人参RAPD指纹鉴定的毛细管PCR方法

本实验建立并优化了用毛细管PCR扩增人参RAPD指纹的反应体系，讨论了用毛细管PCR方法扩增RAPD指纹在中药材鉴别上的应用前景。

毛细管PCR检测HBV-DNA的临床应用

目的 建立一种特异性强、敏感性高的检测HBV-DNA的毛细管PCR诊断技术。方法 用新建立的毛细血管PCR检测92例感染HBV的患者血清标本及8例非肝病患者血清标本。结果 HBsAg及HBeAg同时阳性的病人血清中HBV-DNA的检出率100％,而HBsAg阳性、HBeAg阴性病人血清中HBV-DNA的检出率为34.8％,8例非肝病患者血清中HBV-DNA的检出率为12.5％。若操作20份标本,可在2h内报告结果。结论 采用毛细管PCR检测血清HBV-DNA具有快速、敏感、准确及操作简便等优点,适用于临床检验。

毛细管PCR技术的建立及其在传染病快速诊断上的应用

毛细管ＰＣＲ技术的建立及其在传染病快速诊断上的应用李建标，谭津，赖进祥，王春颖，朱美财，林万明临床实验科主题词聚合酶链反应，传染病，基因聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术的发展及其在传染病诊断上的应用，使传染病的基因诊断有了新的突破［１］。然而常规ＰＣＲ反应...

用毛细管PCR检测粪样中的FPLV和CPV

本文报道了一种可以检测和鉴别粪样中犬细小病毒(CPV)和猫泛白细胞减少症病毒(FPLV)的毛细管PCR。PCR引物对可以选择性地检测两种病毒保守区VP1/VP2基因的核苷序列。其依据是FPLV和CPV衣壳蛋白基因的核苷序列不同。PCR法的敏感性比培养法和HA法高10~2—10~4倍。

多重PCR毛细管电泳细菌快速鉴定方法的建立和临床应用研究

目的针对引起人类感染的常见病原菌建立一种基于多重PCR毛细管电泳技术的快速细菌鉴定方法,评估其临床应用价值。方法建立23种常见病原菌的多重PCR毛细管电泳检测体系。收集150例临床微生物检测标本,分别用多重PCR毛细管电泳法(以下简称多重PCR法)、培养法进行检测。对两种方法的检测结果进行比较,评价多重PCR法的检测效能。结果150例标本中多重PCR法检出15种病原菌、培养法检出14种病原菌。多重PCR法检测阳性率为73.3%,培养法为70.0%,差异无统计学意义(P>0.05)。多重PCR法对肺炎链球菌的检出率为16.0%,培养法为6.0%,差异有统计学意义(P<0.05)。多重PCR法对混合菌标本的检出率为15.3%,培养法未检出混合菌标本。多重PCR法与培养法检测结果的符合率为79.3%。多重PCR法检测时间为3~6 h,培养法为2~4 d。结论与培养法比较,多重PCR法具有较高的时效性,对肺炎链球菌及混合菌标本具有较高的检出率,可满足临床标本病原微生物快速初筛的需求。

塑料毛细管空气热循环PCR法获取人脾Ro、La多肽基因片段

利用塑料毛细管通过空气热循环PCR获取了人脾Ro和La多肽基因片段。该法高效省时，节省试剂，操作安全简便。

毛细管电泳RT-PCR方法在中国明对虾抗菌肽基因表达定量检测中的应用

建立了毛细管电泳RT-PCR检测基因表达谱的方法,并利用实时定量PCR技术对此方法进行基因表达定量的可靠性进行了验证.利用此新方法研究了弧菌和白斑综合征病毒(WSSV)感染对中国明对虾抗菌肽(penaeidin)基因mRNA表达的影响.结果表明,弧菌感染后对虾肽基因表达变化可分为三个阶段:迅速下调,缓慢回升,持续稳定.WSSV感染后对虾肽基因表达的变化显示出与弧菌感染组不同的变化趋势:迅速下调,迅速回升,再次下降.

PCR毛细管电泳法检测嗜水气单胞菌gyrB和16SrRNA基因：溺死诊断方法

目的建立嗜水气单胞菌gyr B和16SrRNA基因PCR毛细管电泳检测方法,探讨它们在淡水溺死诊断中的应用价值。方法提取人、18种浮游生物(白色念珠菌、嗜水气单胞菌及16种藻类),以及经微波消解-真空抽滤-电镜扫描法检测过的30例尸体(其中生前淡水溺死28例,陆地自然死亡2例)的组织样本的DNA(肺、肝、肾各1份/例),分别使用引物AH(gyr B基因)及引物Ah(16SrRNA基因)进行扩增,扩增产物用毛细管电泳法检测。结果人、白色念珠菌、16种藻类DNA扩增后毛细管电泳检测结果均为阴性,而嗜水气单胞菌结果均为阳性,其产物大小分别为195 bp,350 bp。分别利用引物AH和Ah对28例淡水溺死尸体样本肺、肝、肾进行PCR毛细管法进行检测,嗜水气单胞菌的检出率:AH分别为96.4%,71.4%,60.7%;Ah分别为75.0%,42.9%,32.1%,计算得到溺死者的体循环脏器中嗜水气单胞菌检验的总阳性率分别为82.1%,53.6%,2例陆地自然死亡案件尸体样本检测结果均为阴性。两对引物AH与Ah对嗜水气单胞菌检出率有显著性差异(P<0.05)。结论 PCR毛细管电泳法检测嗜水气单胞菌gyr B基因用于诊断淡水溺死灵敏度较高,可作为诊断的辅助性方法;联用16SrRNA基因可提高该菌的检出率,增强MDVF-Auto SEM法诊断淡水溺死的证据力。

利用荧光PCR⁃毛细管电泳法评价微卫星不稳定性检测国家参考品

目的利用荧光PCR⁃毛细管电泳法评价微卫星不稳定性(MSI)检测国家参考品,验证国家参考品用于相关试剂盒性能评价及临床实验室质量评价的适用性。方法采用3家不同公司的微卫星不稳定性检测试剂盒(荧光PCR⁃毛细管电泳法)对国家参考品进行阳性参考品符合率、阴性参考品符合率和检测限项目的检测。结果对国家参考品中的62例样本进行检测,其中阳性参考品的结果均为微卫星高度不稳定,阴性参考品的结果均为微卫星稳定,LOD1及LOD3的20%、10%检测限参考品均检出微卫星高度不稳定,但其5%检测限参考品有1家公司未检出相应的微卫星高度不稳定状态。LOD4、LOD5、LOD6及LOD7检测限参考品检测结果均为微卫星稳定或微卫星低度不稳定。结论微卫星不稳定性检测国家参考品,适用于荧光PCR⁃毛细管电泳法试剂盒的性能评价及临床实验室的质量评价。

应用多重竞争性PCR联合毛细管电泳技术进行脊髓性肌萎缩症携带者筛查

脊髓性肌萎缩症(spinal muscular atrophy,SMA)是一种常染色体隐性遗传、儿童致死性神经系统疾病。SMA致病基因为运动神经元存活基因(survival motor neuron1,SMN1)。虽然检测SMN1基因拷贝数的方法众多,但目前适于大规模人群筛查的技术较少。为寻求一种快速准确的实验技术可以用于人群中SMA携带者的大规模筛查,了解区域人群携带情况及常见变异的分布,本研究应用多重竞争性PCR联合毛细管电泳技术检测12例SMA患者及其父母SMN1基因拷贝数,同时对江苏地区151例健康孕妇人群SMN1基因进行拷贝数检测,并通过多重连接依赖探针扩增(multiplex ligation-dependent probe amplification,MLPA)技术验证检测结果。多重竞争性PCR联合毛细管电泳技术结果与MLPA结果一致,显示12例SMA患者均为SMN1基因零拷贝,其父母的SMN1基因拷贝数均为单拷贝,151例健康人群中检测出SMN1基因单拷贝3例(即SMA携带者),占2.0%;SMN1基因双拷贝134例,占88.7%;SMN1基因大于双拷贝14例,占9.3%。因此,多重竞争性PCR联合毛细管电泳技术作为一种快速、简便和准确的检测技术具有着应用于人群中SMA携带者的大规模筛查的潜力。

PCR方法检测食品中沙门氏菌研究进展

对目前出现的一些具有代表性的食品中沙门氏菌的PCR检测方法做一综述,由此可以得出,目前开发出的检测食品中沙门氏菌的PCR方法正逐渐以多种PCR方法相结合、多重PCR技术以及食品样品预处理方法等为主,以开发出更快速、灵敏、简便、实时、低廉的食源性沙门氏菌PCR检测方法。

从同一外周血标本制备总RNA和DNA

在基因水平的临床研究中,常需要从人外周血白细胞中提取染色体DNA,以研究其基因的缺陷,或者制备细胞总RNA,以研究某基因的表达。需要同时了解基因的结构改变和功能异常时,从一份病人外周血或骨髓中同时分离出染色体DNA和细胞总RNA,无论从标本的来源、提取简便等方面考虑都是临床分子生物学研究的一个很实际的问题。 由细菌或培养细胞中同时分离DNA和PNA的方法已有报道。郭传海等介绍一种从小量样本同时提取RNA和DNA的方法,其提取总RNA采用异硫氰酸胍超离心法。

错配修复蛋白和微卫星不稳定在结直肠癌中检测中的对比分析

目的 比较PCR-毛细管电泳法与IHC两种检测方法对微卫星状态判断的差异性与一致性,以期寻找到更适合临床广泛开展筛查的方法。方法 326例结直肠癌手术切除标本,IHC方法检测癌组织4种错配修复蛋白MMR蛋白的表达。选取其中68例标本用PCR毛细管电泳法检测6个微卫星位点。最后对比这68例患者两种检测结果的敏感性、特异性及一致性。结果 326例结直肠癌手术样本中,有29例IHC结果为dMMR,剩余297例为pMMR。将这29例dMMR标本全部进行PCR毛细管电泳法检测,另挑选297例pMMR中的39例标本进行PCR-毛细管电泳法检测,共计68例。68例标本检测结果显示高度微卫星不稳定(MSI-H)23例,低度微卫星不稳定(MSI-L)5例,微卫星稳定(MSS)40例。统计分析发现,IHC法检测的敏感度和特异性分别为96%和95%,PCR-毛细管电泳法检测的敏感度和特异性分别为93.1%和97.4%,两种方法的一致率达到95.6%。结论 IHC检测MMR蛋白和PCR-毛细管电泳法检测微卫星位点具有较高的一致性,由于IHC方法经济、便捷的特点,更适合在临床推广,因此可以作为临床初筛结直肠癌微卫星不稳定的一种方法。当存在任一MMR蛋白缺失或对有疑问的标本,可进行进一步的PCR-毛细管电泳检测。

厦门市1846例呼吸道病原检测分析

目的通过对呼吸道病原多重核酸检测结果进行分析,了解2019年3—8月厦门市呼吸道病原的流行规律,为临床疾病诊治提供依据。方法利用PCR毛细管电泳片段分析法,对1846份呼吸道感染患者咽拭子进行12种常见呼吸道病原的检测,计算检出各种呼吸道病原的阳性率和混合感染情况,比较不同月份、年龄患者常见呼吸道病原检出阳性率的差异性。结果在1846份样本中,呼吸道常见12种病原总阳性率为65.2%,其中肺炎支原体和腺病毒检出阳性率最高,分别为24.4%和24.1%。混合感染389例,占总阳性检出病例的32.3%。按月份分析,3—8月份总阳性数呈上升趋势,但不同病原有不同的流行规律。按年龄组分析,不同的病原流行规律不同。结论肺炎支原体和腺病毒为厦门市呼吸道感染的主要病原体。呼吸道病原的检出存在时间和年龄的差异。呼吸道病原体多重核酸检测在临床的应用,有助于呼吸道感染患者的早期诊治。

180例不明原因智力障碍儿童的脆性X综合征检出情况

目的通过检测脆性X智力低下1(FMR1)基因突变情况,分析不明原因智力障碍儿童的脆性X综合征(FXS)检出情况。方法纳入180例不明原因智力障碍儿童,采用PCR微流控毛细管电泳技术对其及部分FMR1基因突变患儿家系成员进行FMR1基因突变分析,并采用Southern印迹杂交法进行验证。结果在180例智力障碍儿童中,共检出FMR1基因全突变型4例、中间型1例、正常型175例,FXS的检出率为2.22%(4/180);正常型最常见的CGG重复次数是28次和29次。4例全突变型病例中,家系1先证者CGG重复数为190/248/370次,母亲为25次和134次,妹妹为39次和148/218/554次,姨妈为29次和29次;家系2先证者CGG重复次数为859次;家系3先证者CGG重复次数为529次,母亲为31次和76次,姐姐为29次和130次;家系4先证者CGG重复次数为525次。4例FMR1基因全突变型病例样本经Southern印迹杂交法验证,结果都显示有>5.8 kb条带(全突变条带),两种方法基因分型结果完全一致。结论在不明原因智力障碍儿童中存在一定比例的FXS患儿。PCR微流控毛细管电泳技术高效、快速,适合用于智力障碍人群FXS大规模筛查,有助于避免该病患儿的出生。

脆性X综合征快速基因诊断方法的研究

据《中华儿科杂志》1996年9月34卷第5期报道 为建立脆性X综合征的快速直接基因诊断方法,武汉同济医科大学附属协和医院儿科金润铭等,采用毛细管聚合酶链反应(PCR)-序列胶银染法,对68例正常个体、3个脆性X综合征家系。