内皮素-1对毛囊外根鞘无色素黑素细胞黏附和移行及其细胞骨架形态的影响

目的:体外研究内皮素-1(ET-1)对毛囊外根鞘无色素黑素细胞(AMMC)黏附和移行的作用,并观察其对细胞骨架蛋白微丝、微管的形态影响。方法:3种浓度的ET-1作用体外纯化培养的人AMMC,观察其在细胞外基质蛋白如纤维连接蛋白、层黏连蛋白、Ⅳ型胶原包被培养板上的黏附,以及通过Boyden小室微孔滤膜的情况。采用免疫荧光双重染色法对AMMC分别进行罗丹明(红色)和异硫氰酸(绿色)标记纤维型-肌动蛋白(F-actin)、β微管蛋白,激光共聚焦显微镜观察3种浓度ET-1处理前后AMMC纤维型-肌动蛋白、β微管蛋白形态的变化。结果:与空白对照组相比,ET-1促进了AMMC在纤维连接蛋白上的黏附,20ng/mLET-1作用最明显(P<0.01),而200ng/mL时对细胞的黏附不继续增加。但对层黏连蛋白和Ⅳ型胶原上的黏附无明显影响(P>0.05)。另外,ET-1呈浓度依赖性地促进AMMC通过微孔滤膜。激光共聚焦显微镜观察显示,>20ng/mLET-1可明显促进AMMC胞质中束状应力纤维形成,并集中分布于细胞膜内侧,但对微管结构无明显影响。结论:ET-1在体外可以促进AMMC的黏附和移行,其作用可能与诱导束状应力纤维形成和促进其向细胞膜内侧分布有关。

白癜风外科治疗新进展——毛囊外根鞘细胞悬液移植

白癜风是一种皮肤色素异常性疾病,表现为慢性局限性的皮肤色素脱失斑,表皮黑素细胞功能进行性丢失,如果出现毛发变白则提示预后较差。白癜风的外科疗法即手术治疗,适用于对光疗或药物治疗无效的稳定期白癜风患者,对非手术疗法不敏感的皮损,如唇部、手足、手指及生殖器等部位也可采用外科疗法。除了常见的自体表皮移植和自体黑素细胞移植,近年来采用毛囊单位提取法获取毛囊外毛根鞘细胞悬液移植作为一种新的外科手段,逐渐显现出其在白癜风治疗中的优势。该文就该方法在白癜风中的应用作一综述。

VEGF对体外培养绒山羊次级毛囊外根鞘细胞的影响

本研究旨在探讨陕北白绒山羊毛囊外根鞘细胞的培养和VEGF对次级毛囊外根鞘细胞增殖、分化及细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、角蛋白10(K10)和成纤维细胞生长因子5(FGF5)mRNA表达量的影响。采集绒山羊体侧部皮肤,并利用消化等方法分离次级毛囊外根鞘细胞,置于37℃、5%CO_2、饱和湿度条件下培养;选用第5代次级毛囊外根鞘细胞,添加不同质量浓度血管内皮生长因子(VEGF),分别处理24、48h,噻唑兰比色法(MTT)检测细胞活力,EdU核酸标记技术检测细胞增殖;实时荧光定量PCR技术检测PCNA、K 10、FGF5mRNA的表达情况。结果显示:1)成功培养出次级毛囊外根鞘细胞,CK17和CK15细胞免疫组化呈阳性。2)VEGF可以促进绒山羊次级毛囊外根鞘细胞的增殖。相同浓度VEGF处理48h组的细胞活力极显著高于处理24h组(P<0.01);在48h处理组中,100ng·mL^(-1)组的细胞活力极显著高于对照组、1ng·mL^(-1)组、10ng·mL^(-1)组(P<0.01),并显著高于50ng·mL^(-1)组(P<0.05),50ng·mL^(-1)组的细胞活力显著高于对照组(P<0.05);100ng·mL^(-1)组和50ng·mL^(-1)组增殖细胞比例均极显著高于对照组、1ng·mL^(-1)组、10ng·mL^(-1)组(P<0.01),100ng·mL^(-1)组显著高于50ng·mL^(-1)组(P<0.05)。3)PCNA、K10、FGF5mRNA在次级毛囊外根鞘细胞中均有表达。在VEGF处理48h时,PCNA mRNA的表达量100ng·mL^(-1)组最高,极显著高于对照组(P<0.01),显著高于10ng·mL^(-1)组(P<0.05);K10mRNA的表达量对照组最高,极显著高于10ng·mL^(-1)组与100ng·mL^(-1)组(P<0.01);FGF5mRNA的表达量对照组最高,极显著高于100ng·mL^(-1)组(P<0.01)。综上表明,本研究成功分离培养了陕北白绒山羊次级毛囊外根鞘细胞;VEGF能够促进次级毛囊外根鞘细胞的增殖,抑制细胞的分化;VEGF可能通过抑制次级毛囊外根鞘细胞中FGF5基因的表达而促进毛囊生长。

人头皮毛囊外根鞘无色素黑素细胞的分离和纯化培养进一步研究

目的从人头皮毛囊外根鞘分离纯化培养无色素黑素细胞。方法采用两步酶法0.50%分离酶和0.50%胶原酶Ⅴ获得游离的毛囊,高浓度0.50%胰酶30min消化游离的毛囊外根鞘细胞,并以优化的培养基进行细胞培养。用HMB-45和NKI/beteb单克隆抗体免疫组化染色、透射电镜对培养物进行鉴定。结果培养物中初始贴壁细胞大多数为无色素黑素细胞,仅有少量的角质形成细胞,无成纤维细胞污染。经二次传代差别胰酶处理很容易去除角质形成细胞。取培养3周的细胞经免疫组化和透射电镜鉴定证实为无色素黑素细胞。传3代后细胞得到完全纯化。结论两步酶法结合高浓度的胰蛋白酶处理细胞可彻底清除成纤维细胞,获得无色素黑素细胞的纯培养。

甲氧沙林对体外培养的人毛囊外根鞘无色素黑素细胞的激活作用

目的:观察甲氧沙林(8-MOP)对体外培养的人毛囊外根鞘无色素黑素细胞黑素合成相关酶的影响。方法:3种浓度(10、50、100μmol/L)的8-MOP作用于体外培养的人毛囊外根鞘无色素黑素细胞,经免疫荧光染色后,采用激光共聚焦显微镜观察不同浓度、不同作用时间的8-MOP对无色素黑素细胞形态的影响,荧光定量分析酪氨酸酶、酪氨酸相关蛋白(TRP)1、TRP2表达量的变化。结果:50、100μmol/L8-MOP作用于人毛囊外根鞘无色素黑素细胞3d能显著促进酪氨酸酶的表达(P<0.01)熏作用7d后TRP1、TRP2的表达也增加(P<0.05)。结论:8-MOP在体外能直接刺激毛囊外根鞘无色素黑素细胞的活化。

308nm准分子激光联合胡椒碱对毛囊外根鞘无色素黑素细胞黑素合成及酪氨酸酶相关蛋白酶-1、-2蛋白表达的促进作用

目的研究308 nm激光联合胡椒碱对毛囊外根鞘无色素黑素细胞(AMMC)黑素合成及酪氨酸酶相关蛋白酶(TRP)-1、TRP-2蛋白表达的影响。方法体外培养的AMMC细胞分别以联合疗法组、308 nm激光组、胡椒碱组、阳性对照组及空白对照组作用24、72及120 h,测定黑素含量,激光共聚焦显微镜观察并定量分析荧光染色后细胞内TRP-1、TRP-2的表达情况。结果 4组均能促进AMMC细胞黑素量生成。联合治疗组、308 nm激光组、胡椒碱组、阳性对照组均不同程度的促进黑素含量的增加,其中以联合治疗组促进作用最强。胡椒碱呈浓度依赖性促进黑素合成且作用72 h时效果最明显。0.5 mmol/L胡椒碱作用72 h可促进表皮黑素细胞TRP-1表达,而对TRP-2的表达无明显影响。308 nm激光对TRP-1、TRP-2均有促进作用。结论 308 nm激光联合胡椒碱能促进AMMC细胞的黑素合成。

皮肤组织工程中毛囊外根鞘细胞增殖能力及细胞角蛋白表达的意义

目的:通过培养人毛囊外根鞘细胞群,观察其增殖活性及细胞角蛋白K19的表达。方法:利用人头皮拔出的毛发,以组织块法和酶消化法培养毛囊外根鞘细胞,用四氮噻唑蓝(MTT)法比较其与表皮角质形成细胞的增殖能力,用免疫组化检测培养外根鞘细胞中细胞角蛋白K19的表达。结果:外根鞘细胞具有较表皮角质形成细胞更强的增殖能力,而且在培养的外根鞘细胞中有大量细胞角蛋白K19阳性的细胞。结论:由于外根鞘细胞具有较表皮角质形成细胞更强的增殖能力,同时含有大量K19阳性细胞,可以作为皮肤组织工程种子细胞来源。

毛囊外根鞘NKI/beteb和HMB-45免疫组化及胰酶消化后细胞的电镜观察

目的:研究头皮毛囊外根鞘中无活性黑素细胞的存在部位以及毛囊经胰酶消化的细胞组成。方法:拔取正常头发,琼脂预先包埋后,切片行NKI/beteb和HMB-45单抗染色。另取毛囊用胰酶消化,收集细胞,在透射镜下进行观察。结果:拔取的正常毛囊外根鞘中存在NKI/beteb阳性细胞,而HMB-45染色阴性。在毛母质中有大量的HMB-45阳性细胞。毛囊经胰酶消化的细胞为有活性的黑素细胞(MC)、无色素性黑素细胞(AMMC)、毛皮质细胞和成纤维细胞。结论:毛囊外根鞘中存在功能和形态不成熟的AMMC。

308 nm激光联合胡椒碱对毛囊外根鞘无色素黑素细胞黏附、移行及酪氨酸酶相关蛋白表达的影响

目的:研究308 nm准分子激光(EL)联合胡椒碱对毛囊外根鞘无色素黑素细胞(AMMC)黏附、移行及酪氨酸酶相关蛋白(TRP-1及TRP-2)表达的影响,初步探讨其对AMMC黑素合成影响的作用机制。方法:体外培养的AMMC分别予308nm EL(激光组)、胡椒碱(胡椒碱组)及二者联合(联合干预组)作用72 h、120 h及168 h,同时设阳性对照组及空白对照组。激光共聚焦显微镜观察AMMC黏附及移行情况,并定量分析荧光染色后AMMC细胞内TRP-1及TRP-2表达。结果:与空白对照组比较,其余4组均能不同程度地促进AMMC的黏附及移行。联合干预组、激光组及阳性对照组TRP-1及TRP-2表达均上调,其中联合干预组促进作用最强。胡椒碱作用72 h可促进AMMC细胞内TRP-1表达,且呈浓度依赖性;而对TRP-2的表达无影响。结论:308 nm EL联合胡椒碱具有促进AMMC黏附、移行及提高细胞内TRP-1及TRP-2表达的作用。

BMP-4对人毛囊外根鞘细胞增殖和迁移的影响

目的观察BMP-4对体外培养的人毛囊外根鞘细胞增殖和迁移的影响。方法用含不同浓度BMP-4的MSCM培养基培养毛囊外根鞘细胞48小时后行MTT检测毛乳头细胞的增殖情况;将铺满90%培养皿底的毛囊外根鞘细胞划痕后以含不同浓度BMP-4的MSCM培养基培养,分别于0h,8h,24h和48h测量毛囊外根鞘细胞爬行的距离。结果与其他浓度相比,10μg/mlBMP-4明显促进毛囊外根鞘细胞的增殖(P<0.05),不同浓度BMP-4均促进毛囊外根鞘细胞的迁移,48小时10μg/ml浓度BMP-4的创面愈合指数达到100%(P<0.05)。结论 BMP-4对于毛囊形成及发育具有重要意义。

山羊毛囊外根鞘细胞系的建立

本试验旨在建立纯一、稳定的山羊毛囊外根鞘细胞系。活体采集济宁青山羊羔羊背部皮肤,采用机械分离与酶消化相结合的方法,分离外根鞘细胞,培养于含有表皮生长因子（EGF）、类胰岛素生长因子-Ⅰ（IGF-Ⅰ）和氢化可的松的无血清角质细胞培养液中,置5%CO2浓度的37℃培养箱中启动原代培养。待原代细胞长成良好的单层后即可进行传代培养,细胞经传代培养至第8-10代时,更换含EGF、IGF-Ⅰ、氢化可的松和FBS的DMEM/F12培养液进行长期培养。选取传至第40代的外根鞘细胞进行生长特性研究与染色体分析。结果表明：体外培养的细胞倍增时间为51.9 h,培养细胞的染色体数仍以2n=60为主,但是出现了非整倍体性染色体特征;免疫细胞化学鉴定结果表明,该细胞系角蛋白19表达呈阳性。结果提示,本试验分离培养的细胞确为由山羊毛囊干细胞分化来的外根鞘细胞,体外培养的山羊毛囊外根鞘细胞系得到了成功建立。

双氢睾酮对小鼠毛囊外根鞘体外培养再生的影响

目的筛选小鼠触须毛囊外根鞘(ORS)在体外培养再生的最适双氢睾酮(DHT)浓度,通过检测Dermo-1、CD11b探索其对毛囊外根鞘再生的影响。方法利用冰冻切片技术HE染色观察毛囊外根鞘在不同DHT浓度培养条件下的再生程度,利用免疫荧光技术鉴定Dermo-1、CD11b在最适DHT浓度条件下在毛囊外根鞘中的表达情况。结果浓度为10^(-5) mol/L、10^(-6) mol/L的DHT对毛囊外根鞘体外再生起抑制作用,但10^(-9) mol/L的DHT促进其体外再生。并且Dermo-1、CD11b在毛囊外根鞘再生过程中均有表达。结论毛囊外根鞘在体外培养第5天时再生的结构最完整,10^(-9) mol/L的DHT与体内浓度最为接近,毛囊干细胞对创伤修复和组织结构再生都发挥着重要作用。

人头发毛囊外根鞘中有二个不同的K19阳性区:干细胞储库的统一假说?

至今,人生长期毛囊中干细胞的定位依靠三种互补的检查方法:即检测缓慢周期生长细胞、高集落形成细胞和分化细胞的免疫组化染色。由于干细胞既可以是位于隆突部位的长期标记的保留细胞,也可以是位于毛囊下三分之一处的高集落形成细胞,所以这些技术往往产生相互矛盾的结果。为了阐明毛发生长周期中人毛囊干细胞的分布情况,我们研究了通常被认为是上皮干细胞标志的细胞角蛋白19(K19)的表达。发现人生长期毛囊中有两个干细胞储库,分别位于毛囊的上、下三分之一处。这两个储库在毛囊的退行期-休止期的过渡阶段发生融合,在新形成的生长期毛囊中再次分开。

毛囊各细胞体外生长条件的探索研究

目的体外观察毛乳头细胞（DPc）上清培养液对毛囊外根鞘细胞（ORSC）长增殖的影响。方法体外分离培养DPC和ORSC，分别收集DPC不同培养代数上清液，按一定比例加入基础培养液（K-SFM）对ORSC进行培养作为混合培养组，同时以单独基础培养液（K—SFM）对ORSC的培养为对照组，利用倒置显微镜和细胞计数板分剐对细胞的形态、活性覆生长趋势进行观察。结果不同时间点（1d、3d、5d、7d、9d）观察：混合培养组的ORSC细胞数均明显高于对照组ORSC的细胞数。结论DPC不同培养代数的上清液对ORSC贴壁生长有一定的促进作用。且传代次数越少的DPC的上清培养液对OKSC的生长促进现象越明显。

毛囊干细胞双向分化的分子调控机制

随着皮肤组织工程研究的逐步深入，毛囊干细胞有望作为稳定的种子细胞用于组织工程化皮肤的构建，并应用于临床。目前的研究表明，皮肤表皮细胞和毛囊各种细胞成份都来源于位于真皮层的毛囊外根鞘隆突区的毛囊干细胞，即毛囊干细胞具有双向分化的潜能，其分化方向有可能是受细胞增殖分化的内源性生物信号通路和外源性微环境调节控制的^[1-6]。

巨大外毛根鞘癌1例分析及文献复习

外毛根鞘癌（TLC）是一种罕见的向毛囊外根鞘分化、具有局部侵袭性的低度恶性肿瘤[1]。临床常误诊为鳞状细胞癌、基底细胞癌、角化棘皮瘤等，病理常误诊为其他类型的皮肤附属器肿瘤或鳞状细胞癌。本研究报道1例TLC，并复习相关文献，探讨其临床病理特征、诊断及治疗。

乌骨山羊皮肤黑色素细胞的分布及特征

试验采用免疫组织化学染色对乌骨山羊不同被毛颜色皮肤中的黑色素细胞进行定位,再用多巴组织化学染色法对皮肤中有黑色素分泌的黑色素细胞进行定位,以HE染色法对黑色素细胞的形态进行观察。免疫组织化学染色结果显示,乌骨山羊皮肤中的黑色素细胞主要分布在表皮基底层和毛囊中;多巴组织化学染色结果显示,表皮中没有阳性反应,黑色被毛毛球部及外根鞘均有阳性反应,白色被毛毛球部及外根鞘则没有阳性反应,说明黑色被毛毛球部及外根鞘有成熟的黑色素细胞存在并能合成黑色素。HE染色结果显示,黑色被毛毛囊外毛根鞘中的黑色素细胞和周围细胞区分明显,呈空泡状和活化状态,周围有大量黑色素颗粒分布,白色被毛毛囊外根鞘黑色素细胞呈椭圆状,没有黑色素产生,和周围细胞难以区分。因此,乌骨山羊黑色被毛毛囊外根鞘中黑色素细胞的活化可能参与了乌骨山羊毛色和乌质性状的形成。

大鼠腹部皮肤切创缘电镜酶组织化学研究

大白鼠腹部皮肤切创组织电镜酶组织化学研究发现:三磷酸腺苷酶(ATPase)定位于皮肤毛细血管质膜内侧和毛囊外根鞘。生前损伤15分钟,毛细血管质膜 ATPase 活性降低,酶颗粒减少;毛囊外根鞘酶活性丧失。死后酶活性与对照组无差异。

表皮干细胞的研究进展

表皮干细胞（epidermal stem cells）主要位于表皮基底层和毛囊外根鞘膨凸部（bugle）。表皮干细胞通过不对称分裂完成自我更新,同时形成一个新的子代细胞——短暂扩增细胞（transit amplifying cells,TA cells）。TA细胞继续分裂扩增、上移从而形成其他各细胞层如颗粒细胞层、棘细胞层等。随着时间的推移,颗粒层细胞、棘层细胞发育成熟行使组织功能,并逐渐老化失去细胞器,被细胞自身分泌的角质蛋白所替代，形成透明层或者角质层直至脱落。这个过程又可称为：生长期、衰退期和静止期。表皮就是遵循这个不断循环往复的生理过程，自我更新，自我修复。

NB-UVB联合复方白芷酊及卤米松乳膏对进展期白癜风患者AMMC细胞黑素合成量的影响

目的:探究窄谱中波紫外线(NB-UVB)联合复方白芷酊及卤米松乳膏对进展期白癜风疗效及患者毛囊外根鞘无色素黑素细胞(AMMC)黑素合成情况的影响。方法:选取2016年12月-2019年3月在笔者医院皮肤科就诊的70例进展期白癜风患者,随机分成常规组(35例)和联合组(35例)。常规组给予卤米松乳膏+NB-UVB治疗,联合组在常规组的基础上加用复方白芷酊。两组患者均连续治疗24周。观察并比较两组疗效、不良反应发生情况及AMMC细胞黑素合成量。结果:治疗12周时,联合组与常规组总有效率比较差异无统计学意义(82.86%vs 68.57%,P>0.05);治疗24周时,联合组总有效率高于常规组(97.14%vs 80.00%),差异有统计学意义(P<0.05)。两组均有少部分患者出现轻度红斑反应,均在治疗后自行缓解,无其他严重不良反应发生。联合组AMMC细胞黑素合成量为显著高于常规组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:卤米松乳膏+NB-UVB+复方白芷酊对进展期白癜风患者疗效显著,能够提高AMMC细胞黑素合成量,有效促进白斑消退,缓解其临床病症,值得临床推广与应用。