百日咳杆菌气管细胞毒素的结构组成及其致病性研究

本文重点介绍应用快原子轰击质谱法和高效液相色谱法新技术分析百日咳气管细胞毒素(Tracheal Cytotoxin,TCT)的结构和化学组成。TCT由百日咳杆菌细胞壁肽聚糖派生,与百日咳杆菌毒力决定簇相关,它参与百日咳致病作用,并与其它百日咳毒素成分协同作用引起百日咳一系列病理生理学变化,造成组织重叠性损害。

液相色谱-串联质谱法测定百日咳和百白破疫苗中百日咳杆菌气管细胞毒素

百日咳杆菌气管细胞毒素(TCT)是一种引起百日咳及百日咳相关疫苗不良反应的毒性糖肽。尽管各国药典均规定了百日咳疫苗产品中TCT的含量限度,但均没有推荐TCT的含量测定方法。该研究发展了一种液相色谱-串联质谱法用于TCT的含量测定。实验优化了包括色谱柱类型和流动相组成在内的TCT色谱条件。虽然TCT在反相色谱模式和亲水作用色谱(HILIC)模式下均具有较好的保留,但HILIC模式与蛋白质沉淀的前处理方法兼容性更好,因此采用HILIC模式分离TCT。优化所得的方法具有较宽的线性范围(5.76～369 ng/L),良好的重复性(峰面积的相对标准偏差不大于3.9%),各种基质中均有较好的回收率(96.4%～102.5%),且定量限是药典要求的TCT最高限量的1/1 279。将本方法用于共纯化百日咳疫苗、组分百日咳疫苗、共纯化无细胞百白破疫苗和组分无细胞百白破疫苗中TCT的检测,所有产品均未检出TCT,表明被检样品具有较好的工艺条件可避免TCT在产品中的残留。

以组分百白破疫苗为基础的联合疫苗中气管细胞毒素定量分析液相色谱串联质谱联用方法的建立及验证

目的建立定量分析以组分百白破疫苗为基础的联合疫苗中百日咳鲍特氏菌气管细胞毒素(tracheal cytotoxin,TCT)的液相色谱串联质谱(liquid chromatography tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)方法,并进行验证及初步应用。方法HPLC条件:色谱柱BioC18,流动相A为0.1%甲酸水溶液(V/V),流动相B为0.1%甲酸乙腈溶液(V/V),进样量为5μL,柱温为30℃,流速为0.3 mL/min;MS条件:电喷雾离子源正电子模式,电压为3.0 KV,离子源温度为300℃,脱溶剂管温度为250℃,雾化器流速为3 L/min,干燥气流速为10 L/min,采用多反应监测模式(multi reaction monitoring mode,MRM)检测TCT。验证方法的线性范围、灵敏度、精密度及准确度。采用该方法对国内外公司生产的组分百白破联合疫苗33批成品、63批原液、80批纯化蛋白进行TCT筛查及定量分析。结果TCT标准溶液在20.66~661 ng/L范围内,与TCT的定量高子通道922.3>719.3峰面积线性良好,线性方程为Y=3555.9 X-3368,R2=0.996;检出限为2.58 ng/L,定量限为10.33 ng/L;20.65、82.625及330.5 ng/L TCT标准溶液重复检测5次TCT峰面积的RSD分别为2.23%、4.61%和4.40%;66.1及33.05 ng/L的加标样品回收率分别为104.1%和94.4%。所有组分百日咳联合疫苗成品及原液样品均无TCT检出,纯化蛋白样品仅有一家公司的1批黏附素(pertactin,PRN)蛋白的裂解菌体浓缩液检出65.5 ng/L TCT,其后序工艺样品均未检出。结论成功建立了定量分析组分百白破联合疫苗中TCT的LC-MS/MS方法,该方法灵敏度高,准确度、精密度及线性良好,可用于我国组分百白破联合疫苗的TCT定量定性检测。

兔波氏杆菌研究进展及防控对策思考

波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb)最早分离自患有犬瘟热的犬中,至今已有百余年,主要感染家兔、猪、狗等哺乳动物,给畜牧生产带来巨大经济损失,其中兔波氏杆菌病已成为家兔养殖中发病率和死亡率增加的重要原因之一,本文将着重论述兔波氏杆菌流行现状、病原特性及防治对策。1波氏杆菌流行病学波氏杆菌是一种具有高度传染性的呼吸道病原体,1910年Ferry首次从犬上分离到该菌。