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中华蜜蜂AcerOr2基因昆虫表达载体pIB/V5-His的构建 被引量:1
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作者 郭丽娜 赵慧婷 +2 位作者 任有蛇 徐兵 姜玉锁 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2020年第6期994-999,共6页
为构建能稳定高效表达中华蜜蜂气味受体AcerOr2的重组表达载体,并在Sf9昆虫细胞中表达,将目的基因AcerOr2和昆虫表达载体pIB/V5-His用BamHⅠ和EcoRⅠ做双酶切,通过T4 DNA连接酶构建成含目的基因AcerOr2的表达载体pIB/V5-His-AcerOr2。... 为构建能稳定高效表达中华蜜蜂气味受体AcerOr2的重组表达载体,并在Sf9昆虫细胞中表达,将目的基因AcerOr2和昆虫表达载体pIB/V5-His用BamHⅠ和EcoRⅠ做双酶切,通过T4 DNA连接酶构建成含目的基因AcerOr2的表达载体pIB/V5-His-AcerOr2。将重组DNA用脂质体转染的方法转染至Sf9细胞中,利用Western blot和免疫荧光检测AcerOr2蛋白的表达和亚细胞定位情况。结果表明,成功构建重组表达载体pIB/V5-His-AcerOr2并建立稳定转染细胞系;Western blot结果证明,重组表达载体能在昆虫细胞Sf9中表达,融合蛋白相对分子质量为56 ku左右;免疫荧光显示,重组表达载体在Sf9细胞膜上表达,与预测结果一致。说明构建的重组表达载体pIB/V5-His-AcerOr2能在Sf9细胞中稳定表达,为进一步研究中华蜜蜂气味受体AcerOr2的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 中华蜜蜂 气味受体aceror2 载体构建 亚细胞定位
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中华蜜蜂AcerOr1基因昆虫表达载体pIB/V5-His的构建及功能分析
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作者 郭丽娜 赵慧婷 +2 位作者 任有蛇 徐兵 姜玉锁 《福建农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期359-365,共7页
【目的】构建能在Sf9昆虫细胞中稳定高效表达中华蜜蜂气味受体AcerOr1的重组表达载体,并对其功能进行分析。【方法】将目的基因AcerOr1和昆虫表达载体pIB/V5-His载体用Bam HI和EcoRI做双酶切,通过T4 DNA连接酶构建成含目的基因AcerOr1... 【目的】构建能在Sf9昆虫细胞中稳定高效表达中华蜜蜂气味受体AcerOr1的重组表达载体,并对其功能进行分析。【方法】将目的基因AcerOr1和昆虫表达载体pIB/V5-His载体用Bam HI和EcoRI做双酶切,通过T4 DNA连接酶构建成含目的基因AcerOr1的表达载体pIB/V5-AcerOr1。将重组表达载体用脂质体转染的方法转染至Sf9细胞中,利用免疫荧光和Western blot检测AcerOr1蛋白的亚细胞定位和表达情况;利用全波长多功能酶标仪检测该受体对4种花香物质刺激后细胞内Ca2+浓度的变化。【结果】成功构建重组表达载体pIB/V5-AcerOr1并建立稳定转染细胞系;Western blot结果证明重组表达载体能在昆虫细胞Sf9中表达;免疫荧光显示重组表达载体在Sf9细胞膜上表达,与预测结果一致。转染pIB/V5-AcerOr1的细胞受花香物质月桂酸(Lauric acid)、亚麻酸(Linolenic acid)、α-松油醇(α-Terpineol)、十一酸(Undecanoic acid)刺激时,均能引起细胞内Ca2+浓度升高。【结论】构建的重组表达载体pIB/V5-AcerOr1能在Sf9细胞中稳定表达,并具有对气味分子的识别功能。 展开更多
关键词 中华蜜蜂 气味受体aceror1 pIB/V5-His 表达 亚细胞定位 功能分析
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舞毒蛾LdOR2基因克隆及对CO_(2)胁迫下的行为反应 被引量:1
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作者 王建国 王建军 +1 位作者 曹传旺 孙丽丽 《北京林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期101-110,共10页
【目的】本文克隆了舞毒蛾的气味受体基因LdOR2,并阐明该基因在舞毒蛾各发育期和组织中的表达特征及其对CO_(2)浓度胁迫下的行为响应,为进一步研究气候变化下舞毒蛾的嗅觉反应机制提供理论依据。【方法】通过转录组文库筛选克隆出LdOR2... 【目的】本文克隆了舞毒蛾的气味受体基因LdOR2,并阐明该基因在舞毒蛾各发育期和组织中的表达特征及其对CO_(2)浓度胁迫下的行为响应,为进一步研究气候变化下舞毒蛾的嗅觉反应机制提供理论依据。【方法】通过转录组文库筛选克隆出LdOR2基因,利用生物信息学分析其基因特性,通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测LdOR2基因在不同发育阶段和组织以及不同CO_(2)浓度(397、550和750μL/L)下的表达水平,并利用RNA干扰(RNAi)技术研究不同CO_(2)浓度下LdOR2基因沉默后舞毒蛾的行为学反应。【结果】舞毒蛾LdOR2基因开放阅读框(ORF)为1203 bp,编码400个氨基酸,蛋白分子量为45.76 kDa,理论等电点为8.22;进化树分析结果表明,舞毒蛾LdOR2与黏虫MsepOR24和双委夜蛾AdisOR21亲缘关系较近,并聚为一类;RT-qPCR结果显示,LdOR2在舞毒蛾各发育阶段均有表达,在雌蛹中表达量最高,雄成虫中表达量最低;在雌、雄成虫不同组织中,雌、雄触角中表达量显著高于其它组织(P<0.05),但雌、雄虫触角间的表达量差异不明显。高CO_(2)浓度下LdOR2基因表达量降低,其中,550μL/L和750μL/L条件下雌虫触角中其表达量与对照组相比分别下降21%和29%(P<0.05),雄虫触角中其表达量与对照组相比分别下降了43%和7%(P<0.05)。LdOR2基因沉默后,舞毒蛾雌、雄成虫对丁香酚和顺-3-己烯-1-醇的趋向性减弱,而在高浓度CO_(2)处理条件下,舞毒蛾沉默体对7种挥发物的反应率均有所下降。【结论】舞毒蛾LdOR2在其气味识别过程中发挥重要作用,CO_(2)浓度变化通过调节舞毒蛾LdOR2基因的表达进而影响其对气味的敏感性。 展开更多
关键词 舞毒蛾 LdOR2 克隆表达 CO_(2)浓度 气味受体 RNA干扰 行为反应
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中华蜜蜂气味受体基因AcerOR58的序列与时空表达分析 被引量:3
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作者 彭竹 黄丽 +1 位作者 王雷 赵慧婷 《应用昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期309-317,共9页
【目的】通过分析中华蜜蜂Apis cerana cerana气味受体基因AcerOR58编码蛋白的理化性质、结构特征,明确AcerOR58时空表达特性,为该基因后续的功能研究奠定基础。【方法】利用多种生物信息学软件预测分析AcerOR58序列及其编码蛋白的结构... 【目的】通过分析中华蜜蜂Apis cerana cerana气味受体基因AcerOR58编码蛋白的理化性质、结构特征,明确AcerOR58时空表达特性,为该基因后续的功能研究奠定基础。【方法】利用多种生物信息学软件预测分析AcerOR58序列及其编码蛋白的结构特性,采用邻接法构建系统进化树。利用实时荧光定量PCR技术分析AcerOR58在不同发育阶段工蜂触角及采集蜂不同组织的表达差异。【结果】AcerOR58基因的开放阅读框(ORF)长1230bp,编码409个氨基酸,成熟蛋白分子量为47.147ku,理论等电点8.46,无信号肽,含有6个跨膜结构且N端位于胞内,31个潜在的磷酸化位点,在第80-405位氨基酸之间存在一个昆虫气味受体家族7tm-6superfamily保守结构域。AcerOR58与西方蜜蜂Apismellifera的AmelOR58亲缘关系最近,核苷酸序列一致性高达96.67%,氨基酸序列一致性高达97.31%。AcerOR58在采集蜂(15-25日龄)阶段的表达量较高,且在触角中的表达量极显著高于其他组织(P<0.01)。【结论】AcerOR58具有昆虫气味受体的结构特征,该基因特异性高表达于中华蜜蜂采集蜂触角中,推测其功能与识别外界蜜粉源的花香气味物质有关。 展开更多
关键词 中华蜜蜂 气味受体 aceror58 生物信息学分析 时空表达
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ASOB、ApoD、AngⅡ2R在腋(臭)区顶泌汗腺中的水平及相关性 被引量:3
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作者 陈文换 马朝辉 +2 位作者 杨峰燕 李子国 李扬 《中国临床研究》 CAS 2021年第4期466-469,共4页
目的研究大汗腺分泌物气味结合蛋白(ASOB)、载脂蛋白D(ApoD)、血管紧张素Ⅱ受体2(AngⅡ2R)在腋(臭)区顶泌汗腺中的水平及相关性。方法选取2018年1月至2020年1月进行手术治疗的腋臭患者92例(腋臭组),其中男40例,女52例;轻度31例,中度43例... 目的研究大汗腺分泌物气味结合蛋白(ASOB)、载脂蛋白D(ApoD)、血管紧张素Ⅱ受体2(AngⅡ2R)在腋(臭)区顶泌汗腺中的水平及相关性。方法选取2018年1月至2020年1月进行手术治疗的腋臭患者92例(腋臭组),其中男40例,女52例;轻度31例,中度43例,重度18例。选同期经腋窝入路进行隆乳术的患者50例为正常对照组,均为女性。采用荧光定量PCR检测ASOB、ApoD及AngⅡ2R的mRNA表达量;免疫组化染色检测三者蛋白的表达;采用Pearson线性相关分析其相关性。结果免疫组化结果可见,ApoD和AngⅡ2R蛋白在腋臭患者顶泌汗腺细胞细胞质中呈棕黄色或棕褐色的阳性表达,ASOB蛋白在细胞浆中呈棕黄色阳性表达。与正常对照组相比,腋臭组ASOB、ApoD及AngⅡ2R的mRNA表达量升高(P均<0.01)。与静息期患者相比,活跃期腋臭患者顶泌汗腺中ASOB、ApoD及AngⅡ2R的mRNA表达量升高(P均<0.01)。ASOB、ApoD及AngⅡ2R的mRNA表达量均呈重度>中度>轻度腋臭患者(P均<0.01)。相关性分析显示,ASOB与ApoD呈正相关(r=0.341,P=0.001);ApoD与AngⅡ2R呈正相关(r=0.525,P=0.001);ASOB与AngⅡ2R呈正相关(r=0.474,P=0.001)。结论 ASOB、ApoD及AngⅡ2R在腋(臭)区顶泌汗腺中高表达,与腋臭不同分泌时期及不同程度相关,ASOB与ApoD、AngⅡ2R两两间分别呈正相关,在腋(臭)区顶泌汗腺中起重要的参与作用。 展开更多
关键词 大汗腺分泌物气味结合蛋白 载脂蛋白D 血管紧张素Ⅱ受体2 腋(臭)区顶泌汗腺
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