用ELISA检测耕牛感染伊氏锥虫不同虫株的比较试验

酶联免疫吸附试验(ELISA)诊断耕牛伊氏锥虫病具有敏感性高、特异性强以及简便易行等优点。由于伊氏锥虫虫体抗原的变异,在应用ELISA诊断耕牛锥虫病时,出现敏感性和特异性不均一的现象,造成诊断结果的误差。为给诊断提供依据,我们应用ELISA检测方法对伊氏锥虫安徽株和云南株抗原及其感染牛血清进行了比较试验。 1 材料和方法 1.1 抗原制备分别从安徽、云南地区自然感染伊氏锥虫的水牛体内分离得到各伊氏锥虫株,经小鼠繁殖后,放血经DEAE[O—(二乙胺基乙基)

RIL—2对急性克氏锥虫感染小鼠的抗SRBC直接溶血空斑反应及抗虫保护性免疫影响的初步研究

为研究ＩＬ—２在克氏锥虫感染过程中出现的免疫抑制机制中的作用，８只克氏锥虫感染的Ｃ３Ｈ／ＨｅＪｎ小鼠每日皮下注射两次，每日总量５０００μ重组人ｒＩＬ－２；对照组相同数量小鼠皮下注射等量的无钙、镁离子的ＰＢＳ。实验结果表明ｒＩＬ－２注射组小鼠脾细胞对羊红细胞的反应能力由ＰＢＳ注射鼠的１５。２％提高到９３。５％（Ｐ＜０．０５）。相当接近于正常的未感染小鼠的空斑形成细胞数。ｒＩＬ－２注射组小鼠仅表现轻度降低的寄生虫血症，其动态变化在两组间未显示出差异。除ＰＢＳ组的１只小鼠在感染后第３６ｄ死亡外，ｒＩＬ－２以及ＰＢＳ注射组的其它动物都在克氏锥虫急性感染期存活。尽管ｒＩＬ－２注射并未明显地提高克氏锥虫急性感染期Ｃ３Ｈ／ＨｅＪｎ小鼠的抗虫保护性免疫，本实验提示ＩＬ－２不足是克氏锥虫急性感染期Ｃ３Ｈ／ＨｅＪｎ小鼠非特异性免疫抑制的原因之一。

克氏锥虫的超微结构

从感染克氏锥虫的小鼠切取病变心肌组织,同时取培养的锥虫作电镜观察。结果显示:无鞭毛体圆或椭圆形。鞭毛袋内藏鞭毛。无鞭毛体的鞭毛较短,大都藏于袋内。在鞭毛横切面上,周围有9对微管,中央有2根微管。质膜下有排列整齐的膜下微管,约143根。动基体腊肠状,内腔中含有呈“8”字形紧密排列的DNA纤丝。高尔基复合体呈囊状。在小鼠心肌纤维中,常可见簇状排列的无鞭毛体。锥鞭毛体的动基体在核后方,动基体的DNA由平行而疏松排列的纤丝组成。动基体DNA纤丝在无鞭毛体及锥鞭毛体内形态显著不同。阐明这种形态变化的本质,对揭示动基体功能将起重要作用。

细菌脂多糖促进克氏锥虫抗原诱导的自身免疫性心肌炎

目的观察细菌脂多糖(LPS)对克氏锥虫抗原诱导自身免疫性心肌炎的影响。方法克氏锥虫抗原辅以完全弗氏佐剂免疫A/J小鼠,LPS经腹腔接种方式给药,其后加强免疫2次,28 d后,测定心肌肌球蛋白特异的迟发型超敏反应(DTH)及自身抗体,并取鼠心脏观察心肌炎症情况。结果LPS提高锥虫抗原诱导的心肌肌球蛋白特异性DTH及自身抗体,并且25μg LPS与锥虫抗原免疫的小鼠可见明显的心肌炎。结论LPS能够促进心肌肌球蛋白特异的自身免疫反应及锥虫抗原诱导的自身免疫性心肌炎。

克氏锥虫的新过氧化物酶基因克隆表达研究(英文)

目的为了探索克氏锥虫的谷胱甘肽依赖的过氧化物酶活性。方法使用基因克隆与表达鉴定的方法学对克氏锥虫谷胱甘肽依赖的过氧化物酶基因克隆和表达。结果一个全新的、18kDa的克氏锥虫单拷贝过氧化物酶基因被完全克隆到E.coli的表达载体pHrcHis上,并测序。蛋白序列分析表明与基因库谷胱甘肽依赖的过氧化物酶有高度的同源性。其表达蛋白被纯化分离,测定其酶活性显示了良好的活性,并能被亚油酸-氢过氧化物饱和。结论结果证实克氏锥虫仍然存在过氧化物酶介导的生物代谢。

泰氏锥虫研究概况

泰氏锥虫(Trypanosoma theiri,Larean1902)是南非奥伦治弗锐邦的泰勒氏首先发现的。当时曾一度被误认为是边缘边虫引起的牛胆病(gall sickness)的病原。按Hoare分类法,泰氏锥虫是锥虫科、锥虫属、巨大锥虫亚属的典型种,世界各地均有分布。我国自1960年在吉林首例发现以来,甘肃、江苏、陕西也先后有发现泰氏锥虫的报道。泰氏锥虫虽然分布极广泛,但目前发现哺乳动物中,它仅对各种牛及羚羊有感染性,而且牛体内的虫血症水平极低。常规血片中很难看到虫体,这也限制了泰氏锥虫研究工作的开展。本文就近年来国内外对泰氏锥虫研究工作进行回顾性介绍,以引起兽医工作者对这个课题的兴趣。

伊氏锥虫变异表面糖蛋白抗原双抗体夹心ELISA检测方法的建立及初步应用

试验旨在建立一种能鉴定水牛临床感染伊氏锥虫的方法。试验以纯化的伊氏锥虫3D7腹水单抗作为包被抗体,HRP标记的伊氏锥虫5B9单抗作为第2抗体,建立了检测伊氏锥虫变异表面糖蛋白(variant surface glucoprotein,VSG)抗原的双抗体夹心ELISA方法,并进行了灵敏度、特异性试验及初步检测应用试验。结果显示,用该法检测阳性血清,1∶3200稀释时其D450nm值仍大于阴阳临界值;交叉反应试验结果显示,其不与泰勒虫、弓形虫、衣原体、大片吸虫等抗原发生交叉反应,表明该法具有良好的检测特异性;用该法检测了当地82份水牛血清,阳性率为9.76%。结果表明本研究建立的伊氏锥虫VSG抗原双抗体夹心ELISA方法检测灵敏度高、特异性好,能作为检测水牛临床感染伊氏锥虫的有效方法,对于临床伊氏锥虫病的诊断和防控具有重要意义。

广东粤北山区耕牛伊氏锥虫病诊治

耕牛伊氏锥虫病是由锥虫属的伊氏锥虫感染引发的一种寄生虫性血原虫病,是乳源县耕牛的一种常见多发病,临床上其症状表现各异,且不易察觉。该病主要是由吸血昆虫——虻、蝇叮咬带虫家畜,通过机械传播所引发。这种血原虫除寄生于水牛、黄牛和奶牛外。还可寄生于其他一些家畜和一些野生动物。

马伊氏锥虫病的防治策略

马伊氏锥虫病是通过吸血昆虫机械性传播的伊氏锥虫引起的疾病,也称“苏拉”病,是马、骡常见寄生虫病,该病严重影响马的生长发育,引发功能障碍,死亡率极高,危害性极大,因此积极做好防治工作显得至关重要。目前,我国将其列为二类动物疫病,也是伊金霍洛旗无规定马属动物疫病区建设的重要内容。基于此,本文着重介绍马伊氏锥虫病的防治策略进行分析。

抗克氏锥虫的生长激素免疫疗法

生长激素是一种重要的垂体激素,主要参与身体生长和新陈代谢。在哺乳动物,克氏锥虫感染急性期的控制主要依赖于巨噬细胞活化细胞因子,为探索生长激素是否可有效治疗恰加斯病,试验研究了生长激素对克氏锥虫感染鼠的治疗效果,重点分析了其对寄生虫血症,NO、TNF-a、IFN-c浓度,心肌组织病理学变化及寄生虫负荷的影响。克氏锥虫雄性Wistar感染鼠每日腹腔注射生长激素,注射剂量为5ng/10g体重。与未处理组小鼠相比,生长激素处理组小鼠在感染急性期的血液锥虫数量显著减少(P<0.05)。在试验感染急性期(感染后7、14、21d),与未处理组小鼠相比,生长激素处理组小鼠的NO、TNF-a、IFN-c浓度显著升高(P<0.05)。心肌组织病理学观察结果表明,注射生长激素可减轻无鞭毛体负荷,减少炎性渗透和组织结构破坏。结果表明,生长激素可作为免疫调节剂来控制寄生虫复制,可与现用药物联合使用以减少恰加斯病的危害。

在克氏锥虫高发地区血清学试验筛查的效果

背景 本项研究旨在获得目前应用克氏锥虫病的筛查试验的敏感性和特异性无偏评估，并且模拟在不同流行率地区筛查的效果。研究设计和方法从波利维亚Santa Cruz，1998年4月至1999年1月的经过筛检的1200份库存捐血者血清样本中系统性地随机采取400份样本，进行间接血凝试验（IHA），间接免疫荧光试验（IFA）和4种酶联免疫试验（ELISAs）检测。通过特征分组分析评估检测试验的敏感性和特异性。

克氏锥虫唾液酸转移酶催化机理的理论研究

克氏锥虫唾液酸转移酶（TcTs）是恰加斯病的致病原,它具有由6个β片构成的桶状催化结构域。该催化结构域集中在酶N端的边缘。本文利用量子力学/分子力学（QM/MM）联用的模型研究了克氏锥虫唾液酸转移酶的催化机理。初始酶和底物复合物模型由蛋白质晶体数据库得到（PDB ID：lSOI）。其中QM部分在半经验模型中由AM1描述,在从头算模型中由B3LYP/6-3lG~＊描述。MM部分只取酶的N端结构域,并始终由AMBER力场来描述。QM部分与MM部分成键相互作用边界用pseudo-bond方法处理,将3个重要的氨基酸残基（Glu230,Asp59,Tyr342）的C_β-C_β键作为OM/MM模型中的pseudo-bond。由Nudged Elastic Band（NEB）路径优化方法得到的TcTs半经验的最低能量反应路径中,关键原子间距离沿最低能量路径的变化表明：反应开始后Glu230开始靠近Tyr342,当它们之间的氢键距离由2.9 A缩短为2.4 A时,Tyr342将质子转移给Glu230,增强了Tyr342酚氧负离子的碱性,更有利于Tyr342亲核进攻糖苷键。同时,Asp59作为酸,提供质子给糖苷键断裂后的离去基团。过程中,伴随着唾液酸的单糖糖环从扭曲的船式构象向松弛的椅式构象的转变,从而更有利于稳定生成的共价唾液酸-酶中间产物。对得到的半经验的最低能量反应路径再做B3LYP/6-31G~＊/MM模型下的优化,得到反应的能垒约为13.53 kcal/mol,说明该反应路径是合理的。研究结果与实验上通过突变的TcTs_（D59A）推测的乒乓双置换酸碱催化的机理一致,是对实验结论的有力支持,为TcTs抑制剂的设计和结构修饰提供了理论参考,有助于预防和抗恰加斯病的新药物研发。