黄芪提取物对体外高糖培养牛视网膜毛细血管周细胞的影响

目的:观察中药黄芪提取物对体外高糖培养牛视网膜毛细血管周细胞(pericyte,PC)的影响。方法:在体外高糖(20mmol/L)培养2d的第3代周细胞中加入不同浓度的黄芪提取物,继续培养2d,用MTT比色法,测定每组的吸光度值(A值),根据A值计算抑制率。另在周细胞中加入0.4g/L黄芪提取物,2d后收集细胞,用流式细胞仪测定凋亡细胞百分率。结果:黄芪提取物0.0256～10000mg/L浓度组对高糖培养周细胞的增殖有促进作用,其A值与空白对照组相比有显著性差异(P<0.05)。在周细胞以20mmol/L葡萄糖培养48h后,加入400mg/L黄芪提取物组的细胞凋亡百分率低于空白对照组和模型组(12.2%±1.5%vs7.30%±2.0%,18.6%±2.1%P<0.05)。结论:黄芪能抑制周细胞凋亡,提高体外高糖培养视网膜毛细血管周细胞的存活力。

醛糖还原酶抑制剂和肌醇对糖尿病视网膜毛细血管周细胞的保护作用

目的观察醛糖还原酶抑制剂和肌醇对实验性糖尿病大鼠视网膜病变毛细血管周细胞的保护作用。方法给链脲佐菌素诱发的糖尿病大鼠分别管饲醛糖还原酶抑制剂或肌醇,于实验6个月末进行视网膜毛细血管消化铺片及透射电镜观察。结果糖尿病组的视网膜可见毛细血管内皮细胞/周细胞比值升高、无细胞毛细血管形成、周细胞线粒体肿胀、内皮细胞增生和毛细血管基底膜增厚;管饲醛糖还原酶抑制剂组的视网膜血管形态无明显改变;但管饲肌醇组的视网膜血管改变较管饲醛糖还原酶抑制剂组明显。结论醛糖还原酶抑制剂可有效预防实验性糖尿病性视网膜病变的形态学改变,肌醇能部分阻止视网膜形态学异常的发生。

高血压合并糖尿病大鼠心肌毛细血管周细胞的观察

目的:本研究利用免疫组织化学方法和电镜观察高血压、糖尿病和高血压合并糖尿病对心肌毛细血管周细胞的影响,探讨周细胞在高血压合并糖尿病并发心肌微血管病时的作用。方法:SD大鼠和自发性高血压大鼠(SHR)分别腹腔注射链脲佐菌素结合高能量饲料喂养,复制糖尿病和SHR合并糖尿病模型。动物分为4组:正常SD大鼠组(SD组)、自发性高血压大鼠组(SHR组)、糖尿病组(DM组)与SHR合并DM大鼠组(SHDM组)。16周后透射电镜观察心肌毛细血管周细胞超微结构,α-SMA免疫组织化学染色测定周细胞数量。结果:电镜下,SHR、DM和SHDM组心肌毛细血管周细胞多见,大小不一,胞浆富含细胞器及肌丝,与内皮细胞联系松散。免疫组化结果表明SHR、DM和SHDM组大鼠心肌毛细血管周细胞数均较SD组大鼠显著增多,SHDM组(11.8±3.6)个/视野较SHR组(3.9±1.1)个/视野增多非常显著(P<0.01),但与DM组(10.2±3.3)个/视野比较无显著差异(P>0.05)。结论:高血压合并糖尿病时周细胞表型发生改变,且数量增多,这些变化可能在心肌毛细血管肌化及毛细血管旁纤维化中起重要作用。

牛视网膜毛细血管周细胞的选择性培养

目的:探讨牛视网膜毛细血管周细胞(pericyte,PC)的体外选择性培养方法。方法:结合视网膜微血管的消化分离,采用含200mL/L胎牛血清的DMEM培养基选择性培养PC,以免疫组织化学染色进行细胞鉴定。通过相差倒置显微镜观察原代PC的形态、生长特性以及与血管碎片之间的关系。结果:通过选择性培养获得的PC的纯度达到98%以上,并能连续传代。PC早期多散布在距血管碎片稍远处,形状不规则。结论:选择性培养的应用可获得较高纯度的PC,简单且具有良好的重复性,无需额外步骤来除杂。

高浓度葡萄糖对视网膜毛细血管周细胞的影响

目的 观察高浓度葡萄糖对体外培养的视网膜毛细血管周细胞的影响 ,探讨糖尿病视网膜病变 (DR)的发病机制。方法 以新鲜牛眼球为材料 ,分离并培养周细胞 ;控制培养液中葡萄糖的浓度 ,采用形态学观察、乳酸脱氢酶 (L DH)的测定、3H- Td R掺入法及液体闪烁技术 ,研究高糖对周细胞的作用。结果 周细胞在高糖 (10、2 0、40 mmol· L- 1 )培养液及不同培养时间 (4 8、96 h)下 ,L DH水平与对照组 (生理浓度葡萄糖 ,5 mm ol· L- 1 )比较无显著性差异 (P>0 .0 5 )。3H- Td R掺入法研究结果显示 ,高糖 (分别培养 48、96、144 h)对周细胞的增殖有明显抑制作用 ,随时间延长和葡萄糖浓度升高 ,抑制率增长 ,其中 40 m mol· L- 1葡萄糖培养 144 h对周细胞的抑制率达 78.0 9% .结论 高浓度葡萄糖对体外培养周细胞的增殖有明显抑制作用 ,并随葡萄糖浓度升高和时间延长 。

VitC对高糖下视网膜毛细血管周细胞增殖的影响

目的 观察 Vit C对高糖下体外培养视网膜毛细血管周细胞增殖的影响 ,探讨糖尿病视网膜病变 (DR)的防治方法。方法 以新鲜牛眼球为材料 ,分离并培养周细胞 ;采用3H- Td R掺入法及液体闪烁技术 ,研究不同浓度的 Vit C(5 0 ,1 0 0 ,5 0 0 ,1 0 0 0 ,1 5 0 0 mg/ L)对周细胞增殖的影响。结果 5 0 0 ,1 0 0 0 mg/ L的 Vit C对生理浓度葡萄糖 (5 mmol/ L)下周细胞的增殖没有影响 ,大剂量 Vit C(5 0 0 ,1 0 0 0 ,1 5 0 0 mg/ L)加入高糖 (2 0 mmol/ L)培养液中培养周细胞 48h,对周细胞的增殖有明显促进作用。结论 大剂量 Vit C可促进高糖下周细胞的增殖 ,提示 Vit C可作为临床防治

脱氢异雄酮对高糖下视网膜毛细血管周细胞增殖的影响

目的 研究脱氢异雄酮 (DHEA)对高糖下视网膜毛细血管周细胞增殖的影响。方法 以新鲜牛眼球为材料 ,分离并培养周细胞 ;采用 3H- Td R掺入法及液体闪烁技术 ,研究不同浓度的 DHEA(10、5 0、10 0、5 0 0、10 0 0 nmol/L)对周细胞增殖的影响。结果 高浓度葡萄糖 (2 0 mmol/L)培养液中加入 DHEA(5 0、10 0、5 0 0、10 0 0 nmol/L)培养周细胞 48小时 ,周细胞的增殖与对照组比较均有显著性差异 ,其中 DHEA为 5 0 0 nmol/L时对周细胞增殖的促进作用最大 (增殖率为42 .6 7% )。结论 DHEA可促进高糖下周细胞的增殖 ,这为筛选临床防治糖尿病视网膜病变的有效药物提供了可靠的依据。

不同剂量血小板源性生长因子-B及黄芪注射液对体外高糖培养大鼠视网膜毛细血管周细胞的影响

目的观察不同剂量的血小板源性生长因子-B(PDGF-B)、不同剂量的黄芪注射液以及两者合用对体外高糖培养大鼠视网膜毛细血管周细胞(RMPs)生长的影响。方法取体外培养第3代大鼠RMPs,饥饿培养24 h后,分为空白组(5.5 mmol/L葡萄糖的低糖DMEM)、对照组(50 mmol/L葡萄糖的高糖DMEM)、不同浓度PDGF-B组(0.25 ng/mL、0.50 ng/mL、1.00 ng/mL+高糖DMEM)、不同浓度黄芪注射液组(0.2 mg/mL、2 mg/mL、20 mg/mL、200 mg/mL+高糖DMEM)和PDGF-B+不同浓度黄芪注射液组(1.00 ng/mL PDGF-B+0.2 mg/mL、2 mg/mL、20 mg/mL、200 mg/mL黄芪注射液+高糖DMEM),培养48 h后,采用CCK8法检测各组RMPs增殖情况,并用免疫荧光法鉴定增殖后的细胞。结果与对照组比较,不同浓度PDGF-B组,2 mg/mL、20 mg/mL、200 mg/mL黄芪注射液组及1.00 ng/mL PDGF-B+2 mg/mL、20 mg/mL、200 mg/mL黄芪注射液各组均能促进体外高糖培养的RMPs增殖,并在一定浓度内呈剂量-效应关系,差异均有统计学意义(P均<0.05);其中1.00 ng/mL PDGF-B组及200 mg/mL黄芪注射液组促增殖作用均优于1.00 ng/mL PDGF-B+200 mg/mL黄芪注射液组(P均<0.05)。加药培养后各组细胞表达周细胞标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及血小板源性生长因子受体-β(PDGFR-β),不表达血管性血友病因子(vWF),几乎不表达胶质纤维酸性蛋白(GFAP)。结论PDGF-B及黄芪注射液均对体外高糖培养大鼠RMPs的生长有促进作用,短期内未使RMPs发生变异,单用PDGF-B或黄芪注射液促生长作用优于两者合用。

纤维蛋白溶解酶对视网膜毛细血管周细胞生长调节的研究进展

鉴于纤维蛋白溶解酶（简称纤溶酶）在眼科临床应用广泛，尤其在辅助玻璃体切除术方面效果显著，因此研究纤溶酶对视网膜毛细血管周细胞的影响有助于更好理解糖尿病视网膜病变（DR）的发病机制；为治疗DR提供新途径；为纤溶酶安全有效的在玻璃体内注射辅助玻璃体切除手术提供理论依据。在此综述了纤溶酶对周细胞的生长调节、作用机制及其在眼科临床应用方面的最新研究进展。

眼科教授李维业的“绿洲”

李维业:北京协和医院眼科主任、中国医学科学院、中国协和医科大学眼科教授、北京市五一劳动奖章获得者、国际眼科和视觉研究协会会员、《国外医学》眼科分册编委、美国眼科杂志中文版编委、1988年卫生部科学技术进步一级成果奖获得者……他有一块小小的“绿洲”——地下室里一间大约20平方米的实验室。为了这一小块“绿洲”,他奋斗,他拼搏,殚精竭虑,苦苦经营。