毛茛总苷对肾性高血压大鼠血压、NO、AngⅡ及A7r5细胞内钙的影响

目的:探讨毛茛总苷对肾性高血压大鼠的血压、血清一氧化氮(NO)、血浆和心肾组织中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)以及血管平滑肌细胞内钙的影响。方法:采用二肾一夹(2K1C)肾性高血压大鼠模型,连续灌胃给药5 w,5w末测定血压,检测血清中一氧化氮、血浆和心、肾组织中AngⅡ含量;采用新一代Ca2+荧光探针Fluo-3/AM标记培养的血管平滑肌细胞内钙,荧光倒置显微镜观察荧光成像和荧光分光光度计测量细胞内钙荧光强度,观察毛茛总苷对大鼠血管平滑肌细胞内Ca2+水平的影响。结果:毛茛总苷高、中剂量能降低肾性高血压大鼠血压水平(P<0.05),其各剂量均能显著的升高大鼠血清中NO含量(P<0.01),但对大鼠体内的AngⅡ含量无显著影响;毛茛总苷各剂量均能降低由AngⅡ引起的细胞内钙离子浓度升高。结论:毛茛总苷能降低肾性高血压大鼠的血压,其降压作用可能与其能显著的升高大鼠NO水平及拮抗AngⅡ引起的血管平滑肌细胞内钙升高有关。

毛茛总苷抗炎镇痛作用研究

目的观察毛茛总苷抗炎、镇痛作用。方法采用小鼠热板法和扭体法实验观察镇痛作用;用二甲苯诱导小鼠耳廓肿胀和角叉菜胶诱导大鼠足肿胀实验模型观察抗炎作用。结果200,400,800 mg.kg-1毛茛总苷能显著减小二甲苯诱导的小鼠耳廓肿胀程度,抑制由55℃热板刺激诱导的小鼠疼痛反应和醋酸刺激引起小鼠腹腔疼痛反应,效应具有浓度依赖性;200,400 mg.kg-1毛茛总苷明显抑制角叉菜胶诱导的大鼠足肿胀。结论毛茛总苷具有显著的抗炎、镇痛作用。

毛茛总苷对离体蛙心和大鼠胸主动脉环张力的作用研究

目的:研究毛茛总苷对离体蛙心和大鼠胸主动脉环张力的影响。方法:制备离体蛙心,观察毛茛总苷对蛙心基础张力和异丙肾上腺素诱导的心脏收缩力的影响;制备大鼠离体胸主动脉环,观察毛茛总苷对主动脉基础张力、去甲肾上腺素诱导主动脉环收缩和对异丙肾上腺素诱导主动脉环舒张的影响。结果:1μg/mL和10μg/mL毛茛总苷可以降低离体蛙心的基础张力,并具有抑制异丙肾上腺素诱导蛙心收缩作用,但对心率没有影响;1mg/mL和2mg/mL的毛茛总苷对主动脉环的基础张力和对异丙肾上腺素诱导的主动脉环舒张均没有影响;2mg/mL的毛茛总苷能够明显拮抗由去甲肾上腺素诱导的主动脉环收缩作用,与生理盐水组相比有明显的差异(P<0.01),与酚妥拉明组相比没有明显差异(P>0.05);1mg/mL的毛茛总苷也能拮抗去甲肾上腺素诱导的血管环收缩作用,但与生理盐水组相比无明显的差异(P>0.05)。结论:毛茛总苷具有抑制异丙肾上腺素诱导的蛙心收缩作用;毛茛总苷具有抑制去甲肾上腺素诱导的大鼠胸主动脉环收缩作用,但对主动脉环的基础张力和异丙肾上腺素诱导的动脉舒张均无影响。

毛茛总苷对垂体后叶素所致实验性心肌缺血的影响

目的观察毛茛总苷对垂体后叶素所致大鼠、小鼠实验性心肌缺血的影响及对小鼠耐缺氧实验的影响。方法采用大鼠舌下静脉注射垂体后叶素(pituitrin,Pit)制备大鼠急性心肌缺血模型,观察毛茛总苷对模型大鼠心电图T波及心率的影响;采用小鼠尾静脉注射垂体后叶素制备小鼠心肌缺血模型,观察毛茛总苷对其心电图T波及心率的影响;并观察毛茛总苷对小鼠耐缺氧实验的影响。结果毛茛总苷对大鼠和小鼠心肌缺血模型心电图T波和心率有明显改善作用;能明显延长小鼠耐缺氧存活时间。结论毛茛总苷对垂体后叶素所致的大鼠、小鼠实验性心肌缺血有保护作用,并能提高小鼠对缺氧的耐受能力。

毛茛总苷对血管紧张素Ⅱ致心肌肥大的影响

目的研究毛茛总苷对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌肥大的影响。方法采用正交试验设计法考察AngⅡ浓度、心肌细胞密度和AngⅡ干预时间对心肌肥大模型构建的影响,确定心肌肥大模型的构建条件,考查毛茛总苷对AngⅡ诱导的心肌肥大的影响。结果心肌肥大模型的条件为:AngⅡ浓度为1μmol.L-1,心肌细胞密度为2×105个.mL-1,AngⅡ干预时间为48 h。50、100、200μg.mL-1毛茛总苷有抑制AngⅡ诱导的心肌肥大的作用。结论毛茛总苷有抗心肌肥大的作用。

毛茛总苷对人胃癌细胞和胰腺癌细胞增殖作用的初步研究

目的:研究毛茛总苷体外对人胃癌细胞MGC803和人胰腺癌PATU898细胞增殖、细胞周期的影响。方法:采用Alamar Blue和瑞-姬染色方法检测毛茛总苷对人胃癌细胞MGC803和人胰腺癌细胞PATU8988增殖的作用;PI染色法观察毛茛总苷对MGC803和PATU8988细胞周期的影响;Annexin V/PI双染实验法检测毛茛总苷对MGC803细胞凋亡的影响。结果:用Alamar Blue检测及瑞-姬染色法,其结果显示毛茛总苷对人胃癌细胞MGC803和人胰腺癌细胞PATU8988表现出具有较好地增殖和抑制作用,其48h的半数抑制浓度分别为222.05μg/mL,341.23μg/mL;用PI单染法,其结果显示毛茛总苷对2株肿瘤细胞的细胞周期无明显影响;用Annexin V/PI双染法,其实验结果显示毛茛总苷可诱导MGC803细胞凋亡。结论:毛茛总苷在体外可以明显抑制MGC803和PATU8988的增殖,其作用机制可能与诱导细胞凋亡有关,而与细胞周期阻滞无关。

毛茛总苷中扩血管活性物质实验研究

目的:探讨毛茛总苷中总黄酮含量与其扩血管作用关系。方法:采用大鼠离体胸主动脉环张力测定方法,观察毛茛总苷制备过程中不同浓度乙醇洗脱部位对去甲肾上腺素诱导的胸主动脉环收缩的抑制作用;以芦丁为标准品,采用紫外分光光度法测定对应各部位的总黄酮含量;以总黄酮终浓度为横坐标,以各不同部位对抗去甲肾上腺素引起的血管环收缩的抑制率为纵坐标,进行线性回归,分析二者相关性。结果:毛茛总苷不同部位对去甲肾上腺素诱导的主动脉环张力升高均有不同程度的抑制作用(P<0.05);以总黄酮终浓度对毛茛总苷抑制去甲肾上腺素引起血管环收缩的抑制率进行线性回归,相关系数R2=0.919 9,相关性良好。结论:毛茛总苷中总黄酮类成分可能是引起血管扩张的活性成分。

毛茛总苷对大鼠离体心脏缺血-再灌注损伤的保护作用

目的:观察毛茛总苷对大鼠离体心肌缺血-再灌注损伤的保护作用。方法:将SD大鼠随机分为正常对照组、缺血-再灌注损伤模型组及毛茛总苷0.05、0.10、0.20 mg/mL组。采用Langendroff大鼠离体心脏灌流系统,建立离体心脏缺血-再灌注损伤模型。记录停灌前、再灌注后1、5、10、20、30、40 min时的心率(HR)、左室收缩压峰值(LVSP)、左室收缩压最大上升速率(+dp/dtmax)、左室舒张压最大下降速率(-dp/dtmax)、冠脉流量(CF)等心功能指标;测定再灌注后20、40 min灌流液中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)的活性;采用氯化三苯基四氮唑(TTC)进行心肌染色并计算心肌梗死面积百分比。结果:模型组再灌注后HR、LVDP、±dp/dtmax、CF显著降低,LDH、CK水平升高,心肌梗死面积达58.78%,毛茛总苷对以上指标均有良好的改善作用。结论:毛茛总苷对缺血-再灌注导致的心肌损伤具有良好的保护作用。

毛茛总苷对去甲肾上腺素致大鼠离体去内皮胸主动脉环收缩的影响

目的:研究毛茛总苷对去内皮大鼠离体胸主动脉环的影响。方法:采用离体胸主动脉环张力记录法,考察毛茛总苷对去甲肾上腺素引起去内皮离体胸主动脉环收缩的影响。结果:0.5mg/mL、1mg/mL、2mg/mL的毛茛总苷对去甲肾上腺素引起去内皮离体胸主动脉环的收缩均有显著的抑制作用(P<0.01)。结论:毛茛总苷对抗去甲肾上腺素引起离体胸主动脉环收缩的作用不依赖于内皮。

毛茛总苷诱导卵巢癌SKOV-3细胞凋亡的体外研究

近年来，天然药物的价值得到越来越多药物研究人员的重视。毛茛（Ranunculus japonicas Thumb）为毛莨科毛茛属多年生草本植物。全国各地均有分布。毛茛及其提取物毛茛总苷具有消炎、镇痛、抗菌、抗心肌肥厚等多种生物活性。除此之外．研究还发现毛茛总苷还可显著抑制胃癌及胰腺癌细胞的增殖㈨。但目前对其抗卵巢癌作用的影响尚无报道。本研究拟以人卵巢癌SKOV-3细胞株作为离体实验模型．探讨毛茛总苷对SKOV-3细胞增殖的影响。

毛茛总苷通过circ_0079593/miR-324-5p通路抑制肝癌细胞增殖、迁移及侵袭的机制研究

目的:探讨毛茛总苷对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其对circ_0079593/miR-324-5p通路的调控作用。方法:体外培养人肝癌细胞MHCC97H,并分为对照组,毛茛总苷低、中、高剂量组,si-NC组,si-circ_0079593组,毛茛总苷+pcDNA组,毛茛总苷+pcDNA-circ_0079593组;采用CCK-8法、Transwell实验分别检测细胞活力、迁移及侵袭;采用定量反转录聚合酶链反应(quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测circ_0079593和miR-324-5p的表达水平;采用双荧光素酶报告基因实验检测circ_0079593和miR-324-5p的靶向关系;采用蛋白质印迹法检测基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的表达水平。结果:与对照组比较,毛茛总苷不同剂量组细胞增殖抑制率和miR-324-5p表达水平均升高(P<0.05),迁移及侵袭细胞数均减少(P<0.05),circ_0079593表达水平及MMP-2、MMP-9蛋白水平均降低(P<0.05),且呈剂量依赖性;circ_0079593能靶向调控miR-324-5p;与si-NC组比较,si-circ_0079593组细胞增殖抑制率升高(P<0.05),迁移及侵袭细胞数均减少(P<0.05),MMP-2、MMP-9蛋白水平均降低(P<0.05);与毛茛总苷+pcDNA组比较,毛茛总苷+pcDNA-circ_0079593组细胞增殖抑制率降低(P<0.05),迁移及侵袭细胞数均增多(P<0.05),MMP-2、MMP-9蛋白水平均升高(P<0.05)。结论:毛茛总苷可通过调控circ_0079593/miR-324-5p通路降低肝癌细胞增殖、迁移及侵袭能力。

毛茛总苷对人胃癌MGC803细胞血管生成拟态的影响及其机制

目的探讨毛茛总苷对人胃癌MGC803细胞血管生成拟态的影响及其机制。方法采用细胞黏附实验观察毛茛总苷对MGC803细胞黏附作用的影响;通过细胞划痕实验检测毛茛总苷对MGC803细胞迁移能力的影响;通过Matrigel肿瘤细胞类血管生成模型实验观察毛茛总苷对MGC803细胞体外类血管生成的作用;半定量RT-PCR方法检测毛茛总苷对MGC803细胞血管生成拟态相关基因表达的影响。结果毛茛总苷有效抑制MGC803细胞黏附、细胞迁移以及MGC803细胞介导的体外类血管生成;明显抑制MGC803细胞血管生成拟态相关基因VE-cadherin、sema 4D和integrinβ5的表达。结论毛茛总苷通过抑制血管生成拟态相关基因VE-cadherin、sema 4D和integrinβ5的表达来抑制MGC803细胞黏附、细胞迁移和血管生成拟态。

毛茛总苷对麻醉大鼠血流动力学的影响

目的:研究毛茛总苷对麻醉大鼠血流动力学的影响。方法:将SD大鼠随机分为5组:生理盐水组、阳性对照组(维拉帕米,10 mg/kg)、毛茛总苷3个剂量组(20、40和80 mg/kg)。采用股静脉注射方式给药,股动脉插管、右颈总动脉心室插管和连续记录肢体Ⅱ导联心电图的方法观察药物对大鼠心率(HR)、收缩压(SP)、舒张压(DP)、平均动脉血压(AP)、左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张压(LVDP)、左心室终末舒张压(LVEDP)、左心室内压最大上升速率(+dp/dtmax)、左心室内压最大下降速率(-dp/dtmax)和等容舒张时间室内压下降的时间常数(T)的变化。结果:静脉注射毛茛总苷80 mg/kg和40 mg/kg后,均能显著地减慢大鼠心率,显著降低SP、DP、AP、LVSP、-dp/dt max和T值;对+dp/dt max和LVEDP无显著性影响。结论:毛茛总苷有减慢大鼠心率,降低动脉血压,抑制心肌收缩和舒张功能的作用。

黔产毛茛总皂苷的提取方法和工艺优选

目的:确定黔产毛茛总皂苷的最佳提取方法和工艺。方法:以黔产毛茛中总皂苷含量为评价指标,考察水、甲醇、95%乙醇三种溶媒分别采用超声、回流及微波三种提取方法对总皂苷提取率的影响,优化提取方法。单因素分析法确定乙醇体积分数、液固比和提取时间为影响因素,采用正交试验设计法安排实验,利用直观分析法结合方差分析法优选最佳提取方法的工艺参数。结果:以85%乙醇为溶媒的回流法提取效果最佳,最优工艺参数为:提取温度80℃,溶媒用量10倍,提取2次,每次2h。结论:本方法测定结果准确、重复性好、专属性强,可为黔产毛茛药材质量控制提供理论依据。