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人血管内皮抑制素基因在毕赤甲醇酵母中的表达
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作者 曹志飞 李新平 +1 位作者 潘春娟 邱玲娅 《苏州科技学院学报(自然科学版)》 CAS 2005年第4期57-60,72,共5页
对发生突变的人血管内皮抑制素基因进行了PCR修正,并将其连接到pAO815载体上,然后克隆进大肠杆菌TOP10F’中,提取质粒测序,证实序列正确。再用电激法转化毕赤甲醇酵母KM71,利用RDB平板和PCR技术筛选出阳性克隆菌落后,甲醇诱导表达,SDS-P... 对发生突变的人血管内皮抑制素基因进行了PCR修正,并将其连接到pAO815载体上,然后克隆进大肠杆菌TOP10F’中,提取质粒测序,证实序列正确。再用电激法转化毕赤甲醇酵母KM71,利用RDB平板和PCR技术筛选出阳性克隆菌落后,甲醇诱导表达,SDS-PAGE电泳检测显示重组的人血管内皮抑制素蛋白在毕赤甲醇酵母KM71中获得了有效表达。 展开更多
关键词 人血管内皮抑制素 PCR定点突变 毕赤甲醇酵母 pAO815载体 诱导表达
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人LYVE-1的基因克隆及其在毕赤甲醇酵母细胞中的表达鉴定
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作者 陶蕾 吕元明 高锋 《检验医学》 CAS 北大核心 2007年第4期385-389,共5页
目的获得可溶、稳定、与人淋巴管内皮特异性透明质酸受体(LYVE-1)具备相同抗原性的重组人LYVE-1,为进一步研究LYVE-1在淋巴管形成中的作用及临床肿瘤免疫学诊断打下基础、提供材料。方法采用逆转录-酶链聚合反应(RT-PCR)自人淋巴结获得L... 目的获得可溶、稳定、与人淋巴管内皮特异性透明质酸受体(LYVE-1)具备相同抗原性的重组人LYVE-1,为进一步研究LYVE-1在淋巴管形成中的作用及临床肿瘤免疫学诊断打下基础、提供材料。方法采用逆转录-酶链聚合反应(RT-PCR)自人淋巴结获得LYVE-1全长cDNA,将其克隆入真核表达载体pPICZα,构建含人LYVE-1的重组质粒(pPICZα-LYVE-1);经全自动序列分析仪测序确证后,将此重组质粒转化入毕赤甲醇酵母细胞(GS115)中进行诱导表达,表达产物经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析及免疫印迹试验(Western blot)鉴定。结果经甲醇诱导的含pPICZα-LYVE-1的酵母细胞表达出重组人LYVE-1的融合蛋白,此蛋白在凝胶上表现为一约70 000的区带,在Western blot实验中可被LYVE-1的特异多克隆抗体识别。结论人LYVE-1融合蛋白在酵母表达系统中高水平表达,并具有与人体天然蛋白相同的抗原活性。 展开更多
关键词 淋巴管内皮特异性透明质酸受体 毕赤甲醇酵母 基因表达 鉴定
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木质素过氧化物酶基因(LipH8)的克隆及在甲醇毕赤酵母中的表达 被引量:12
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作者 王海宽 孙亚范 +1 位作者 杜连祥 路福平 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期258-260,共3页
以黄孢原毛平革菌 (Phanerochaetechrysosporium)RNA为模板 ,克隆LipH8基因片段 ,研究LipH8基因在甲醇毕赤酵母中的表达。构建了甲醇酵母表达质粒pMETA_LipH8载体 ,并将其线性化后用电穿孔法导入PichiamethabolicaPMAD16 ,部分阳性克隆... 以黄孢原毛平革菌 (Phanerochaetechrysosporium)RNA为模板 ,克隆LipH8基因片段 ,研究LipH8基因在甲醇毕赤酵母中的表达。构建了甲醇酵母表达质粒pMETA_LipH8载体 ,并将其线性化后用电穿孔法导入PichiamethabolicaPMAD16 ,部分阳性克隆的PCR结果表明LipH8基因已经整合到甲醇毕赤酵母染色体上 ,经摇瓶培养筛选出表达水平较高的酵母工程菌株。胞外木质素过氧化物酶活力达 932U L。 展开更多
关键词 黄孢原毛平革菌 RNA 克隆 甲醇毕赤酵母 木质素过氧化物酶 异源表达 cDNA
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甲醇毕赤酵母Pichia methanolica的高效电转化方法 被引量:6
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作者 孙亚范 王海宽 +2 位作者 向微 杜连祥 路福平 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期35-39,共5页
采用电穿孔的方法对甲醇毕赤酵母进行外源DNA的转化。通过调整参数,对影响电转化效率的主要因素进行探索,建立了质粒pMETA-Lip对甲醇毕赤酵母PMAD16的高效电转化方法。结果表明,当采用对数生长中期的菌体制备感受态细胞、质粒DNA浓度为3... 采用电穿孔的方法对甲醇毕赤酵母进行外源DNA的转化。通过调整参数,对影响电转化效率的主要因素进行探索,建立了质粒pMETA-Lip对甲醇毕赤酵母PMAD16的高效电转化方法。结果表明,当采用对数生长中期的菌体制备感受态细胞、质粒DNA浓度为30μg/mL、采用0.2cm电转杯、电压为600 V时,转化率达到最大值,为57个转化子/μg质粒DNA。经抽样鉴定所得到的转化子均为阳性克隆。为外源基因在甲醇毕赤酵母中的表达奠定了基础。 展开更多
关键词 甲醇毕赤酵母 高效电转化方法 电穿孔方法 外源DNA
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杂色云芝漆酶基因在甲醇毕赤酵母中表达条件研究 被引量:6
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作者 郭梅 路福平 +2 位作者 蒲军 白东清 杜连祥 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2006年第4期82-84,共3页
重组甲醇毕赤酵母(Pichiamethanolica)工程菌PMAD16/pMETA-Lcc1能分泌表达杂色云芝重组漆酶。本文通过对其发酵条件的研究,找出瓶发酵表达漆酶的最适培养条件:在BMMY培养基中添加0.2mmol/L的Cu2+,装液量为25mL/250mL三角瓶,接种量体积... 重组甲醇毕赤酵母(Pichiamethanolica)工程菌PMAD16/pMETA-Lcc1能分泌表达杂色云芝重组漆酶。本文通过对其发酵条件的研究,找出瓶发酵表达漆酶的最适培养条件:在BMMY培养基中添加0.2mmol/L的Cu2+,装液量为25mL/250mL三角瓶,接种量体积之比为45:25,0.5%甲醇诱导,20℃条件下瓶培养5d,漆酶最高酶活力达1192U/L。 展开更多
关键词 漆酶 重组甲醇毕赤酵母 表达条件
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杂色云芝漆酶基因(Lcc1)的克隆及在甲醇毕赤酵母中的表达 被引量:12
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作者 郭梅 蒲军 +2 位作者 杜连祥 路福平 白东清 《菌物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期221-226,共6页
以白腐菌杂色云芝Coriolus versicolor RNA为模板,通过RT-PCR获得漆酶Leel基因的cDNA片段。构建了甲醇酵母表达质粒pMETA-Lccl载体,并将其线性化后用电穿孔法导入Pichia methabolica PMAD16,部分阳性克隆的PCR结果表明Lccl基因已经整合... 以白腐菌杂色云芝Coriolus versicolor RNA为模板,通过RT-PCR获得漆酶Leel基因的cDNA片段。构建了甲醇酵母表达质粒pMETA-Lccl载体,并将其线性化后用电穿孔法导入Pichia methabolica PMAD16,部分阳性克隆的PCR结果表明Lccl基因已经整合到甲醇毕赤酵母染色体上,经摇瓶培养筛选出表达水平较高的酵母工程菌株。 展开更多
关键词 甲醇毕赤酵母 杂色云芝 酶基因 cDNA片段 RT-PCR PICHIA E1基因 表达质粒 甲醇酵母 电穿孔法 阳性克隆 工程菌株 摇瓶培养 白腐菌 RNA 线性化 染色体 酶活力 漆酶 载体
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漆酶基因的克隆及在甲醇毕赤酵母中的表达 被引量:2
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作者 郭梅 路福平 +2 位作者 白东清 蒲军 梁鹏 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2008年第12期30-32,共3页
以白腐菌杂色云芝RNA为模板,通过RT-PCR获得不带自身信号肽漆酶Lcc1基因的cDNA片段。构建了重组表达载体pMETαA-Lcc1,并将其线性化后用电穿孔法导入Pichia methabolica PMAD16,PCR结果表明Lcc1基因已经整合到甲醇毕赤酵母染色体上。经... 以白腐菌杂色云芝RNA为模板,通过RT-PCR获得不带自身信号肽漆酶Lcc1基因的cDNA片段。构建了重组表达载体pMETαA-Lcc1,并将其线性化后用电穿孔法导入Pichia methabolica PMAD16,PCR结果表明Lcc1基因已经整合到甲醇毕赤酵母染色体上。经摇瓶培养筛选出表达水平较高的酵母菌株,漆酶酶活力达78U/L。 展开更多
关键词 漆酶 CDNA 甲醇毕赤酵母 异源表达
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甲醇毕赤酵母表达木质素过氧化物酶的研究 被引量:2
8
作者 王海宽 路福平 +1 位作者 孙亚范 杜连祥 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2005年第3期17-21,共5页
将含有黄孢原毛平革菌(Phanerochaetechrysosprium)木质素过氧化物酶基因的甲醇毕赤酵母工程菌进行了鉴定和筛选,筛选得到木质素过氧化物酶活力高的菌株PMLIP08。确定了一步法发酵的最优葡萄糖浓度,优化其发酵培养条件,结果表明葡萄糖... 将含有黄孢原毛平革菌(Phanerochaetechrysosprium)木质素过氧化物酶基因的甲醇毕赤酵母工程菌进行了鉴定和筛选,筛选得到木质素过氧化物酶活力高的菌株PMLIP08。确定了一步法发酵的最优葡萄糖浓度,优化其发酵培养条件,结果表明葡萄糖的添加量为10g/L时,发酵条件为pH3.0,诱导温度24℃,培养时间12h,甲醇添加量1.1%,诱导时间72h后发酵液中酶活可达4888U/L。 展开更多
关键词 异源表达 木质素过氧化物酶 甲醇毕赤酵母 表达优化
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山蛭素Hs基因在甲醇毕赤酵母中表达 被引量:5
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作者 谭恩光 梁迎健 《中山医科大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第1期21-23,共3页
【目的】山蛭素基因在甲醇毕赤酵母中表达。【方法】利用PCR点突变方法改造山蛭素基因 ,将山蛭素基因克隆到pGEM Teasy载体中。对重组质粒测序 ,构建了毕赤酵母表达载体 pPIZB Hs ,然后转化有活性的GS115酵母菌株 ,筛选表达酵母菌株GS11... 【目的】山蛭素基因在甲醇毕赤酵母中表达。【方法】利用PCR点突变方法改造山蛭素基因 ,将山蛭素基因克隆到pGEM Teasy载体中。对重组质粒测序 ,构建了毕赤酵母表达载体 pPIZB Hs ,然后转化有活性的GS115酵母菌株 ,筛选表达酵母菌株GS115 ,摇瓶发酵。【结果】改造的山蛭素基因在重组酵母中表达 ,重组蛋白质具有对凝血酶抑制活性。【结论】利用PCR点突变方法能改造山蛭素基因 。 展开更多
关键词 山蛭素 基因扩增 序列分析 基因表达 点突变 甲醇毕赤酵母
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Reteplase基因的克隆及在甲醇毕赤酵母中的表达 被引量:1
10
作者 冮洁 江成英 +4 位作者 杜连祥 路福平 郭洪杰 李迪 刘海洋 《华南理工大学学报(自然科学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第12期25-29,50,共6页
进行了组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)突变体Reteplase(r-PA)基因的克隆,并在甲醇毕赤酵母(Pichia methanolica)中实现了胞外表达。以基因工程菌株里氏木霉(Trichoderma reesei)306染色体DNA为模板,通过PCR技术克隆了r-PA基因,将扩增产物... 进行了组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)突变体Reteplase(r-PA)基因的克隆,并在甲醇毕赤酵母(Pichia methanolica)中实现了胞外表达。以基因工程菌株里氏木霉(Trichoderma reesei)306染色体DNA为模板,通过PCR技术克隆了r-PA基因,将扩增产物克隆到pMD18-T载体上并进行了序列测定。测序结果表明:克隆到的基因序列长1.1 kb,与已发表的Reteplase基因同源性达99.91%,其编码的氨基酸顺序一致。文中还构建了甲醇毕赤酵母分泌性表达载体pMETαA-r-PA,用PacⅠ单酶切将pMETαA-r-PA线性化后,采用电转化的方法将其导入甲醇毕赤酵母PMAD16中,PCR和表型鉴定表明,筛选到Reteplase基因已经整合到甲醇毕赤酵母染色体上的阳性克隆。经摇瓶初步培养及以甲醇为唯一碳源诱导表达,胞外Reteplase表达水平最高达27.93mol/(s.L)。 展开更多
关键词 组织型纤溶酶原激活剂 甲醇毕赤酵母 Reteplase(r-PA) 表达
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培养条件对甲醇毕赤酵母异源表达木质素过氧化物酶的影响 被引量:4
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作者 王海宽 路福平 《天津科技大学学报》 CAS 2007年第1期33-36,共4页
对含有黄孢原毛平革菌木质素过氧化物酶基因(LipH8)的甲醇毕赤酵母培养基和发酵方法进行了研究.摇瓶培养条件研究结果表明:用11°Bx麦芽汁培养工程菌,然后用高温浸提液置换诱导产酶较好.5 L发酵罐产酶放大实验结果表明,木质素过... 对含有黄孢原毛平革菌木质素过氧化物酶基因(LipH8)的甲醇毕赤酵母培养基和发酵方法进行了研究.摇瓶培养条件研究结果表明:用11°Bx麦芽汁培养工程菌,然后用高温浸提液置换诱导产酶较好.5 L发酵罐产酶放大实验结果表明,木质素过氧化物酶较稳定,在72 h木质素过氧化物酶酶活达到最高7 568 U/L. 展开更多
关键词 异源表达 木质素过氧化物酶 甲醇毕赤酵母 黄孢原毛平革菌
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人甲状旁腺素在甲醇毕赤酵母中的分泌表达 被引量:1
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作者 王旭 李霜 +1 位作者 刘志斌 何冰芳 《南京工业大学学报(自然科学版)》 CAS 2004年第4期45-48,共4页
选用酵母偏爱的密码子,人工合成长度为282bp的人甲状旁腺素(hPTH)基因,将其克隆于M13载体中,DNA测序验证正确。通过PCR从含有hPTH基因的M13载体获得了该基因,将其插入到含有AOX1启动子和α因子信号肽序列的表达载体pPIC9K中,构建了重组... 选用酵母偏爱的密码子,人工合成长度为282bp的人甲状旁腺素(hPTH)基因,将其克隆于M13载体中,DNA测序验证正确。通过PCR从含有hPTH基因的M13载体获得了该基因,将其插入到含有AOX1启动子和α因子信号肽序列的表达载体pPIC9K中,构建了重组质粒pPIC9K-hPTH,电击法转化甲醇毕赤酵母(Pichiapastoris)GS115菌株,经G418筛选得到高拷贝转化子,甲醇诱导表达,Tricine-SDS-PAGE电泳结果表明在9 3kDa处有明显的诱导蛋白带,与报道的hPTH的相对分子质量相近;酶联免疫沉淀法(ELISA)检测证明表达的蛋白具有hPTH免疫活性为132ng/L。 展开更多
关键词 甲状旁腺素 甲醇毕赤酵母 重组质粒 分泌表达 酶联免疫沉淀法
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黄孢原毛平革菌木质素过氧化物酶基因在甲醇毕赤酵母中的表达 被引量:1
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作者 孙亚范 王海宽 +1 位作者 杜连祥 路福平 《工业微生物》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期10-15,共6页
将编码黄孢原毛平革菌木质素过氧化物酶(lip)的cDNA克隆到酵母整合型质粒pMETA上,电转化Ade缺陷型甲醇毕赤酵母(Pichiamethanolica)PMAD16,通过MD平板及PCR方法筛选和鉴定重组子。重组子发酵液经SDSPAGE分析和木质素过氧化物酶活力测定... 将编码黄孢原毛平革菌木质素过氧化物酶(lip)的cDNA克隆到酵母整合型质粒pMETA上,电转化Ade缺陷型甲醇毕赤酵母(Pichiamethanolica)PMAD16,通过MD平板及PCR方法筛选和鉴定重组子。重组子发酵液经SDSPAGE分析和木质素过氧化物酶活力测定等方法鉴定,表明带自身信号肽的黄孢原毛平革菌木质素过氧化物酶基因(lip)在甲醇毕赤酵母中得到表达。优化其发酵培养条件,以藜芦醇为底物进行酶活测定,其酶活可达932U/L。相应发酵指数为12.94U/h·L。比出发菌株提高了24.18%。 展开更多
关键词 甲醇毕赤酵母 重组子 木质素过氧化物酶 黄孢原毛平革菌 电转化 信号肽 酶活测定 表达 酶基因 缺陷型
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甲醇毕赤酵母电转化条件的研究 被引量:6
14
作者 江成英 冮洁 曹畅 《齐齐哈尔大学学报(自然科学版)》 2005年第1期8-11,共4页
采用电转化的方法,将携带有tPA355基因的DNA片段转化进甲醇毕赤酵母(Pichia methanolica)。通过调整参数,对影响电转化效率的主要因素进行探索,建立了质粒pMETα-tPA355对甲醇毕赤酵母PMAD16的高效电转化方法。
关键词 甲醇毕赤酵母 电转化 转化率 tPA355
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毕赤嗜甲醇酵母工程菌高密度培养表达黑曲霉菊粉内切酶的研究
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作者 华承伟 谢凤珍 +1 位作者 王建华 史贤明 《生物技术通讯》 CAS 2007年第1期60-63,共4页
目的:对毕赤嗜甲醇酵母工程菌inu-26高密度培养表达黑曲霉菊粉内切酶的条件进行优化,找出最佳的外源蛋白表达条件。方法:在摇瓶优化培养的基础上进行发酵罐高密度培养,优化最佳产酶条件。结果:以葡萄糖为碳源、微量元素添加量100~200m... 目的:对毕赤嗜甲醇酵母工程菌inu-26高密度培养表达黑曲霉菊粉内切酶的条件进行优化,找出最佳的外源蛋白表达条件。方法:在摇瓶优化培养的基础上进行发酵罐高密度培养,优化最佳产酶条件。结果:以葡萄糖为碳源、微量元素添加量100~200mL/L、甲醇浓度1g/L、pH6.0~7.0、诱导时间96h时酶的表达量最高;摇瓶模拟高密度培养表明影响酵母生长的最主要因素葡萄糖和硫酸铵的最佳浓度分别为20~45和11.5g/L;利用培养基F1进行高密度培养优于其他培养基,工程菌生长符合指数生长曲线,细胞生长延迟期为1.36h,比生长速率μ为0.4846h-1。结论:以葡萄糖为碳源,采用葡萄糖-甲醇混合诱导和100%甲醇单一诱导相结合,在菌体鲜重约为280g/L时连续诱导96h,菌体生长良好,不会出现自溶,且酶的表达量最高,为摇瓶培养的3倍多,酶活最高可达540 U/mL。 展开更多
关键词 毕赤甲醇酵母 黑曲霉菊粉内切酶 高密度培养
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重组巴氏毕赤酵母恒化培养动力学及代谢迁移特性研究 被引量:8
16
作者 郭美锦 吴康华 +2 位作者 庄英萍 储炬 张嗣良 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期617-624,共8页
通过对甲醇营养型毕赤酵母基因工程菌以碳源甘油为限制性基质进行恒化培养动力学试验 ,结果认为 :(1 )细胞光密度与其干、湿重呈线性关系 ,当细胞光密度 (OD60 0 )为 1 0 0时细胞湿重 (WCW)为 1 2 8 3g L ,细胞干重 (WDW)则为 2 2 9g L... 通过对甲醇营养型毕赤酵母基因工程菌以碳源甘油为限制性基质进行恒化培养动力学试验 ,结果认为 :(1 )细胞光密度与其干、湿重呈线性关系 ,当细胞光密度 (OD60 0 )为 1 0 0时细胞湿重 (WCW)为 1 2 8 3g L ,细胞干重 (WDW)则为 2 2 9g L ;(2 )基因工程菌P .pastoris的生长与限制性基质甘油残留浓度的关系符合Monod关系式 ,通过 1 μ对 1 S进行线性回归得 μmax=0 .366h- 1,Ks=0 .1 82 3g L ,经参数推导甘油最大菌体得率系数YG =0 .54g g ,菌体维持生长消耗底物系数m =0 .0 0 69g (g·h) ;氧最大菌体系数YX O2 =30 .96g moL ,菌体维持生长时消耗氧系数mO2 =0 .0 0 0 8mol (g·h) ,最适理论稀释速率Dm =0 .341h- 1;(3)从氨水的消耗速率和呼吸商 (RQ)的变化认为随着比生长速率 (μ)的增大 ,甘油代谢流从糖原异生和磷酸戊糖途径线性地向糖酵解和三羧酸循环途径进行代谢迁移 。 展开更多
关键词 甲醇营养型毕赤酵母 恒化培养 代谢迁移 动力学 重组人血清白蛋白
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毕赤氏酵母工程菌高密度发酵表达恶性疟原虫融合抗原的研究 被引量:5
17
作者 郭美锦 吴康华 +5 位作者 储炬 庄英萍 张嗣良 黄大庆 张青锋 潘卫庆 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期456-459,共4页
The effects of cultural conditions,which were fermentation period when methanol was as sole carbon source,methanol concentration,range of pH,on the expression of the chimeric protein of Plasmodium falciparum in geneti... The effects of cultural conditions,which were fermentation period when methanol was as sole carbon source,methanol concentration,range of pH,on the expression of the chimeric protein of Plasmodium falciparum in genetically engineered methylotrophic Pichia pastoris were investigated by shake flask experiments in this paper.The results showed:(1)fermentation period with methanol inducement is about 96 hours;(2)the optimum methanol concentration as sole carbon source is 10g/L;(3)the range of pH is from 6.0 to 7.0. On the base of above experimental results the cell high-density fermentation had been done on the FMG-5L fermentor with multi-sensors.The results showed that the cell optical density (OD 600) can reached 550 and the ma-ximum expression level of target proteins was 780mg/L which was 4 times higher or more than the shake flask culture’s. 展开更多
关键词 甲醇营养型毕赤酵母 恶性疟原虫融合抗原 发酵条件 优化 高密度发酵 表达
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黑曲霉中葡萄糖氧化酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达 被引量:8
18
作者 刘虎军 罗玮 +1 位作者 范新蕾 余晓斌 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期615-621,共7页
为了提高葡萄糖氧化酶的生产能力,提取和纯化了黑曲霉Aspergillus niger PCTC的基因组DNA,以此为模板进行PCR扩增获得葡萄糖氧化酶基因,经测序,所得基因全长1 772 bp,编码含有589个氨基酸的蛋白质。将目的基因和表达载体pPIC9K连接经电... 为了提高葡萄糖氧化酶的生产能力,提取和纯化了黑曲霉Aspergillus niger PCTC的基因组DNA,以此为模板进行PCR扩增获得葡萄糖氧化酶基因,经测序,所得基因全长1 772 bp,编码含有589个氨基酸的蛋白质。将目的基因和表达载体pPIC9K连接经电转化导入毕赤酵母GS115中,在甲醇诱导和α信号肽的转运下,将葡萄糖氧化酶分泌到胞外。经G418梯度抗性平板和显色平板的初筛以及摇床复筛,获得了一株产葡萄糖氧化酶活力较高的菌株,该株菌在30℃、180 r/min的培养条件下,经0.5%的甲醇诱导发酵4 d可获得0.342 U/mL的酶活。对该菌株进行了摇瓶产酶条件优化,其最佳发酵条件为:200 r/min、pH 5、接种体积分数50%、25℃下经1.5%甲醇诱导7 d,酶活达到25 U/mL。实验结果表明:葡萄糖氧化酶基因已经成功转入毕赤酵母,并获得相当的产量。 展开更多
关键词 葡萄糖氧化酶 黑曲霉 异源表达 甲醇毕赤酵母
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重组毕赤酵母表达人血清白蛋白-人白介素2融合蛋白过程的代谢特性 被引量:2
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作者 王舒 郑志永 +5 位作者 詹晓北 史仲平 高敏杰 刘立明 金坚 李华钟 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期11-17,共7页
分析了重组甲醇营养型毕赤酵母在5L多参数自控发酵罐上生产人血清白蛋白-人白介素2融合蛋白(HSA-IL-2)的发酵过程。在使用多种在线传感器和离线检测参数的基础上,应用相关性分析的方法将细胞生长的关键酶(乙醇氧化酶、葡萄糖-6-磷酸脱... 分析了重组甲醇营养型毕赤酵母在5L多参数自控发酵罐上生产人血清白蛋白-人白介素2融合蛋白(HSA-IL-2)的发酵过程。在使用多种在线传感器和离线检测参数的基础上,应用相关性分析的方法将细胞生长的关键酶(乙醇氧化酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶和异柠檬酸脱氢酶)酶活和代谢特性相关联。实验结果显示,甲醇诱导后葡萄糖-6-磷酸脱氢酶和异柠檬酸脱氢酶的酶活分别下降了46.1%和66.8%,说明胞内代谢流发生了迁移:三羧酸循环(TCA)和磷酸戊糖途径(HMP)中代谢流通量下降,甲醇完全氧化代谢成为主要代谢流。此外,在不同控制策略下,乙醇氧化酶的酶活和重组蛋白HSA-IL-2表达量也呈现出一定的差异。高溶氧低甲醇控制方式下HSA-IL2的表达量达到27mg/L,比低溶氧高甲醇条件下的表达量高33.7%。 展开更多
关键词 重组甲醇营养型毕赤酵母 在线测量 酶活分析 相关性分析
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人白细胞介素17基因的分离及其在酵母中的表达
20
作者 周俐梅 王嘉玺 +4 位作者 周泾 蔡欣 王利红 段聚宝 邹民吉 《生物技术通讯》 CAS 1997年第Z1期172-173,共2页
1995年,美国Immunex公司的姚政兵等人从激活的人T淋巴细胞中鉴定了一种新型的白细胞介素,即人白细胞介素17(human inter-leukm-17,hIL-17)。与此同时,法国的Fossiez等也从人类基因组中分离出相应的基因,二者的核苷酸序列完全相同。hIL-1... 1995年,美国Immunex公司的姚政兵等人从激活的人T淋巴细胞中鉴定了一种新型的白细胞介素,即人白细胞介素17(human inter-leukm-17,hIL-17)。与此同时,法国的Fossiez等也从人类基因组中分离出相应的基因,二者的核苷酸序列完全相同。hIL-17主要由活化的记忆性CD4^+T细胞产生,通过表达于许多细胞上的受体发挥作用,它能活化转录因子NF-κβ并诱导成纤维细胞中IL-6。 展开更多
关键词 人白细胞介素17 基因的分离 基础医学研究 成纤维细胞 医学科学院 啤酒酵母 毕赤酵母 甲醇营养型毕赤酵母 酵母表达系统 核苷酸序列
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