毛蕊异黄酮-丹参酮ⅡA调控内皮细胞功能参与高血压肾损害的机制研究

目的:观察黄芪-丹参有效单体药对毛蕊异黄酮-丹参酮IIA延缓血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导大鼠肾动脉内皮细胞(RRAECs)损伤的作用机制。方法:以正常细胞为对照组,5×10^-7mol/L AngⅡ作用RRAECs 24h建立高血压肾损害模型,其余各组在AngⅡ基础上依次加入毛蕊异黄酮(1.5mg/L)、丹参酮ⅡA(3mg/L)、毛蕊异黄酮(3mg/L)+丹参酮ⅡA(3mg/L)、缬沙坦(10^-5mol/L),干预24h后,观察细胞增殖能力、凋亡率、活性氧(ROS)水平、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)含量的变化。结果:与对照组比较,模型组细胞增殖能力显著降低(P<0.05),凋亡率升高(P<0.01),ROS生成增加(P<0.01),eNOS含量降低(P<0.05);与模型组比较,毛蕊异黄酮-丹参酮ⅡA显著提高RRAECs增殖能力和eNOS含量(P<0.01),降低细胞凋亡率(P<0.01),减少ROS生成(P<0.01)。结论:毛蕊异黄酮-丹参酮ⅡA改善AngⅡ诱导的RRAECs损伤,其机制可能与促进内皮细胞增殖,抑制细胞凋亡,减少ROS生成,提高eNOS水平等多因素相关。

毛蕊异黄酮治疗脊髓损伤大鼠的作用机制

目的:探究毛蕊异黄酮治疗脊髓损伤的潜在作用机制。方法:30只大鼠随机分为假手术组、模型组、毛蕊异黄酮组,每组10只。模型组和毛蕊异黄酮组采用改良Allen重物打击法建立大鼠脊髓损伤模型后,毛蕊异黄酮组大鼠给予20 mg/kg毛蕊异黄酮灌胃。造模5周后,测定改良Tarlov评分、皮层体感诱发电位波潜伏期时长和斜板试验,测定SCI大鼠脊髓神经功能。观察HE染色后脊髓损伤的情况;蛋白质印迹法检测脊髓组织中p-Akt、gp130、IL-6蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组中改良Tarlov评分及倾斜平面临界角度显著降低(P<0.05),皮层体感诱发电位波潜伏期时长和p-Akt、gp130、IL-6蛋白表达均显著上调(P<0.05);与模型组比较,毛蕊异黄酮治疗后改良Tarlov评分及斜板试验角度显著上升(P<0.05),皮层体感诱发电位波潜伏期时长和p-Akt、gp130、IL-6蛋白表达均显著下调(P<0.05)。结论:毛蕊异黄酮促进大鼠脊髓损伤后神经功能的恢复,通过抑制gp130、IL-6的蛋白表达和PI3K/Akt信号通路磷酸化起作用。

参茶软胶囊中丹参酮Ⅱ_A和总黄酮的含量测定

目的:研究并建立参茶软胶囊中丹参酮Ⅱ_A和总黄酮的含量测定方法。方法:采用HPLC法测定丹参酮Ⅱ_A含量,色谱柱为Optimusil C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-水(75:25),流速为0.8 ml·min^(-1),检测波长为270 nm;采用紫外可见分光光度法测定总黄酮含量,以芦丁为对照品,于360 nm波长处测定。结果:丹参酮Ⅱ_A在0.2~3.6μg·ml^(-1)范围内呈良好的线性关系(r=0.999 8),芦丁在0.002 9~0.029 5 mg·ml^(-1)范围内呈现良好的线性关系(r=0.999 9);丹参酮Ⅱ_A和芦丁的加样回收率分别为98.77%、99.21%,RSD分别为0.337%、0.353%。三个批号的参茶软胶囊中丹参酮Ⅱ_A和总黄酮的平均含量分别为141.92μg·g^(-1),25.22 mg·g^(-1)。结论:本方法简便易行,准确可靠,重复性好,可以用于参茶软胶囊及其类似产品中丹参酮Ⅱ_A和总黄酮的质量控制。

金莲花总黄酮下调miR-215-5p抑制PI3K/AKT信号通路影响AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖和迁移

目的 探讨金莲花总黄酮对血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞(CFs)增殖、迁移的影响和潜在机制。方法 不同浓度(0.2、0.4、0.8 mmol/L)的金莲花总黄酮作用于AngⅡ诱导CFs。细胞计数试剂盒检测细胞活力确定金莲花总黄酮使用浓度。Transwell实验、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞迁移、miR-215-5p表达水平。Western印迹检测磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)和蛋白激酶B(AKT)的磷酸化水平。将miR-215-5p模拟物、抑制物分别转染CFs,检测上调或下调miR-215-5p对AngⅡ诱导的CFs增殖和迁移的影响。结果 金莲花总黄酮作用于AngⅡ诱导的CFs后,细胞活力、迁移能力、miR-215-5p、磷酸化(p)-PI3K和p-AKT蛋白表达显著降低(P<0.05)。上调miR-215-5p表达后,AngⅡ诱导的CFs活力、迁移能力显著升高(P<0.05)。下调miR-215-5p表达后,AngⅡ诱导的CFs活力、迁移能力显著降低(P<0.05)。上调miR-215-5p表达能够显著降低金莲花总黄酮对AngⅡ诱导的CFs活力、迁移能力及PI3K/AKT信号通路的影响(P<0.05)。结论 金莲花总黄酮能够降低AngⅡ诱导的CFs增殖和迁移,其机制可能与下调miR-215-5p表达和抑制PI3K/AKT信号通路有关。

毛蕊异黄酮靶向高迁移率族蛋白1对心肌缺血再灌注损伤大鼠保护作用实验研究

目的:探讨毛蕊异黄酮对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠的保护作用及机制。方法:SPF级SD大鼠,建立心肌缺血再灌注损伤大鼠模型。随机分为四组:假手术组、心肌缺血再灌注损伤组、毛蕊异黄酮低剂量组、毛蕊异黄酮高剂量组。将H9C2细胞分为四组:对照组、缺氧/复氧组、毛蕊异黄酮组、重组高迁移率族蛋白1(HMGB1)蛋白组。超声心动图评估大鼠心功能,ELISA法测定心肌标志酶,HE染色观察心肌组织病理变化,TUNEL染色测定心肌组织和H9C2细胞凋亡情况,PPI网络分析毛蕊异黄酮的靶点预测和分子对接,胆囊收缩素八肽(CCK)8检测细胞活力,免疫荧光检测心肌HMGB1的表达量,Western blot检测高迁移率族蛋白1(HMGB1)、Toll样受体4(TLR4)、核因子-κB p65(NF-κB p65)和半胱氨酸蛋白酶-3(Cleaved caspase-3)相对表达水平。结果:心肌缺血再灌注损伤组较假手术组左心室舒张阶段末期内径(LVEDD)、左心室收缩阶段末期内径(LVESD)均上调(均P<0.05),而左心室射血分数(LVEF)和左心室短轴缩短率(LVFS)均下调(均P<0.05);心肌纤维断裂,炎性细胞浸润增多;血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)和肌钙蛋白(cTnI)水平显著升高;TUNEL阳性细胞数量升高,Cleaved caspase-3水平上调;HMGB1表达量增加(均P<0.05)。与心肌缺血再灌注损伤组比较,毛蕊异黄酮低、高剂量组LVEDD、LVESD均下调(均P<0.05),而LVEF和LVFS均上调(均P<0.05);心肌组织纤维排列尚规则,炎性细胞数量较少;血清CK-MB、LDH和cTnI水平降低;TUNEL阳性细胞数量降低,Cleaved caspase-3水平下调;HMGB1表达量降低(均P<0.05)。PPI和分子对接显示毛蕊异黄酮与HMGB1能较好的结合。缺氧/复氧组较对照组H9C2细胞TUNEL细胞阳性数量显著升高,Cleaved caspase-3、HMGB1、TLR4、NF-κB p65表达上调(均P<0.05)。毛蕊异黄酮组较缺氧/复氧组H9C2细胞TUNEL细胞阳性数量降低,Cleaved caspase-3、HMGB1、TLR4、NF-κB p65表达下调(均P<0.05)。而毛蕊异黄酮组基础上给予rHMGB1后,毛蕊异黄酮的保护作用被逆转。结论:毛蕊异黄酮能够明显改善大鼠心肌缺血再灌注损伤,这可能与抑制HMGB1/TLR4/NF-κB通路有关。

超高效液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱法同时检测补中益气丸中毛蕊异黄酮葡萄糖苷、橙皮苷、甘草酸铵的含量

建立了一种超高效液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱同时检测补中益气丸中毛蕊异黄酮葡萄糖苷、橙皮苷和甘草酸铵含量的方法。采用超高效液相色谱-四级杆/静电场轨道阱质谱,Hypersil Gold C_(18)型色谱柱,乙腈-0.1%甲酸水梯度洗脱,流速0.4 mL/min,柱温40℃,进样量1μL;采用电喷雾离子源,正离子模式下,在质荷比100~1500范围内全扫描,通过提取待测成分的精确质量数进行定量。结果表明,毛蕊异黄酮葡萄糖苷、橙皮苷、甘草酸铵线性范围分别为0.0891~1.4250μg/mL、0.0984~12.6000μg/mL、7.4250~29.7000μg/mL(r≥0.9993),检测限分别为5.57、4.10、5.80 ng/mL,定量限分别为22.26、12.30、23.20 ng/mL,精密度、重复性及样品稳定性(24 h)良好,加样回收率91%~105%(δ_(RSD)≤5.0%,n=6)。本方法简便快捷、特异性强、灵敏度高,可同时检测补中益气丸中毛蕊异黄酮葡萄糖苷、橙皮苷、甘草酸铵的含量。

超声辅助酶法提取茶麸黄酮及其对Ⅱ型5α-还原酶抑制活性

通过正交试验优化超声辅助酶法提取茶麸黄酮的工艺条件,同时建立了Ⅱ型5α-还原酶体外酶促反应体系考察茶麸提取物对Ⅱ型5α-还原酶的抑制活性,并通过分子对接模型对茶麸中主要黄酮组分抑制Ⅱ型5α-还原酶的机理进行了模拟,为茶麸中黄酮类活性物开发和应用提供了基础。正交试验优化的提取工艺为:50℃下,50%乙醇,酶解p H=6,添加茶麸质量2.5%的纤维素酶酶解1 h,再以45 kHz,50℃超声提取30 min,此优化条件下总黄酮得率为(10.13±0.32)mg/g。通过超高效液相色谱质谱(UPLC Q-TOF MS)初步推断茶麸中主要含有山奈酚3-O-[2-O-β-D-半乳糖-6-O-α-L-鼠李糖]-β-D-葡萄糖苷和山奈酚3-O-[2-O-β-D-木糖-6-O-α-L-鼠李糖]-β-D-葡萄糖苷两种特征黄酮类化合物。茶麸总黄酮具有Ⅱ型5α-还原酶抑制活性,分子对接模拟结果显示山奈酚3-O-[2-O-β-D-木糖-6-O-α-L-鼠李糖]-β-D-葡萄糖苷与5α-还原酶的结合能力与非那雄胺相近,可能是茶麸总黄酮中抑制Ⅱ型5α-还原酶的主要活性分子。

毛蕊异黄酮对宫颈癌HeLa细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨毛蕊异黄酮对宫颈癌HeLa细胞增殖及凋亡的影响及其可能作用机制。方法 体外培养人宫颈癌细胞HeLa,设为对照组(未经毛蕊异黄酮处理)、毛蕊异黄酮-低组(25μmol/L)、毛蕊异黄酮-中组(50μmol/L)、毛蕊异黄酮-高组(100μmol/L);经100μmol/L毛蕊异黄酮培养24 h,细胞分别设为微小RNA(miR)-NC组、miR-4766-5p组、毛蕊异黄酮+anti-miR-NC组以及毛蕊异黄酮+anti-miR-4766-5p组。采用CCK-8法、平板克隆形成实验与流式细胞术分别检测细胞增殖、克隆形成及凋亡;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白质免疫印迹(Western blot)分别检测miR-4766-5p和凋亡相关蛋白表达量。结果 与对照组比较,毛蕊异黄酮-低组、毛蕊异黄酮-中组、毛蕊异黄酮-高组的细胞增殖受到抑制,凋亡蛋白含量、miR-4766-5p表达量升高,且呈剂量依赖性,差异有统计学意义(P<0.05)。与癌旁组织比较,宫颈癌组织中miR-4766-5p的表达量降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-4766-5p组细胞增殖能力降低,凋亡蛋白含量升高,差异有统计学意义(P<0.05)。毛蕊异黄酮+anti-miR-4766-5p组的细胞增殖抑制率、凋亡率和cleaved-caspase3、cleaved-caspase9蛋白水平低于毛蕊异黄酮+anti-miR-NC组,细胞克隆形成能力高于毛蕊异黄酮+anti-miR-NC组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 毛蕊异黄酮可通过上调miR-4766-5p表达抑制宫颈癌细胞增殖,诱导细胞凋亡。

高效液相色谱法测定黄芪中毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄吡喃糖苷的含量

目的:建立黄芪中毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄吡喃糖苷含量测定的高效液相色谱法,并测定10批不同来源黄芪商品药材中该成分的含量。方法:色谱柱为Polaris C_(18)柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相为甲醇-水(30:70),流速为1.0 mL·min^(-1),柱温为25℃,检测波长为254 nm。结果:毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄吡喃糖苷在0.010 6～2.12μg呈良好的线性关系,回归方程为Y=3 035.97X-14.85(r=0.999 9),加样回收率平均为95.8％(n=5,RSD=1.3％)。结论:本法简便、快速、灵敏,重现性好。所测10批不同来源黄芪商品药材中毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄吡喃糖苷含量差异较大。

LC-MS/MS同时测定大鼠血浆中黄芪成分芒柄花素、毛蕊异黄酮和异鼠李素的浓度及其药动学研究

目的:建立大鼠血浆中芒柄花素、毛蕊异黄酮和异鼠李素浓度的测定方法,并研究其药动学参数。方法:取大鼠10只灌胃给予10 g/kg黄芪,检测给药前和给药后24 h内芒柄花素、毛蕊异黄酮和异鼠李素的血浆浓度,并计算其药动学参数;采用液相色谱-串联质谱法,以芦丁为内标,色谱柱为Alltima C18,流动相:甲醇-水溶液,梯度洗脱,流速为0.3 mL/min,柱温为40℃,电喷雾负离子源,扫描方式为多反应离子监测。芒柄花素、毛蕊异黄酮、异鼠李素和芦丁的选择检测离子质荷比(m/z)分别为m/z 267.0→251.9,m/z 283.1→268.2,m/z 315.4→300.1和m/z 609.4→300.1。结果:芒柄花素、毛蕊异黄酮和异鼠李素检测浓度的线性范围分别为5～1 000(r=0.9996)、3.91～500(r=0.9989)、0.5～100(r=0.9992)ng/mL,最低检测限分别为0.625、0.5和0.1 ng/mL,药动学参数分别为:t1/2β(10.43±2.94)、(6.91±1.33)和(5.07±1.21)h,Cmax(398.5±103.7)、(138.7±32.8)和(58.3±14.5)ng/mL,AUC0→12h(1238.8±311.3)、(669.5±159.7)和(274.1±83.9)ng.h/mL。结论:本方法专属性强、灵敏度高、准确性好,可用于芒柄花素、毛蕊异黄酮和异鼠李素的血药浓度测定,大鼠灌胃给10 g/kg黄芪后,芒柄花素、毛蕊异黄酮和异鼠李素在大鼠体内的药动学符合二室模型特征。

ZTC1+1-Ⅱ型澄清剂处理追风七总黄酮提取液的工艺优选

目的:优选ZTC1+1-Ⅱ型澄清剂处理追风七总黄酮提取液的工艺条件。方法:以总黄酮保留率、蛋白质清除率和固形物去除率为评价指标,通过单因素试验考察药液质量浓度、澄清剂用量、反应温度和反应时间对澄清效果的影响。结果:最佳澄清工艺为:药液质量浓度0.5 g/ml,澄清剂加入量分别为4%B组分和2%A组分,水浴温度60℃,水浴保温时间60 min;总黄酮保留率为91.32%,蛋白质去除率为35.82%,固形物的去除率为8.1%。结论:ZTC1+1-Ⅱ型澄清剂对追风七总黄酮提取液的澄清效果良好,该工艺稳定可行。

HPLC法同时测定柴穿通任丸中丹参酮ⅡA和α-香附酮的含量

建立同时测定柴穿通任丸中丹参酮ⅡA与α-香附酮两种成分含量的HPLC法。方法: 采用CAPCELL PAK C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)为色谱柱;流动相为乙腈-水(60:40);流速1.0 mL·min-1;检测波长254 nm;柱温33℃;进样量10 μL。结果:丹参酮A在0.40-40.44 μg·mL-1(r=0.9999),α-香附酮在0.23-22.74 μg·mL-1(r=0.9999)范围线性关系良好,两成分的平均加样回收率( n=9)分别为99.31%,101.57%,RSD分别为1.1%,1.5%。结论:该方法操作简单、准确性和重复性较好,可为柴穿通任丸的质量控制提供参考。

丹参酮ⅡA对慢性心力衰竭患者心功能的作用及机制

目的观察丹参酮ⅡA对慢性心力衰竭(CHF)患者心功能、血管内皮功能的影响。方法将68例CHF患者分为治疗组(采用常规疗法+丹参酮ⅡA治疗)、治疗对照组(采用常规疗法治疗),并设立健康对照组。采用放射免疫法和双抗体夹心酶联免疫吸附法分别测定三组的血管性假血友病因子(vWF)和6-酮-前列腺素F1α(6-ke-to-PGF1α),超声心动图检测左室射血分数(LVEF)、心排血指数(CI)、每搏量(SV)。结果治疗组与治疗对照组总有效率比较差异有统计学意义(P<0.01);vWF和6-keto-PGF1α在健康对照组与心衰各心功能分级间差异均有统计学意义(P均<0.05)。2周治疗后,两治疗组各指标均明显改善,治疗组较治疗对照组LVEF、CI、SV及6-keto-PGF1α增加明显,vWF降低明显(P均<0.05)。结论丹参酮ⅡA可通过改善CHF患者内皮细胞功能,增加心输出量,而改善其心功能。

UPLC-ESI-MS法测定贞芪扶正胶囊中毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷、红景天苷和黄芪甲苷的含量

建立了超高效液相色谱-电喷雾串联三重四级杆质谱法(UPLC-ESI-MS)同时测定贞芪扶正胶囊中红景天苷、毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷和黄芪甲苷含量的方法.采用UPLC-ESI-MS联用法,乙腈和0.3%甲酸水溶液不同比例梯度洗脱,流速0.3 m L/min,12 min内可完成测试,且线性关系良好(r2>0.999).方法简便、准确、可靠、重复性好,可用于贞芪扶正制剂的质量控制.

丹参酮ⅡA对充血性心力衰竭患者心功能和血管内皮细胞分泌功能的影响

目的研究丹参酮ⅡA对充血性心力衰竭患者的心功能以及血管内皮细胞分泌功能的影响。方法选择102例慢性心衰患者,根据美国纽约心脏病协会(NYHA)分级标准进行心功能分级,使用放射免疫法和双抗体夹心酶联免疫吸附法分别测定血管性假血友病因子(vWF)和6-酮-前列腺素F1α(6-keto-PGF1α),同时用比色法测一氧化氮(NO),ELISA法检测N-末端脑钠素原(NT-proBNP),超声心动图测左室射血分数(LVEF),并与健康对照组42名进行比较。心衰患者随机分为常规组和丹参酮ⅡA组,治疗2周后复查各指标。结果心衰心功能Ⅲ级、Ⅳ级组与对照组比较,血NO、NT-proBNP及LVEF差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);vWF和6-keto-PGF1α在对照组与心衰各心功能分级间差异有统计学意义(P<0.05)。治疗2周后,丹参酮ⅡA组心功能明显改善,血浆vWF及6-keto-PGF1α含量升高(P<0.05),且丹参酮ⅡA组较常规组LVEF明显增加,NT-proBNP及血NO明显降低(P<0.05)。结论血管内皮细胞功能、vWF和6-keto-PGF1α与心衰严重程度有关,丹参酮ⅡA组可明显改善慢性心衰患者心功能,与血管内皮细胞功能改善有关。

丹参酮ⅡA对充血性心力衰竭患者心功能和血管内皮细胞功能的干预研究

目的观察丹参酮ⅡA对充血性心力衰竭(心衰)患者心功能、血管内皮细胞功能的影响。方法入选68例慢性心衰患者根据纽约心脏病协会(NYHA)分级标准进行心功能分级,采用放射免疫法和双抗体夹心酶联免疫吸附法分别测定血管性假血友病因子(vWF)和6-酮-前列腺素F1a(6-keto-PGF1a),同时用比色法测一氧化氮(NO)、ELISA法检测N末端脑钠素原(NT-proBNP)、超声心动图测左室射血分数(LVEF),并与健康对照组28例进行比较。心衰患者随机分为常规组和丹参酮ⅡA组,2周后复查。结果心衰心功能Ⅲ级、Ⅳ级组与对照组比较,血NO、LN(NT-proBNP)及LVEF差异有统计学意义(P均<0.01);vWF和6-keto-PGF1a在对照组与心衰各心功能分级间差异均有统计学意义(P均<0.05)。治疗2周后,丹参酮ⅡA组心功能明显改善,与血浆vWF及6-keto-PGF1a含量分别呈正相关及负相关,且丹参酮ⅡA组较常规组LVEF明显增加,LN(NT-proBNP)及血NO明显降低(P均<0.05)。结论血管内皮细胞功能及vWF和6-keto-PGF1a与心衰严重程度有关,丹参酮ⅡA组可明显改善慢性心衰患者心功能,与血管内皮细胞功能改善有关。

甘草黄酮合酶Ⅱ催化甘草素特异性合成7,4'-二羟基黄酮

利用同源序列比对和分子进化树分析从胀果甘草转录组数据库中挖掘并成功克隆到2个黄酮合酶基因:Gur.gene26505和Gur.gene26116。经表征Gur.gene26505为黄酮合酶Ⅱ,具有催化甘草素特异性合成7,4′-二羟基黄酮的特性,而Gur.gene26116为黄烷酮2位羟化酶,可催化甘草素生成包括7,4′-二羟基黄酮在内的三种产物。进一步通过蛋白质结构预测、分子对接和分子动力学模拟探究了黄酮合酶Ⅱ(Gur.gene26505)催化合成7,4′-二羟基黄酮特异性的原因。由于Gur.gene26505活性口袋附近特有的刚性结构β片层使大位阻苯丙氨酸残基翻转至羟化中心下方,消除了羟化产物2-羟基甘草素进入脱水中心的阻力进而发生C_(2)-C_(3)位的脱水反应特异性生成7,4′-二羟基黄酮。最后通过基因过表达、反应条件优化和强化菌体生长建立了7,4′-二羟基黄酮特异性合成的最佳细胞催化工艺,使甘草素转化率达到了76.67%。

UFLC-MS/MS法同时测定黄芪中黄芪甲苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量

目的建立超快速液相色谱-串联质谱(UFLC-MS/MS)法同时测定黄芪中黄芪甲苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量。方法液相测定采用0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱;Shim-Pack XR-ODS柱(75 mm×3.0 mm,2.2μm);流速为0.4 mL·min^(-1)。质谱测定采用三重四极杆串联质谱仪,电喷雾电离源(ESI源),负离子模式检测。结果黄芪甲苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷分别在1~50μg·mL-1(r=0.999 6)、2~100μg·mL^(-1)(r=0.999 8)范围内线性关系良好。黄芪甲苷含量为0.132%~0.140%,毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量为0.055 1%~0.064 3%。结论与《中国药典》方法比较,该方法供试品提取简单,分析快速、准确,可用于黄芪的质量控制研究。

黄芪单体毛蕊异黄酮对血管内皮细胞前列环素和血栓素A_2的影响

目的观察黄芪单体毛蕊异黄酮对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导体外培养的人脐静脉内皮细胞(HU-VECs)合成前列环素(PGI2)、血栓素A2(TXA2)的影响。方法以HUVECs为研究对象,用L-DMEM培养基在5%CO2、37℃条件下对HUVECs进行传代培养,至足够数量后对其进行分组处理:(1)空白对照组(不加入任何干预因素);(2)AngⅡ组(加入AngⅡ至终浓度为1×10-6 mol/L);(3)AngⅡ+毛蕊异黄酮不同剂量组(10、1、0.1mg/L),分别培养0、6、12、18、24 h后收集细胞上清进行PGI2、TXA2的检测,检测方法采用ELISA。结果 (1)与空白对照组比较,AngⅡ可以诱导HUVECs合成PGI2和TXA2,并且都具有时间依赖性(r=0.891,P=0.043;r=0.95,P=0.013);(2)与AngⅡ组比较,毛蕊异黄酮0.1 mg/L可以抑制AngⅡ诱导PGI2和TXA2的合成(P<0.05);1 mg/L可以促进AngⅡ诱导的PGI2合成,抑制TXA2合成(P<0.05);10 mg/L可以促进AngⅡ诱导的PGI2和TXA2合成(P<0.05)。结论黄芪单体毛蕊异黄酮可以影响AngⅡ所诱导的HUVECs PGI2和TXA2的合成。