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rHSG基因调控COPD大鼠气道成纤维细胞增殖凋亡 被引量:5
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作者 葛正行 李波 +1 位作者 周洵 李常 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2013年第10期1235-1241,共7页
目的采用脂质体介导携带大鼠增殖抑制基因(rHSG)的真核表达载体,转染至COPD模型大鼠气道成纤维细胞,为干预COPD的气道成纤维细胞增殖,打下基因治疗基础。方法构建真核表达载体pEGFP-N1,对重组质粒pEGFP-rHSG进行鉴定并测序;采用阳离子... 目的采用脂质体介导携带大鼠增殖抑制基因(rHSG)的真核表达载体,转染至COPD模型大鼠气道成纤维细胞,为干预COPD的气道成纤维细胞增殖,打下基因治疗基础。方法构建真核表达载体pEGFP-N1,对重组质粒pEGFP-rHSG进行鉴定并测序;采用阳离子脂质体将重组质粒pEGFP-rHSG转染至COPD模型大鼠气道成纤维细胞,分别感染24和48 h及3、5和7 d后,用实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测rHSG mRNA的不同时段表达水平,MTT、流式细胞仪检测转染后成纤维细胞增殖及凋亡。结果证实重组质粒pEGFP-rHSG构建成功。转染24 h,rHSG mRNA表达量开始增加,7 d达到高峰,各转染组间rHSG mRNA表达差异显著(P<0.05);转染48 h后rHSG基因转染组成纤维细胞的增殖抑制明显低于未转染组成纤维细胞(P<0.05);转染后48 h凋亡开始,与模型对照组相比,随着时间延长,凋亡逐渐增加,7 d时凋亡率达最大(P<0.05)。结论外源性rHSG基因介导,能够使气道成纤维细胞的增殖受到抑制并诱导其凋亡。 展开更多
关键词 慢性阻塞性肺疾病 气道重塑 气道成纤维细胞 大鼠增殖抑制基因
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rHSG基因对COPD大鼠气道成纤维细胞增殖凋亡的调控 被引量:4
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作者 葛正行 李波 +1 位作者 周洵 李常 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2013年第10期1549-1552,共4页
目的:研究外源性大鼠增殖抑制基因(rat hyperplasia suppressor gene,rHSG)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠气道成纤维细胞增殖的影响。方法 :采用阳离子脂质体将重组质粒pEGFP-rHSG转染至COPD模型大鼠气道成纤维细胞,分别感染24、48 h及3... 目的:研究外源性大鼠增殖抑制基因(rat hyperplasia suppressor gene,rHSG)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠气道成纤维细胞增殖的影响。方法 :采用阳离子脂质体将重组质粒pEGFP-rHSG转染至COPD模型大鼠气道成纤维细胞,分别感染24、48 h及3、5 d和7 d后,用实时荧光定量PCR(Real time-PCR)检测rHSGmRNA的不同时段表达水平,MTT、流式细胞仪检测转染后成纤维细胞增殖及凋亡。结果:转染24 h,rHSGmRNA表达量开始增加,高峰在7 d时,各转染组间rHSG mRNA表达差别满足(P<0.05);转染48 h后rHSG基因转染组成纤维细胞的增殖抑制明显低于未转染组(P<0.05);转染后48 h凋亡开始,与对照组相比,随着时间延长,凋亡逐渐增加,7 d时凋亡率达最大(P<0.05)。结论:外源性rHSG基因能够抑制气道成纤维细胞增殖诱导其凋亡。 展开更多
关键词 肺疾病 慢性阻塞性 气道重塑 气道成纤维细胞 大鼠增殖抑制基因
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大鼠气道成纤维细胞的分离、培养及鉴定 被引量:6
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作者 李常 葛正行 李波 《吉林医学》 CAS 2012年第19期4043-4044,共2页
目的:体外分离、培养、纯化大鼠气道成纤维细胞,并对其进行鉴定,为进一步气道成纤维细胞的相关研究提供物质基础。方法:处死SD大鼠,在无菌条件下切开胸腔,取出气道,刮去气管内膜上皮及气管外组织,将气道剪成小组织块行贴壁培养,用抗波... 目的:体外分离、培养、纯化大鼠气道成纤维细胞,并对其进行鉴定,为进一步气道成纤维细胞的相关研究提供物质基础。方法:处死SD大鼠,在无菌条件下切开胸腔,取出气道,刮去气管内膜上皮及气管外组织,将气道剪成小组织块行贴壁培养,用抗波形蛋白对其进行鉴定。结果:成功分离、培养出SD大鼠气道成纤维细胞,通过鉴定得出所培养的细胞为成纤维细胞。结论:成功分离、培养出大鼠气道成纤维细胞,为进一步深入研究气道成纤维细胞的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 大鼠 气道成纤维细胞 培养 鉴定
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五味子和芍药醇提取物对气道成纤维细胞增殖的影响 被引量:1
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作者 杨柳 黄科 +2 位作者 杨艳 陈霞 冯静 《西南国防医药》 CAS 2016年第10期1093-1095,共3页
目的探讨芍药和五味子醇提取物对人成纤维细胞增殖活性的影响。方法采用渗滤提取法制备芍药和五味子醇提取液,分别用0.03125、0.0625、0.125、0.25、0.5、1、1.25 g/ml醇提取物刺激人胚肺成纤维细胞72 h,观察醇提取物对人胚肺成纤维细... 目的探讨芍药和五味子醇提取物对人成纤维细胞增殖活性的影响。方法采用渗滤提取法制备芍药和五味子醇提取液,分别用0.03125、0.0625、0.125、0.25、0.5、1、1.25 g/ml醇提取物刺激人胚肺成纤维细胞72 h,观察醇提取物对人胚肺成纤维细胞形态、增殖活性、细胞周期的影响。结果不同浓度醇提取物均可抑制成纤维细胞增殖,但无明确的量效关系;醇提取物浓度达到0.0625 g/ml时,不仅能抑制人胚肺成纤维细胞增殖,且可将细胞阻滞于G0/G1期,减少进入DNA合成期的细胞。结论芍药和五味子醇提取物可有效抑制人胚肺成纤维细胞增殖,且0.0625 g/ml可能为最适宜浓度。 展开更多
关键词 醇提取物 气道成纤维细胞 增殖 浓度
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IL-22对人气道细胞的作用 被引量:5
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作者 张旃 蓝海兵 +7 位作者 周丽丽 赖文岩 徐建 黎振兴 任敦强 叶涵 钟浩海 罗雅玲 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期2222-2225,共4页
目的探讨IL-22对人气道上皮细胞、气道平滑肌细胞、气道成纤维细胞的生理学作用。方法用实时定量PCR检测气道上皮细胞、气道平滑肌细胞、气道成纤维细胞哮喘血清刺激前后IL-22R1 mRNA表达的变化。不同浓度的IL-22(10 ng/ml,100 ng/ml,1 ... 目的探讨IL-22对人气道上皮细胞、气道平滑肌细胞、气道成纤维细胞的生理学作用。方法用实时定量PCR检测气道上皮细胞、气道平滑肌细胞、气道成纤维细胞哮喘血清刺激前后IL-22R1 mRNA表达的变化。不同浓度的IL-22(10 ng/ml,100 ng/ml,1 000 ng/ml)刺激气道上皮细胞、气道平滑肌细胞和气道成纤维细胞后,用MTT法检测细胞的增殖,用流式细胞技术(FACS)检测细胞的凋亡和坏死。结果哮喘血清刺激后气道上皮细胞IL-22R1 mRNA表达降至正常对照组的9%,气道平滑肌细胞IL-22R1 mRNA表达升高至正常对照组的345倍,而气道成纤维细胞IL-22R1 mRNA表达无明显变化。高剂量(1 000 ng/ml)的IL-22刺激气道上皮细胞和气道成纤维细胞12、24 h可显著降低细胞增殖(P<0.05,P<0.01)。三种不同浓度的IL-22刺激气道上皮细胞24 h后均导致细胞凋亡显著下降(P<0.05),低浓度的IL-22(10 ng/ml)导致细胞坏死增加(P<0.01)。不同浓度的IL-22刺激气道平滑肌细胞后,细胞凋亡和坏死无显著性变化。中、高浓度IL-22(100 ng/ml,1 000 ng/ml)刺激气道成纤维细胞后,细胞坏死率显著下降(P<0.05)。结论 IL-22在支气管哮喘中对气道上皮的作用具有双重性,并与支气管哮喘的病程相关;而对气道平滑肌细胞的作用则可能与浓度及病程相关。支气管哮喘后续阶段,IL-22对气道成纤维细胞作用轻微。 展开更多
关键词 细胞介素-22 气道上皮细胞 气道平滑肌细胞 气道成纤维细胞
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进口与国产胎牛血清影响气道原代成纤维细胞生长的对比研究
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作者 洪苓苓 曾奕明 林汉钦 《国际呼吸杂志》 2015年第12期929-933,共5页
目的:对比进口与国产胎牛血清(FBS)对气道原代成纤维细胞生长的影响。方法成功培养新西兰兔和 SD 大鼠原代气道成纤维细胞后,将细胞分为4组:A 组:大鼠气道原代成纤维细胞采用含20%进口 FBS 的高糖 DMEM 培养组,B 组:大鼠气道原代... 目的:对比进口与国产胎牛血清(FBS)对气道原代成纤维细胞生长的影响。方法成功培养新西兰兔和 SD 大鼠原代气道成纤维细胞后,将细胞分为4组:A 组:大鼠气道原代成纤维细胞采用含20%进口 FBS 的高糖 DMEM 培养组,B 组:大鼠气道原代成纤维细胞采用含20%国产 FBS 的高糖DMEM 培养组,C 组:兔气道原代成纤维细胞采用含20%进口 FBS 的高糖 DMEM 培养组,D 组:兔气道原代成纤维细胞采用含20%国产 FBS 的高糖 DMEM 培养组。分别采用进口 FBS(Gibco 公司)、国产FBS(杭州四季青公司)进行培养原代气道成纤维细胞。倒置显微镜观察,细胞爬片后 HE 染色,MTS 法描绘生长曲线,流式细胞仪测量细胞周期,判定不同 FBS 培养气道原代细胞的效果差异。结果①采用进口 FBS 和国产 FBS 均能成功培养新西兰兔和 SD 大鼠原代气道成纤维细胞。②采用国产 FBS 培养原代气道成纤维细胞,效果略低于进口 FBS,但10代以内细胞生长良好,对实验无明显影响。结论国产FBS 可以替代进口 FBS 培养实验动物原代气道成纤维细胞,降低实验成本预算,产生一定经济效益。 展开更多
关键词 原代气道成纤维细胞 国产胎牛血清 进口胎牛血清
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