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奶牛气管抗菌肽(TAP)基因乳腺特异性表达载体的构建与鉴定
1
作者
曹随忠
姚学萍
+4 位作者
崔亚飞
杨德英
雍康
余树民
刘宗平
《西北农林科技大学学报(自然科学版)》
CSCD
北大核心
2013年第6期1-7,18,共8页
【目的】构建奶牛气管抗菌肽(TAP)基因乳腺特异性表达载体。【方法】根据GenBank中牛TAP基因cDNA序列(GenBank号:NM_174776)设计引物,从奶牛乳腺组织中RT-PCR扩增TAP基因编码序列,将其克隆到pMD19-T(simple)载体中测序。重组质粒pMD-TAP...
【目的】构建奶牛气管抗菌肽(TAP)基因乳腺特异性表达载体。【方法】根据GenBank中牛TAP基因cDNA序列(GenBank号:NM_174776)设计引物,从奶牛乳腺组织中RT-PCR扩增TAP基因编码序列,将其克隆到pMD19-T(simple)载体中测序。重组质粒pMD-TAP经EcoRⅠ+KpnⅠ双酶切回收目的基因片段,亚克隆到携带增强型绿色荧光蛋白的通用型乳腺特异性表达载体pBLG-EGFP中,采用脂质体法转染奶牛乳腺上皮细胞(bMEC)、COS-7细胞,并注射泌乳家兔乳腺组织,荧光显微镜检测转染细胞中绿色荧光蛋白的表达,半定量RT-PCR检测家兔乳腺组织中TAP mRNA的表达。【结果】成功构建了乳腺特异性表达载体pBLG-EGFP-TAP,该载体可在bMEC中特异性地表达绿色荧光蛋白;半定量RT-PCR检测发现,转染pBLG-EGFP-TAP可显著提高家兔乳腺组织中TAPmRNA的表达水平。【结论】成功构建了乳腺特异性表达载体pBLG-EGFP-TAP,为进一步研究奶牛TAP基因的表达特性及利用基因工程技术防治奶牛乳房炎提供了重要材料。
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关键词
奶牛
乳房炎
Β-防御素
气管抗菌肽
基因
乳腺特异性表达载体
下载PDF
职称材料
奶牛乳房炎抗性基因TAP cDNA克隆及序列分析
被引量:
3
2
作者
姚学萍
栾红雨
+4 位作者
袁曦
曹随忠
余树民
刘长松
刘宗平
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2010年第4期71-75,共5页
采用RT-PCR方法从奶牛乳腺组织中扩增气管抗菌肽(TAP)基因,重组到pMD19-T Simple载体中,并进行序列分析。序列分析结果显示,克隆的TAP基因包含完整的开放阅读框(ORF)195 bp,与牛TAP基因同源性达93.8%;该ORF编码的64个氨基酸,含有β-防...
采用RT-PCR方法从奶牛乳腺组织中扩增气管抗菌肽(TAP)基因,重组到pMD19-T Simple载体中,并进行序列分析。序列分析结果显示,克隆的TAP基因包含完整的开放阅读框(ORF)195 bp,与牛TAP基因同源性达93.8%;该ORF编码的64个氨基酸,含有β-防御素特征性结构即6个在特定位置上的保守半胱氨酸残基。TAP基因cDNA完整开放阅读框的克隆,为进一步开发应用重组牛β-防御素奠定了基础。
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关键词
Β-防御素
气管抗菌肽
乳腺
基因克隆
奶牛
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职称材料
奶牛bTAP蛋白表达载体的构建及其在奶牛乳腺上皮细胞中的表达
3
作者
张小灵
葛俊伟
李玉龙
《畜牧兽医科技信息》
2015年第5期34-35,共2页
奶牛气管抗菌肽是一种具有较强抗菌活性的抗菌小肽。实验从奶牛气管组织中提取总RNA,反转录成c DNA,以此为模板,用奶牛气管抗菌肽特异性PCR引物扩增奶牛气管抗菌肽基因,然后将其连入载体p CMV-C-e GFP中构建奶牛气管抗菌肽的真核表达载...
奶牛气管抗菌肽是一种具有较强抗菌活性的抗菌小肽。实验从奶牛气管组织中提取总RNA,反转录成c DNA,以此为模板,用奶牛气管抗菌肽特异性PCR引物扩增奶牛气管抗菌肽基因,然后将其连入载体p CMV-C-e GFP中构建奶牛气管抗菌肽的真核表达载体b TAP-GFP,并将此载体转染进奶牛乳腺上皮细胞中,分别运用荧光蛋白观察和细菌记数等方法检测b TAP-GFP蛋白在细胞中的表达及其对大肠杆菌的抗菌活性。试验结果表明,试验成功的建立了奶牛气管抗菌肽的真核表达载体b TAP-GFP,并且此重组载体能在奶牛乳腺上皮细胞中正常表达具有抗大肠杆菌活性的b TAP-GFP蛋白。
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关键词
奶牛
气管抗菌肽
真核表达载体
奶牛乳腺上皮细胞
基因表达
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职称材料
题名
奶牛气管抗菌肽(TAP)基因乳腺特异性表达载体的构建与鉴定
1
作者
曹随忠
姚学萍
崔亚飞
杨德英
雍康
余树民
刘宗平
机构
四川农业大学动物医学院
扬州大学兽医学院
出处
《西北农林科技大学学报(自然科学版)》
CSCD
北大核心
2013年第6期1-7,18,共8页
基金
中国博士后科学基金项目(20090451250)
四川省教育厅青年基金项目(09zb054)
国际科技合作重点项目(2005DFA30720)
文摘
【目的】构建奶牛气管抗菌肽(TAP)基因乳腺特异性表达载体。【方法】根据GenBank中牛TAP基因cDNA序列(GenBank号:NM_174776)设计引物,从奶牛乳腺组织中RT-PCR扩增TAP基因编码序列,将其克隆到pMD19-T(simple)载体中测序。重组质粒pMD-TAP经EcoRⅠ+KpnⅠ双酶切回收目的基因片段,亚克隆到携带增强型绿色荧光蛋白的通用型乳腺特异性表达载体pBLG-EGFP中,采用脂质体法转染奶牛乳腺上皮细胞(bMEC)、COS-7细胞,并注射泌乳家兔乳腺组织,荧光显微镜检测转染细胞中绿色荧光蛋白的表达,半定量RT-PCR检测家兔乳腺组织中TAP mRNA的表达。【结果】成功构建了乳腺特异性表达载体pBLG-EGFP-TAP,该载体可在bMEC中特异性地表达绿色荧光蛋白;半定量RT-PCR检测发现,转染pBLG-EGFP-TAP可显著提高家兔乳腺组织中TAPmRNA的表达水平。【结论】成功构建了乳腺特异性表达载体pBLG-EGFP-TAP,为进一步研究奶牛TAP基因的表达特性及利用基因工程技术防治奶牛乳房炎提供了重要材料。
关键词
奶牛
乳房炎
Β-防御素
气管抗菌肽
基因
乳腺特异性表达载体
Keywords
dairy cattle
mastitis
β-defensin
trachea antimicrobial peptide(TAP) gene
mammary gland specific expressing vector
分类号
S858.237.26 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
奶牛乳房炎抗性基因TAP cDNA克隆及序列分析
被引量:
3
2
作者
姚学萍
栾红雨
袁曦
曹随忠
余树民
刘长松
刘宗平
机构
四川农业大学动物医学院
扬州大学兽医学院
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2010年第4期71-75,共5页
基金
中国博士后科学基金项目(20090451250)
教育部《长江学者和创新团队发展计划》创新团队项目(IRT0848)
+1 种基金
扬州大学博士后基金(2008)
国际科技合作重点项目计划(2005DFA30720)
文摘
采用RT-PCR方法从奶牛乳腺组织中扩增气管抗菌肽(TAP)基因,重组到pMD19-T Simple载体中,并进行序列分析。序列分析结果显示,克隆的TAP基因包含完整的开放阅读框(ORF)195 bp,与牛TAP基因同源性达93.8%;该ORF编码的64个氨基酸,含有β-防御素特征性结构即6个在特定位置上的保守半胱氨酸残基。TAP基因cDNA完整开放阅读框的克隆,为进一步开发应用重组牛β-防御素奠定了基础。
关键词
Β-防御素
气管抗菌肽
乳腺
基因克隆
奶牛
Keywords
β-defensins
tracheal antimicrobial peptide(TAP)
mammary gland
gene cloning
dairy cow
分类号
Q785 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
奶牛bTAP蛋白表达载体的构建及其在奶牛乳腺上皮细胞中的表达
3
作者
张小灵
葛俊伟
李玉龙
机构
东北农业大学动物医学学院
哈尔滨维科生物技术开发公司
出处
《畜牧兽医科技信息》
2015年第5期34-35,共2页
文摘
奶牛气管抗菌肽是一种具有较强抗菌活性的抗菌小肽。实验从奶牛气管组织中提取总RNA,反转录成c DNA,以此为模板,用奶牛气管抗菌肽特异性PCR引物扩增奶牛气管抗菌肽基因,然后将其连入载体p CMV-C-e GFP中构建奶牛气管抗菌肽的真核表达载体b TAP-GFP,并将此载体转染进奶牛乳腺上皮细胞中,分别运用荧光蛋白观察和细菌记数等方法检测b TAP-GFP蛋白在细胞中的表达及其对大肠杆菌的抗菌活性。试验结果表明,试验成功的建立了奶牛气管抗菌肽的真核表达载体b TAP-GFP,并且此重组载体能在奶牛乳腺上皮细胞中正常表达具有抗大肠杆菌活性的b TAP-GFP蛋白。
关键词
奶牛
气管抗菌肽
真核表达载体
奶牛乳腺上皮细胞
基因表达
分类号
S823 [农业科学—畜牧学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
奶牛气管抗菌肽(TAP)基因乳腺特异性表达载体的构建与鉴定
曹随忠
姚学萍
崔亚飞
杨德英
雍康
余树民
刘宗平
《西北农林科技大学学报(自然科学版)》
CSCD
北大核心
2013
0
下载PDF
职称材料
2
奶牛乳房炎抗性基因TAP cDNA克隆及序列分析
姚学萍
栾红雨
袁曦
曹随忠
余树民
刘长松
刘宗平
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2010
3
下载PDF
职称材料
3
奶牛bTAP蛋白表达载体的构建及其在奶牛乳腺上皮细胞中的表达
张小灵
葛俊伟
李玉龙
《畜牧兽医科技信息》
2015
0
下载PDF
职称材料
已选择
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