毛钩藤碱对6-羟基多巴胺诱导的帕金森病模型大鼠神经保护作用及机制研究

目的 探讨毛钩藤碱对帕金森病(Parkinson′s disease, PD)模型大鼠的神经保护作用及机制。方法 采用右侧中脑黑质致密部注射6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine, 6-OHDA)制备大鼠PD模型,将建模成功的PD大鼠随机分为模型组、美多芭组、毛钩藤碱低剂量和高剂量组,同时设置正常对照组,每组12只。给予相应药物灌胃干预,每天1次,连续1个月。采用旋转试验、转棒试验和Morris水迷宫试验检测大鼠行为学变化;HE染色法观察大鼠右侧中脑黑质病理学变化;高效液相色谱法(HPLC)检测大鼠右侧纹状体中多巴胺(dopamine, DA)水平;免疫组化法检测大鼠右侧中脑黑质中多巴胺能神经元标志物酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase, TH)表达;ELISA法检测大鼠右侧中脑黑质IL-6、IL-1β和TNF-α水平;Western blot检测大鼠右侧中脑黑质中NF-κB p65、NF-κB抑制因子α(IκBα)、p-IκBα等蛋白表达水平。结果 毛钩藤碱能显著改善PD大鼠行为学障碍及中脑黑质损伤,升高纹状体DA含量及中脑黑质中TH阳性神经元数量和IκBα蛋白表达水平,降低中脑黑质中IL-6、IL-1β和TNF-α水平及p-IκBα、NF-κB p65蛋白表达水平(P<0.05)。结论 毛钩藤碱可通过减少多巴胺能神经元丢失,提高脑内DA含量,抑制炎症反应,改善PD大鼠行为学障碍,其机制可能与抑制NF-κB信号通路活化有关。

钩藤活性提取物毛钩藤碱药理作用的研究进展

毛钩藤碱(Hirsutine)是从茜草科植物钩藤(Uncaria rhynchophylla)中提取得到的生物碱类活性成分,其具有抗炎、降压、抗感染、保护心脏以及抗肿瘤等药理活性,目前在抗肿瘤领域研究比较广泛。本文通过中英文献数据库检索,总结近年来毛钩藤碱的研究现状,发现毛钩藤碱除了抗肿瘤作用外,在其他领域还有很大的研究空间和发展前景。本文从毛钩藤碱的来源及其在降压、抗炎、保护心脏、抗肿瘤等领域药理作用做系统的总结,以期为毛钩藤碱的进一步的研究提供便利,也为推动中药钩藤的临床应用及开发提供理论依据。

广东4种钩藤中毛钩藤碱及总碱含量的HPLC、UV测定

目的建立UV、HPLC测定广东4种钩藤植物的总碱以及毛钩藤碱含量的方法,比较不同物种、不同部位间有效成分的含量变化。方法采用HPLC梯度洗脱法测定毛钩藤碱含量,以Hypersil ODS C18(4.6 mm×200 mm,5μm)为色谱柱,甲醇-水(含0.50%三乙胺,冰乙酸调pH 5.35)为流动相,梯度洗脱,进样体积10.00μl,柱温为40.00℃,245 nm波长下检测分析;以UV测定总碱含量,检测波长为245 nm。结果毛钩藤碱在0.02～0.40μg范围内线性关系良好,r=0.999 5,平均回收率分别为96.830%,RSD=1.600%;总碱含量在不同物种、不同部位里存在差异性,其线性范围为2.00～10.00μg/ml,r=0.998 4。结论该法准确,操作简便、快速,重复性较好,精密度较高,可用于对钩藤属植物不同物种、不同部位的总碱以及有效成分毛钩藤碱含量测定。

毛钩藤碱对缺氧乳腺癌MCF-7细胞迁移和侵袭能力的影响

目的:观察毛钩藤碱对缺氧诱导的人乳腺癌MCF-7细胞迁移和侵袭能力的影响,并探讨其分子机制。方法:选取MCF-7细胞作为研究对象,采用CCK-8法检测毛钩藤碱的细胞毒性作用;采用细胞划痕实验测量细胞迁移率;采用Transwell侵袭实验检测细胞侵袭力;采用Western blot法检测缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)、Snail、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的蛋白表达水平;采用RT-PCR法检测HIF-1α的mRNA水平。结果:自32μmol/L开始,随着毛钩藤碱浓度的升高,MCF-7细胞存活率明显降低(P<0.05),IC_(50)为62.82μmol/L;在缺氧条件下,MCF-7细胞的迁移和侵袭能力显著增强(P<0.05),HIF-α、Snail和MMP-9蛋白表达水平明显升高(P<0.05),E-cadherin蛋白表达水平明显下降(P<0.05),HIF-1α的mRNA水平也显著升高(P<0.05);除缺氧MCF-7细胞中HIF-α的mRNA水平未受影响外,上述效应均被毛钩藤碱(16μmol/L)明显抑制(P<0.05)。结论:毛钩藤碱可在体外抑制缺氧诱导的人乳腺癌MCF-7细胞迁移和侵袭,这可能与毛钩藤碱下调HIF-1α、Snail和MMP-9蛋白表达水平,上调E-cadherin蛋白表达水平有关。

毛钩藤碱调控Shh信号通路对结直肠癌荷瘤鼠的抑瘤作用及CD4^(+)、CD8^(+)T细胞的影响

目的:探讨毛钩藤碱对结直肠癌荷瘤鼠的抑瘤作用,并分析其对Shh信号通路关键蛋白及CD4^(+)、CD8^(+)T细胞的影响。方法:采用结肠癌SW480细胞接种于裸鼠右腋部皮下建立结直肠癌荷瘤鼠模型,将40只建模成功的裸鼠分为荷瘤鼠模型组、阳性药环巴胺(Shh信号通路抑制剂)对照组和毛钩藤碱低、中、高剂量组,每组8只。阳性药给予环巴胺(20μmol/L,0.2 ml),毛钩藤碱干预组分别腹腔注射5、10、20 mg/kg毛钩藤碱,1次/d,连续21 d,留取外周血后处死。观察各组荷瘤小鼠的自主活动次数、体质量及肿瘤体积,计算体质量增长率、相对肿瘤体积增长率和抑瘤率;免疫组化法(IHC)检测荷瘤鼠移植瘤中Glil、Gli2、Shh、Smo和Ptch1表达量;流式细胞术检测荷瘤鼠移植瘤和外周血中CD4^(+)及CD8^(+)T细胞水平。结果:与模型组比较,环巴胺及毛钩藤碱的干预显著改善了裸鼠的自主活动次数,环巴胺组及毛钩藤碱中、高剂量组的瘤质量、相对肿瘤体积增长率及Shh信号通路关键蛋白Glil、Gli2及Shh、Smo和Ptch1表达量均显著降低(P<0.05或P<0.01),移植瘤和外周血中CD4^(+)及CD8^(+)T细胞水平均显著提高(P<0.05或P<0.01),但毛钩藤碱低剂量组上述指标与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05)。与阳性药环巴胺组比较,毛钩藤碱各剂量干预组肿瘤质量、抑瘤率、相对肿瘤体积增长率差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。随着毛钩藤碱剂量的增加,Shh信号通路关键蛋白(Glil、Gli2及Shh、Smo和Ptch1)表达量显著降低(P<0.05或P<0.01),而移植瘤和外周血中CD4^(+)及CD8^(+)T细胞水平均显著增加(P<0.05或P<0.01)。结论:毛钩藤碱可显著改善结肠癌荷瘤鼠的自主活动状态,发挥较好的抑瘤作用,可能与其抑制Shh信号通路,提高CD4^(+)及CD8^(+)T细胞水平有关。

毛钩藤碱调控IL-6/STAT3信号通路抑制结肠癌细胞增殖、迁移及诱导细胞凋亡的体外实验

目的探讨毛钩藤碱对结肠癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响及其作用机制。方法用终浓度为150μmol/L、300μmol/L、600μmol/L的毛钩藤碱处理结肠癌细胞SW480,未经任何处理的SW480细胞作空白对照(NC)组,DMSO处理SW480细胞作为DMSO组,5 mg/L紫杉醇处理SW480细胞作为TAX 5 mg/L组。噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;qRT-PCR检测白细胞介素(IL)-6、信号转录和转录活化因子(STAT)3和血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达水平;Western印迹检测蛋白表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测IL-6的含量。结果不同浓度的毛钩藤碱可抑制结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭,促进其凋亡;抑制细胞周期蛋白(Cyclin)D1、基质金属蛋白酶(MMP)2蛋白的表达,促进半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3蛋白的表达;抑制IL-6、STAT3和VEGF的表达。结论毛钩藤碱可抑制结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭,促进其凋亡,其机制可能是与IL-6/STAT3相关,将为结肠癌的治疗提供新思路和新靶点。

去氢毛钩藤碱在大鼠体外肠道菌群中代谢产物的鉴定

目的研究去氢毛钩藤碱在大鼠体外肠道菌群中的代谢途径,阐明肠道菌群对去氢毛钩藤碱吸收和代谢的影响。方法采用UPLC/Q-TOF MS技术,鉴定并推测了去氢毛钩藤碱在大鼠体外肠道菌群培养液中的代谢产物。采用HSS C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm),以乙腈(A)-体积分数0.2%甲酸水溶液(B)为流动相梯度洗脱,流速为0.5 m L·min-1,采用ESI离子源,正离子模式下检测。结果通过色谱保留时间及质谱碎片等信息,在大鼠肠道菌群中鉴定了原型化合物去氢毛钩藤碱,以及经还原、氮氧化和羟基化反应后得到的3个微量代谢产物。结论建立了采用UPLC/Q-TOF MS技术鉴定去氢毛钩藤碱在大鼠体外肠道菌群中代谢产物的方法,为吲哚类生物碱在体内吸收和代谢机制的研究提供试验依据。

毛钩藤碱对H_(2)O_(2)诱导的大鼠心肌细胞氧化应激损伤的保护作用及机制

目的:观察毛钩藤碱(HS)对H_(2)O_(2)诱导的大鼠心肌细胞氧化应激损伤的保护作用,并初步探讨其机制。方法:选取出生1~2 d的大鼠乳鼠提取原代心肌细胞作为研究对象,用400μmol/L浓度的H_(2)O_(2)刺激细胞,复制细胞氧化应激模型。将细胞分为4组:Control组、HS组、H_(2)O_(2)组、H_(2)O_(2)+HS组。采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测细胞活性,采用Tunel法检测细胞凋亡情况,采用免疫荧光法检测细胞形态结构,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测Bcl-2、Bax、Caspase 3、Cleaved-caspase 3、Nrf2及HO-1的蛋白水平表达情况。结果:细胞活力检测结果发现,与Control组比,H_(2)O_(2)处理6、12、24 h,细胞活性均显著降低(P<0.01);与H_(2)O_(2)组比,H_(2)O_(2)+1μmol/L HS、H_(2)O_(2)+10μmol/L HS组细胞活力显著升高(P<0.01);与H_(2)O_(2)组比,H_(2)O_(2)+100μmol/L HS组细胞活力显著下降(P<0.01)。细胞凋亡检测结果显示,与H_(2)O_(2)组比,H_(2)O_(2)+HS组细胞凋亡显著下降(P<0.05),肌节结构相对完整;与H_(2)O_(2)组比,H_(2)O_(2)+HS组细胞Bax/Bcl-2、Cleaved-caspase 3/Caspase 3蛋白比值下调(P<0.05),Nrf2、HO-1蛋白表达上调(P<0.05)。结论:HS对H_(2)O_(2)诱导的大鼠心肌细胞线粒体凋亡有保护作用,其机制可能通过Nrf2/HO-1信号通路发挥作用。

毛钩藤碱对Apc^(min/+)小鼠肠道息肉生长及肠道菌群的影响

目的:探讨毛钩藤碱对Apc^(min/+)小鼠肠道息肉生长及肠道菌群的影响。方法:将36只Apc^(min/+)小鼠随机分为模型组及毛钩藤碱低(5 mg/kg)、高(20 mg/kg)剂量组,另选取C57BL/6J小鼠作为正常对照组,每组12只。连续灌胃给药12 w,观察小鼠疾病活动指数(DAI);记录小鼠肠道息肉的数量及直径;免疫组化检测小鼠肠息肉组织中增殖细胞核抗原(PCNA)表达;ELISA测定小鼠肠组织中炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α水平;Western Blot检测小鼠肠组织NF-κB p65、IκBα、p-IκBα蛋白表达;16S rRNA测序法检测大鼠粪便中肠道菌群的结构变化。结果:与正常对照组比较,模型组小鼠DAI评分、肠道菌群Alpha多样性及肠组织中炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α水平和NF-κB p65、p-IκBα蛋白表达显著升高,肠组织IκBα蛋白表达显著降低,肠道中拟杆菌属、norank_f_Erysipelotrichaceae等菌群丰度显著升高,乳酸菌属、双歧杆菌属、脱硫弧菌属等菌群丰度显著降低(P<0.05)。与模型组比较,毛钩藤碱高剂量组小鼠DAI评分及息肉数量和大小显著降低,息肉组织中PCNA阳性细胞比例、肠组织中炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α水平和NF-κB p65、p-IκBα蛋白表达及肠道菌群Alpha多样性显著降低,肠组织IκBα蛋白表达显著升高,肠道中乳酸菌属、双歧杆菌属、脱硫弧菌属等菌群丰度显著升高,拟杆菌属、norank_f_Erysipelotrichaceae等菌群丰度显著降低(P<0.05)。结论:毛钩藤碱可抑制Apc^(min/+)小鼠肠道息肉生长,并改善肠道菌群结构。

去氢毛钩藤碱抗突变型p53(R273H)结直肠癌的体外作用机制研究

目的从抑制结直肠癌细胞HT29增殖角度研究去氢毛钩藤碱(hirsuteine,HST)对突变型p53(R273H)结直肠癌的体外抗癌作用机制。方法采用MTT和平板克隆形成实验评价HST对HT29细胞增殖的影响;流式细胞术和丹酰尸胺(dansylcadaverine,MDC)染色法检测细胞周期分布和自噬情况;Western blotting、qRT-PCR分析细胞中p53蛋白、mRNA表达水平和p53下游效应子的表达情况;放线菌酮(actidione,CHX)-chase实验检测p53蛋白半衰期;染色质免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation,ChIP)实验检测p53与其下游靶基因p21启动子区的结合情况。结果HST显著抑制突变型p53(R273H)结直肠癌HT29细胞增殖,引起细胞周期阻滞,诱导杀伤性细胞自噬,缩短突变型p53(R273H)蛋白半衰期,诱导其发生MDM2介导的泛素-蛋白酶体降解,增强其与p21启动子的结合,并上调p21的mRNA表达。结论HST能够促进HT29细胞中突变型p53(R273H)降解并恢复p53野生型转录激活功能,其体外抗结直肠癌活性可能与p53通路密切相关。

毛钩藤碱在脑缺血再灌注损伤动物模型中的保护作用

目的探究毛钩藤碱(Hirsutine)在大鼠脑缺血再灌注损伤(CIRI)中的神经保护作用及其潜在机制。方法SD大鼠用于建立大脑中动脉闭塞再灌注(MCAO/R)模型,并将大鼠分为6个实验组(n=6):对照组;模型组;Hirsutine低剂量(5 mg/kg)组;Hirsutine中剂量(10 mg/kg)组;Hirsutine高剂量(20 mg/kg)组;依达拉奉(30 mg/kg,阳性对照)组。取脑组织进行TTC染色,测量脑梗死和神经行为缺陷;HE和Nissl染色检测神经元损伤;Tunel染色检测海马细胞凋亡;ELISA法检测脑组织活性氧(ROS),丙二醛(MDA),超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平;蛋白质印迹检测机制相关蛋白的表达水平。结果Hirsutine治疗显著减轻了MCAO/R大鼠的脑梗死和神经元损伤,并改善了脑神经行为缺陷。Hirsutine有效抑制氧化应激和细胞凋亡。此外,Hirsutine激活了MCAO/R大鼠神经元中的PI3K/Akt/Nrf2通路。结论Hirsutine通过激活PI3K/Akt/Nrf2信号通路改善MCAO/R大鼠脑组织氧化应激和细胞凋亡,从而缓解CIRI诱导的神经元损伤。

毛钩藤碱通过线粒体途径诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡

本研究旨在观察毛钩藤碱对人乳腺癌细胞的抑制作用,并探讨其分子机制。选取人正常乳腺上皮MCF-10A细胞、乳腺癌MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞作为研究对象,采用CCK-8法检测细胞活性,采用流式细胞术检测细胞凋亡和线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP),采用Western blot检测Bcl-2、Bax、cleaved-caspase 9、cleaved-caspase 3以及胞浆中细胞色素C(cytochrome C,Cyt C)的蛋白水平。结果显示,毛钩藤碱可显著降低MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞存活率,且该作用呈时间和剂量依赖性(P<0.05);毛钩藤碱作用MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞48 h的IC50分别为447.79和179.06μmol/L;毛钩藤碱可诱导MDA-MB-231细胞发生凋亡和MMP去极化(P<0.05),促进线粒体释放Cyt C(P<0.05),激活caspase 9和caspase 3(P<0.05),这些作用均可被线粒体通透性转换孔(mitochondrial permeability transition pore,MPTP)特异性阻断剂环孢素A(cyclosporin A,CsA)显著抑制(P<0.05);此外,毛钩藤碱显著下调MDA-MB-231细胞Bcl-2蛋白水平并上调Bax蛋白水平(P<0.05)。以上结果提示,毛钩藤碱可诱导MDA-MB-231细胞发生凋亡,这可能与其调低Bcl-2/Bax蛋白比值,从而引起MPTP持续开放和Cyt C释放,最终导致caspase 9和caspase 3活化有关。

毛钩藤碱对人宫颈癌Ca Ski细胞增殖、凋亡、转移及侵袭的影响

目的:探讨毛钩藤碱对人宫颈癌Ca Ski细胞增殖、凋亡、转移、侵袭的影响及机制。方法:细胞活性与增殖检测(CCK-8)法检测细胞增殖活性,Hoechst 33258染色及流式细胞术检测细胞凋亡,实时荧光定量聚合酶链式反应检测B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),p53 mRNA表达,划痕实验检测细胞转移能力,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测纤连蛋白(FN),基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)含量,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测蛋白表达。结果:与空白组比较,毛钩藤碱可以呈剂量及时间依赖性的抑制Ca Ski细胞的增殖;8.0,16.0,32.0μmol·L^(-1)毛钩藤碱组细胞凋亡率,Bax,p53 mRNA表达增加(P<0.05,P<0.01),Bcl-2 mRNA及磷酸化Src(p-Src),磷酸化信号转导和转录活化因子3(p-STAT3)蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01)。与空白组比较,1.0,2.0,4.0μmol·L^(-1)毛钩藤碱组细胞迁移率,穿膜细胞数,FN,MMP-2,MMP-9含量及缺氧诱导因子-1α(HIF-1α),波形蛋白(Vimentin),N-钙黏蛋白(N-cadherin)表达降低(P<0.05,P<0.01),E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达增加(P<0.01)。结论:毛钩藤碱可以抑制人宫颈癌Ca Ski细胞的增殖、转移及侵袭,并能诱导凋亡,作用机制与调控Src/STAT3及HIF-1α/上皮间充质转化(EMT)信号通路有关。

毛钩藤碱诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡作用机制探讨

目的毛钩藤碱(hirsutine,HS)是从传统中药钩藤中提取出的一种生物碱单体,具有降压、抗感染、心脏保护和抗肿瘤等药理作用。本研究旨在探讨HS对肝癌SMMC-7721细胞的促凋亡作用及其机制。方法以终浓度分别为25、50和100μmol/L HS处理SMMC-7721细胞24h后,细胞增殖检测试剂盒8(cell counting kit 8,CCK8)法检测HS对SMMC-7721细胞活性的影响,流式细胞仪检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量和细胞凋亡,蛋白质印迹法分析p-eIF2α、CHOP、Bcl-2、Bax、cleaved Caspase-3和cleaved多腺苷二磷酸核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)的表达。结果 CCK8实验显示,HS可剂量依赖性地抑制SMMC-7721细胞活力,F=44.536,P<0.001。流式结果显示,0、25、50和100μmol/L HS作用SMMC-7721细胞24h,代表ROS含量的MIF值分别为237±13、281±15、342±12和396±16,F=46.473,P<0.001;细胞凋亡率分别为(2.5±1.2)%、(9.8±1.4)%、(17.3±2.1)%和(28.5±1.9)%,F=70.316,P<0.001。蛋白质印迹实验结果显示,100μmol/L HS作用SMMC-7721细胞24h后,促凋亡蛋白p-eIF2α、CHOP、cleaved Caspase-3和cleaved PARP表达上调,均P<0.001;抗凋亡蛋白Bcl-2表达下调,P=0.001。同时,eIF-2α磷酸化抑制剂Salubrinal和抗氧化剂N-乙酰-L-半胱氨酸可抑制HS的上述作用。结论 HS可通过ROS激活内质网应激,下调Bcl-2/Bax比率诱导SMMC-7721细胞凋亡。

基于UHPLC-MS/MS的钩藤生物碱在大鼠体内的组织分布研究

目的建立超高效液相串联质谱(ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UHPLCMS/MS)法测定大鼠不同组织中钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱、毛钩藤碱、去氢毛钩藤碱与缝籽嗪甲醚的含量,并用于钩藤的组织分布研究。方法大鼠ig钩藤水煎液后,分别于0.083、0.25、0.5、0.75、1、2、4、8、12 h取心、肝、脾、肺、肾、脑组织。以长春胺为内标,采用液液萃取法提取后进行样本检测。结果建立的UHPLC-MS/MS方法中,7个生物碱在不同的组织中最低定量限范围为0.05~1.00 ng,响应与浓度的相关性R≥0.991。方法学考察中的专属性、基质效应、回收率、精密度与准确度以及稳定性等方法学考察均满足要求。各个组织中均为异钩藤碱含量最高,其次为去氢钩藤碱;异钩藤碱与去氢钩藤碱含量均远高于其对应的异构体钩藤碱与异去氢钩藤碱;而3个四环单萜吲哚生物碱(毛钩藤碱、去氢毛钩藤碱、缝籽嗪甲醚)在各组织中均含量最低。比较不同组织中生物碱成分含量可以发现,7个生物碱均在肝脏中含量最高,其次为肾脏与肺部,推测钩藤生物碱在肝脏与肾脏的蓄积是因为两者分别是生物碱成分的主要代谢部位与排泄部位。结论建立的方法灵敏度高、准确性好、专属性好,适用于大鼠不同组织中钩藤生物碱的组织分布研究。

超高效液相色谱质谱联用技术快速检测中药钩藤中6种钩藤碱含量

目的建立UPLC-MS/MS方法测定中药钩藤中钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱、毛钩藤碱与去氢毛钩藤碱含量。方法以地西泮为内标,采用UPLC BEH(2. 1 mm×50 mm,1. 7μm)柱,柱温为40℃。流动相由乙腈和水(含0. 1%甲酸)组成,梯度洗脱流速为0. 4 ml/min,洗脱时间为5. 5 min。MRM模式对钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱、毛钩藤碱与去氢毛钩藤碱进行定量分析。蒸馏水煮法对中药钩藤进行提取。结果在0. 005μg/ml～5μg/ml浓度时,钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱、毛钩藤碱与去氢毛钩藤碱线性良好(r> 0. 995),最低定量下限为0. 005μg/ml。日内精密度RSD≤8%,日间精密度RSD≤10%。准确度在93. 4%～108. 7%。结论该分析方法灵敏、快速、选择性好,并成功应用于中药钩藤中钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱、毛钩藤碱与去氢毛钩藤碱含量测定。

HPLC指纹图谱和多成分定量结合化学模式识别法评价黔钩藤质量

目的基于HPLC指纹图谱、多成分定量结合化学模式识别法评价黔钩藤质量。方法从贵州中药材市场随机购买了18批钩藤饮片,采用HPLC法建立了18批钩藤饮片的指纹图谱;通过中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012年版)进行相似度评价,对其中5种生物碱进行了指认,并采用外标法和一测多评法进行了含量测定;采用SPSS 26.0统计软件进行聚类分析和主成分分析。结果在钩藤饮片指纹图谱中,确定了共有峰28个,采用对照品指认了5个生物碱成分,分别为异去氢钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、钩藤碱和去氢毛钩藤碱,18批钩藤的相似度评价表明市场上钩藤的质量差异较大;聚类分析将18批钩藤饮片样品聚为3大类;主成分分析用5个主成分进行综合评价,其中8批钩藤饮片的综合得分大于1;采用一测多评法和外标法计算18批钩藤饮片中5种生物碱的含量,经GraphPad差异性分析表明,2种方法无显著性差异。结论市场上钩藤质量差异较大,建立了检测5个生物碱成分的一测多评法和外标法,为完善钩藤质量评价提供参考。

基于网络药理学和分子对接探讨癫痫宁片治疗癫痫的潜在作用机制研究

目的通过网络药理学和分子对接方法,筛选癫痫宁片治疗癫痫的主要活性成分和分子机制。方法采用TCMSP、Herb数据库筛选癫痫宁片中的主要活性成分及靶点;GeneCard、OMIM、DisGent筛选癫痫的治疗靶点;使用Cytoscape 3.8.2软件构建“药物活性成分–靶点”网络;将药物–交集基因上传至相互作用数据库String构建蛋白相互作用(PPI)网络。将药物–疾病交集基因上传至利用生物信息学开源软件Bioconductor,对其进行生物学过程的基因本体论(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,并对关键靶点与成分进行分子对接验证。结果共筛选到癫痫宁片有效成分70个,靶点308个,其中degree前9位的活性成分分别为毛钩藤碱、山柰酚、狼尾草麦角碱、β-谷甾醇;核心靶点共10个,分别为V-Rel网状内皮增生病毒癌基因同源物A(RELA)、转录因子AP-1(JUN)、有丝分裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)、信号传导和转录激活蛋白3(STAT3)、肿瘤蛋白p53(TP53)、蛋白激酶B1(Akt1)、雌激素受体α(ESR1)、肿瘤坏死因子(TNF)、有丝分裂原活化蛋白激酶8(MAPK8)。共筛选出5195个GO条目,富集到259条与药物治疗癫痫相关的通路。分子对接结果显示,核心靶点与活性成分间结合良好。结论基于网络药理学和分子对接方法对癫痫宁片治疗癫痫作用机制有了新的认识,阐明药物活性成分与癫痫的关系,为临床药物治疗提供了科学依据。