Hippo信号通路对毛细胞损伤及再生的研究进展

Hippo信号通路在进化上高度保守,对控制细胞增殖及分化、调控组织大小、损伤修复等过程起重要作用。研究发现,Hippo信号通路在毛细胞中表达,该通路主要成员的活性和表达可调控毛细胞内炎症因子的表达、氧化物水平、毛细胞增殖等过程。哺乳动物中,毛细胞损伤后可导致不可逆性感音神经性听力损失。在减少毛细胞损伤基础上,诱导支持细胞和感觉上皮细胞增殖和转分化,以及干细胞转化,从而实现毛细胞再生,是目前感音神经性听力损失的治疗策略。本综述对Hippo信号通路在毛细胞损伤及再生中发挥作用的研究进行梳理,以期为实现毛细胞再生提供新思路。

电针治疗调节miR-183对噪声性耳聋模型耳蜗毛细胞VEGF表达的影响

目的:探讨电针治疗调节miR-183对噪声性耳聋(NIHL)模型耳蜗毛细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响与作用机制。方法:将雄性SD大鼠随机均分为空白对照组、NIHL组、NIHL+针刺组、NIHL+针刺+腺病毒(AAV)-NC组和NIHL+针刺+AAV-sp-miR-183组。针刺组取中渚穴进行刺激。利用AAV载体在NIHL大鼠中敲低miR-183。各组大鼠进行听觉脑干反应(ABR)评估与毛细胞计数。qRT-PCR分析大鼠耳蜗组织miR-183水平。蛋白质免疫印迹测定VEGF水平。结果:与对照组相比,NIHL组耳蜗组织中miR-183的水平降低,ABR阈值差与毛细胞的缺失率升高,耳蜗毛细胞VEGF表达的水平升高(P<0.05)。与NIHL组相比,NIHL+针刺组耳蜗组织中miR-183的水平上升,ABR阈值差与毛细胞的缺失率降低,耳蜗毛细胞VEGF表达的水平升高(P<0.05)。NIHL+针刺+AAV-sp-miR-183组与NIHL+针刺+AAV-NC组相比,miR-183的水平降低,ABR阈值差与毛细胞的缺失率升高,耳蜗毛细胞VEGF表达的水平降低(P<0.05)。结论:电针治疗可以通过上调miR-183进而促进NIHL大鼠耳蜗毛细胞VEGF的表达,降低噪音诱导的NIHL大鼠ABR阈值差增高与毛细胞损伤。

红景天苷改善顺铂引起的小鼠耳蜗毛细胞和螺旋神经节神经元损伤的机制

目的探究红景天苷(SAL)改善顺铂(CIS)引起的耳蜗毛细胞(CHC)和螺旋神经节神经元(SGN)损伤的作用及其与环磷腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)/cAMP效应元件结合蛋白(CREB)通路的关系。方法分离新生C57BL/6小鼠的耳蜗基底膜,分为对照组(C组)、CIS组、SAL组、SAL+SQ22536(cAMP抑制剂)组和SAL+H-89(PKA抑制剂)组,每组20条。C组仅加入无血清BME培养液;CIS组在培养液中加入15μmol/L CIS;SAL组在CIS组基础上加入5μmol/L SAL;SAL+SQ22536组在CIS组基础上加入5μmol/L SAL和5μmol/L SQ22536;SAL+H-89组在CIS组基础上加入5μmol/L SAL和30μmol/L H-89。各组在培养箱中孵育48 h后,免疫荧光染色观察各组CHC和SGN损伤;试剂盒检测各组耳蜗基底膜中ROS和cAMP含量;Western blot检测各组PKA、p-CREB、CREB、Bcl-2、BDNF、NF-M蛋白水平。结果CIS组CHC排列混乱、体积肿大,SGN细胞核破碎、神经突缺失,SAL可减轻CHC和SGNs损伤。与C组相比,CIS组CHC、SGN数量较少(P<0.05),ROS、cAMP含量、PKA、BDNF、NF-M、Bcl-2蛋白及p-CREB/CREB水平较高(P<0.05);与CIS组相比,SAL组CHC、SGN数量较多(P<0.05),ROS含量较低(P<0.05),cAMP含量、PKA、BDNF、NF-M、Bcl-2蛋白及p-CREB/CREB水平较高(P<0.05)。SQ22536和H-89均可逆转SAL对CHC和SGN的保护作用。结论SAL可能通过激活cAMP/PKA/CREB通路,促进抗凋亡蛋白和神经保护因子表达,缓解CIS引起的CHC和SGN损伤。

多参数MRI在小儿毛细胞型星形细胞瘤的诊断价值研究

目的:探究多参数磁共振成像(multi-parameter magnetic resonance imaging,mp-MRI)在小儿毛细胞型星形细胞瘤的诊断价值。方法:回顾性分析2018年9月至2023年9月医院收治30例疑似毛细胞型星形细胞瘤患儿临床资料。患儿入院后均接受磁共振成像技术(magnetic resonance imaging,MRI)检查,疾病得到病理诊断证实。以病理诊断结果为“金标准”评估常规MRI(T1WI+T2WI)、双参数MRI(biparametric magnetic resonance imaging,bp-MRI)(T1WI+T2WI+DWI)、mp-MRI(T1WI+T2WI+DWI+DSC-PWI)对小儿毛细胞型星形细胞瘤的诊断效能,并进行对比分析。结果:病理诊断结果显示30例患儿中24例为小儿毛细胞型星形细胞瘤;常规MRI、bp-MR、mp-MRI对小儿毛细胞型星形细胞瘤诊断的阳性预测值分别为73.68%、90.00%、95.83%,阴性预测值分别为9.09%、40.00%、83.33%,灵敏度分别为58.33%、75.00%、95.83%,特异度分别为16.67%、66.67%、83.33%,准确度分别为50.00%、73.33%、93.33%;三组方法灵敏度、准确度差异有统计学意义(P>0.05)。结论:小儿毛细胞型星形细胞瘤临床诊断过程中,采用mp-MRI可获取较高诊断效能,可为患儿精准治疗提供可靠影像学检查依据。

1-苯基2-硫脲通过p53调控自噬活性来保护斑马鱼神经丘毛细胞

为了确定细胞自噬与毛细胞存活的关系,通过溶酶体标记物Lyso Tracker对神经丘的细胞自噬进行活体染色发现,斑马鱼(Danio rerio)经过苯基硫脲(PTU)处理后,其神经丘毛细胞Lyso Tracker信号强度增加,并伴随毛细胞数量增多和肿瘤抑制蛋白p53基因(Tumor protein p53 gene,tp53)上调。为了阐明毛细胞的存活和保护机制,通过CRISPR/Cas9技术构建了tp53突变体斑马鱼,发现该基因突变后不会影响斑马鱼神经丘毛细胞的数量,但抑制了PTU对神经丘毛细胞自噬的促进,神经丘毛细胞不再增多。研究结果表明:PTU可以通过上调tp53基因的表达,促进斑马鱼侧线神经丘毛细胞的自噬活性,进而促进毛细胞的存活,为保护毛细胞奠定了重要基础。

内耳毛细胞发育与再生关键转录因子的研究进展

内耳毛细胞损伤是感音神经性耳聋和外周性眩晕发生的重要原因之一,由于哺乳动物内耳毛细胞损伤后无法完全再生,因此无法从根本上恢复受损的听力和前庭功能。通过调节与内耳毛细胞发育和成熟相关的关键转录因子,有望实现毛细胞的功能性再生。参与毛细胞发育与再生的转录因子繁多,本文总结了目前毛细胞发育与再生研究领域中涉及的关键转录因子及其相互关系,旨在为未来内耳毛细胞再生研究提供新策略。

利妥昔单抗联合克拉屈滨治疗毛细胞白血病变异型1例

毛细胞白血病变异型(hairy cell leukemia variant,HCL-V)是一种罕见的B细胞慢性淋巴增殖性疾病,发病的中位年龄为71岁,男女比例6∶1,中位生存期9年,在2008年世界卫生组织淋巴肿瘤分类中暂定为脾B细胞淋巴瘤/白血病不能分类,认为和毛细胞白血病(hairy cell leukemia,HCL)在生物学上不再有关联,2016年版分类维持原状[1-2]。HCL-V缺乏特异性临床表现和生物分子标志物,容易误诊,此次报道1例利妥昔单抗联合克拉屈滨治疗HCL-V,并进行相关文献回顾。

手术联合贝伐单抗治疗罕见成人小脑半球毛细胞黏液型星形细胞瘤1例并文献复习

目的 探讨成人小脑毛细胞黏液型星形细胞瘤(PMA)的临床特点、手术治疗、放化疗干预及其预后。方法 回顾分析新疆医科大学第一附属医院神经外科2021年4月收治的1例成人小脑半球PMA的临床资料,并结合相关文献进行复习。手术方法采用旁正中入路肿瘤次全切,术后复发给予贝伐单抗化疗干预。结果 患者头颅核磁共振成像(MRI)示右侧小脑半球及脑干偏右缘团状异常占位。术后病理结果显示细胞黏液型星形细胞瘤。术后同步放化疗干预,患者术后7个月复发,规律2周期贝伐单抗治疗后无明显进展,再次复查MRI示肿瘤体积明显减少,行第3周期化疗,术后1年随访临床症状无明显进展。结论 成人小脑PMA罕见,手术以全切为目标,无法全切术后应及时放化疗干预,贝伐单抗治疗有效。

毛细胞型星形细胞瘤116例临床病理及分子遗传学特征分析

目的探讨毛细胞型星形细胞瘤(PA)临床病理及分子遗传学特征,分析预后相关因素。方法回顾性分析116例PA患者临床病理随访资料及治疗信息,分析各指标预后意义。结果116例PA主要临床表现为头晕头痛和共济失调。免疫组化结果显示GFAP、Olig-2、ATRX、S-100阳性表达,IDH1阴性表达,NeuN大部分阴性表达,Ki-67增殖指数低,p53蛋白呈弱阳性或阴性表达,1p/19q绝大部分无缺失。KIAA1549-BRAF融合基因阳性率在年龄和肿瘤部位的差异有统计学意义(P<0.05)。Log-rank单因素分析结果显示,肿瘤切除率是影响本组患者PFS的主要因素(P<0.05),年龄,性别,肿瘤部位、KIAA1549-BRAF融合基因对生存率的影响无统计学意义。Cox回归分析结果显示,肿瘤切除率仍是影响PFS的独立危险因素(P<0.05)。结论手术完整切除是PA首选治疗方式。分子遗传学特征及正确的组织形态学判断对于PA的精确诊断具有重要作用。

microRNA-183调节 FOXO1 对听觉毛细胞再生作用机制研究

目的探讨microRNA-183(miR-183)对斑马鱼内耳生长发育的影响,及其在顺铂损伤内耳神经丘毛细胞及耳囊、耳石后的再生和生长发育中的作用。方法利用显微注射技术向斑马鱼受精卵内分别注入miRNA模拟物(agomir)或反义吗啉寡核苷酸(MOs),初步构建miR-183过表达或低表达模型,然后将受精后第72 h斑马鱼浸泡在50μmol/L顺铂溶液中24 h完成最终建模。利用miRNA微阵列分析、RT-qPCR等技术检测miR-183和FOXO1基因表达的改变;通过FM1-43FX荧光染色了解内耳神经丘毛细胞损伤及再生情况;使用正置显微镜观察耳囊、耳石生长发育变化。结果①顺铂作用后斑马鱼内耳毛细胞受损且耳囊、耳石生长发育受阻;移除顺铂后内耳毛细胞可再生,耳囊、耳石生长发育也逐渐恢复。②miR-183在移除顺铂后被激活,是斑马鱼幼体miRNA中最有表达差异的成员之一(P<0.001),且表达量持续上调至峰值后逐渐恢复至正常水平。③与对照组相比,移除顺铂后过表达miR-183组可促进内耳毛细胞数量和耳囊耳石面积的恢复(P<0.01);低表达miR-183组则使其恢复受到抑制(P<0.05)。④移除顺铂作用后FOXO1被激活,表达量上调(P<0.01);当过表达miR-183时FOXO1受到抑制,表达下调(P<0.01);低表达miR-183时FOXO1则表达量上升(P<0.01)。结论miR-183与移除顺铂作用后内耳毛细胞的再生、耳囊耳石面积生长发育的恢复呈正向调控关系,其机制可能与miR-183对FOXO1的负向调控有关。

不同种属实验动物耳蜗毛细胞年龄相关性缺失的不同模式

目的展示自然衰老和耳聋相关基因遗传缺陷之间耳蜗毛细胞缺失的不同模式。方法用不同龄的长尾猴、南美栗鼠、豚鼠、Sprague-Dawley大鼠、CBA/CaJ小鼠、C57BL/6J小鼠、A/J小鼠、DBA/2J小鼠和侏儒灰色突变纯合子(dwg/dwg)小鼠作为受试对象。所有测试动物的耳蜗基底膜都被制作成平坦的耳蜗基底膜铺片。沿着耳蜗基底膜的全长,基底膜上所有的内外毛细胞都被完整计数,毛细胞的计数结果被输入到耳蜗图软件并自动生成每组实验条件的平均耳蜗图。结果在天然衰老的动物中,耳蜗毛细胞的缺失总是发生在老年阶段。与此不同的是,在耳聋相关基因缺陷的动物中,耳蜗毛细胞的缺失却是发生在青年阶段甚至幼年阶段。发生在天然老化动物的耳蜗毛细胞缺失总是呈均匀分布或从耳蜗的顶回向底回扩展。但是,发生在具有耳聋相关基因遗传缺陷动物的耳蜗毛细胞缺失却通常表现为从耳蜗的底回向顶回扩展。结论本实验观察结果表明,发生在天然衰老的不具备耳聋相关基因缺陷动物身上的年龄相关性耳蜗毛细胞缺失反映的是真正由衰老引起的耳蜗退化性病变,而发生在伴有耳聋相关基因遗传缺陷的年幼动物身上的年龄相关性耳蜗毛细胞缺失可能与耳聋相关基因的遗传缺陷有关。

儿童毛细胞型星形细胞瘤术后综合治疗研究进展

毛细胞型星形细胞瘤(PA)是最常见的儿童低级别脑肿瘤,常见于视神经、视交叉、下丘脑、脑干、小脑和大脑等部位。PA往往边界清楚、生长缓慢,属于WHO I级肿瘤,手术切除是治疗的首选方案。然而,由于视神经、视交叉、下丘脑或脑干等处神经功能的重要性,手术不一定能做到全切。目前临床对于儿童PA术后的治疗方案尚无定论,国内外对于儿童PA术后的主要治疗方式包括放疗、化疗、靶向治疗和随访观察。随着影像学和放射技术的进步,除了传统分次放疗,还包括适形放疗、立体定向放射治疗和质子治疗。但目前多数学者尚不推荐将放疗作为儿童PA术后的一线治疗选择。以长春新碱联合卡铂的化疗方案是进展性PA的首选,伊立替康-贝伐单抗可作为二线治疗用药。靶向治疗的发展如火如荼,以丝裂原活化蛋白激酶(MEK)抑制剂为首的靶向药物因其更少的毒副反应和良好的疗效而有望在未来成为儿童PA术后的一线用药,但目前尚缺乏高级别的临床证据。随访观察是儿童PA术后的选择之一,有学者提出儿童PA的分层治疗方案,推荐低风险层患者于术后随访观察。该文对儿童PA术后综合治疗进展作综述报道。

二甲胺四环素拮抗新霉素致小鼠耳蜗外毛细胞损伤的机制研究

目的通过体内实验探究二甲胺四环素对新霉素导致外毛细胞损伤的保护作用及其机制。方法选用C57小鼠45只,雌雄不限,将小鼠随机分为对照组,新霉素处理组及新霉素+二甲胺四环素处理组,每组15只,测试3组小鼠听性脑干反应(auditory brainstem response,ABR)阈值;通过免疫荧光染色,比较3组外毛细胞存活情况;采用cleaved caspase-3染色及原位末端标记法(TdT-mediated dUTP-nick end labeling assay,TUNEL)染色,比较3组外毛细胞凋亡情况。结果新霉素+二甲胺四环素处理组ABR阈值在各个频率均显著低于新霉素处理组,且ABR阈值在各个频率比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。基底膜铺片显示,二甲胺四环素处理能显著减轻新霉素导致的外毛细胞损失。在对照组基底膜中,未检测到cleaved caspase-3和TUNEL阳性细胞;新霉素处理组,cleaved caspase-3和TUNEL阳性细胞数量显著上升;新霉素+二甲胺四环素处理组,cleaved caspase-3和TUNEL阳性细胞数量显著下降。结论二甲胺四环素对新霉素导致的外毛细胞损伤具有显著的保护作用,且这种保护作用是通过抑制外毛细胞凋亡通路而介导的。

毛细胞型星形细胞瘤与毛细胞黏液型星形细胞瘤的异同

结合中间型毛细胞黏液样星形细胞瘤的形成,对毛细胞型星形细胞瘤(PA)和毛细胞黏液型星形细胞瘤(PMA)的历史演变、组织学及基因表达、临床预后、影像学表现进行综述。毛细胞型星形细胞瘤归类为局灶性星形细胞胶质瘤,突出其更为坚实的生长模式。毛细胞黏液型星形细胞瘤是毛细胞型星形细胞瘤的一种变异,毛细胞黏液型星形细胞瘤与毛细胞型星形细胞瘤之间有着非常密切的关系。

柴胡皂苷A对噪声诱发听力损失小鼠受损毛细胞及氧化应激的影响

【目的】探讨柴胡皂苷A对噪声诱发听力损失小鼠的干预作用及机制。【方法】将45只C57BL/6小鼠随机分为正常组、噪声暴露组、柴胡皂苷A组,每组15只。柴胡皂苷A组接受噪声暴露的同时给予柴胡皂苷A 10.0 g·kg^(-1)·d^(-1)灌胃;噪声暴露组接受噪声暴露,给予等体积生理盐水灌胃;正常组不接受噪声暴露,给予等体积生理盐水灌胃。每日1次灌胃,连续4周。给药结束后,检测小鼠听力脑干反应(ABR),采用Hoechst荧光染色法和扫描电镜分别对应观察耳蜗毛细胞数量、形态,采用8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)免疫荧光染色法观察耳蜗组织氧化应激损伤情况,Western Blot法检测耳蜗组织4-羟基壬烯醛(4-HNE)及3-硝基酪氨酸(3-NT)表达。【结果】(1)与正常组比较,噪声暴露组小鼠ABR域值明显增加(P<0.001);与噪声暴露组比较,柴胡皂苷A组小鼠ABR域值明显降低(P<0.01)。(2)正常组小鼠耳蜗毛细胞核完整、纤毛排列有序;噪声暴露组耳蜗毛细胞核部分丢失,纤毛出现倾斜、部分破裂;柴胡皂苷A组耳蜗毛细胞核完整性、纤毛形态较噪声暴露组得到明显改善。(3)与正常组比较,噪声暴露组小鼠耳蜗毛细胞中8-OHdG及耳蜗组织4-HNE、3-NT表达水平明显升高(P<0.001);与噪声暴露组比较,柴胡皂苷A组小鼠耳蜗毛细胞中8-OHdG及耳蜗组织4-HNE、3-NT表达水平明显降低(P<0.01)。【结论】柴胡皂苷A可有效干预小鼠噪声性听力损失,其机制与抑制氧化应激、保护耳蜗毛细胞有关。

79例毛细胞肿瘤的组织学分类及临床病理分析

目的观察中间型毛细胞黏液样肿瘤(intermediate pilomyxoid tumor,IPMT)、毛细胞黏液样星形细胞瘤(pilomyxoid astrocytoma,PMA)和毛细胞星形细胞瘤(pilocytic astrocytoma,PA)的临床病理学特征。方法回顾性分析79例毛细胞肿瘤,按照WHO(2007)中枢神经系统肿瘤分类标准重新诊断,结合其临床病理学特征进行对比分析。结果 67例为典型PA,1例为典型PMA,11例为IPMT。男性患者均多于女性,IPMT患者平均年龄大于PMA,明显小于PA,三者病变部位相似。镜检:PMA由形态单一的双极梭形细胞以血管为中心生长,间质内见大量黏液,未见Rosenthal纤维或嗜酸性颗粒小体;PA均可见Rosenthal纤维和嗜酸性颗粒小体;IPMT则具有PMA的大量黏液,形态单一的双极小肿瘤细胞且呈假菊形团样生长,具有PA的Rosenthal纤维和嗜酸性颗粒小体特征,可见多量微囊。三者均可复发。结论 IPMT确实存在且数量不少,PA、PMA和IPMT在组织学上有联系。

豚鼠耳蜗毛细胞的定量观察

用琥珀酸脱氢酶染色法耳蜗软铺片和电子计算机图像分析技术测量了豚鼠耳蜗基底膜的长度钩回为2.72±0.56mm,第一回7.67±0.53mm,第二回4.97±0.40mm,第三回3.74±0.52mm,第四回2.91±0.40mm。耳蜗基底膜的平均总长度22.04±0.93mm。内毛细胞总数为2228个,外毛细胞为7668个。毛细胞的数目和耳蜗基底膜长度之间存在着线性关系。毛细胞的分布规律是耳蜗内外毛细胞各回的数目由钩回到第二回逐渐增加,而由第二回到第四回逐渐减少。对毛细胞自然缺失率由钩回到第四回分别为0.45％、0.26％、0.40％、0.50％、1.86％,内毛细胞自然缺失比较少见。

CT、MRI检查对儿童毛细胞型星形细胞瘤的诊断价值

目的探讨CT、MRI检查对儿童毛细胞型星形细胞瘤(PA)的诊断价值。方法选取107例疑似PA患儿,均接受CT、MRI检查,以病理检查结果为金标准,评估CT、MRI检查对PA的诊断价值。结果病理检查结果显示,107例患者中阳性85例,阴性22例。CT检查诊断PA的灵敏度、特异度、准确度分别为67.06%、40.91%、61.68%,与病理检查结果的一致性一般(Kappa=0.541,P﹤0.01);MRI检查诊断PA的灵敏度、特异度、准确度分别为78.82%、77.27%、78.50%,与病理检查结果的一致性一般(Kappa=0.608,P﹤0.01)。CT检查诊断PA的特异度和准确度均低于MRI检查,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。结论MRI检查诊断PA的价值较高,诊断特异度和准确度均高于CT检查。

Atoh1调控毛细胞再生与分化的研究进展

哺乳动物耳蜗毛细胞受损后无法再生,从而造成听力障碍。Atoh1是bHLH转录因子家族中的一员,是正性调控毛细胞再生与分化的关键因子之一。研究发现,Atoh1可与其上游调控基因(Eya1、Six1、Sox2)和下游调节基因(Gfi,Pou4f3,Barhl1)协同作用,调节多种细胞信号转导通路(如Notch,Wnt/β-catenin,SHH,FGF等),诱导耳蜗毛细胞再生。干细胞具有分化成毛细胞样细胞的潜能,该过程依赖Atoh1的表达。因此,调控Atoh1依赖性耳祖细胞或干细胞的定向分化,将为毛细胞损害的临床治疗提供新途径。

ATOH1相关的毛细胞再生新进展

耳聋已成为全球主要的健康问题之一,越来越多的人受其困扰。听觉系统中耳蜗毛细胞扮演着重要角色,毛细胞损伤后不可自发再生,当毛细胞损伤或死亡累积到一定数量时,也就会导致永久性的感音神经性耳聋。一直以来毛细胞的损伤、生长发育、再生机制是本领域的研究热点。ATOH1基因过表达产生毛细胞样细胞,但还未能成功再生正常功能的毛细胞,ATOH1与多基因联合表达是未来毛细胞再生研究的关键,本文就ATOH1与其他基因共同表达时的毛细胞再生进展进行讨论。