半胱氨酸、蛋氨酸对体外培养绒山羊次级毛囊生长及毛乳头细胞增殖的影响

旨在探讨半胱氨酸(Cys)、蛋氨酸(Met)对体外培养燕山绒山羊次级毛囊(SF)生长及毛乳头细胞(DPCs)增殖凋亡的影响。本研究选取1只1周岁左右健康雄性燕山绒山羊皮肤若干,完整分离的次级毛囊随机分成Cys试验组和Met试验组,每组各浓度3个重复,每个重复8根毛囊,Cys试验组添加浓度分别为0、40、80、120、160和200μg·mL^(-1);Met试验组添加浓度分别为0、10、15、20、25和30μg·mL^(-1)。毛囊培养7 d,每隔24 h观察毛囊生长形态并测量毛囊生长长度。从燕山绒山羊次级毛囊中提取、纯化DPCs,细胞计数并绘制DPCs生长曲线,将DPCs随机分为Cys试验组和Met试验组,每组各浓度6个重复,Cys试验组添加浓度分别为0、20、40、60、80、100μg·mL^(-1);Met试验组添加浓度分别为0、2、4、6、8、10μg·mL^(-1)。培养2 h后用CCK-8试剂盒进行细胞增殖活力测定,确定燕山绒山羊DPCs中Cys和Met的最适培养浓度,利用qRT-PCR技术检测不同浓度Cys和Met的DPCs增殖相关基因(PCNA、CCND1、CDC42、CDK 4)、凋亡相关基因(P21、P53、Bax、Caspase-3、Bcl-2)、皮肤细胞分化相关基因(IVL)及角蛋白相关基因(K10、K 14)mRNA表达水平。结果表明,与对照组相比,添加80和120μg·mL^(-1) Cys与10、15、20和25μg·mL^(-1) Met均可显著影响次级毛囊生长速率和累计生长长度(P<0.01),且120μg·mL^(-1) Cys和20μg·mL^(-1) Met促生长效果最好;添加20、40和60μg·mL^(-1) Cys可以显著影响DPCs增殖(P<0.05),添加40μg·mL^(-1) Cys显著上调PCNA、CCND1、CDK4、Bcl-2、K10、K 14和IVL基因mRNA表达量(P<0.05);添加6μg·mL^(-1) Met可以显著影响DPCs增殖(P<0.05),并显著上调PCNA、CCND1、CDK4、P21、Bcl-2、K 10和K 14基因mRNA表达量(P<0.05)。综上,添加Cys和Met可以显著促进长绒期燕山绒山羊次级毛囊生长,最适添加量分别为120μg·mL^(-1)和20μg·mL^(-1);添加Cys和Met可通过上调细胞增殖、分化、角蛋白等基因mRNA、下调细胞凋亡基因mRNA表达,促进乳头细胞增殖、抑制细胞凋亡进而促进燕山绒山羊次级毛囊生长。

miR-218-5p调控安哥拉兔毛囊毛乳头细胞增殖的研究

本文旨在探讨miRNA-218-5p对兔毛乳头细胞毛囊发育相关基因的影响,为研究家兔毛囊发育中的作用机制提供理论依据。用酶消化法分离兔毛乳头细胞,用MSCM培养基培养毛乳头细胞。将培养的毛乳头细胞分为4组,分别转染miR-218-5p mimics、miR-218-5p mimics NC、miR-218-5p inhibitor、miR-218-5p inhibitor NC。培养48 h后,收集细胞。使用RNA提取试剂盒提取各组RNA,使用RT-qPCR检测各组miR-218-5p的mRNA表达水平和毛囊生长发育相关基因表达水平。使用CCK-8检测各组细胞增殖情况。结果发现,在兔DPCs(Dermal Papilla Cells)中过表达miR-218-5p能够显著上调毛囊生长发育相关基因如CCND1、CTNNB1、LEF1的mRNA表达水平,显著下调TGF-β1、BMP4的mRNA表达水平;敲减miR-218-5p能够显著下调毛囊生长发育相关基因如CCND1、CTNNB1、LEF1的mRNA表达水平,显著上调TGF-β1、BMP4的mRNA表达水平。过表达miR-218-5p后,极显著上调了毛乳头细胞的增殖。敲减miR-218-5p后,极显著下调了毛乳头细胞的增殖。本研究发现,miR-218-5p能上调家兔毛囊生长发育相关基因CCND1、CTNNB1、LEF1的表达水平,下调TGF-β1、BMP4的表达水平,同时具有促进毛乳头细胞增殖的功能。

小鼠毛乳头细胞体外分离培养方法的优化和评价

目的 :探索小鼠毛乳头细胞(DPCs)体外分离培养的改良新方法。方法 :选用雌性C57BL/6小鼠,以精细显微解剖获取毛乳头部位,联合胶原酶消化,并添加10 ng/mL碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)以优化培养体系,建立体外分离培养小鼠DPCs的改良新方法;以光镜下观察、细胞计数、碱性磷酸酶(ALP)特异性染色及荧光定量PCR鉴定DPCs的ALP mRNA表达水平,与传统方法比较进行相关评价。结果 :与传统方法比较,改良方法的毛乳头基本全部贴壁,细胞可更快迁出及生长融合,所获得的细胞数量是传统方法的5.85倍;经传代后传统方法的低代次DPCs有聚集性生长现象,随代次增加,细胞形态逐渐变大衰老,增殖明显迟缓,聚集性生长愈发不明显,至第5代聚集性现象消失。而改良方法的DPCs经传代后,第1、2和5代形态仍呈长梭形及多角形的特点,至第5代仍保有聚集性生长的特点;且具有更强的ALP活性,尤其是高代次(第5代)细胞更为明显,而传统方法的高代次细胞则几乎无ALP活性;改良方法的ALP mRNA表达水平与传统方法相比也明显上调,尤其是第5代细胞更加明显。结论 :改良方法可获取更多数量、并具有较好功能的小鼠DPCs,为开展毛囊相关研究提供可靠的细胞来源。

马尾松松针提取物对人毛乳头细胞的保护作用及机制研究

研究了马尾松松针提取物对人毛乳头细胞(Human dermal papilla cells,HDP)的保护作用及机制。通过制备并分析不同溶剂松针提取物中主要活性成分含量;建立二氢睾酮(Dihydrotestosterone,DHT)诱导HDP细胞损伤模型,采用CCK8法检测细胞相对活力,qPCR检测细胞中血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)、转化生长因子-β2(Transforming growth factor-β2,TGF-β2)、β-连环蛋白(β-Catenin)和蓬乱蛋白1(Dishevelled 1,DVL1)基因相对表达量,探究松针提取物对Wnt/β-Catenin信号通路的影响;最后采用UPLC-QTOF/MS分析鉴定提取物成分。结果表明,松针50%醇提物可显著提高HDP细胞相对活力,最高达88.3%(P<0.05);显著提高VEGF mRNA表达量(P<0.05),降低TGF-β2 mRNA相对表达量(P<0.01);并显著促进Wnt/β-Catenin信号中DVL1 mRNA和β-Catenin mRNA表达(P<0.05,P<0.01)。从松针50%醇提物中共鉴定出36种成分,包括黄酮类、木脂素类、生物碱和萜类等化合物。马尾松松针提取物对人毛乳头细胞具有保护作用,其机制可能与Wnt/β-Catenin信号传导途径有关。

毛乳头细胞凝集性生长对诱导毛囊样结构形成能力的影响

目的 以细胞外基质成分纤维连接蛋白促进培养的人头皮毛乳头细胞凝集性生长行为 ,观察毛乳头细胞的凝集性生长对诱导毛囊形成能力的影响。方法 传代培养的人头皮毛乳头细胞经细胞外基质纤维连接蛋白预处理后 ,促进形成凝集性生长团 ,再与毛囊上皮细胞共同移植于裸鼠皮下 ,分别于 8、12周进行组织学检查 ,观察毛囊形成及分化程度。结果 8周后纤维连接蛋白预处理的毛乳头细胞组可见有毛囊样结构形成 ,未处理组仅见松散细胞团 ;12周后两组均可见有毛囊样结构形成 ,但纤维连接蛋白预处理组较未处理组诱导形成毛囊样结构分化更成熟 ;真皮成纤维细胞组未见有毛囊样结构形成。结论 毛乳头细胞的凝集性生长特性对其诱导毛囊形成的能力有密切的关系 ,细胞呈凝集性生长后 ,其生物学功能增强。

毛乳头细胞诱导毛囊形成的研究

目的 探讨培养的毛乳头细胞在体内外条件下诱导毛囊形成的可能性。方法 采用酶消化法获得毛乳头细胞、真皮鞘细胞、毛囊上、下段及球部细胞 ,进行毛囊组织工程重建 ,或用游离细胞混合移植于裸鼠 ,组织学观察毛囊形成情况。 结果 毛囊间表皮细胞、毛囊上段上皮细胞、下段上皮细胞和球部细胞在间质细胞凝胶上均可形成双层结构的组织工程皮肤 ,在真皮鞘细胞胶原凝胶上毛囊的上、下段上皮细胞形成了毛囊结构 ,移植于裸鼠后 8周毛乳头细胞胶原凝胶诱导毛囊上、下段细胞形成了毛囊。低代毛乳头细胞与毛囊上皮细胞混合移植形成了数量较多、结构典型的毛囊 ,并有肉眼可见的毛发纤维产生。结论 毛囊的真皮成分细胞即毛乳头细胞、真皮鞘细胞在体内、外均具有诱导毛囊形成的能力 ,通过与毛囊上皮细胞之间的相互作用 ,可诱导毛囊形成。

培养毛乳头细胞bFGF、ET-1、SCF的表达及其生物学特性

目的 :观察不同传代培养人毛乳头细胞的 b FGF、ET- 1、SCF表达变化情况及对其诱导毛囊再生能力的影响。方法 :采用细胞培养、免疫组织化学和原位杂交技术 ,对不同传代培养的毛乳头细胞的 b FGF、ET- 1、SCF的表达变化情况进行观察 ,同时观察其对诱导毛囊再生能力的影响。结果 :低传代培养毛乳头细胞 ET- 1、SCF表达较强 ,传代 >6代后 ET- 1和 SCF转为阴性 ;并发现毛乳头细胞表达 ET- 1和 SCF越强 ,其诱导毛囊再生能力也越高。结论 :毛乳头细胞诱导毛囊再生的能力与其表达 ET- 1和

毛乳头细胞凝集性生长与细胞外基质分泌关系的组织化学研究

目的 研究毛乳头细胞的凝集性生长方式与其产生的细胞外基质之间的关系。方法 用人头皮分离的低传代毛乳头细胞与毛发上皮细胞共同培养形成的毛乳头细胞凝集性生长区及非凝集生长区的毛乳头细胞进行阿新蓝、过碘酸雪夫氏染色 ,观察染色反应的强弱。结果 新分离的毛乳头 ,阿新蓝和过碘酸雪夫氏染色均呈强阳性 ,培养的毛乳头细胞凝集性生长区阿新蓝—过碘酸雪夫氏染色亦显示强阳性 ,而非凝集区的毛乳头细胞显色呈弱阳性。结论 培养的毛乳头细胞凝集性生长后 。

咖啡因对体外培养人毛囊及毛乳头细胞的影响

目的:研究咖啡因对人毛囊及毛乳头细胞体外培养的影响。方法:选择不同浓度咖啡因作用于体外培养的人毛囊及毛乳头细胞.记录6 d内毛囊的生长速度和毛球部形态学改变,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定毛乳头细胞增殖活性;流式细胞技术测定细胞凋亡:RT-PCR技术进行血管内皮生长因子(VEGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)、雌激素受体(ER)、雄激素受体(AR)及5α-还原酶(SRD5A)的mRNA定量。结果:与对照组相比,0.005%咖啡因明显促进毛囊生长,0.000 5%咖啡因促进毛乳头细胞增殖、抑制凋亡,并促进毛发生长正性相关因子表达,抑制负性相关因子表达。结论:在有效浓度范围内,咖啡因可以促进人毛发生长,高浓度咖啡因抑制毛发生长。

硫酸软骨素、硫酸肝素对毛乳头细胞粘附及生长的影响

目的 探讨细胞外基质在毛囊生长发育中的作用 ,寻找毛乳头细胞 (DPC)生长的调节因素。方法 用两步酶消化法分离培养DPC ,并通过免疫组化α 平滑肌肌动蛋白 (Actin)染色证实。测定硫酸软骨素A ,硫酸软骨素C及硫酸肝素对DPC粘附及生长的影响。结果 两步酶消化法分离培养DPC效率高 ,纯度高 ,方法简单易行。硫酸软骨素A和硫酸肝素明显促进DPC粘附及生长 ,而硫酸软骨素C作用不明显。结论 某些细胞外基质可调节DPC的生长 ,从而影响毛囊的生长发育。

人毛乳头细胞在不同传代时期某些细胞因子表达的变化

目的观察毛乳头细胞在体外培养条件下的生长特性,为毛囊重建提供参考资料。方法采用二步酶消化法分离正常人头皮毛囊的毛乳头细胞,在体外进行传代培养,用免疫组化方法观察不同传代毛乳头细胞生长因子表达的差异。结果高代培养毛乳头细胞逐渐丧失其凝集性生长的特性,生长因子的表达逐渐消失。结论毛乳头细胞的生长及其特性的保持受许多因素的影响,体外培养的毛乳头细胞与体内有差异。低代毛乳头条件培养基可恢复毛乳头细胞部分生长特性。

血管内皮生长因子对毛乳头细胞生长特性的影响

目的观察血管内皮生长因子(VEGF)对体外培养的毛乳头细胞生长的影响。方法取神经外科手术患者头皮,采用两步酶消化分离法分离人毛乳头细胞,取对数生长期的第3代人毛乳头细胞,调整细胞浓度为1×107/L,将实验分为20μg/L的血管内皮生长因子组及只加培养基的空白对照组。结果低传代培养的毛乳头细胞VEGF表达较强,随着传代次数增多,表达逐渐减弱,血管内皮生长因子组与空白对照组相比,细胞生长曲线停滞期减少,提前进入对数生长期,VEGF组与空白对照组的吸光度值相比较明显升高(P=0.002)。结论 VEGF可以促进体外培养的人毛乳头细胞的增殖。

毛乳头在毛囊生长周期中的变化和作用

目的了解人毛乳头结构在毛发生长周期中的变化及其对毛发生长的调控作用。方法将整形手术后取下的头皮在无菌条件下分离成游离的毛囊,在Williams E培养基中培养;通过横断毛囊和完整毛囊的培养来观察毛囊的生长状况和处于不同生长周期的毛囊的毛乳头结构变化。结果分离后的完整毛囊在WilliamsE培养基中平均可继续生长12 d,平均生长速度为每天0.2～0.3 mm;静止期或生长初期毛囊的毛乳头呈圆形贴在毛球底部,快速生长的毛囊毛乳头变长呈锥形,结构疏松,与毛根紧密相接,当毛囊进入衰退期直至停止生长后毛乳头萎缩变小,并与毛根逐渐分离。在低位横断毛囊,毛囊可再生毛球并继续生长,但生长速度减慢;在高位横断毛囊,毛囊不能继续生长。结论毛乳头在毛发生长周期中不断变化,生长期毛乳头体积增大,与毛母质联系紧密,它在毛囊的生长和生长周期中起着不可缺少的调控作用。

人毛乳头细胞组织化学研究

毛乳头细胞是一种高度特殊化的成纤维细胞。本文通过对体外培养的毛乳头细胞进行组织化学染色研究发现，它对阿新蓝、甲苯胺蓝和PAS染色均呈阳性，并对甲苯胺蓝显异染性．与原位时的细胞染色结果相同，表明在体外培养下．毛乳头细胞合成和分泌酸性、中性粘多糖的能力仍能维持较长时间；在细胞聚集区和多层化细胞团中有丰富的细胞外基质，阿新蓝和PAS染色呈强阳性，说明细胞外基质的存在与毛乳头细胞的聚集有很大关系；另外毛囊真皮鞘细胞对阿新蓝、甲苯胺蓝染色呈阳性反应．无甲苯胺蓝的异染性，PAS染色阴性，而真皮成纤维细胞这些染色均阴性，说明它与毛乳头细胞关系密切。

胰岛素样生长因子1和成纤维细胞生长因子7与毛乳头细胞的生长

背景:毛乳头细胞凝集性生长与其诱导毛发生长有关。毛乳头细胞分泌的多种生长因子如胰岛素样生长因子1、成纤维细胞生长因子7可能对毛乳头细胞生长具有重要的影响。目的:观察正常人毛乳头细胞的增长与生长方式与胰岛素样生长因子1、成纤维细胞生长因子7的相关性。方法:采用二步酶消化法分离培养毛乳头细胞,免疫组化法和流式细胞仪分别检测两种生长因子在凝集性与非凝集性生长的毛乳头细胞中的表达,MTT法检测2.5～100μg/L质量浓度胰岛素样生长因子1对人毛乳头细胞增殖的影响。结果与结论:胰岛素样生长因子1与成纤维细胞生长因子7均表达于细胞胞浆,但表达量随时间减弱,其中第3代明显比第9代毛乳头细胞中成纤维细胞生长因子7的表达强烈(P<0.05)。与对照组相比,不同质量浓度胰岛素样生长因子1均有明显促进毛乳头细胞增殖的作用(P<0.05),其中以2.5μg/L最为显著。提示毛乳头细胞的凝集性生长状态的改变可能与胰岛素样生长因子1、成纤维细胞生长因子7表达下降有关,胰岛素样生长因子1可明显刺激毛乳头细胞增殖。

人毛乳头细胞条件培养液治疗女性脱发的临床疗效观察

目的:观察人毛乳头细胞条件培养液皮下注射治疗女性脱发的临床疗效。方法:用人毛乳头细胞条件培养液皮下注射18例女性脱发患者的脱发区,每周1次,共4次。结果:人毛乳头细胞条件培养液治疗过的女性脱发区,可见到重新生长的毳毛和终毛。结论:人毛乳头细胞条件培养液对女性脱发患者有明显的治疗作用。

体外长期培养人毛乳头细胞生长特性

目的:观察人毛乳头细胞体外长期培养的生长特性,为深入阐明毛乳头细胞凝集性生长的分子机制打下基础。方法:采用二步酶消化法分离毛乳头后,于DMEM培养基中培养,观察长期传代培养中毛乳头细胞生长方式的改变,并用计数法绘制不同传代水平细胞的生长曲线。结果:培养中的毛乳头细胞多呈梭形,细胞在融合前出现多层凝集性生长的细胞团,并具有周期性,凝集性生长状态下毛乳头细胞增殖速度加快;凝集性生长随着传代次数增加而减弱,表现为凝集性生长的细胞团数目减少、体积变小。结论:体外培养的人毛乳头细胞具有周期性凝集性生长的特性,凝集性生长的特性可能与其功能密切相关。

人毛乳头细胞条件培养基对毛乳头细胞的作用

目的:研究人毛乳头细胞条件培养基对高传代人毛乳头细胞的生物作用。方法:通过体外培养低传代的人毛乳头细胞,收集其上清配制成条件培养基,用此条件培养基培养高传代人毛乳头细胞,观察其细胞的3H-TdR计数值及细胞超微结构的变化。结果:用低传代人毛乳头细胞上清液培养过的高传代人毛乳头细胞3H-TdR计数值明显高于对照组(P<0.01)。在电镜下可见高传代人毛乳头细胞核糖体丰富、内质网分泌成池。结论:低传代人毛乳头细胞条件培养基有明显促进高传代人毛乳头细胞活性的作用。

甘草提取物对人毛乳头细胞增殖和分泌血管内皮生长因子的影响

目的:观察甘草提取物对体外培养的人毛乳头细胞增殖和分泌血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法:采用不同浓度的甘草提取物作用于体外培养的人毛乳头细胞72h,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖活性;ELISA法检测细胞培养上清液中VEGF蛋白含量,反转录(RT)-PCR半定量检测细胞中VEGF mRNA表达。结果:与对照组相比,甘草提取物对毛乳头细胞增殖无明显影响;加药组浓度为2.5、5.0、10.0、15.0μg/mL时,甘草提取物促进细胞分泌VEGF,增加细胞内VEGF mRNA表达,差异有统计学意义。结论:甘草提取物对毛乳头细胞增殖无明显影响,但能显著促进毛乳头细胞分泌VEGF,甘草提取物可能是通过增加毛乳头细胞分泌VEGF来促进毛发生长的。