旋转激光扫描共焦荧光检测式毛细管阵列电泳

研制了一种新型毛细管阵列电泳仪———旋转激光扫描共焦荧光检测式毛细管阵列电泳。采用圆形毛细管阵列 ,激光扫描共聚焦荧光检测方式 ,利用了高速直流电机旋转反射镜来进行激光扫描 ,并且加快了采样速率 ;采用旋转编码器获得毛细管的绝对位置并对数据采集系统触发来采集信号 ,并利用研制的 8通道毛细管阵列电泳对酪氨酸、赖氨酸、谷氨酸及天冬氨酸的混合物进行了分离分析 ,获得了良好的分离效果。

毛细管电泳-激光诱导荧光检测法测定抗癫痫药加巴喷丁

建立了毛细管电泳-激光诱导荧光(CE-LIF)测定抗癫痫药加巴喷丁的方法。加巴喷丁经4-氯-7-硝基苯并-2-氧杂-1,3-二唑(NBD-Cl)衍生化后,采用10mmol/L硼砂-10mmol/L十二烷基硫酸钠(pH9.75)的缓冲体系,加巴喷丁在6min内实现高效基线分离。方法的线性范围为0.01～10mg/L(r=0.999 7),检出限为2μg/L,定量限为10μg/L。方法的平均回收率为100.2%～103.1%,相对标准偏差为0.15%～1.00%(n=3)。该方法灵敏、快速、准确和可靠,已用于加巴喷丁药物制剂的质量控制。

毛细管电泳-激光诱导荧光检测法测定卡托普利和N-乙酰-L-半胱氨酸

建立了一种高效、快速的毛细管电泳分离-激光诱导荧光(CE-LIF)检测卡托普利(CAP)和N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)的分析方法。采用1,3,5,7-四甲基-8-溴甲基-二氟二硼-二吡咯甲川(TMMB-Br)为柱前衍生试剂,在50 mmol/L磷酸盐缓冲溶液(pH=8.5)中,40℃下进行衍生反应10min。以荧光素为内标,25mmol/L硼酸盐缓冲溶液(pH=9.5)为电泳背景电解质,14min内达到基线分离。CAP和NAC的检出限分别为0.65nmol/L、0.76nmol/L。将该方法应用于人体尿液和血清中这两种物质的测定,回收率在97.0%~105.7%之间。

毛细管电泳-激光诱导荧光鞘流检测系统优化研究及在基因分析中的应用

对自组装的毛细管电泳 激光诱导荧光鞘流检测装置进行了系统的优化。探讨了鞘流速度、激光功率和检测的位置对检测信号的影响以及鞘流速度与峰面积和理论塔板数的关系。在优化的条件下 ,对荧光素检测的线性范围为 1× 1 0 - 8～1× 1 0 - 1 0 mol L;检出限为 7.5×1 0 - 1 1 mol L(S N =3 )。使用聚N ,N 二甲基丙烯酰胺 (PDMA)为双功能非胶筛分介质 ,将毛细管电泳 激光诱导荧光鞘流检测系统成功地用于DNA片段及基因PCR扩增产物分离检测。

毛细管电泳分离-激光诱导荧光检测巴氯芬和加巴喷丁

采用新合成的6-氧-(N-琥珀酰亚胺乙酸酯)-9-(2'-甲氧羰基)荧光素(SAMF)作为柱前衍生试剂,用甘氨酸做内标,毛细管电泳分离-激光诱导荧光检测血清中的巴氯芬(baclofen)和加巴喷丁(gabapentin).研究表明,在磷酸盐缓冲溶液(pH=8)介质中,25℃下15 min即可完成衍生反应.以pH=5的30 mmol/L的磷酸盐缓冲溶液作为电泳介质,衍生产物在16 min内达到电泳基线分离,检出限为4×10-10 mol/L.将新建立的方法用于血清中巴氯芬、加巴喷丁的分析测定,回收率为95.5%～102.01%,结果令人满意.

毛细管电泳-激光诱导荧光用于肌肽类生物活性肽的分离检测

肌肽类生物活性肽是一类含组氨酸的二肽,广泛分布在脊椎动物体的骨骼肌以及神经组织中,具有抗氧化及保持生物体酸碱平衡等重要生物学功能.生物体液中这类物质的含量大小可以作为临床上诊断某些代谢疾病的依据[1,2].本文以3-(4-羰基苯甲酰基)-喹啉-2-羰醛(CBQCA)为柱前衍生试剂,对肌肽(Car)、鹅肌肽(Ans)和高肌肽(Hcar)进行了柱前衍生,建立了高效、灵敏的毛细管电泳-激光诱导荧光检测方法.……

毛细管电泳-激光诱导荧光法测定缺氧缺血新生大鼠脑组织中氨基酸

建立了新生儿缺氧缺血性脑病(H IE)发生时脑组织中兴奋性氨基酸(EAA)含量的高效毛细管电泳-激光诱导荧光检测(CE-LIF)的新方法。方法的最佳条件为:40 mmol/L硼砂溶液,分离电压20 kV,压力进样5 s,λem=488 nm、λex=560 nm。随机分为假手术组、新生儿缺氧缺血性脑病(H IE)组,小剂量地塞米松(DXM)组和大剂量DXM组的新生大鼠脑组织中EAA的含量测定,结果表明:假手术组EAA含量较低,H IE组EAA含量显著升高,大、小剂量DXM预处理后,EAA含量较H IE组有不同程度的降低。

毛细管电泳-激光诱导荧光法测定基因工程人细胞生成素的N-连接糖谱

目的 建立重组人红细胞生成素 (EPO)中影响体内生物学活性的含唾液酸和去唾液酸的N 连接糖的糖谱。方法 用肽糖苷酶F释放EPO中与天冬酰胺连接的寡糖 ,再用唾液酸酶脱去糖末端的唾液酸 ,采用荧光试剂APTS标记后 ,以毛细管凝胶电泳 激光诱导荧光法分离和检测糖的各种形态。结果 EPO样品含有大致相同的N 连接糖谱 ;去唾液酸后的N 连接糖组分的保留时间延长 ;体内生物学活性不同的样品 ,其N 连接糖也有差异。 结论此法可用于判断EPO产品的来源及批间差异 ,与肽图相结合可作为EPO的指纹鉴别图谱 。

毛细管电泳-激光诱导荧光法检测HSP70-2基因多态性研究

建立了HSP70-2基因多态性的毛细管电泳-激光诱导荧光（CE-LIF）检测方法。采用试剂盒法提取人血清标本中全基因组DNA作为模板,选择特异引物进行PCR扩增反应,产物用Pst I限制性内切酶酶切;酶切产物用高灵敏度的SYBR Gold荧光染料标记后,用毛细管电泳-激光诱导荧光法检测。在优化的毛细管电泳-激光诱导荧光条件下,酶切产物在25 min内即可完成检测。GeneRular 100bp DNA ladder在同一天内连续测定6次,迁移时间和峰面积的RSD分别为1.8%~2.9%和2.8%~7.9%;连续6日测定迁移时间与峰面积的RSD分别为2.1%~4.3%和3.5%~9.3%。本研究共检测200份样品,其中G/G分型3份,A/G分型25份,A/A分型172份,检测结果与凝胶电泳结果一致。CE-LIF检测方法具有电泳时间短、试样消耗少、绿色环保等优点,能用于HSP70-2基因多态性的检测。

STR遗传标记荧光复合扩增系统的法医学应用

目的:建立D20S601、D6S474、D6S2418荧光标记复合扩增体系,并对其进行法医学实用性研究。方法:利用传统复合扩增技术扩增D20S601、D6S474、D6S2418基因座,在不同条件下对复合扩增系统的同一性、灵敏性、可重复性等进行测试,用实际案例进行验证。结果:建立的D20S601、D6S474、D6S2418荧光标记复合扩增体系的扩增条件要求不高,法医实用性研究证明该体系实用性好。结论:建立了D20S601、D6S474、D6S2418遗传标记的荧光标记复合扩增体系。法医学应用性研究证明,该系统分型结果稳定,重复性好,灵敏度高,对陈旧斑痕具有检测能力,能够对常见介质上的斑痕正确分型,与常见的动物及微生物无交叉反应,可成功应用于法医检案。

毛细管电泳-激光诱导荧光法测定人参中铜和镉离子含量

目的:建立高效毛细管电泳-激光诱导荧光法(high performance capillary electrophoresis-laser induced fluorescence,HPCE-LIF)测定Cu^(2+)和Cd^(2+)含量的方法,并将其应用于中药材人参重金属的检测。方法:Cu^(2+)与Cd^(2+)通过与荧光络合剂异硫氰酸荧光素酯-偶氮乙二胺四乙酸(fluorescein isothiocyanate isomer I-Aminobenzyl ethylene diamine tetraacetic acid,FITCABEDTA)柱前络合后,以熔融石英毛细管柱(75μm×60.2 cm,有效长度50 cm)为分离通道,经1 mol·L^(-1)NaOH溶液调pH至9.3的0.1 mol·L^(-1)硼酸溶液-0.1 mol·L-1SDS溶液(38.5∶61.5)作为缓冲溶液,分离电压25 kV,检测波长520 nm,毛细管温度25℃,自动压力进样5 s。结果:人参样品中Cu^(2+),Cd^(2+)分离效果良好,并且对两者进行了标准曲线、精密度、重复性和加样回收率试验,在1~150,2~200μg·L^(-1)线性关系良好(r>0.999 2),两者精密度RSD均<2.0%,表明精密度良好;两者重复性RSD均<3.7%,表明重复性良好;两者加样回收率分别为103.30%,100.33%,RSD 2.5%,2.8%。结论:采用毛细管电泳-激光诱导荧光法测定中药材人参中特定重金属,方法可行,很好地解决了中药材重金属离子含量低且不易分离的问题,为中药材重金属离子的检测提供一种新的方便快捷准确的方法,并且相信经过不断探索和改进研究,HPCE-LIF法可用于中药材中更多重金属离子的同时检测。

新疆野扁桃TP-M13-SSR引物的多态性分析

以来自5个居群的96份新疆野扁桃叶片为试材,采用TP-M13-SSR技术和毛细管荧光电泳检测的方法,分析新疆野扁桃TP-M13-SSR引物的多态性,以期为该珍稀植物的保育工作提供参考依据。结果表明:新疆野扁桃TP-M13-SSR引物库中包含23 627条序列,共有5类重复类型,以二核苷酸类型数量最多,五、六核苷酸数量极少。将12对核心引物与96份样品一同扩增后,等位基因数(No.of allele)均为2个,有效等位基因数(Ne)、观测杂合度(Ho)、期望杂合度(He)、固定指数(F)、香农指数(I)、特异等位基因(Na)、多态性信息含量指数(PIC)、标记指数(MI)、Nei′s多样性指数、遗传相似性系数(Gst)、基因流(Nm)的范围分别为:3.531 0~9.000 0、0~0.666 7、0.72~0.89、0.25~1.00、1.48~2.44、8~18、0.669 0~0.879 0、5.35~15.82、0.219 5~0.430 8、0.002 0~0.042 6、34.756 0~252.196 4。这12对引物中,引物PT-9的多态性最好,引物PT-1多态性最差。

一种用于LIF&CE有效分离DNA片段的定量分析方法

为正确评估激光诱导荧光检测毛细管阵列凝胶电泳(LIF&CE)有效分离DNA片段及确保后续DNA鉴定的准确性,本文从实际电泳过程出发探索DNA片段长度与电泳迁移率的函数关系,研究解决因众多影响因素而造成的电泳迁移率实时变化问题,基于毛细管电泳迁移修正模型而设计了一种局部Southern方法。经理论分析和仿真实验结果证明,该方法非常适合于LIF&CE分离DNA片段的定量分析,可用于进行内标分子量定标与DNA片段大小识别,是一种稳定可靠、准确有效的定量分析方法。

新疆野扁桃TP-M13-SSR的引物开发研究

该试验自主设计新疆野扁桃TP-M13-SSR引物,从中筛选多态性最佳的引物以供后续研究使用。从该植物的5个居群中分别挑选2份叶片提取基因组DNA,扩增后的产物使用毛细管电泳荧光检测并分析。经分析可得出12对新疆野扁桃TP-M13-SSR引物的期望杂合值(He)、观测杂合值(Ho)、等位基因数目(Na)、香农指数(I)、固定指数(F)、多态性信息含量指数(PIC)的范围分别为0.656~0.859、0~0.281、3.796~9.580、4~8、1.213~2.014、-0.164~1、0.605~0.843。在所有以上引物中,引物PT-6除固定指数外的所有信息数据均为最高。共筛选出12对多态性信息丰富的TP-M13-SSR引物,扩增片段大小在100~300 bp之间,多为两碱基重复。

基于TaqMan实时荧光PCR技术快速筛查转基因玉米

随着全球转基因玉米种植面积日益扩大,快速筛查转基因玉米技术需求与日俱增。本研究以转基因玉米混合样品(1%,0.5%,0.1%,0.05%,0.01%)为试验材料,应用TaqMan real-time PCR和毛细管荧光检测电泳技术对转基因的2个元件CaMV35S启动子和NOS终止子进行检测。结果表明两种检测技术均可筛查玉米中转基因成分,TaqMan real-time PCR技术检测灵敏度可以达到0.01%,比毛细管电泳荧光检测技术高约50倍。TaqMan实时荧光PCR技术具有更简便、高效等特点,为快速筛查转基因玉米提供技术支持。

CE-LIF方法对重组人促红细胞生成素中N-寡糖的快速分析

目的:建立毛细管电泳-激光诱导荧光检测(CE-LIF)的方法对重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,rhEPO)的N-寡糖进行快速分析。方法:以N-糖苷酶酶切rhEPO样品,采用磁珠辅助法收集酶切下来的N-寡糖,以APTS对酶切下来的N-寡糖进行荧光标记,利用CE-LIF实现分离检测,通过GU数据库进行糖型鉴定。CE-LIF条件:采用未涂层熔融石英毛细管(有效长度20 cm,总长度30 cm,内径50μm),电迁移进样,电压设为-2 kV,进样时间2 s;毛细管分离温度设为25℃,毛细管分离电压为-30 kV,分离时间5.5 min;LIF检测器的激发波长及发射波长分别为488 nm和520 nm。结果:新建方法在60 min内完成样品前处理,5 min内完成分离分析检测;FA2BG2S2、FA2(3)G1S1和A2B3个峰的迁移时间的RSD均小于0.2%,校正峰面积百分比RSD均小于2.6%(n=5)。结论:本研究建立的CE-LIF快速糖分析法高效快速,重复性好,可对糖型进行实时鉴定,适用于rhEPO制品的N-寡糖分析。

Comparative study on different derivatization procedures for analysis of recombinant human erythropoietin by capillary electrophoresis with laser-induced fluorescence detection

Human erythropoietin （hEPO）, an endogenous glycoprotein, plays a fundamental role in erythropoiesis controlling the formation of red blood cells. Production of recombinant human erythropoietin （rhEPO） has made it possible for its abuse in competitive sports. In this work, pre-capillary and on-capillary derivatization by 5-furoylquinoline-3-carboxaldehyde （FQ） and fluorescein isothiocyanate （FITC） for the detection of rhEPO by capillary electrophoresis with laser-induced fluorescence detection （CE-LIF） were compared. FQ pre-capillary labeling improves sensitivity but degrades the glycoforms separation due to the inhomogeneity of the reaction products from multiple labeling. Compared with FITC pre-capillary derivatization with the excess fluorescent background, the on-capillary FQ derivatization method can provide shorter analysis time, lower background, and better selectivity. It is demonstrated that, through optimizing reaction conditions of FQ on-capillary derivatization, both high sensitivity and satisfactory resolution for the analysis of the be used for the glycoforms profiling and quality control of rhEPO doping control analysis. glycoforms of rhEPO could be obtained. This method can It may be used as a candidate method for fast screening in