超声萃取-亲和毛细管电泳-激光诱导荧光法同时测定纺织品和食品塑料包装中16种多环芳烃的含量

通过优化背景电解液酸度及背景电解液中硼砂、羧甲基-β-环糊精(CM-β-CD)、二甲基-β-环糊精(DM-β-CD)的浓度,利用多环芳烃(PAHs)与CM-β-CD以及PAHs与DM-β-CD亲和力的差异,提出了提示方法。参考GB/T 28189-2011进行样品前处理,将样品剪成0.5 cm×0.2 cm的细条,分取1 g,加入50 mL环己烷,密封后于50℃超声提取1 h。冷却至室温,过滤,滤液用附激光诱导荧光检测器的高效毛细管电泳仪分析,背景电解液为含30 mmol·L^(-1)CM-β-CD、20 mmol·L^(-1)DM-β-CD和40 mmol·L^(-1)硼砂的混合溶液(pH 5.0),荧光检测波长为325 nm。结果显示:16种PAHs的质量浓度在0.01~0.5 mg·L^(-1)内与峰面积呈线性关系,检出限为0.002~0.040 mg·L^(-1);按照标准加入法进行回收试验,结果为91.4%~104%,测定值的相对标准偏差(n=5)为0.40%~6.3%。方法用于3种纺织品以及5种食品塑料包装的分析,8种样品均不同程度地检出了PAHs。

毛细管电泳-激光诱导荧光法测定草甘膦、草胺膦及氨甲基膦酸

建立了一种快速、有效的毛细管电泳分离-激光诱导荧光检测有机磷除草剂草甘膦、草胺膦和草甘膦的代谢物氨甲基膦酸的方法。将荧光衍生试剂5-(4,6-二氯三嗪基)氨基荧光素(DTAF)成功用于衍生上述3种化合物。最佳衍生条件:DTAF的浓度为1.0μmol/L,以50 mmol/L硼酸(pH 9.5)作为缓冲溶液,在30℃下反应40 min。以pH 9.5的30 mmol/L硼酸缓冲溶液(含15 mmol/L Brij-35)作为电泳背景电解质,3种衍生物得到基线分离。在优化的条件下,草甘膦、草胺膦、氨甲基膦酸的检出限分别为3.21、6.14和1.99 ng/kg。将该方法应用于环境水样和土壤中除草剂及代谢物的测定,回收率为91.3%～106.0%。该方法准确、灵敏,可满足环境样品中有机磷农药及其代谢物残留的检测要求。

毛细管电泳－激光诱导荧光法分离检测DNA片段及基因扩增产物

以羟丙甲基纤维素和非交联聚丙烯酰胺浴液为筛分介质，将毛细管电泳－激光诱导荧光法用于ＤＮＡ片段及基因扩增产物的分离检测．探讨了非胶筛分介质中高分子化合物的浓度、电解质的浓度、内插试剂用量等对ＤＮＡ片段分离检测的影响；考察了ＤＮＡ片段迁移时间和峰面积的重现性及ＤＮＡ片段定量检测的关系．建立了一种快速、灵敏的ＤＮＡ片段及基因扩增产物分离检测方法．

毛细管电泳-激光诱导荧光法测定人血浆中的富马酸比索洛尔

建立了毛细管电泳-激光诱导荧光检测(CE-LIFD)技术测定人血浆中富马酸比索洛尔含量的新方法。选用荧光素异硫氰酸酯(FITC)为衍生化试剂,当缓冲溶液为25mmol/LNa2B4O7(pH9.2)、分离电压25kV、柱温20℃、电动进样(10kV×8s)、以峰面积内标法定量、于激发波长/发射波长=488/520nm柱上检测时,富马酸比索洛尔得到较好分离。在选定的电泳条件下,对其线性范围(20～1000μg/L)、检出限(10μg/L)、重现性(日内和日间精密度分别小于4.44%和5.59%)和回收率(96.19%～101.80%)进行了测定。结果表明:迁移时间的重现性<1.58%;峰面积之比的重现性<6%。

多重聚合酶链反应-毛细管电泳-激光诱导荧光法检测三种食源性致病菌

建立了食品中常见致病菌大肠杆菌O157：H7的uidA基因、沙门菌的invA基因和志贺菌的ipaH基因的多重聚合酶链反应（PCR）产物的毛细管电泳快速检测方法。根据这3种致病菌的特异性基因序列设计多重PCR引物,优化PCR扩增反应体系,采用7.0g/L甲基纤维素为筛分介质,毛细管电泳-激光诱导荧光检测法同时检测了3种常见致病菌的PCR扩增产物。在优化的多重PCR反应和毛细管筛分电泳条件下,该方法可以同时检测沙门菌、志贺菌和大肠杆菌O157：H7基因的多重PCR扩增产物,22min内即可完成3种常见致病菌的毛细管电泳检测。迁移时间的相对标准偏差为1.47%-2.07%。与凝胶电泳法比较,该法简便快速,灵敏度高,可用于多种致病菌脱氧核糖核酸的检测,为食品安全提供了一种可靠的快速检测方法。

毛细管电泳-激光诱导荧光法测定缺氧缺血新生大鼠脑组织中氨基酸

建立了新生儿缺氧缺血性脑病(H IE)发生时脑组织中兴奋性氨基酸(EAA)含量的高效毛细管电泳-激光诱导荧光检测(CE-LIF)的新方法。方法的最佳条件为:40 mmol/L硼砂溶液,分离电压20 kV,压力进样5 s,λem=488 nm、λex=560 nm。随机分为假手术组、新生儿缺氧缺血性脑病(H IE)组,小剂量地塞米松(DXM)组和大剂量DXM组的新生大鼠脑组织中EAA的含量测定,结果表明:假手术组EAA含量较低,H IE组EAA含量显著升高,大、小剂量DXM预处理后,EAA含量较H IE组有不同程度的降低。

限制性内切酶指纹-高效毛细管电泳激光诱导荧光法测定原核/真核质粒

采用线性聚丙烯酰胺修饰石英毛细管的高效毛细管电泳无胶筛分技术,对原核/真核质粒用不同限制性内切酶酶切,运用限制性内切酶指纹-高效毛细管电泳激光诱导荧光(REF-HPCE-LIF)检测法同时对内切酶酶切后多个和较长DNA片段进行了检测,电泳缓冲液为1×TBE(pH8.3),阴极电压进样(10kV,5s),分离电压13kV,25℃,激光诱导荧光检测器检测(λex=520nm)。结果表明,所建立的REF-HPCE-LIF方法可对原核/真核酶切后多个和较长DNA片段进行检测,获得了满意的限制性内切酶指纹图谱,能够检测片段大小相差不超过10bp。所建立的方法较琼脂糖电泳分辨率高,可应用在检测多个和较长DNA片段的突变,在诊断肿瘤方面有一定应用前景。

毛细管电泳间接激光诱导荧光法测定苦蒿和青蒿中酸性成分

利用毛细管电泳建立了中药苦蒿和青蒿及其制剂中11种酸性化合物的同时定量分析方法。其最佳电泳条件为:熔融石英毛细管50 cm(40 cm处检测窗口)×75μm i.d.;分离电压:+15 kV;分离温度:25℃;缓冲液(含:35.7 mmol/L磷酸钠,2.86×10-5mol/L荧光素钠,少量甲醇,pH=11.42);进样压力:0.5 psi(3.45 kPa),进样时间5.0 s;荧光素钠为激光诱导荧光响应试剂;LIF激发光波长:488 nm,检测波长:520 nm。该方法线性范围宽、相对标准偏差低、精密度高、重现性好,用于实际样品的测定,获得满意结果。

毛细管电泳激光诱导荧光法优化量子点-转铁蛋白偶联体系及用于细胞标记

利用毛细管电泳激光诱导荧光(CE-LIF)表征了偶联剂N-羟基硫代琥珀酰亚胺(NHS)及NHS和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)混合偶联剂对CdTe量子点活化效果的差异,优化了CdTe与转铁蛋白(Trf)的偶联条件,比较了CdTe-Trf,CdTe-BSA偶联物及CdTe量子点对Hela细胞的标记效果。结果表明:NHS活化后的量子点性能优于混合偶联剂EDC-NHS。31.2μmol/L Trf与CdTe形成的偶联物CdTe-Trf对Hela细胞的标记效果最佳。CdTe-Trf在4℃孵育20 min可快速标记在Hela细胞的表面;在37℃孵育7 h后,可进入Hela细胞内。说明所制得的CdTe-Trf偶联物具有Trf的生物功能,它可通过特异性识别并结合细胞膜表面的Trf受体而转入Hela细胞。而CdTe-BSA偶联物的标记不具特异性,CdTe则不能用于Hela细胞的标记。

毛细管电泳—激光诱导荧光法分离四种神经递质类氨基酸的条件优化

目的探讨毛细管电泳分离神经递质类氨基酸的影响因素。方法采用毛细管电泳法分离4种神经递质类氨基酸的荧光素异硫氰酸酯(FITC-AAs)衍生物,分析电泳缓冲液、表面活性剂以及衍生条件对分离的影响。结果电泳缓冲液的组成、浓度、pH值、表面活性剂以及衍生条件对4种FITC-AA衍生物分离有很大影响,在以75 mm ol/L,pH 9.42硼酸盐含100 mm ol/LSDS为电泳缓冲液,50 mmol/LpH 9.8硼酸盐为衍生缓冲液,4种FITC-AA衍生物20 min内得到很好分离。结论通过条件优化,毛细管电泳-激光诱导荧光技术分离神经递质类氨基酸的分离效果能得到很大提高。

毛细管电泳激光诱导荧光法检测多酶片中四种生物酶

通过基于电荷耦合装置的在线自校正激光诱导荧光检测装置,使用毛细管电泳法同时分离检测了异硫氰酸荧光素(FITC)标记的多酶片样品中4种生物酶,根据FITC标记血红蛋白含量的减少评价胃蛋白酶的活力。结果表明,毛细管电泳激光诱导荧光检测法可以分离检测生物药品中的活性成分,胃蛋白酶活性评价方法,可作为药典方法的补充。

毛细管区带电泳-红色激光诱导荧光检测磷酸化氨基酸

以自行设计合成的1,7-二甲基-3,5-二苯乙烯基-8-苯基-(4′-氧乙酸-N-羟基琥珀酰亚胺酯)-二氟化硼-二吡咯甲烷(DMDSPAB-OSu)为高活性红色荧光衍生试剂,建立了毛细管区带电泳-激光诱导荧光(CZE-LIF)分离检测磷酸化苏氨酸、磷酸化丝氨酸和磷酸化酪氨酸的新方法。DMDSPAB-OSu具有量子产率高、光稳定性好、荧光不受pH和溶剂影响等优势,且其荧光波长与红色半导体激光检测器匹配,可有效减少生物基质内源性荧光干扰。在0.07 mol·L^(-1)H_3BO_3-Na_2B_4O_7缓冲溶液(pH=8.5)中,DMDSPAB-OSu与3种磷酸化氨基酸的衍生反应室温下仅需5 min,衍生产物可在17.5min内实现基线分离,激光诱导荧光检测检出限(S/N=3)为1.5~3.2nmol·L^(-1),方法用于牛奶酪蛋白样品检测,回收率为91.1%~103.8%。

毛细管电泳-激光诱导荧光法测定细胞中谷胱甘肽

谷胱甘肽(GSH)在抵抗氧化应激和重金属解毒过程中发挥着重要作用,建立灵敏、准确的GSH定量分析方法对于研究细胞重金属毒性机制具有深远意义。该研究以肝癌细胞(HepG2)为研究对象,以活性基团为芳香邻二醛的2,3-萘二甲醛(NDA)为标记试剂,建立了一种高灵敏度的测定细胞中GSH含量的毛细管电泳-激光诱导荧光检测方法(CE-LIF)。实验考察了缓冲溶液的种类、pH、添加剂等对GSH与NDA的反应速率和NDA-GSH检测灵敏度的影响。比较了pH为7.4和9.2的三羟甲基氨基甲烷(Tris)缓冲溶液、pH为9.2的硼砂和Tris缓冲溶液中NDA-GSH的灵敏度和反应速率,结果显示在pH为9.2的硼砂缓冲溶液中NDA-GSH的灵敏度最高且反应速率最快。进一步比较了4种添加剂对NDA-GSH灵敏度的影响,结果显示以β-环糊精(β-CD)作为添加剂效果最好。在最优的实验条件下,GSH与NDA可以在5 min内达到反应平衡,3 min内检测到NDA-GSH电泳信号。采用外标法对细胞中的GSH进行定量分析,方法线性范围为0.01~20.00 mmol/L,GSH的检出限和定量限分别为0.006μmol/L和0.020μmol/L,加标回收率和标准偏差分别为95.7%~112.6%和3.8%~5.0%(n=3)。通过建立的方法对HepG2细胞中的GSH进行定量分析,并研究了As(Ⅲ)、As(Ⅴ)、Cr(Ⅲ)和Cr(Ⅵ)刺激细胞后胞内GSH的变化情况。结果表明,在研究剂量水平下,As(Ⅲ)、As(Ⅴ)和Cr(Ⅲ)不会影响HepG2细胞中GSH的含量,而高剂量Cr(Ⅵ)会导致GSH含量显著降低。结合元素毒性数据,说明HepG2细胞内GSH含量与细胞毒性相关,GSH含量会随着细胞毒性增大而降低。

分散固相萃取结合毛细管电泳-激光诱导荧光法测定血清中甲基化精氨酸

介绍一种分散固相离子交换萃取方法,结合毛细管电泳-激光诱导荧光检测法,测定血清样品中不对称二甲基精氨酸、对称二甲基精氨酸和单甲基精氨酸。将提取甲基化精氨酸的树脂粒加入到4-氯-7-硝基苯并呋喃乙腈溶液和碱性硼酸钠溶液(pH=10.5)的混合溶液中,于60℃水浴中衍生化。在80 mmol/L磷酸盐溶液(pH=2.0)分离电解质和20 kV分离电压条件下,这3种衍生物在熔融石英毛细管中获得基线分离。根据FDA生物分析方法验证指南,进行方法验证,结果满意。利用该方法测定了当地医院血清样品中的3种甲基化精氨酸含量。

毛细管电泳-激光诱导荧光法测定基因工程人细胞生成素的N-连接糖谱

目的 建立重组人红细胞生成素 (EPO)中影响体内生物学活性的含唾液酸和去唾液酸的N 连接糖的糖谱。方法 用肽糖苷酶F释放EPO中与天冬酰胺连接的寡糖 ,再用唾液酸酶脱去糖末端的唾液酸 ,采用荧光试剂APTS标记后 ,以毛细管凝胶电泳 激光诱导荧光法分离和检测糖的各种形态。结果 EPO样品含有大致相同的N 连接糖谱 ;去唾液酸后的N 连接糖组分的保留时间延长 ;体内生物学活性不同的样品 ,其N 连接糖也有差异。 结论此法可用于判断EPO产品的来源及批间差异 ,与肽图相结合可作为EPO的指纹鉴别图谱 。

毛细管电泳柱后衍生激光诱导荧光测定动物组织中卡那霉素类抗生素

采用毛细管电泳柱后衍生激光诱导荧光测定3种卡那霉素类抗生素。研究了在反向电渗流条件下HAc-NaAc缓冲液酸度和浓度对卡那霉素类抗生素分离的影响,研究了Na2B4O7缓冲体系和柱后衍生试剂萘二醛/2-巯基乙醇浓度对检测信号的影响。采用50 mmol/L HAc-NaAc（pH5.0）＋0.5 mmol/L CTMAB溶液为分离缓冲液,样品在-15 kV下分离,与柱后衍生试剂1.0 mmol/L NDA＋8.0 mmol/L 2-ME＋35 mmol/LNa2B4O7（pH10.0）的30%（V/V）甲醇溶液反应,激发诱导荧光检测卡那霉素类抗生素检出限为3.6×10^-5-5.2×10^-5g/L;本方法用于动物组织中卡那霉素类抗生素残留检测,相对标准偏差小于7.2%;回收率为90.2%-95.3%（n=4）。

毛细管电泳-激光诱导荧光检测肌腱和肌腱细胞中的羟脯氨酸

建立毛细管电泳-激光诱导荧光检测(CE-LIF)分析羟脯氨酸的方法。肌腱和肌腱细胞中的胶原蛋白碱水解生成氨基酸,经异硫氰酸荧光素(FITC)衍生,采用LIF-CE分离测定胶原蛋白特异性氨基酸-羟脯氨酸。羟脯氨酸在0.5μg/L^8×103μg/L浓度范围内线性关系良好;检出限为0.5μg/L。相对迁移率和相对峰高的相对标准偏差(RSD)分别为5.0%和6.1%。测定了60份肌腱和9份细胞样品,加标回收率为95%~110%。将所建立的毛细管电泳方法与高效液相色谱法(HPLC)进行比较,两者测定结果相对误差为-1.9%~2.0%。本法仅需一次荧光标记,操作简单、快速灵敏,12min内完成一个分析周期,适于测定肌腱和细胞样品。

芯片毛细管电泳激光诱导荧光快速分离检测麻黄碱类兴奋剂

研究用芯片毛细管电泳激光诱导荧光检测系统分离测定经7-chloro-4-nitrobenzo-2-oax-1，3-diazole（NBD-Cl）衍生的麻黄碱和伪麻黄碱的实验条件。采用胶束毛细管电动色谱分离体系（12mmol／L SDS＋10mmol／L硼砂缓冲液，pH9．0），在45mm长的通道上实现了麻黄碱和伪麻黄碱的快速分离，一次分离小于1．5min。10—100ms／L范围内，峰高与浓度呈良好的线性关系，麻黄碱、伪麻黄碱的检出限分别是0．83mg／L和1．10mg／L。所建立的方法应用于尿中麻黄碱和伪麻黄碱的分离测定，取得满意的结果。

毛细管电泳-激光诱导荧光检测装置的研制及应用

目的 自行组建高效毛细管电泳 -激光诱导荧光分析装置。方法 以波长 5 4 3.5 nm He- Ne激光为激发光源 ,滤色片 -单色仪分光 ,光电倍增管检测 ,用计算机采集和处理电泳图谱。结果 优化了毛细管电泳 -激光诱导荧光检测装置的设计和分析参数 ,用该装置获得了高信噪比毛细管电泳谱。对罗丹明类荧光试剂 (Sulforhdam ineB)溶液的检出限为 10 - 9m ol/ L,线性范围为 1× 10 - 6～ 1× 10 - 9mol/ L。采用该装置检测了分枝杆菌 DNA的 PCR扩增产物、酶切产物以及人血清白蛋白。结论 所组建的高效毛细管电泳 -激光诱导荧光分析装置结构合理 ,灵敏度高 ,成本低、光路校准方便 ,分离效能明显高于常规琼脂糖电泳 ,能作为研究生物样品中 DNA片段和蛋白质含量的有效检测手段。