基于毛细管凝胶电泳与DNA条形码技术鉴别可食用动物内脏掺假方法的研究

建立并优化了使用基于DNA条形码技术对可食用内脏制品中包括猪、牛、羊、鸡、鸭、鹅、兔7种常见动物源成分进行掺假鉴别的方法。用生理盐水清洗和真空冷冻干燥预处理后的内脏样品,经DNA提取扩增后,扩增产物经毛细管凝胶电泳分析系统进行确认,克隆测序结果提交本地数据库Viscera进行比对,同时筛选出适合7种动物源内脏DNA扩增的通用引物COI-A,优化DNA模板量和退火温度,验证考察了19个可食用内脏掺假模型的最低掺假比例。7种动物的5类内脏的PCR扩增效率均为100%,最佳的DNA模板量和退火温度为2μL和53℃,掺假成分的最低检出比例为5%。本方法灵敏度高,可靠性好,可作为常见可食用动物内脏掺假的有效检测方法。

基于毛细管凝胶电泳的寡核苷酸纯度分析方法

在寡核苷酸的化学合成过程中,会产生与全长序列相差一个(n-1)和两个核苷酸(n-2)的杂质,因为分子质量及电荷性质与主成分差异小,难以准确定量检测。毛细管凝胶电泳具有样品用量少、速度快、灵敏度高、分离效果好、自动化程度高等优势,而普遍应用于核酸的分离和分析。采用毛细管凝胶电泳对寡核苷酸纯度进行分析,能有效分离寡核苷酸全长序列与n-1的杂质,在0.03~1.00 mg/L浓度范围内线性良好(R^(2)=0.998 8),检出限约为0.01 mg/L(信噪比S/N>3),该方法的建立将为寡核苷酸的纯度分析与质量控制提供有力的技术支撑。

不同来源乳中乳铁蛋白含量的高通量毛细管凝胶电泳检测

本研究在前期建立的毛细管凝胶电泳检测牛源乳铁蛋白的基础上,通过筛选分别能够与人源乳铁蛋白、羊源乳铁蛋白特异性结合的DNA序列,实现了母乳及羊奶粉中人源乳铁蛋白、羊源乳铁蛋白的快速准确定性定量检测。该方法采用非标记DNA探针替代荧光标记的DNA,进一步降低了检测成本,不需要复杂的样品前处理操作,仅需2 min即可完成一个样品的检测,对人源、羊源乳铁蛋白的检出限分别为11.74μg/m L、3.53μg/m L,可作为适用于其他特色生鲜乳(牦牛乳、骆驼乳、驴乳等)中乳铁蛋白含量的一种通用性检测方法。

毛细管凝胶电泳法测定硫代寡核苷酸药物癌泰得的含量

癌泰得为20碱基的抑制端粒酶催化亚基hTERT的硫代反义寡核苷酸,体内、体外抗肿瘤活性评价显示其有较好的抗肿瘤活性。采用固相合成仪分别制备了癌泰得及与其碱基百分组成基本相同的硫代寡核苷酸内标,并使用制备型阴离子交换色谱和反相高效液相色谱进行纯化。采用毛细管凝胶电泳仪和单链DNA分离试剂盒测定了癌泰得的含量。所用毛细管规格为内径100μm,总长31cm,有效长度20cm;电动进样,进样电压-10kV,进样时间1s;分离电压-12 4kV;柱体温度40℃;样品储存温度为30℃;缓冲溶液为pH8 5的Tris 硼酸盐 7mol/L尿素缓冲液;紫外检测,波长为254nm。结果表明,在12 5～800mg/L时呈现良好的线性关系(r=0 99997);最低检测限为0 220mg/L;日内、日间的相对标准偏差(RSD)分别为0 449%～1 89%和1 01%～1 48%;低、中、高3种浓度的平均回收率为96 95%,RSD为6.88%。说明毛细管凝胶电泳内标法用于反义硫代寡核苷酸的含量测定结果准确、可靠。

毛细管凝胶电泳法测定血浆中的癌泰得

为了进行硫代反义寡核苷酸药物癌泰得的药代动力学研究,建立了毛细管凝胶电泳测定血浆中癌泰得含量的方法.样品经强阴离子交换柱除去血浆中的蛋白和油脂,通过反相C18柱脱盐,再通过渗滤膜除去残留盐分后,以长度为24个碱基的寡核苷酸作为内标,采用毛细管凝胶电泳测定血浆中癌泰得的含量.结果表明,毛细管凝胶电泳测定血浆中癌泰得含量的线性范围为12.5～400 mg/L(r=0.999 8),日内、日间的相对标准偏差分别为0.398% ～2.46% 、2.75% ～6.07% ,回收率为99.53% ～102.1% .毛细管凝胶电泳法用于血浆中反义硫代寡核苷酸的含量测定具有良好的准确性、稳定性和重现性.

任意多阶梯度场强毛细管凝胶电泳中谱带的迁移和展宽

在自行制备的毛细管凝胶电泳柱上，通过实验考察毛细管凝胶电泳（ＣＧＥ）中场强（Ｅ）和组分迁移率（μ）的关系，发现在一般ＣＧＥ使用的场强范围内，μ随Ｅ增大而成近似线性的增加。并讨论了产生这种现象的原因。以此为基础提供了任意多阶梯度场强毛细管凝胶电泳中组分的迁移时间和距离的计算公式，用于编制计算机程序。

基于QIAxcel毛细管凝胶电泳分析系统的7种猪病毒检测方法的建立与初步应用

为建立同时检测7种常见猪病毒的毛细管凝胶电泳方法,本研究针对猪伪狂犬病病毒、猪乙型脑炎病毒、猪瘟病毒、猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪细小病毒及非洲猪瘟病毒保守基因,设计7对特异引物,并在引物的5’端加入一段非同源性标签序列,再设计一对可识别标签序列的通用引物。经反应条件优化,建立了一种基于QIAxcel毛细管凝胶电泳分析系统的7种猪常见病毒多重PCR检测方法。该方法与O型猪口蹄疫病毒(FMDV-O)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)等均无交叉反应,特异性强;所建立方法对7种病毒质粒标准品的检测下限分别为4.56×10^3拷贝/μL、6.35×10^3拷贝/μL、1.98×10^3拷贝/μL、1.32×10^4拷贝/μL、3.21×10^3拷贝/μL、4.51×10^3拷贝/μL、3.37×10^3拷贝/μL,敏感性较高;重复性试验结果显示各靶条带数值间的变异系数均小于1%,该方法稳定,重复性高。该方法对65份临床样本检测结果与国标或行标单一PCR检测方法相比,二者对单一病原和混合病原检测的一致性分别为94.3%(33/35)、77.7%(14/18)。本研究建立的方法为毛细管凝胶电泳技术在动物疾病病原检测中的应用提供一定的参考。

毛细管凝胶电泳分离和检测低聚核苷酸和脱氧核糖核酸的合成产物

本文将毛细管凝胶电泳方法用于低聚核苷酸及DNA合成产物的分离检测，并探讨了低聚核苷酸的淌度与其碱基数的关系以及迁移时间和相对迁移时间的重现性。

采用毛细管凝胶电泳技术检测常见乳源成分

常见乳源真伪检测方法的开发对于特色乳品产业开发以及保障消费者安全与权益都有着重要的作用。本研究采用毛细管凝胶电泳技术,对牛乳及水牛乳、牦牛乳、驴乳、马乳、羊乳、骆驼乳等特色乳品进行测试。通过计算各乳品蛋白峰与内标蛋白相对迁移时间,以及差异蛋白峰面积比值,构建聚类分析模型,筛选不同乳品靶标蛋白峰以及判定标准。通过对方法稳定性、重复性、检出限等参数的研究,构建常见乳源成分评价体系。此外,对市售样品进行检测,证明本方法可以实现对靶标乳源蛋白的快速筛查。

毛细管凝胶电泳在临床分子生物学研究中的应用

毛细管电泳作为迅速发展的分离技术，已得到广泛应用。本文简要介绍了毛细管凝胶电泳技术的发展，近年来在临床分子生物学领域的应用情况，其中包括病原体、遗传病和肿瘤的基因诊断、ＤＮＡ序列分析、反义治疗的监测等。由于毛细管凝胶电泳在核酸分析中显示了巨大的优越性，随着技术和仪器设备的不断发展和完善，在临床分析中必将得到更广泛的应用。

毛细管凝胶电泳柱技术的新进展

全面介绍了当前毛细管凝胶电泳（ＣＧＥ）柱制备的几种技术，初步归纳了影响凝胶柱稳定性的可能因素，并对毛细管凝胶电泳柱技术的几个发展方向进行了概述。

乳及乳制品中乳铁蛋白的全自动高通量毛细管凝胶电泳检测方法研究

全自动毛细管凝胶电泳是一种简单、快速的DNA片段定性定量分析方法。本研究利用乳铁蛋白和DNA序列的特异性结合,建立了一种操作简便、分析时间短、高通量的全自动毛细管凝胶电泳检测乳铁蛋白的方法。实验中根据全自动毛细管凝胶电泳后游离DNA序列的峰面积是否减少以及减少程度实现乳铁蛋白的定性定量检测。结果表明:该方法特异性、准确性良好。采用预制胶卡夹,解决了人工制胶的繁琐步骤和毛细管区带电泳检测乳铁蛋白需要涂层抑制非特异性吸附的问题,自动化程度高,适用于乳及其制品中乳铁蛋白的快速准确定量检测。

高效毛细管凝胶电泳（HPCGE）中超载进样对蛋白质分离的影响

报导了高效毛细管凝胶电泳在超载情况下样品负荷量与其电泳行为的关系，研究了牛血清白蛋白、伴清蛋白及溶菌酶三种蛋白质的进样量与它们电泳峰形（包括对称性、相对迁移时间和分离度）变化的关系，证实了在样品用量不同时，它们的电泳行为有很大的不同。

高效毛细管线性聚丙烯酰胺凝胶电泳柱的制备、柱性能表征及操作条件考察

发展一种简便快速的线性聚丙烯酰胺毛细管凝胶电泳（ＣＧＥ）柱的新型制备方法，用于分离Ｐｏｌｙ ｄＡ（４０～６０）和双链ＤＮＡ，柱效达 ６百万理论板／米。提出“筛分能力”作为 ＣＧＥ柱评价指标，对样品迁移行为随操作条件的变化规律进行考察，为毛细管凝胶电泳的理论研究和实验条件优化奠定了基础。

DNA序列分析新技术——阵列毛细管凝胶电泳

“人的基因组项目”对ＤＮＡ序列分析的速度提出了极高的要求，阵列毛细管凝胶电泳主要为解决这一问题而发展起来。本文详细介绍了阵列毛细管凝胶电泳与毛细管凝胶电泳和板凝胶电泳的不同，它对电泳系统、检测系统的新要求及目前的研究及应用状况，并对其应用前景进行了展望。

慢病毒载体生产用质粒DNA构象检测毛细管凝胶电泳法的建立及验证

目的:建立可定量检测质粒DNA超螺旋构象相对百分含量的毛细管凝胶电泳法(CGE),并开展方法学验证研究及初步应用探讨。方法:选用涂层毛细管,采用荧光检测器CGE法分离质粒DNA,首先通过限制性内切酶和缺刻酶处理法确认质粒DNA超螺旋(covalently closed circular,ccc)、线性(linear)及开环(open circular,oc)这3种构象在电泳图谱中的位置,然后通过对荧光染料、样品上样浓度等条件进行优化,建立质粒DNA构象的检测方法。对所建方法进行专属性、准确性、线性、精密度、检测下限和定量下限验证,并通过将质粒DNA置于不同保存温度、反复冻融及紫外照射后再进行质粒DNA构象的检测,初步分析该方法应用的可行性。结果:采用总长度为40 cm、有效长度为30.2 cm涂层毛细管,毛细管和样品上样温度分别为20℃和4℃,质粒浓度为4 ng·μL^(-1)以1378.95 Pa,4 s上样分离,CGE法可准确地定量质粒DNA 3种构象所占的比例,且分离度良好。通过对3种常用的质粒保存液基质的检测结果显示,这些基质不会干扰检测结果,专属性较好。质粒DNA 3种构象的线性范围均在0.25^8 ng·μL^(-1),构象峰面积与上样浓度具有良好的线性关系,相关系数分别是0.9977、0.9994、0.9927。将线性化质粒及开环质粒分别以3%^50%添加至原质粒中,可检出的线性及开环构象的峰面积与添加浓度呈现良好的线性关系,相关系数分别为0.9999和0.9972,线性构象的回收率在104%-120%,准确性良好;开环构象的回收率稍差,为68%-94%。将质粒DNA分别以高(4μg·mL^(-1))、中(2μg·mL^(-1))、低(0.5μg·mL^(-1))3个浓度验证实验的重复性,结果显示,试验内重复性良好,质粒DNA超螺旋构象迁移时间的RSD在0.22%-0.54%,相对百分含量的RSD在0.38%-2.1%;中间精密度也较好,迁移时间的RSD在0.52%-1.1%;相对百分含量的精密度在质量浓度为2 ng·μL^(-1)和4 ng·μL^(-1)时,RSD值分别为3.6%、0.25%。灵敏度的验证结果显示,定量下限及检测下限分别为0.5ng·μL^(-1)和0.25 ng·μL^(-1)。用该方法分别检测质粒DNA在不同保存条件、冻融及紫外照射后的构象变化,结果显示,质粒DNA在-80℃、-20℃保存1周,超螺旋构象无明显变化,但在室温保存1周后,质粒DNA开环构象含量从1.39%增加到4.16%;将质粒DNA反复冻融5次,未观察到明显的构象变化,但冻融7次后,质粒DNA开环构象相对百分含量从1.3%左右增加到1.93%;质粒DNA质量浓度在1 mg·mL^(-1)时,紫外照射15 min到3 h,质粒DNA的超螺旋构象相对百分含量从96.97%下降到54.38%,同时线性及开环构象明显增加。结论:本研究建立的毛细管凝胶电泳法可以很好地将质粒DNA的超螺旋、线性及oc 3种构象分离,各构象分离度良好,可准确定量不同构象相对百分含量,线性相关系数不低于0.99,灵敏度高,可重复性好,且可灵敏地反映出质粒DNA构象的变化,可用于质粒DNA构象纯度检测的质量控制。

部分交联聚丙烯酰胺用于毛细管凝胶电泳蛋白质分离

以高分辨低黏度可替换的部分交联聚丙烯酰胺作为毛细管凝胶电泳的分离筛分介质,实现了溶菌酶、细胞色素C、核糖核酸酶A和胰蛋白酶4种碱性蛋白的基线分离.该聚合物材料具有的动态涂渍能力减少了毛细管壁对蛋白质的吸附,显著改善了分离重现性.混合使用两种部分交联聚合物,分离分辨率和塔板数获得进一步提高.初步实验研究结合分离机制的解析,这种具有多种优异性能的部分交联聚丙烯酰胺聚合物材料,介于交联聚合物凝胶和非交联线性凝胶之间的一个中间状态,有望在毛细管电泳以及微流控芯片电泳等生物分离领域发挥重要作用.

凝胶电泳-毛细管液相色谱-质谱联用技术分析大肠癌肿瘤与癌旁组织的差异蛋白质组

通过凝胶电泳将大肠癌患者的手术标本组织(肿瘤与癌旁)中的总蛋白按照分子量分成不同的组分,经胶内水解后,利用毛细管液相色谱-质谱联用技术对各个组分的多肽混合物进行蛋白质组学分析,共鉴定出29种差异表达的蛋白质,其中肿瘤组织中表达上调的蛋白质19种,如Fibrinogen beta chain,Vimentin,Fibrinogen gamma chain,Histone H2A type 1-B/E,Isoform 1 of Periostin,Fibrinogen alpha chain,Histone H3.1,Alphaenolase,Protein disulfide-isomerase A3等;在肿瘤组织中表达下调的有10种蛋白质,如Sarcomeric tropomyosin kappa,Transgelin,Heat shock protein beta-1,Talin-1,Isoform 2 of Vinculin,Isoform 1 of Filamin-C等。通过蛋白质印迹实验对其中的踝蛋白1(Talin-1)和烯醇化酶(Alpha-enolase)的蛋白质组学鉴定结果进行了验证。生物信息学分析表明在大肠癌组织中表达上调的蛋白多具有胞外分泌的属性,提示这些蛋白很有可能会渗透到机体内的循环系统中,从而在患者血液或者腹水中能够被检测到;而在大肠癌组织中表达下调的蛋白则多为细胞骨架、胞外基质纤维等的组成成分,这些蛋白的下调常与肿瘤细胞向周围组织的侵袭和转移有密切关系。本研究为大肠癌的早期诊断、大肠癌初筛等方面的研究等提供了基础数据,对进一步深入研究大肠癌发病机制具有重要意义。

毛细管电泳技术检测羊乳婴幼儿配方粉中的牛乳成分

婴幼儿配方乳粉的乳源鉴别对于保障产品安全和真实性至关重要。采用毛细管电泳技术对羊乳来源的婴幼儿配方粉中的牛乳成分进行检测。通过比较不同乳源产品中主要蛋白质组分的电泳图谱,筛选出牛乳表征蛋白峰。通过方法验证以及检测市售样品,证实毛细管凝胶电泳在准确度、精密度及重复性方面表现良好,筛选的表征蛋白峰峰面积与羊乳中牛乳含量呈现良好线性相关性(R^2>0.99),检测灵敏度0.5%,表明该方法可用于羊乳来源婴幼儿配方粉中牛乳成分的定性和定量检测。

毛细管电泳技术在蛋白质生物制品分析中的应用研究进展

毛细管电泳技术作为一种快速的分离分析技术,具有分析速度快、分辨率高、重现性好、定量分析准确、分离模式多样等特点,在蛋白质生物制品的定性定量分析中发挥着重大作用。就毛细管电泳技术的演变、分类及其在蛋白质生物制品分析中的应用研究进展进行了综述。