猪舍环境中气载需氧菌及气载葡萄球菌的研究

本研究采用Andersen-6空气微生物收集器,选用血-葡萄糖-琼脂培养基为采样介质,对两个不同猪场8个猪舍环境空气中需氧菌总数和葡萄球菌总数进行了检测,并对葡萄球菌的菌群组成进行了分析,评价气载需氧菌和气载葡萄球菌对猪舍环境的污染及对饲养人员健康的潜在危害。结果表明,2个猪场气载需氧菌的浓度分别为2.87×104、12.65×104CFU/m3,葡萄球菌的浓度分别为1.94×104、5.74×104CFU/m3。猪舍空气中葡萄球菌主要包括金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、猪葡萄球菌、木葡萄球菌、头状葡萄球菌、科氏葡萄球菌、肉葡萄球菌,其中金黄色葡萄球菌的浓度占葡萄球菌总浓度的24%和27%,其次是表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌。从葡萄球菌菌在Andersen-6空气微生物收集器层级上的分布规律来看,主要分布在B^E级(36.9%),气溶胶颗粒直径在0.2~6μm之间,可以进入到人、畜的气管、支气管,甚至细支气管,对养殖人员和动物呼吸道存在严重危害。

牛羊场环境气载葡萄球菌浓度及气溶胶粒谱特征分析

以5%绵羊血琼脂平板为采样基质,应用Andersen-6级空气微生物采样器,分别于春季、夏季、秋季和冬季采集牛场、羊场、牛运动场及养殖场外环境空气中的葡萄球菌,并分析葡萄球菌气溶胶的空气动力学特性,为反刍动物养殖场的环境控制提供依据。结果显示,牛、羊场环境气载葡萄球菌浓度随季节变化波动较大,夏、冬两季较高,春季最低;牛、羊场环境气载葡萄球菌浓度在养殖场下风向均随与场区距离增大而逐渐减小,下风向100 m处浓度均高于上风向10 m处。牛场和羊场环境葡萄球菌气溶胶颗粒在采样器Ⅲ~Ⅵ级占比为53.33%~84.73%,牛场葡萄球菌气溶胶颗粒的峰值分布在采样器第Ⅳ级,羊场峰值分布在采样器第Ⅰ级;羊场及外环境葡萄球菌气溶胶粒子中值直径(CMD)大于牛场,细菌粒径分布的离散度(GSD)值小于牛场。

奶牛场环境中气载金黄色葡萄球菌的耐药性分析与散播试验

为了解奶牛养殖场内、外环境中金黄色葡萄球菌的耐药情况和散播特点,以5%绵羊血琼脂平板为采样基质,应用Andersen 6级空气生物采样器采集奶牛场内、外环境空气及牛场内粪土样本,经细菌分离、纯化和16S rRNA保守序列分析鉴定金黄色葡萄球菌,并进行了菌株耐药性和ERIC-PCR亲缘性分析。结果:从奶牛场内、外环境和牛场粪土中分离鉴定出51株金黄色葡萄球菌。药敏试验发现,分离菌株表现出不同程度的耐药性和多重耐药性,其中青霉素P-G的耐药情况最为严重,耐药率为100%,多重耐药主要表现为2耐、3耐、4耐;对不同来源金黄色葡萄球菌进行亲缘性分析,结果显示,牛舍内空气中90.5%(19/21)、牛场外空气中50%(7/14)的金黄色葡萄球菌与粪土中的金黄色葡萄球菌遗传相似系数≥90%,表明粪土中的金黄色葡萄球菌可形成微生物气溶胶,向养殖场周围环境散播。

鸡舍环境金黄色葡萄球菌气溶胶产生及其传播的REP-PCR鉴定

采用ANDERSEN-6级空气微生物样品收集器和RCS离心式采样器在山东泰安4个鸡场舍内空气、舍外环境上风向10、50m和下风向10、50、100、200、400m不同距离处收集金黄色葡萄球菌，计算每个采样点的金黄色葡萄球菌浓度；与此同时，收集鸡的粪便，分离金黄色葡萄球菌。利用金黄色葡萄球菌DNA基因外重复一致回文序列聚合酶链式反应（Repetitive extragenic palindromic elements PCR，REP—PCR）鉴定技术，扩增不同测量点和粪便分离的金黄色葡萄球菌的DNA图谱。通过每个采样点的金黄色葡萄球菌的浓度变化以及金黄色葡萄球菌遗传相似性分析确认动物舍微生物气溶胶向舍外环境的传播。结果显示：4个鸡场舍内空气中金黄色葡萄球菌的浓度远远高于舍外上风和下风向的金黄色葡萄球菌浓度（P〈0．05或P〈0．01），但是舍外下风不同距离间的金黄色葡萄球菌浓度差异并不显著（P〉0．05）。REP-PCR结果表明，从鸡的粪便中分离的金黄色葡萄球菌与从舍内空气中分离的部分金黄色葡萄球菌（38．7％）相似性可达100％，从鸡场舍外下风方向分离到的多数金黄色葡萄球菌（55．9％）与舍内空气或粪便中分离的金黄色葡萄球菌相似性可达100％。可见，它们分别是由粪便中遗传基因完全相同的菌株繁殖而来。而从鸡舍上风分离到的金黄色葡萄球菌与舍内空气或粪便中分离的金黄色葡萄球菌相似性仅在60％～87％。结果显示，鸡粪便中的金黄色葡萄球菌能够形成气溶胶，进入气悬状态，不仅能在舍内传播，而且还能够借助舍内外气体交换，传播到舍外下风一定的距离。从而说明，来自动物体的金黄色葡萄球菌既能污染舍内空气，对本舍鸡群构成传染威胁，又能传播一定的距离，对周边社区环境空气造成生物污染。