广谱钙粘附素与β-连环素在肺纤维化小鼠气道上皮损伤及修复中的表达

运用免疫组织化学方法检测实验性肺纤维化小鼠不同时期气道上皮广谱钙粘附素 ( Pan- cadherin,Pan- cd)、β-连环素 ( β- catenin,β- cat)及 PCNA的表达。结果发现 ,随肺纤维化进展 ,小气道上皮 Pan- cd与 β- cat表达强度均减弱 ,且同步性地出现下调 -恢复 -下调的动态变化 ,Pan- cd由正常的胞膜型进而出现胞浆 -胞膜 -胞浆型的改变 ,同时 ,小气道上皮细胞 PCNA表达增强 ,且呈动态变化。提示 :小气道上皮的反复损伤与修复过程可能参与了肺纤维化的形成。

气道上皮损伤对成纤维细胞增殖的影响

目的探讨气道上皮细胞对成纤维细胞生长的调节机制。方法应用一种间接的气道重构的细胞模型,以酪氨酸激酶抑制剂(TKIs)TyrphostinAG1478及金转停为干预因素,用3HTdR掺入法观察大鼠气管上皮细胞不同损伤状态下培养上清液对成纤维细胞生长的影响,用ELISA方法检测上清液中表皮生长因子(EGF)及转化生长因子β1(TGFβ1)的变化。结果损伤组上皮的50%培养上清液刺激成纤维细胞的增殖,上皮损伤后50μmol/L的TKIs预处理30min可减弱其刺激作用;损伤组上皮细胞的上清液中TGFβ1明显降低,50μmol/L的TKIs预处理后可使上清液中TGFβ1明显增高;各组中均未检测出EGF。结论上皮损伤可间接导致成纤维细胞增殖,上皮损伤后一定浓度的TKIs预处理30min则可一定程度地抑制此种增殖效应,TKIs对气道重构的发生可能有一定预防作用。

气道上皮损伤及上皮衍化松弛因子与哮喘

本文综述气道上皮损伤及上皮衍化松弛因子与气道高反应性和哮喘的关系。系统地介绍了气道上皮损伤的原因及其诱发气道反应性增高的机理;上皮衍化松弛因子的生理特性及其临床意义。

气道上皮损伤与支气管哮喘

支气管哮喘发病过程中 ,多种因素可导致气道上皮损伤。损伤的气道上皮细胞通过细胞因子介质与气道平滑肌细胞、成纤维细胞及炎症细胞间的相互作用 ,参与了气道炎症、气道重塑及气道高反应性的形成 。

β连环素在吸烟小鼠气道上皮损伤修复中的作用

目的 研究 β连环素 (β cat)在吸烟小鼠不同阶段气道上皮中表达的变化 ,探讨不同功能状态的β cat在气道上皮损伤修复中的作用。 方法 采用HE染色光镜观察研究小鼠吸烟 5周组(S5w组 ) ,吸烟 10周组 (S10w组 ) ,吸烟 15周组 (S15w组 )气道上皮的形态学变化 ;应用原位杂交及免疫组化技术研究气道上皮 β catmRNA、β cat、原癌基因 (c Src)、酪氨酸磷酸化蛋白 (phosphorytyrsine,p Tyr)的表达。结果 (1)随着吸烟时间的延长气道上皮形态学上呈损伤 (S5w)、修复 (S10w)、过度增殖 (S15w)变化。 (2 )S5w、S10w、S15w组 β catmRNA及蛋白表达水平均较对照组低 (对照组、S5w、S10w、S15w组 β cat染色平均吸光度值分别为 0 2 0 4± 0 0 12、0 0 97± 0 0 0 7、0 16 0± 0 0 0 3、0 10 7±0 0 0 8;β catmRNA染色平均吸光度值分别为 0 2 2 3± 0 0 0 8、0 12 3± 0 0 11、0 173± 0 0 0 8、0 116± 0 0 0 4,P <0 0 1)。但S10w组 β catmRNA及蛋白表达水平较S5w、S15w组高。S15w组中尚可见 β cat核内表达。 (3)正常气道上皮细胞c Src、p Tyr表达极弱 ,和S5w、S10w、S15w组相比差异有显著性 (对照组、S5w、S10w、S15w组c Src染色平均吸光度值分别为 0 0 48± 0 0 15、0 12 7± 0 0 18?

气道上皮损伤对上皮下成纤维细胞转分化的影响及其在支气管哮喘气道高反应发生中的地位

目的探讨损伤气道上皮对上皮下成纤维细胞活化、转分化为肌纤维母细胞的影响及其在支气管哮喘(简称哮喘)气道高反应中的地位。方法原代培养的人气道上皮下成纤维细胞与经脂多糖(LPS)处理后给予机械划伤的人气道上皮细胞(16HBE)共培养,分别加入内皮素(ET)受体A拮抗剂BQ123、转化生长因子β1(TGF-β1)中和抗体及丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信号通路特异性抑制剂,应用免疫组化、免疫印迹以及5-溴-2′-脱氧尿苷(BrdU)掺入等方法,检测上皮下成纤维细胞α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达与细胞增殖情况;将细胞转染反义内皮素转换酶(anti-ECE)mRNA表达载体并运用酶谱分析法,研究ET-1与基质金属蛋白酶(MMPs)的相互作用。结果损伤上皮诱导并增强了上皮下成纤维细胞α-SMA表达及细胞增殖,同时诱导了上皮下成纤维细胞p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)及细胞外信号调节激酶(ERK1/2)信号通路的活化;BQ123、TGF-β1中和抗体及p38MAPK、ERK1/2抑制剂均分别抑制或部分抑制了α-SMA的表达。与对照(转染空载体)及转染anti-ECEmRNA表达载体上皮细胞比较,转染空载体的上皮细胞损伤后上清液中ET-1分泌[机械划伤+LPS刺激的pEGFPN2转染16HBE组为(15·00±0·86)pg/ml;机械划伤+LPS刺激的anti-ECE转染16HBE组为(7·57±0·94)pg/ml]增加(P均<0·01)。结论损伤上皮通过释放ET-1和(或)TGF-β1诱导了上皮下成纤维细胞向肌纤维母细胞转分化并促进了细胞的增殖,这一过程涉及了MAPKs家族的p38MAPK与ERK1/2信号通路的激活。

基于含药肝孵育液法的麻杏石甘汤抗气道上皮损伤的作用机制研究

目的结合体内外实验探讨含药肝孵育液法用于中药体外药理学研究的可行性及麻杏石甘汤抗气道上皮损伤的作用机制。方法SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组、地塞米松组(dexamethasone,Dex)及麻杏石甘汤组(中药配比方A、B、C、D),麻杏石甘汤干预大鼠哮喘模型,记录引喘潜伏期,病理切片观察气管组织病理形态和气道上皮细胞超微结构变化,原位杂交和蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测表皮生长因子受体(EGFR)mRNA和蛋白表达;SD雄性大鼠离体气管随机分为正常组、模型组、布地奈德福莫特罗组(budesonide and formoterol fumarate powder for inhalation,BF)及麻杏石甘汤含药肝孵育液组(中药配比方A、B、C、D),麻杏石甘汤含药肝孵育液干预大鼠离体气管损伤模型,记录气管张力变化,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测气管EGFR、血管内皮生长因子(VEGF)和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)含量水平,原位杂交和免疫组化分别检测磷酸肌醇-3-激酶(PI3K)mRNA和蛋白表达;大鼠气道上皮细胞(RTE)随机分为正常组、模型组、地塞米松组及麻杏石甘汤含药肝孵育液组(中药配比方A、B、C、D),麻杏石甘汤含药肝孵育液干预RTE细胞损伤模型,流式细胞术检测RTE细胞损伤率,Western blot检测RTE细胞EGFR、PI3K蛋白表达。结果整体研究表明,与正常组比较,模型组气管组织EGFR mRNA和蛋白表达显著升高,气管组织结构形态和上皮细胞超微结构受损;与模型组比较,给药组均可延长大鼠引喘潜伏期,修复气管组织结构形态和上皮细胞超微结构损伤,并下调EGFR mRNA和蛋白表达,以A组药效最为显著。离体组织研究表明,与正常组比较,模型组气管EGFR、VEGF、GM-CSF含量水平显著升高,PI3KmRNA和蛋白表达显著升高;与模型组比较,给药组均可舒张气管环张力,降低EGFR、VEGF、GM-CSF含量水平,并下调PI3K mRNA和蛋白的表达,以A组药效最为显著。离体细胞研究表明,与正常组比较,模型组RTE细胞损伤率显著增加,EGFR、PI3K蛋白表达显著升高;与模型组比较,给药组均可降低RTE细胞损伤,下调EGFR、PI3K蛋白表达,以A组药效最为显著。结论含药肝孵育液法用于体外药理学研究对各药效指标影响的作用趋势与体内药理作用相一致,具备较好的可行性;麻杏石甘汤减轻气道上皮损伤可能是通过调节EGFR/PI3K信号通路和抑制气道重塑发挥作用。

由细胞外信号传导调节激酶1／2介导的紧密连接解聚成分在吸烟引起的气道上皮损伤中发挥作用

吸烟可通过多种生化方式损伤气道上皮，改变其正常的功能和结构。这种损伤可涉及紧密连接而损伤上皮屏障功能。为了研究吸烟冷凝物（CS Condensate，CSC）对紧密连接的影响，明尼苏达大学公共卫生学院和医学院的Loredana Petecchia等进行了研究，并将其结果发表在2009年6月的Chest杂志上。

气道上皮细胞在支气管哮喘发病机制中的研究进展

支气管哮喘（简称哮喘）是由多种细胞（如嗜酸性粒细胞、肥大细胞、T淋巴细胞、气道上皮细胞等）和细胞组分参与的气道慢性炎症性疾病。气道在环境激发因子的作用下,气道上皮细胞是首先受累的细胞,气道上皮损伤与气道慢性炎症、气道高反应性、气道重塑等密切相关,气道上皮细胞可合成和释放多种炎症介质和细胞因子,

阻断CD40-CD40L信号通路对小鼠原位气管移植术后早期气道上皮细胞的影响

目的本研究利用小鼠原位气管移植模型,应用anti m CD40L阻断CD40-CD40L信号通路,探讨其对气管移植模型中IL-17A介导的免疫反应的机制及其调控对移植物的影响,进一步解析其对移植物损伤和疾病预后的影响,为临床寻求新的预防和治疗方法。方法建立小鼠原位气管移植的模型,选取野生型Balb/c小鼠作为供体,野生型C57BL/6小鼠作为供体或受体。移植术后第3天,利用实时荧光定量PCR技术检测各组移植气管中IL-17A m RNA表达水平、ELISA检测血清中IL-17的含量;移植术后第15天,采用苏木精-伊红(HE)、Masson染色,观察各组移植气管组织的病理学改变。结果注射anti m CD40L(MR-1)抗体后,术后3 d移植物中IL-17A m RNA相对于同种异型非特异性免疫球蛋白抗体组有所下降(P<0.05);各组血清中IL-17的含量变化不明显(P>0.05)。术后15 d病理结果显示注射anti m CD40L后可以有效改善气管上皮细胞的损伤。结论阻断CD40-CD40L信号通路能够缓解原位气管移植术后IL-17A对气管上皮细胞的损伤。

麻杏石甘汤含药肝孵育液对大鼠气道上皮细胞损伤的保护作用研究

目的探讨麻杏石甘汤含药肝孵育液对大鼠气道上皮细胞损伤的保护作用。方法按照麻黄-甘草三个配比(1∶4、4∶1、1∶1)制备麻杏石甘汤药液,通过外翻肠囊法、肝细胞短暂孵育分别制备含药肝孵育液A、B和C;以磷酸组胺复制气道上皮细胞损伤模型;造模后细胞分为模型组(完全培养基)、阳性对照组(200μmol·L^(-1)地塞米松)和实验A、B和C组(含药肝孵育液A、B和C),另取正常大鼠气道上皮细胞作为空白对照组。用流式细胞术检测总凋亡率,用荧光素DCFH-DA探针法测定细胞内活性氧(ROS)含量,用蛋白质印迹(Western blot)法检测上皮细胞表皮生长因子受体(EGFR)、磷酸肌醇-3-激酶(PI3K)蛋白的表达水平。结果空白对照组、模型组、阳性对照组和实验A、B、C组的细胞凋亡率分别为(21.29±0.94)%、(30.59±1.55)%、(23.16±1.76)%、(18.87±5.94)%、(17.93±5.26)%和(16.75±2.06)%,细胞内活性氧(ROS)水平分别为1.00±0.06、1.84±0.26、0.97±0.13、0.86±0.23、0.92±0.05和1.07±0.14,EGFR蛋白相对表达水平分别为0.69±0.04、1.01±0.10、0.48±0.01、0.57±0.16、0.30±0.07和0.34±0.05,PI3K蛋白相对表达水平分别为0.38±0.01、0.59±0.01、0.40±0.01、0.35±0.15、0.14±0.01和0.20±0.04;实验A、B和C组的上述指标与模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论麻杏石甘汤含药肝孵育液可能通过降低细胞活性氧水平,抑制细胞凋亡,调控EGFR/PI3K蛋白的表达,从而达到减轻气道上皮细胞损伤的作用。

冬令扶正膏对哮喘缓解期患儿外周血CD_(19)和CD_(23)表达的影响

哮喘是小儿常见的呼吸道疾病，其发病率有逐年上升的趋势。由于其反复发作，可使气道上皮损伤，造成不可逆的气道狭窄，长期困扰患儿，严重影响其生长发育及身心健康。哮喘的病理基础是慢性气道炎症，许多细胞、细胞因子和炎性介质参与了这种炎症反应，

支气管哮喘的几点新认识

支气管哮喘为常见的慢性病,病因较复杂,大多在遗传的基础上受到体内外某些因素而激发。治疗上以控制症状为主,以取得哮喘的暂时缓解。近几十年哮喘的病死率逐年增加,可能与哮喘发病机制研究有误导,以致治疗偏差有关。最近几年学者们提出哮喘发病中的新概念及治疗上的某些新认识,现综述如下。

IL-17A对小鼠气管移植后早期气道上皮细胞的影响

目的 通过建立小鼠原位气管移植模型,探讨气管移植早期IL-17A对气道上皮细胞的影响.方法 选取19～ 21 g清洁级雄性C57BL/6小鼠（n=50）和BALB/c小鼠（n=20）,供受体按体质量配对后随机分为5组,对照组：正常C57BL/6小鼠（n=10）;A组：C57 BL/6（n=10） →C57BL/6（n=10）;B组：BALB/c（n=10） →C57 BL/6（n=10）;C组：BALB/c（n=5）→C57 BL/6（n=5）,注射anti-IL-17A中和抗体;D组：BALB/c（n=5）→C57 BL/6（n=5）,注射IgG;A、B组进一步随机分为3天、14天亚组（n=5）.术后第3天,采用实时荧光定量PCR技术检测A、B组移植气管中IL-17A mRNAⅡ表达水平,使用流式细胞技术检测气管引流淋巴结中γδ T细胞的比例.术后第14天,分别采用HE、Masson染色,观察各组移植气管组织病理学改变.结果 术后小鼠无死亡.术后第3天,B组移植气管组织中IL-17AmRNA表达水平明显高于A组（P＜0.05）;B组小鼠气管引流淋巴结中γδ T细胞占CD3＋T细胞的比例明显高于A组（P＜0.05）.术后14天移植气管组织病理学检查提示：A组气道纤毛柱状上皮结构完整,黏膜下层无纤维组织增生;B、D组气道上皮由柱状变为扁平状上皮并部分脱落,黏膜下层纤维组织增生明显;C组气道纤毛柱状上皮结构较完整,黏膜下层可见纤维组织增生.4组小鼠气管管腔闭塞率分别为（31.21 ±2.82）％、（42.45±2.21）％、（39.04±1.98）％、（40.67±1.54）％,A、B组相比差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 IL-17A在气管移植免疫排斥的早期发挥重要作用,并介导气道上皮的损伤.

二氧化硫对慢性变应性气道炎症、气道上皮下纤维化的促进作用

目的研究SO2所造成的急性气道炎症、上皮损伤对卵白蛋白反复激发致敏小鼠慢性变应性气道炎症、气道上皮下纤维化（subepithelial fibrosis，SEF）的影响。方法吸入50ppm SO2诱发急性气道炎症；卵白蛋白反复激发4、8周，观察首次激发前吸入、未吸入SO2的小鼠支气管肺泡灌洗液（bronehoalveolar lavage fluid，BALF）细胞学、内皮素1（endothelin-1，ET-1）和转化生长因子β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）水平、肺组织羟脯氨酸（Hyp）含量、气道上皮基底膜下纤维面积及气道组织学改变。结果吸入SO2导致急性中性粒细胞性气道炎症、上皮损伤，卵白蛋白反复激发诱发慢性变应性气道炎症、SEF，二者均导致BALF中ET-1、TGF-β1水平增高。与同期单纯激发组相比，损伤激发组SEF出现更早，气道炎症、SEF更显著，肺组织Hyp与BALF中TGF-β1呈正相关。结论预先吸入SO2导致的急性气道炎症、上皮损伤能加剧慢性变应性气道炎症，促进并加重SEF，可能与气道炎症、上皮损伤过程中气道微环境ET-1、TGF-β1表达上调有关。