多重PCR毛细管电泳细菌快速鉴定方法的建立和临床应用研究

目的针对引起人类感染的常见病原菌建立一种基于多重PCR毛细管电泳技术的快速细菌鉴定方法,评估其临床应用价值。方法建立23种常见病原菌的多重PCR毛细管电泳检测体系。收集150例临床微生物检测标本,分别用多重PCR毛细管电泳法(以下简称多重PCR法)、培养法进行检测。对两种方法的检测结果进行比较,评价多重PCR法的检测效能。结果150例标本中多重PCR法检出15种病原菌、培养法检出14种病原菌。多重PCR法检测阳性率为73.3%,培养法为70.0%,差异无统计学意义(P>0.05)。多重PCR法对肺炎链球菌的检出率为16.0%,培养法为6.0%,差异有统计学意义(P<0.05)。多重PCR法对混合菌标本的检出率为15.3%,培养法未检出混合菌标本。多重PCR法与培养法检测结果的符合率为79.3%。多重PCR法检测时间为3~6 h,培养法为2~4 d。结论与培养法比较,多重PCR法具有较高的时效性,对肺炎链球菌及混合菌标本具有较高的检出率,可满足临床标本病原微生物快速初筛的需求。

单抗药物还原毛细管电泳法方法学验证研究

目的对还原十二烷基硫酸钠毛细管电泳法(reduced capillary electrophoresis-sodium dodecyl sulfate,rCE-SDS)用于单抗药物的纯度检测进行方法学验证,为业界此类质量控制方法的方法学验证提供参考。方法按照2020版《中华人民共和国药典》通则<3127>的方法检测样品,对该方法的专属性、线性、准确度、精密度、范围、定量限、耐用性进行验证。结果本方法专属性较好;线性拟合结果良好(均R^(2)>0.99)。各分析用样品主峰的准确性结果满足98%~102%,总杂质和非糖基化重链(non-glycosylated heavy chain,NGHC)的准确性结果均满足70%~130%;重复性和中间精密度的RSD均≤15%;主峰的范围为≥92.4%,总杂质范围为0.36%~7.6%,NGHC的范围为0.12%~3.8%;总杂质和NGHC的定量限分别为0.36%和0.12%。结论本方法验证各项指标均符合预设可接受标准,且该研究可以为此类方法学验证的科学性和合理性设计提供参考。

超声萃取-亲和毛细管电泳-激光诱导荧光法同时测定纺织品和食品塑料包装中16种多环芳烃的含量

通过优化背景电解液酸度及背景电解液中硼砂、羧甲基-β-环糊精(CM-β-CD)、二甲基-β-环糊精(DM-β-CD)的浓度,利用多环芳烃(PAHs)与CM-β-CD以及PAHs与DM-β-CD亲和力的差异,提出了提示方法。参考GB/T 28189-2011进行样品前处理,将样品剪成0.5 cm×0.2 cm的细条,分取1 g,加入50 mL环己烷,密封后于50℃超声提取1 h。冷却至室温,过滤,滤液用附激光诱导荧光检测器的高效毛细管电泳仪分析,背景电解液为含30 mmol·L^(-1)CM-β-CD、20 mmol·L^(-1)DM-β-CD和40 mmol·L^(-1)硼砂的混合溶液(pH 5.0),荧光检测波长为325 nm。结果显示:16种PAHs的质量浓度在0.01~0.5 mg·L^(-1)内与峰面积呈线性关系,检出限为0.002~0.040 mg·L^(-1);按照标准加入法进行回收试验,结果为91.4%~104%,测定值的相对标准偏差(n=5)为0.40%~6.3%。方法用于3种纺织品以及5种食品塑料包装的分析,8种样品均不同程度地检出了PAHs。

毛细管区带电泳法测定儿童药品中6种着色剂

建立羟丙基-β-环糊精修饰的毛细管区带电泳法测定儿童药品中6种着色剂的含量。选择未涂层石英毛细管柱(68.5 cm×75μm),分离缓冲液为10 mmol/L硼酸盐缓冲液(含20 mmol/L的聚乙二醇4000和20 mmol/L的羟丙基-β-环糊精,pH 8.0),检测波长为210 nm,电泳电压为20 kV,进样压力为5 kPa,进样时间为5 s。酸性橙7、诱惑红、酸性蓝74、苋菜红、柠檬黄、丽春红4R分离效果良好,其质量浓度在0.3~3.0 mg/L范围内与对应的电泳峰面积线性关系良好,线性相关系数均不小于0.9990,检出限为0.001~0.004 mg/L,定量限为0.003~0.013 mg/L,样品加标平均回收率为94.0%~99.9%,测定结果的相对标准偏差为0.7%~3.2%(n=6)。该方法操作简单、分析速度快、成本低、有实际应用价值,适用于儿童药品多种着色剂的同时分离和检测。

全柱成像等电聚焦毛细管电泳法对双特异性Fc融合蛋白的电荷异质性分析

建立全柱成像等电聚焦毛细管电泳(WCID-CIEF)分析双特异性Fc融合蛋白电荷异质性方法。方法 通过非还原毛细管电泳法观察酶处理前后峰型的变化,初步确认了该Fc融合蛋白电荷异质性唾液酸相关;结合唾液酸酶酶切和方法优化手段,建立了此融合蛋白的WCID-CIEF分析平台;通过液相质谱法(LC-MS)鉴定了唾液酸相关N-糖构型;通过液相荧光法(LC-FLR)测定了唾液酸的含量。结果 经唾液酸酶酶切和方法优化后,此方法在2.5~7.5 mgmL-1浓度范围内线性良好,R2=0.998,回收率在96.3%~104.6%之间,准确性、专属性和耐用性均满足要求。结论 结合酶处理和方法优化手段,WCID-CIEF可较好地分析融合蛋白的电荷异质性,提供了一种简单、有效的融合蛋白质控手段,并可应用于产品放行及稳定性监测。

毛细管电泳-大体积样品堆积法测定地龙蛋白粉中地龙多肽

建立了一种简单灵敏的毛细管电泳-大体积样品堆积法同时分离检测4种地龙多肽,方法成功用于地龙多肽VQ-5、OEP3121、F-1及AQ-5的富集。实验中采用了高效毛细管电泳的大体积进样法并对电泳条件进行优化,获得最优条件:堆积电压为-20 kV,堆积时间为2 min,进样压力为20.68 kPa,进样时间为33 s,检测波长为215 nm。实验结果显示,4种地龙多肽可在11 min内完全分离,在各自线性范围内呈现良好的线性,相关系数均大于0.99,富集因子在7.7~30.3之间。将所建立的方法用于地龙蛋白粉中多肽的测定,测得地龙蛋白粉中多肽AQ-5的含量为0.0012%,回收率在91.97%~102.67%之间。该方法简单,快速且准确,适用于实际样品的分析。

毛细管电泳间接紫外法分析存储温度和热加工对肉类食品中生物胺含量的影响

为探究肉类食品在存储过程中的温度和热加工对其生物胺(biogenic amines, BAs)含量的影响,采用毛细管电泳(capillary electrophoresis, CE)间接紫外(ultraviolet, UV)法测定新鲜和煮熟鸡肉、牛肉、猪肉分别在4℃(冷藏)下存储6 d和25℃(室温)下存储24 h过程中BAs的含量。结果表明:在整个存储期间,精胺(spermine, Spm)和亚精胺(spermidine, Spd)的含量随时间的延长而减少;在25℃下,腐胺(putrescine, Put)、组胺(histamine, HA)、尸胺(cadaverine, Cad)和酪胺(tyramine, TA)的含量随存储时间的延长而迅速增加,在4℃下这4种BAs的含量随存储时间的延长而缓慢增加;但不论是在室温还是冷藏条件下,新鲜肉类样品中Put、HA、Cad和TA的含量均高于煮熟肉类样品。可见冷藏和热加工处理能有效抑制肉类食品中BAs含量的增加。猪肉样品中BAs的含量低于鸡肉和牛肉样品,说明肉的种类也会影响肉类食品中BAs的含量。

毛细管电泳HbA+HbA2/HbA初筛联合血液学指标RDW筛查诊断新生儿β-地中海贫血的价值分析

目的分析毛细管电泳HbA+HbA2/HbA联合RDW诊断新生儿β-地中海贫血的价值。方法选取2021年1月至2023年12月在我院分娩的2009例新生儿进行毛细管电泳、血液学指标及基因检查筛查β-地中海贫血,描述β-地中海贫血基因类型分布情况,比较非β-地中海贫血组与β-地中海贫血组的毛细管电泳HbA、HbA2/HbA指标、血液学指标,分析筛检效能。结果基因检测β-地中海贫血阳性新生儿12例,总体检出率为0.60%,其中β-地中海贫血单纯杂合突变11例(91.67%),β-地中海贫血复合杂合突变1例(8.33%),以β(CD41-42)、β(IVS-Ⅱ-654)突变常见,分别占16.67%、16.67%。β-地中海贫血组新生儿HbA指标水平显著低于非β-地中海贫血组(P<0.05),β-地中海贫血组新生儿HbA2/HbA指标水平为(2.01±0.10)%,而非β-地中海贫血组新生儿未检测出HbA2。非β-地中海贫血组与β-地中海贫血组的MCV、MCH、MCHC、RBC、Hb水平比较,差异均无统计学意义(均P>0.05);β-地中海贫血组的RDW水平高于非β-地中海贫血组,差异有统计学意义(P<0.05)。毛细管电泳HbA+HbA2/HbA及联合RDW检测的阳性预测值、阴性预测值、灵敏度、特异度最高,分别为90.08%、88.34%、89.74%、86.23%。结论毛细管电泳HbA+HbA2/HbA初筛联合血液学指标(RDW)筛查新生儿β-地中海贫血的效能高,可弥补毛细管电泳HbA+HbA2/HbA筛查假阳性率高的缺点,值得临床推广应用。

毛细管电泳法测定解酒类保健液中葛根素的含量

应用毛细管电泳法快速测定解酒类保健液中葛根素的含量。采用毛细管电泳法,以20 mmol/L硼砂-20 mmol/L磷酸二氢钠溶液(p H8.5)-10%甲醇为缓冲液,未涂层的熔融石英毛细管柱(56 cm×50μm),检测波长254 nm,电压20 kV,柱温20℃,进样压力30 mbar,进样时间6 s。葛根素在10~300μg/mL的浓度范围内与峰面积线性关系良好(R=0.9952)。本方法简便快速、准确、经济性好,可用于测定解酒类保健液中葛根素的含量。

毛细管电泳片段分析法、荧光定量PCR法在ALRTI患儿咽拭子标本病原体诊断中的应用对比观察

目的毛细管电泳片段分析法、荧光定量PCR法在急性下呼吸道感染患儿咽拭子标本病原体诊断中的应用。方法急性呼吸道感染患儿65例(65份咽拭子标本),分别采用毛细管电泳片段分析法、荧光定量PCR法检测患儿咽拭子病原体,比较两种方法病原体检出率,并分析两种检测方法与金标准(Sanger测序法)检测结果的一致性。结果毛细管电泳片段分析法病原体检出率为52.3%(呼吸道合胞病毒21份、副流感病毒4份、衣原体病毒2份、腺病毒2份、鼻病毒2份、偏肺病毒3份、博卡病毒1份,其中1份为合胞病毒与鼻病毒混合感染),荧光定量PCR法病原体检出率为45.0%(呼吸道合胞病毒20份、副流感病毒3份、衣原体病毒2份、腺病毒1份、鼻病毒1份),两种方法病原体检出率比较,P>0.05。毛细管电泳片段分析法与Sanger测序法检测结果阳性一致率为100.0%,阴性一致率为100.0%,准确率为100.0%;荧光定量PCR法与Sanger测序法检测结果阳性一致率为86.2%,阴性一致率为93.5%,准确率为90.0%。结论毛细管电泳片段分析法与荧光定量PCR方法病原体检出率无差异,但毛细管电泳片段分析法能检测出病原菌混合感染,且与Sanger测序法检测结果有高度一致性,有更高的临床应用价值。

中药菟丝子的高效毛细管电泳法鉴别

提取菟丝子种子植物蛋白用高效毛细管电泳法进行生药鉴定。实验表明，同属不同种菟丝子的碱溶性或酸溶性蛋白在成分和含量上均存在显著差异。根据其种子植物蛋白的电泳谱图，可有效地鉴别菟丝子的来源。运用此法对１３个生药样品进行了鉴定。

毛细管电泳法测定青菜中敌百虫的残留量

建立了一种测定青菜中有机磷农药敌百虫的方法,样品以二氯甲烷提取,活性炭脱叶绿素,毛细管电泳法检测,最低检出限为2×10-6mol L,敌百虫浓度在5×10-5～2×10-6mol L之间,呈现良好的线性关系,r=0.9914,样品加标回收率为90%～102%。

中药红曲基原真菌的高效毛细管电泳色谱法鉴别

目的：建立一种中药红曲基原真菌新的鉴定方法。方法：采用毛细管区带电泳分离模式，背景电解质为２０ ｍ ｍ ｏｌ／Ｌ硼酸盐缓冲液（ｐＨ ９．１１），电压２０ｋＶ，温度２５ ℃；紫外检测波长２１４ ｎｍ ，压差进样，进样时间５ ｓ。结果：不同种红曲霉胞内和胞外水溶性蛋白质的成分和含量均存在显著差异。根据红曲霉胞内或胞外水溶性蛋白质４～１０ ｍ ｉｎ 区间内的指纹图谱及这些峰的相对含量，可以有效地鉴别红曲霉属真菌，结果与形态学以及扫描电镜的检验结果一致。结论：高效毛细管电泳可用于红曲霉等真菌的分类和鉴定。

高效毛细管电泳法同时测定红花中腺苷、芦丁和槲皮素的含量

目的 用高效毛细管电泳法对红花中的有效成分腺苷、槲皮素和芦丁同时进行含量测定。方法 采用熔融石英毛细管柱 (66 5cm× 5 0 μmID ,有效长度 5 8cm)作为分离通道 ;以 5 0mmol·L- 1 硼砂其中含 18%甲醇的溶液 (pH9 7)为运行缓冲液 ;运行电压 :2 4kV ;毛细管柱温 :2 0℃ ;检测波长 :2 10nm。结果 以利福平为内标 ,腺苷、芦丁和槲皮素分别在 10～ 160mg·L- 1 ,10 0～ 2 0 0 0mg·L- 1 和 10 0～ 160 0mg·L- 1 线性关系良好 (r>0 998) ;平均回收率分别为98 5 %～ 10 0 5 % ,96 9%～ 99 5 %和 99 1%～ 99 5 % ;RSD分别为 6 5 % ,5 2 %和 5 6% (n =5 )。结论 此法操作简便快速 ,回收率及重现性好 ,可作为红花质量控制的方法。

高效毛细管电泳法同时测定减肥类功能食品中7种违禁成分

建立了同时测定减肥类功能食品中违禁成分芬氟拉明、伪麻黄碱、去甲伪麻黄碱、安非拉酮、两布曲明、两地那非和十的宁的高效毛细管电泳分析方法。以20mmol／L硼砂10mmol／LSDS-5％乙腈溶液（pH9．0）为运行缓冲液，在25℃，17kV条件下测定，检测波长为195nm。各待测物线性范围上限均为100mg／L，线性相关系数均大于0．998，相对标准偏差为4．5％～7．9％（n=7）；平均加标回收率为79．6％～112．0％；检出限（S／N3）为0．16～0．65mg／L。本方法简便快速、灵敏准确、分析成本低，已成功应用于功能食品中上述减肥类违禁添加成分的测定。

毛细管区带电泳法测定阿托伐他汀钙片的含量及降解产物

目的 制定阿托伐他汀钙的含量 ,并对其中降解产物进行控制。方法 采用毛细管区带电泳法 (CZE)以 0 .0 3mol·L- 1的磷酸盐缓冲液 (pH8.5)做运行液 ,运行电压 :1 6kV(运行电流 :90～ 1 0 0 μA) ;进样时间 :1 0s;检测波长 2 1 4nm ;并以磺胺醋酰钠为内标。结果 阿托伐他汀钙在 0 .0 5～ 0 .50mg·mL- 1 的范围内呈良好的线性关系 ,相关系数为r=0 .9999。平均回收率为 1 0 0 .63 % (n =5) ,RSD为 0 .77%。阿托伐他汀钙与降解产物分离良好。结论 本方法简便、快速。

榧子蛋白高效毛细管电泳法鉴别

对国产榧属植物种子进行蛋白电泳鉴别。采用高效毛细管电泳法对榧属植物种子蛋白进行分析。榧属植物种子蛋白高效毛细管电泳谱图有明显的种间差异。高效毛细管电泳可作为中药榧子的鉴别方法。

毛细管电泳-质谱联用法测定灵芝药材中核苷类成分

建立一种用于测定赤芝和紫芝中的核苷类成分的毛细管电泳-质谱联用法(CE-MS)。CE条件为:熔融石英毛细管柱(120 cm×50μm),缓冲液体系100 mmol/L甲酸-10%甲醇水溶液。运行电压25 kV;毛细管温度25℃。MS条件为:0.3%甲酸-75%甲醇水溶液为鞘液,流速3μL/min;干燥气体流速6 L/min,干燥温度350℃;采用电喷雾离子化源(ESI),正离子模式检测,全扫描范围m/z 50～350。以5-氯胞嘧啶阿拉伯糖苷为内标物。结果表明,胞嘧啶、鸟嘌呤、胞苷、腺苷、次黄嘌呤、鸟苷、肌苷和尿嘧啶在线性范围内具有较好的线性关系(除鸟苷外,其他成分R2>0.990)。加样回收率在95.3%～104.6%之间。各待测化合物的最低检测限(LOD)和最低定量限(LOQ)分别分布在0.13～9.85μg/mL和0.42～20.83μg/mL之间。测定结果显示赤芝的核苷类成分的含量上高于紫芝。CE-MS适合用于中药中核苷类成分的分析检测。

高效毛细管电泳法测定石榴皮中鞣花酸的含量

目的:建立以高效毛细管电泳法测定石榴皮提取物中鞣花酸含量的方法.方法:毛细管柱为未涂层毛细管,缓冲液为30mmol/L氨基丁三醇-30mmol/L磷酸二氢钾(20:9),分离电压为20kV,检测波长为254nm,柱温为25℃,进样条件为25mbar、5.0s.结果:鞣花酸检测浓度在0.0 398～0.3 184mg/ml范围内与峰面积积分值线性关系良好(r=0.9 993);平均加样回收率为97.42%(RSD=1.84%).结论:本方法准确、可靠,可用于石榴皮药材的质量控制.

赤芍与白芍药材高效毛细管电泳指纹图谱方法学研究

目的确定赤芍和白芍的高效毛细管电泳分析方法,建立赤芍和白芍的高效毛细管电泳法(HPCE)指纹图谱。方法HPCE工作条件:采用未涂层熔融石英毛细管(内径75μm,有效长度50 cm),分离电压为25 kV,柱温25℃,二极管阵列检测器(DAD)检测波长为220 nm,缓冲液为30 mmol/L硼砂(pH=9.0)溶液。按此条件对来自不同产地的7种赤芍样品和8种白芍样品进行了分析。结果建立了赤芍和白芍HPCE指纹图谱,采用中药指纹图谱相似度计算软件,以系统生成的对照指纹图谱为对照模板对不同样品的图谱进行相似度计算。结论该方法简捷、有效,可以用于赤芍和白芍药材的质量控制。