毛兰素对多囊卵巢综合征大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响及机制

目的 探究毛兰素(ERI)对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响及机制。方法 通过皮下注射脱氢表雄酮构建PCOS大鼠模型,将造模成功的大鼠随机分为PCOS组,ERI低、中、高剂量组(10、20、40 mg/kg)和ERI高剂量+维替泊芬组(40 mg/kg ERI+10 mg/kg维替泊芬),每组10只;另取10只正常大鼠作为正常组。各给药组大鼠灌胃相应剂量的ERI和/或腹腔注射维替泊芬,PCOS组和正常组大鼠灌胃等体积的1%二甲基亚砜,每日1次,连续6周。给药结束后,检测各组大鼠体重和空腹血糖(FPG),血清中雌二醇(E2)、睾酮(T)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)水平,观察卵巢组织形态学变化,分析卵巢组织细胞凋亡情况,检测卵巢组织中凋亡相关蛋白[B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶3(Caspase-3)]和HippoYAP信号通路相关蛋白[大肿瘤抑制激酶1(LATS1)、磷酸化LATS1(p-LATS1)、Yes相关蛋白(YAP)、磷酸化YAP(p-YAP)、转录共激活子因子PDZ结合基序(TAZ)]表达水平。结果 与PCOS组比较,ERI低、中、高剂量组大鼠卵巢多囊特征减轻,闭锁卵泡数量减少,颗粒细胞层增厚,体重、FPG水平、T水平、LH水平、LH/FSH、囊性卵泡数量、细胞凋亡指数和Bax、Caspase-3、p-LATS1、pYAP蛋白表达水平均显著降低或减少(P<0.05),黄体数量、E2水平和Bcl-2、LATS1、YAP、TAZ蛋白表达水平均显著升高或增多(P<0.05)。与ERI高剂量组比较,ERI高剂量+维替泊芬组大鼠的上述指标变化均被抑制(P<0.05)。结论 ERI能促进PCOS大鼠卵巢颗粒细胞增殖,调节性激素水平,其作用机制可能与抑制Hippo-YAP信号通路有关。

毛兰素调节Slit2/Robo1信号通路对糖尿病肾病模型大鼠肾小球内皮细胞血管生成的影响

目的 探讨毛兰素对糖尿病肾病(DN)模型大鼠肾小球内皮细胞血管生成的影响及slit同源蛋白2(Slit2)/轴突导向受体蛋白1(Robo1)信号通路的作用。方法 采用高糖高脂饲料持续饲养雄性SD大鼠8周,ip给予链脲佐菌素35 mg·kg^(-1)制备DN大鼠模型。将DN模型大鼠分为模型组及模型+毛兰素10,20和40 mg·kg^(-1)组(ig给予毛兰素,持续8周),每组10只,同时设置正常对照组(ig给予0.5%羟甲基纤维素钠,持续8周)。尿蛋白定量试剂盒测定大鼠24 h尿蛋白水平,全自动生化分析仪检测血清空腹血糖(FPG)和血肌酐(Scr)水平,PAS染色观察大鼠肾组织病理变化,免疫荧光法检测肾组织血小板内皮细胞黏附分子31(CD31)和足细胞标志蛋白(PCX)表达水平,Western印迹法检测肾组织Slit2和Robo1蛋白表达。结果 与正常对照组比较,模型组大鼠FPG、Scr和24 h尿蛋白水平以及肾组织CD31、Slit2和Robo1蛋白表达显著升高(P<0.01);肾组织新增肾小球毛细血管,并出现肾小球肥大和系膜面积扩张,存在非管状CD31染色,缺少相邻PCX染色,以及部分CD31管状区域染色也缺乏相邻的PCX染色。与模型组比较,模型+毛兰素10,20和40 mg·kg^(-1)组大鼠FPG、Scr和24 h尿蛋白水平及肾组织CD31、Slit2和Robo1蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01);肾组织新增肾小球毛细血管、肾小球肥大和系膜面积扩张现象减轻,CD31管状区域染色与PCX足细胞区域染色基本相邻。结论 毛兰素可能通过抑制Slit2/Robo1信号通路而抑制DN模型大鼠肾小球内皮细胞血管生成。

毛兰素调节CCL2⁃CCR2轴对关节软骨细胞炎性损伤的影响

目的探讨毛兰素调节CC趋化因子配体2(CCL2)/CC趋化因子受体2(CCR2)轴对关节软骨细胞炎性损伤的影响。方法将人关节软骨细胞分为control组(正常培养)、LPS组、毛兰素低(10 nmol/L)、中(25 nmol/L)、高(50 nmol/L)剂量组、pcDNA组(转染pcDNA3.1)、pcDNA⁃CCL2组(转染pcDNA3.1⁃CCL2),实时荧光定量PCR(qRT⁃PCR)检测细胞中CCL2、CCR2 mRNA表达水平;MTT法、平板克隆实验与流式细胞仪分别检测细胞增殖和凋亡情况;qRT⁃PCR和ELISA检测IL⁃6、IL⁃1β、TNF⁃α水平;Western blot法检测细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞抗凋亡因子B细胞淋巴瘤蛋白2(Bcl⁃2)、Bcl⁃2相关X蛋白(Bax)及CCL2/CCR2通路蛋白表达。结果与control组比较,LPS组细胞凋亡率、IL⁃6、IL⁃1β、TNF⁃αmRNA表达水平、CCL2、CCR2 mRNA及Bax、CCL2、CCR2蛋白表达水平显著升高,OD490值、集落形成数、PCNA、Bcl⁃2蛋白表达水平降低(P<0.05);与LPS组比较,毛兰素低、中、高剂量组细胞凋亡率、IL⁃6、IL⁃1β、TNF⁃αmRNA表达水平、CCL2、CCR2 mRNA及Bax、CCL2、CCR2蛋白表达水平逐渐降低,OD490值、集落形成数、PCNA、Bcl⁃2蛋白表达水平逐渐升高(P<0.05);过表达CCL2减弱了毛兰素对LPS诱导的关节软骨细胞的影响(P<0.05)。结论毛兰素可抑制LPS诱导的关节软骨细胞凋亡和炎症反应,其机制可能与抑制CCL2/CCR2通路有关。

石斛来源的毛兰素对口腔癌HSC-3细胞的体外效应研究

通过CCK8法检测毛兰素对细胞增殖的影响;划痕实验和Transwell小室实验研究毛兰素对细胞迁移和侵袭能力的影响;流式细胞术检测评价细胞周期分布情况;Annexin V和PI实验、Hoechest 33258荧光染色显微镜法探究细胞凋亡;Western blot实验检测PI3K/AKT相关蛋白的表达研究,探究天然产物抑制肿瘤细胞体外效应。结果表明,毛兰素能有效抑制细胞增殖、迁移和凋亡,且能通过PI3K/AKT信号通路调控细胞凋亡。毛兰素对于人口腔癌HSC-3具有良好的抑制作用。

毛兰素抗肿瘤活性及作用机制的研究进展

毛兰素是从中草药鼓槌石斛中提取的低分子量天然化合物,具有抗炎、抗病毒、抗肿瘤、抗血管生成等作用,细胞毒性较低且生物相容性良好,有望成为新的抗肿瘤药物之一。毛兰素可抑制多种肿瘤细胞增殖、侵袭和迁移,阻滞细胞周期,促进细胞凋亡等,其抗肿瘤活性与哺乳动物雷帕霉素靶蛋白通路、上皮细胞-间充质转化通路和活性氧/c-Jun氨基末端激酶通路等多个信号通路密切相关。现已证实毛兰素对消化道恶性肿瘤、妇科恶性肿瘤、肺癌、前列腺癌和鼻咽癌等有抗肿瘤活性作用。本文就毛兰素治疗恶性肿瘤的研究进展作一综述,阐述毛兰素抗肿瘤活性的分子机制,探究毛兰素对恶性肿瘤的潜在治疗价值,以期为毛兰素及其衍生物在肿瘤诊治中的应用提供参考。

毛兰素通过抑制NLRP3炎症体介导的细胞焦亡减轻心肌缺血再灌注损伤

目的探究毛兰素(ERI)防治心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的作用和机制。方法将SD大鼠分为假手术组(n=18)、模型组(n=18)、5 mg ERI组(n=17)、10 mg ERI组(n=16)和20 mg ERI组(n=17)。假手术组和模型组大鼠灌胃1%二甲基亚砜,5 mg ERI组、10 mg ERI组和20 mg ERI组大鼠分别灌胃剂量为5,10,20 mg/(kg·d)的毛兰素,给药7 d后模型组和各ERI组大鼠进行MIRI建模。再灌注48 h后检测各组大鼠左心室射血分数(LVEF)、左室舒张末期内径(LVIDd)、左心室收缩末期内径(LVIDs)和左室缩短分数(LVFS)。然后检测大鼠血清心肌损伤标志物[肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)]水平,并对大鼠心肌组织进行TTC染色和苏木精-伊红(HE)染色。RT-qPCR检测心肌组织中核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)、Caspase-1、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、IL-1β和IL-18 mRNA水平。Western blot检测心肌组织中NLRP3、cleaved Caspase-1、ASC、IL-1β和IL-18蛋白表达水平。结果与假手术组比较,模型组大鼠的LVEF和LVFS降低(P<0.05),LVIDd和LVIDs升高(P<0.05),血清CK-MB、LDH和cTnI水平升高(P<0.05),心肌梗死面积升高(P<0.05),心肌明显损伤,心肌组织中NLRP3、Caspase-1、ASC、IL-1β和IL-18的mRNA表达水平升高(P<0.05),心肌组织中NLRP3、cleaved Caspase-1、ASC、IL-1β和IL-18蛋白表达水平升高(P<0.05)。与模型组比较,5 mg ERI组、10 mg ERI组和20 mg ERI组大鼠的LVEF和LVFS升高(P<0.05),LVIDd和LVIDs降低(P<0.05),血清CK-MB、LDH和cTnI水平降低(P<0.05),心肌梗死面积降低(P<0.05),心肌形态明显改善,心肌组织中NLRP3、Caspase-1、ASC、IL-1β和IL-18的mRNA表达水平降低(P<0.05),心肌组织中NLRP3、cleaved Caspase-1、ASC、IL-1β和IL-18蛋白表达水平降低(P<0.05);且毛兰素对上述指标的影响均呈现剂量依赖性(P<0.05)。结论毛兰素预处理可改善MIRI大鼠的心功能并减轻心肌损伤,毛兰素可能通过抑制NLRP3炎症体介导的细胞焦亡防治MIRI。

毛兰素通过CCL2-CCR2信号轴介导的免疫逃避抑制食管癌细胞的恶性进展

目的:探讨毛兰素对食管癌(EC)细胞恶性进展的影响及其作用机制。方法:收集2021年3月至2022年12月期间在本院根治手术治疗EC患者(40例)的癌组织及距离癌组织3cm处的癌旁组织;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western blot分别检测EC组织及细胞中CCL2、CCR2 mRNA及蛋白表达水平;以不同浓度的毛兰素(0、10、20、40、60、80、160nmoL/L)干预ECA109细胞48h,MTT法检测细胞增殖,筛选最佳干预浓度;将ECA109细胞分为control组(正常培养)、毛兰素低、中、高剂量组(20、40、60nmoL/L)、pcDNA组(转染pcDNA3.1)、pcDNA-CCL2组(转染pcDNA3.1-CCL2),MTT法、平板克隆实验、Transwell小室和流式细胞仪分别检测细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡;ECA109细胞和CD8^(+)T细胞共培养后,分为T细胞组、共培养组、毛兰素组、pcDNA组、pcDNA-CCL2组,MTT、流式细胞仪检测CD8^(+)T细胞增殖、凋亡,酶联免疫吸附(ELISA)法检测CD8^(+)T细胞上清中干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;Western blot检测细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关蛋白(Bax)、程序性死亡配体1(PD-L1)及CCL2-CCR2信号通路蛋白表达。结果:在EC组织和EC细胞中CCL2、CCR2蛋白及mRNA表达水平升高(P<0.05);与control组比较,毛兰素低、中、高剂量组ECA109细胞中OD_(490)值、集落形成数、迁移与侵袭细胞数、CCL2、CCR2 mRNA及PCNA、PD-L1、CCL2、CCR2蛋白表达水平显著降低,凋亡率、Bax蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与pcDNA组比较,pcDNA-CCL2组ECA109细胞上述指标变化均显著逆转(P<0.05);与T细胞组比较,共培养组CD8^(+)T细胞OD_(490)值、IFN-γ、IL-2、TNF-α水平降低,细胞凋亡率增加(P<0.05);与共培养组比较,毛兰素组CD8^(+)T细胞OD490值、IFN-γ、IL-2、TNF-α水平升高,细胞凋亡率降低(P<0.05);与pcDNA组比较,pcDNACCL2组CD8^(+)T细胞上述指标变化均显著逆转(P<0.05)。结论:毛兰素可能通过抑制CCL2-CCR2信号通路,抑制EC细胞的恶性进展。

毛兰素通过Hedgehog信号通路调控结直肠癌HT29细胞的上皮间质转化和血管生成

目的:基于Hedgehog信号通路探讨石斛提取物毛兰素(erianin,ER)抑制结直肠癌HT29细胞上皮间质转化(EMT)和血管生成的作用机制。方法:将HT29细胞分为空白对照组、ER-L(25μg/mL)组、ER-M(50μg/mL)组、ER-H(75μg/mL)组、ER-H(75μg/mL)+PM(Hedgehog通路激活剂,1.5μmol/L)组。MTT法检测细胞增殖活力,克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移与侵袭能力,血管拟态形成实验检测血管生成能力,WB法检测与EMT进程、Hedgehog信号通路和拟态血管生成相关蛋白质的表达。结果:HT29细胞增殖活性随着ER质量浓度的升高而逐渐降低(P<0.05);与空白对照组比较,ER各组细胞克隆形成率、迁移与侵袭能力、血管形成能力、间质标志蛋白(N-cadherin、vimentin)、血管生成相关蛋白(VEGF、VE-cadherin)及Hedgehog通路相关蛋白(SHH、GLI1、SMO、c-Myc)表达均显著下降(均P<0.05),上皮标志蛋白(Ecadherin)、Hedgehog通路中融合蛋白抑制剂(SUFU)蛋白表达均显著上升(均P<0.05);PM处理在一定程度上逆转了ER对于HT29细胞增殖、EMT和血管生成的抑制作用(均P<0.05)。结论:ER可以抑制结直肠癌HT29细胞的增殖、迁移与侵袭、EMT和血管生成,其机制可能与抑制Hedgehog信号通路激活有关。

毛兰素对人肝癌细胞系HEPG2增殖、迁移、凋亡和上皮间质转化的影响及其机制

目的观察毛兰素对人肝癌细胞系HEPG2增殖、迁移、凋亡和上皮间质转化的影响,并探讨其机制。方法取对数生长期HEPG2细胞分为对照组、毛兰素组、毛兰素+pc-DNA组、毛兰素+pc-Snail组:对照组仅为HEPG2细胞,毛兰素组加入40 nmol/L的毛兰素,毛兰素+pc-DNA组转染空白对照质粒pc-DNA并加入40 nmol/L的毛兰素,毛兰素+pc-Snail组转染Snail过表达质粒pc-Snail并加入40 nmol/L的毛兰素。各组细胞继续培养24 h后,采用平板克隆法观察各组细胞增殖能力,以细胞克隆个数表示;采用Transwell小室法观察各组细胞迁移能力,以细胞迁移个数表示;采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率;采用Western blotting法检测各组细胞Snail蛋白、凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2)、间质转化相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin、Vimentin)。结果对照组、毛兰素组、毛兰素+pc-DNA组、毛兰素+pc-Snail组细胞克隆个数分别为(109.17±6.98)、(47.50±5.04)、(41.67±4.92)、(82.33±6.25)个,细胞迁移个数分别为(171.33±8.36)、(115.17±7.94)、(108.83±7.68)、(143.17±8.45)个,细胞凋亡率分别为1.83%±0.22%、29.57%±2.34%、32.79%±2.38%、16.16%±2.05%,其中毛兰素组和毛兰素+pc-DNA组细胞克隆个数、细胞迁移个数、细胞凋亡率无差异(P>0.05),其余组间细胞克隆个数、细胞迁移个数、细胞凋亡率相比,P均<0.05。与对照组相比,毛兰素组、毛兰素+pc-DNA组、毛兰素+pc-Snail组Snail、Bcl-2、N-cadherin、Vimentin蛋白相对表达量均降低(P均<0.05),Bax、E-cadherin蛋白相对表达量均升高(P均<0.05);与毛兰素组和毛兰素+pc-DNA组相比,毛兰素+pc-Snail组Snail、Bcl-2、N-cadherin、Vimentin蛋白相对表达量均升高(P均<0.05),Bax、E-cadherin蛋白相对表达量均降低(P均<0.05)。结论毛兰素可抑制HEPG2细胞的增殖、迁移和上皮间质转化,促进细胞凋亡,其机制与毛兰素可抑制Snail信号通路相关蛋白的表达有关。

毛兰素通过JNK/c-Jun信号通路对2型糖尿病大鼠肝脏损伤的保护作用机制研究

目的基于c-Jun氨基末端激酶(JNK)/c-Jun信号通路对氧化应激反应的调控作用,研究毛兰素对2型糖尿病大鼠肝脏损伤的保护作用。方法于2021年10月至2022年2月腹腔注射链脲佐菌素构建糖尿病大鼠模型,将造模成功大鼠分为模型组、毛兰素低剂量组(10 mg/kg)、毛兰素高剂量组(40 mg/kg),及罗格列酮组(1.25 mg/kg)、毛兰素(40 mg/kg)+JNK激活组(5 mg/kg),每组10只,另取正常饲养大鼠10只作为对照组。连续给药6周后,通过血糖仪和胰岛素放射免疫分析试剂盒检测空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)水平,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)及胰岛素敏感指数(ISI);天平称取大鼠体质量和肝质量,计算肝脏指数;试剂盒检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)含量;HE染色观察肝脏组织病理学变化;western blotting法检测肝脏组织中JNK/c-Jun信号通路相关蛋白表达。结果与对照组相比,模型组肝脏指数[(4.26±0.12)g/100 g比(2.24±0.09)g/100 g]、FBG[(21.49±1.78)mmol/L比(5.14±0.45)mmol/L]、FINS[(80.17±6.38)mmol/L比(22.35±2.04)mmol/L]、HOMA-IR[(76.46±6.56)比(5.11±1.12)]、ALT[(138.71±10.21)U/L比(70.29±5.54)U/L]和AST活性[(77.21±5.08)U/L比(40.38±3.27)U/L]、MDA含量[(13.45±1.34)nmol/mg prot比(3.72±0.87)nmol/mg prot]、JNK/c-Jun信号通路相关蛋白表达均明显升高(P<0.05),体质量、ISI[(−7.45±0.18)比(−4.74±0.11)]、SOD[(100.79±11.22)U/mg prot比(223.46±19.86)U/mg prot]和GSH-Px活性[(24.42±1.74)U/mg prot比(56.79±3.18)U/mg prot]明显降低(P<0.05),且肝脏组织病理损伤较为严重;与模型组相比,毛兰素低剂量组、毛兰素高剂量组和罗格列酮组肝脏指数、FBG、FINS、HOMA-IR、ALT和AST活性、MDA含量、JNK/c-Jun信号通路相关蛋白表达均明显降低(P<0.05),体质量、ISI、SOD和GSH-Px活性明显升高(P<0.05),减轻肝脏损伤程度;与毛兰素高剂量组相比,毛兰素低剂量组、毛兰素+JNK激活组肝脏指数、FBG、FINS、HOMA-IR、ALT和AST活性、MDA含量、JNK/c-Jun信号通路相关蛋白表达均明显升高(P<0.05),体质量、ISI、SOD和GSH-Px活性明显降低(P<0.05),肝脏损伤恢复缓慢。结论毛兰素可通过调控JNK/c-Jun信号通路,抑制JNK/c-Jun通路蛋白表达,从而缓解氧化应激反应,改善糖尿病大鼠肝脏损伤。

毛兰素调节CD47/SIRPα信号轴抑制非小细胞肺癌发生发展

目的分析毛兰素(erianin)通过调节CD47/SIRPα信号轴对非小细胞肺癌(NSCLC)发生发展的影响。方法选取2020年9月至2022年6月期间本院行手术切除的NSCLC患者48例,取其癌组织与癌旁组织,应用免疫组织化学染色检测比较组间CD47水平。Western blot检测人正常肺上皮细胞与NSCLC细胞系HCC87、A549、NCI-H157细胞CD47水平。将高水平表达CD47的HCC87细胞分为对照组、毛兰素低浓度组(31μg/L)、毛兰素中浓度组(62.5μg/L)、毛兰素高浓度组(125μg/L)和B6H12组(3.3μg/mL B6H12),CCK-8法测定细胞增殖抑制率,流式细胞仪测定细胞凋亡,体外吞噬实验检测巨噬细胞对HCC87的吞噬效果,Western blot法测定HCC87细胞Bax、Bcl-2、CD47、p-SIRPα、SIRPα水平。结果与癌旁组织相比,癌组织CD47免疫反应性增强,强阳性率增高;与正常肺上皮细胞相比,HCC87、A549、NCI-H157等NSCLC细胞系CD47水平升高;与对照组相比,毛兰素低、中、高浓度组和B6H12组HCC87细胞增殖抑制率、细胞凋亡率、Bax水平、巨噬噬细胞对HCC87细胞的吞噬率均升高,Edu阳性细胞比例、Bcl-2水平、CD47水平、p-SIRPα/SIRPα水平降低。结论毛兰素可抑制NSCLC细胞癌进展,其可能是通过抑制CD47/SIRPα通路,提升巨噬细胞对HCC87细胞的吞噬效率。

毛兰素阻断乳腺癌肿瘤细胞免疫逃逸及其机制研究

探讨毛兰素阻断乳腺癌肿瘤细胞免疫逃逸及其机制。方法 选取乳腺癌细胞株MCF-7进行培养,然后对其进行分组,分别为空白对照组(不添加任何抑制剂)、观察组(添加1mM终浓度的毛兰素)以及阳性对照组(添加终浓度1mM的1-MT),细胞经过培养后,通过RT-PCR检测细胞转染后IDO mRNA的表达,通过Werstern Blot检测IDO蛋白的表达,通过氨基酸分析仪检测IDO活性,通过混合淋巴细胞培养实验检测T细胞抑制率,并进行细胞毒性T淋巴细胞生物杀伤效应检测。结果 采用RT-PCR检测IDO mRNA的表达,结果显示转入成功;对IDO蛋白表达进行检测,结果显示IDO转染组有蛋白表达,未转染组无蛋白表达;对IDO活性进行分析,证明转染后其具有活性;通过混合淋巴细胞培养实验研究,观察组和阳性对照组的T细胞抑制率相比较空白对照组明显更高,其中毛兰素T细胞抑制率更高(P<0.05);对细胞毒性T淋巴细胞生物杀伤效应进行分析,毛兰素组杀伤活性最强,其次是1-MT组(P<0.05)。结论 毛兰素能够通过明显的下调IDO mRNA以及蛋白表达阻断乳腺癌细胞的免疫逃逸,同时能够降低对T细胞的抑制以及上调T细胞杀伤效应。

毛兰素通过ROS/p38 MAPK通路诱导人肺癌A549细胞凋亡

目的:研究毛兰素(erianin)对人肺癌A549细胞活力和凋亡的影响,并探讨可能的分子机制。方法:常规培养人肺癌A549细胞和人正常支气管上皮BEAS-2B细胞,给予不同浓度(0、10、20、40、80和160 nmol/L)毛兰素处理48 h后,采用CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测活性氧(ROS)含量和细胞凋亡情况,WST-8法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性,硫代巴比妥酸法检测丙二醛(MDA)含量,Western blot法检测核因子E2相关因子2(Nrf2)、NAD(P)H:醌氧化还原酶1(NQO1)和血红素氧合酶1(HO-1)蛋白的表达以及p38 MAPK的磷酸化和caspase-3蛋白的活化。结果:毛兰素对A549细胞活力具有较强的抑制作用(P<0.05),并呈剂量依赖性,IC50为52.64 nmol/L;毛兰素还可剂量依赖性地诱导细胞凋亡(P<0.05),显著升高ROS和MDA含量(P<0.05),抑制SOD活性(P<0.05),下调Nrf2、NQO1和HO-1蛋白表达水平(P<0.05);此外,毛兰素可上调p38 MAPK的磷酸化水平并激活caspase-3(P<0.05),该作用可被抗氧化剂N-乙酰-L-半胱氨酸和p38 MAPK抑制剂SB203580显著抑制(P<0.05)。结论:毛兰素可在体外诱导人肺癌A549细胞凋亡,这可能与其抑制SOD活性,下调Nrf2、NQO1和HO-1蛋白表达,继而导致ROS含量升高和激活p38 MAPK有关。

毛兰素诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡的实验研究

[目的]研究毛兰素诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡的机制。[方法]MTT法检测毛兰素对人胃癌细胞SGC-7901的增殖抑制作用,Annexin-Ⅴ/PI双染色法流式细胞仪检测细胞凋亡率,PI染色法流式细胞仪定量检测细胞周期分布变化,同时比色法检测细胞caspase-3活性变化。[结果]毛兰素能明显抑制胃癌细胞SGC-7901增殖,且呈浓度依赖关系,48hIC50值为0.056μg/ml;毛兰素能诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡且呈时间和浓度依赖性,使细胞周期阻滞于S期,但未见caspase-3激活。[结论]毛兰素能诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡,可能与使细胞周期阻滞于S期有关,但未见caspase-3激活。

毛兰素抗肿瘤活性研究进展

毛兰素是从石斛中提取的天然产物,近年来发现毛兰素在体外和体内表现出抗癌活性,诱导多种肿瘤细胞生长抑制。目前报道的毛兰素抗肿瘤效应与多个信号通路相关。通过激活细胞凋亡的内部线粒体途径和死亡受体介导的外部凋亡途径诱导凋亡;通过ROS/JNK信号通路诱导细胞周期G2/M期停滞,凋亡和自噬;通过调节促迁移蛋白和迁移抑制蛋白的表达抑制肿瘤细胞的迁移;通过阻断JAK2/STAT3的磷酸化抑制血管生成等。本文针对抗肿瘤活性的研究进行简要综述。

毛兰素通过调控lncRNA LINC01354/miR-515-5p对前列腺癌细胞糖酵解、增殖、迁移和侵袭的影响

目的 考察毛兰素是否通过LINC01354/miR-515-5p影响前列腺癌细胞糖酵解、增殖、迁移和侵袭。方法 采用试剂盒检测不同剂量毛兰素(20、40、80 nmol/L)作用于前列腺癌DU145细胞后的葡萄糖消耗、乳酸水平,MTT法测定细胞增殖,Transwell评估细胞迁移和侵袭,Western blot法检测细胞cyclin D1、p21、MMP-2、MMP-9蛋白表达,RT-qPCR法检测LINC01354、miR-515-5p表达。LncBase Predicted预测与荧光素酶报告基因检测分析LINC01354对miR-515-5p的靶向调控。在DU145细胞中转染si-LINC01354,或转染pcDNA-LINC01354并使用80 nmol/L毛兰素处理,并对细胞糖酵解、增殖、迁移和侵袭进行检测。结果 不同剂量毛兰素降低DU145细胞的葡萄糖消耗,乳酸水平,迁移和侵袭细胞数,cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白和LINC01354 mRNA表达(P<0.05),提高细胞增殖抑制率、p21蛋白和miR-515-5p mRNA表达,且呈剂量依赖性(P<0.05)。LINC01354能靶向调控miR-515-5p的表达。抑制LINC01354表达可增加miR-515-5p mRNA表达、细胞增殖抑制率和p21蛋白表达(P<0.05),减少葡萄糖消耗,乳酸水平,迁移和侵袭细胞数,cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白表达(P<0.05)。LINC01354过表达后,毛兰素抑制DU145细胞葡萄糖消耗,乳酸水平,细胞增殖、迁移、侵袭,cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白表达的作用,以及促进p21蛋白表达的作用均被逆转。结论 毛兰素可能通过下调LINC01354表达升高miR-515-5p表达,进而抑制前列腺癌细胞的糖酵解、增殖、迁移和侵袭。

毛兰素纯度标准样品的研制

分别采用质量平衡法和定量核磁法两种不同原理定值方法对毛兰素标准样品进行纯度定值,利用高效液相色谱对毛兰素标准样品的均匀性和稳定性进行考察,并对毛兰素标准样品研制过程中的不确定度进行评定。结果表明,毛兰素标准样品的定值结果为99.4%,其扩展不确定度为0.6%(k=2),毛兰素标准样品的量值准确、均匀性和稳定性符合二级标准物质技术要求。

毛兰素固体脂质纳米粒的制备及稳定性的初步研究

目的制备毛兰素固体脂质纳米粒,并初步考察其稳定性等指标。方法采用乳化蒸发-低温固化法制备毛兰素固体脂质纳米粒,并通过正交试验优化处方,同时对其包封率、载药量、粒径、电位、稳定性进行考察。结果制备的毛兰素固体脂质纳米粒的粒径为163.3 nm,Zeta电位为-26.8 mV,包封率为72.6%,载药量12.7%。在4℃条件下,毛兰素固体脂质纳米粒放置4 w,外观形态和包封率无明显改变。结论乳化蒸发-低温固化法制备毛兰素固体脂质纳米粒是可行的,制备的样品在4℃条件下稳定性较好。

毛兰素对胃癌细胞SGC-7901端粒酶活性的影响

目的探讨毛兰素对胃癌细胞端粒酶活性的影响。方法MTT法检测毛兰素对人胃癌细胞SGC-7901的增殖抑制作用,AnnexinⅤ/PI双染色法流式细胞仪检测细胞凋亡率,TRAP实时荧光定量PCR检测端粒酶活性。结果毛兰素能抑制胃癌细胞SGC-7901增值,48小时IC50值为0.056μg/ml;毛兰素抑制胃腺癌SGC-790细胞端粒酶活性早于诱导凋亡,且都表现为时间和浓度依赖性。结论毛兰素能诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡,可能与其对端粒酶活性的抑制有关。

鼓槌石斛中毛兰素及鼓槌素对B16／h MDR—1细胞的药耐药性的作用

采用转染上人类MDR－1基因，对长春花碱及阿霉素具有交叉耐药性的鼠黑色素瘤细胞株对从鼓槌石斛中分得的二个氢芪类化合物毛兰素及鼓槌素的抗肿瘤多药耐药性进行研究。结果表明：二个化合物均能在一定程度上增加阿霉素在多药耐药细胞株中的积累，有进一步研究的价值。