠微孢子虫和环孢子虫的感染及基因型分布情况。从云南省昆明市和玉溪市元江县采集到笼养食蟹猴461份和笼养猕猴72份的新鲜粪便样本,采用巢式PCR方法扩增粪便DNA样本,基于毕氏肠微孢子虫核糖体内转录间隔区和环孢子虫SSU rRNA基因,分别对2种肠道原虫感染进行检测。结果显示:毕氏肠微孢子虫的总感染率为1.5%(8/533)。通过测序分析鉴定出3种已知毕氏肠微孢子虫基因型:D、TypeⅣ和CM1。此外,环孢子虫的总感染率为0.9%(5/533),序列比对仅发现1种环孢子虫基因型。各年龄组、性别、物种和地区间2种原虫的感染率差异无统计学意义(P>0.05)。结果表明,云南地区笼养食蟹猴与猕猴存在较低的毕氏肠微孢子虫和环孢子虫的感染率,该地区存在一定的毕氏肠微孢子虫和环孢子虫传播的潜在风险。本研究结果为我国云南地区笼养食蟹猴与猕猴感染毕氏肠微孢子虫和环孢子虫的防控提供了基础参考资料。

上海市宠物犬和猫毕氏肠微孢子虫和卡耶塔环孢子虫感染情况及分子特性研究

目的了解上海市宠物犬、猫毕氏肠微孢子虫和卡耶塔环孢子虫感染情况及分子特征,评估人兽共患传播风险。方法2021年11月—2022年6月,采集上海市某宠物医院犬和猫的新鲜粪样,提取粪样基因组DNA,巢式PCR扩增毕氏肠微孢子虫核糖体内转录间隔区(ITS)和卡耶塔环孢子虫小亚基核糖体RNA(SSU rRNA)序列,阳性产物经双向测序后在GenBank数据库中进行BLAST比对。使用MEGA 11.0软件基于邻接法构建系统进化树。结果本研究共采集145份粪样(犬粪样99份、猫粪样46份),毕氏肠微孢子虫总阳性率为4.1%(6/145),卡耶塔环孢子虫总阳性率为4.8%(7/145);犬的毕氏肠微孢子虫和卡耶塔环孢子虫阳性率分别为3.0%(3/99)和6.1%(6/99),猫的毕氏肠微孢子虫和卡耶塔环孢子虫阳性率分别为6.5%(3/46)和2.2%(1/46)。6条毕氏肠微孢子虫ITS序列与人源基因型A(GenBank登录号:MK982500)的序列一致性均为100%,归在组1;7条卡耶塔环孢子虫SSU rRNA序列与人源卡耶塔环孢子虫(GenBank登录号:KJ569533)的序列一致性均为100%。系统进化树分析结果显示,毕氏肠微孢子虫分离株与已报道的人源毕氏肠微孢子虫基因型A分离株归为同一分支,卡耶塔环孢子虫的分离株与已报道的人源卡耶塔环孢子虫分离株归为同一分支。结论上海市宠物犬、猫中存在毕氏肠微孢子虫和卡耶塔环孢子虫感染,均为人兽共感染型虫株。

宁夏银川地区奶牛毕氏肠微孢子虫的感染情况与基因型鉴定

目的明确宁夏银川地区奶牛毕氏肠微孢子虫的感染情况及其主要基因型。方法2021年8月—2022年8月,在银川市及周边县6个规模化奶牛场采集奶牛新鲜粪样(包括腹泻粪样和非腹泻粪样),提取粪样基因组DNA,用毕氏肠微孢子虫内部转录间隔区(ITS)引物进行巢式PCR,回收PCR产物后送测序并进行BLAST比对,鉴定毕氏肠微孢子虫基因型。采用SPSS 25.0软件进行分析,不同月龄奶牛毕氏肠微孢子虫阳性率差异的比较采用χ^(2)检验。结果共采集奶牛粪样772份,巢式PCR扩增结果显示,奶牛毕氏肠微孢子虫阳性率为8.7%(67/772),目的条带大小约为400 bp。不同牧场的奶牛毕氏肠微孢子虫阳性率为4.8%(6/124)~11.5%(18/156),差异有统计学意义(χ^(2)=30.828,P<0.05)。5~7月龄犊牛的阳性率最高(15.6%,23/147),12月龄以上育成牛的最低(3.4%,5/149),不同月龄的奶牛阳性率差异有统计学意义(χ^(2)=59.529,P<0.05)。腹泻粪样中毕氏肠微孢子虫的阳性率为10.6%(42/398),高于非腹泻粪样(6.7%,25/374)(χ^(2)=3.419,P<0.05)。测序共检出66条毕氏肠微孢子虫序列,分为CHN4、BEB4、J、I型等4种基因型,提交GenBank获得的登录号分别为OR352930、OR352929、OR352932和OR352931。其中CHN4型3条(占4.5%),与G1亚群CHN4基因型(HM992511)的序列一致性为98.4%;BEB4型18条(占27.3%),与G2亚群BEB4基因型(AY331008)的序列一致性为96.3%;J型22条(占33.3%),与G2亚群J基因型(AF135837)的序列一致性为93.1%;I型23条(占34.9%),与G2亚群I基因型(AF135836)的序列一致性为91.1%。不同月龄奶牛感染的毕氏肠微孢子虫的优势基因型不同,BEB4型、J型和I型毕氏肠微孢子虫在奶牛的各个月龄段均存在,3种基因型的总和分别占阳性腹泻粪样和阳性非腹泻粪样的88.1%(37/42)和60.0%(15/25),二者差异有统计学意义(χ^(2)=3.419,P<0.05)。结论宁夏银川地区奶牛存在毕氏肠微孢子虫感染,主要基因型为BEB4、J和I基因型。