地塞米松对实验性哮喘大鼠气道细胞DNA合成和气道重塑的影响

目的观察地塞米松对实验性哮喘大鼠气道细胞ＤＮＡ合成和气道重塑的干预效果。 方法 应用ＳＤ大鼠建立哮喘动物模型，采用免疫组化技术和其它形态学研究的方法，研究雾化吸入地塞米松对气道细胞ＤＮＡ合成和气道重塑反应的影响。 结果 ① 地塞米松治疗组气道上皮下胶原沉积以及粘液的分泌比模型组明显减少。② 模型组气道平滑肌细胞Ｂｒｄｕ阳性计数（１０．２５±２．０９）明显高于正常对照组（７．１５±２．０５）和地塞米松治疗组（６．８５±２．２０）（Ｐ＜０．０１）；模型组气道上皮细胞Ｂｒｄｕ阳性计数（２１．８３±７．０１）亦明显高于正常对照组（１６．２２±４．３６）和地塞米松治疗组（１６．９２±３．４８）（Ｐ ＜ ０．０５）。 结论 应用地塞米松干预可减轻实验性哮喘大鼠气道炎症，抑制气道细胞ＤＮＡ合成，延缓气道重塑反应的发生。

沙美特罗替卡松联合维生素A对小儿哮喘患儿气道细胞因子及肺换气功能的影响

目的:观察沙美特罗替卡松联合维生素A对小儿哮喘患儿气道细胞因子及肺换气功能的影响。方法:144例哮喘患儿随机分为对照组81例和观察组63例。对照组采用沙美特罗替卡松治疗,观察组在对照组基础上加用维生素A。两组疗程均为12周。比较两组临床疗效、临床症状消失时间和药品不良反应,以及治疗前后临床症状评分、气道细胞因子、血常规、肺换气功能变化情况。结果:观察组总有效率明显高于对照组,临床症状消失时间明显短于对照组(P<0.05)。治疗后,两组临床症状评分、气道细胞因子、血常规、肺内分流率(Qs/Qt)、肺泡-动脉氧分压差值(PA-aDO2)、肺动脉血流阻力指数(RI)均较前下降,最大吸气负压(PIMAX)则较前上升(P<0.05);且观察组各项指标均明显优于对照组(P<0.05)。两组药品不良反应发生率差异无统计学意义(P>0.05)。结论:沙美特罗替卡松联合维生素A对小儿哮喘的疗效确切,可降低气道细胞因子,改善肺换气功能,安全性较高。

IL-22对人气道细胞的作用

目的探讨IL-22对人气道上皮细胞、气道平滑肌细胞、气道成纤维细胞的生理学作用。方法用实时定量PCR检测气道上皮细胞、气道平滑肌细胞、气道成纤维细胞哮喘血清刺激前后IL-22R1 mRNA表达的变化。不同浓度的IL-22(10 ng/ml,100 ng/ml,1 000 ng/ml)刺激气道上皮细胞、气道平滑肌细胞和气道成纤维细胞后,用MTT法检测细胞的增殖,用流式细胞技术(FACS)检测细胞的凋亡和坏死。结果哮喘血清刺激后气道上皮细胞IL-22R1 mRNA表达降至正常对照组的9%,气道平滑肌细胞IL-22R1 mRNA表达升高至正常对照组的345倍,而气道成纤维细胞IL-22R1 mRNA表达无明显变化。高剂量(1 000 ng/ml)的IL-22刺激气道上皮细胞和气道成纤维细胞12、24 h可显著降低细胞增殖(P<0.05,P<0.01)。三种不同浓度的IL-22刺激气道上皮细胞24 h后均导致细胞凋亡显著下降(P<0.05),低浓度的IL-22(10 ng/ml)导致细胞坏死增加(P<0.01)。不同浓度的IL-22刺激气道平滑肌细胞后,细胞凋亡和坏死无显著性变化。中、高浓度IL-22(100 ng/ml,1 000 ng/ml)刺激气道成纤维细胞后,细胞坏死率显著下降(P<0.05)。结论 IL-22在支气管哮喘中对气道上皮的作用具有双重性,并与支气管哮喘的病程相关;而对气道平滑肌细胞的作用则可能与浓度及病程相关。支气管哮喘后续阶段,IL-22对气道成纤维细胞作用轻微。

IL-22在支气管哮喘患者血清中的表达及其受体IL-22R1在人气道细胞中的表达

目的检测IL-22在支气管哮喘患者血清中的表达,检测IL-22R1在人气道上皮细胞、气道平滑肌细胞、肺成纤维细胞中的表达,寻找IL-22作用的靶细胞。方法应用ELISA法检测36例支气管哮喘患者及20例正常对照者血清IL-22及IL-17的表达,同时检测36例患者肺通气功能,根据1秒率(FEV1/FVC)及FEV1占预计值的百分比将支气管哮喘患者分为支气管激发试验阳性组(17例)和支气管舒张试验阳性组(19例)。应用实时定量PCR检测人气道平滑肌细胞、人肺成纤维细胞、人气道上皮细胞IL-22R1 mRNA的表达,用免疫荧光以及蛋白质印迹法检测IL-22R1蛋白在上述3种细胞中的表达。结果支气管哮喘患者血清IL-22及IL-17水平与正常对照组相比差异无统计学意义,但支气管舒张试验阳性组患者血清IL-22和IL-17水平高于支气管激发试验阳性组(P<0.05)。IL-22R1mRNA及蛋白在上述3种细胞均有表达。结论 IL-22可能涉及支气管哮喘的发生发展过程,气道平滑肌细胞、肺成纤维细胞、人气道上皮细胞可能均是IL-22发挥作用的靶细胞。

孟鲁司特钠联合丙卡特罗对肺炎合并哮喘急性发作患儿气道细胞因子的影响

目的探讨孟鲁司特钠与丙卡特罗联合治疗对肺炎合并哮喘急性发作患儿气道细胞因子的影响。方法回顾性分析120例肺炎合并哮喘急性发作患儿的临床资料,依据入选患儿用药方案的不同,分为对照组(孟鲁司特钠)与观察组(孟鲁司特钠+丙卡特罗),各60例。比较两组气道细胞因子MMP-9、TIMP-1及肺功能PEF、FEV1、PEFR。结果治疗3个月后,观察组患儿MMP-9、TIMP-1水平与MMP-9/TIMP-1值均低于对照组,观察组患儿PEF、FEV1、PEFR值均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论肺炎合并哮喘急性发作患儿经孟鲁司特钠与丙卡特罗联合治疗,可有效调节气道细胞因子,利于改善肺功能,促使疾病转归。

顺尔宁与丙卡特罗联合应用对肺炎合并哮喘患儿气道细胞因子的影响

目的探讨顺尔宁与丙卡特罗联合应用对肺炎合并哮喘患儿气道细胞因子的影响。方法对80例肺炎合并哮喘患儿临床资料进行回顾性分析,根据患儿治疗方案将其分为对照组(n=38)和观察组(n=42)。对照组采用丙卡特罗+酮替芬治疗,观察组采用顺尔宁+丙卡特罗进行治疗。治疗12周后比较两组临床疗效及患儿气道细胞因子变化。结果观察组总有效率比对照组高,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,两组患者MMP-9水平及MMP-9/TIMP-11比值降低,TIMP-1水平上升,差异有统计学意义(P<0.05);观察组患者MMP-9水平及MMP-9/TIMP-11比对照组低,TIMP-1水平比对照组高,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,两组患者IL-6、TNF-α水平降低,IL-12水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);观察组患者IL-6、TNF-α水平比对照组低,IL-12水平比对照组高,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗过程中,两组患者耐受性良好,均未出现明显异常。结论顺尔宁与丙卡特罗联合应用治疗小儿支原体肺炎合并哮喘发作具有良好的临床疗效与安全性,能通过降低MMP-9水平、升高TIMP-1水平发挥抑制疾病发展,控制患者病情的作用。

沙美特罗替卡松联合维生素A对小儿哮喘患儿气道细胞因子及肺换气功能的作用分析

目的:评定沙美特罗替卡松联合维生素A相叠加用药方式开展于哮喘患儿给药治疗过程中对其气道细胞因子指标和肺换气功能指标构成的干扰作用。方法:对2018年2月~2019年9月收治的72例哮喘患儿试行这次对应指标调查,病例分组方式采取抽签方式,各个组别纳入36例,试验组实行常规治疗联合沙美特罗替卡松联合维生素A治疗,参照组实行常规治疗联合沙美特罗替卡松治疗,调查给药之前及给药12周之后气道细胞因子相关指标、肺换气功能相关指标,分析给药治疗有效所占比例、患儿家属给药治疗满意所占比例。结果:试验组给药12周之后白细胞介素-6测定情况、C-反应蛋白测定情况对比给药之前及参照组统计内容状况减小,差异有统计学意义(P<0.05),试验组给药12周之后肺中分流比率测定情况、肺泡和动脉氧分压之间相差数值测定情况对比给药之前及参照组统计内容状况减小,差异有统计学意义(P<0.05);试验组给药治疗有效所占比例对比给药之前及参照组统计内容状况增大,差异有统计学意义(P<0.05);试验组患儿家属给药治疗满意所占比例对比给药之前及参照组统计内容状况增大,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:为哮喘患儿选用沙美特罗替卡松联合维生素A相叠加用药方式有助于缓解其气道细胞因子指标,并改善其肺换气功能指标。

基于METTL3介导的miR-29a-3p的m^(6)A修饰探讨平喘颗粒抑制气道上皮细胞泛凋亡治疗哮喘的机制研究

目的:观察平喘颗粒对METTL3介导的气道上皮细胞中miR-29a-3p的m^(6)A修饰的影响,明确其抑制哮喘气道炎症的分子机制。方法:16HBE采用LPS诱导(50 mg/L)构建细胞模型,并给予平喘颗粒含药血清和地塞米松进行干预。分别采用CCK8法检测细胞活性、ELISA法检测炎症因子(TNF-α、IL-6和IL-8)的含量和miR-29a-3p的m^(6)A修饰水平、Western blot检测METTL3与泛凋亡蛋白的表达和qRT-PCR检测METTL3与miR-29a-3p的表达。结果:与模型组相比,平喘颗粒能够显著增加16HBE的活力,抑制炎症因子TNF-α、IL-6和IL-8的含量,下调泛凋亡相关蛋白p-RIPK3、p-MLKL、cleaved Caspase-1、cleaved Caspase-3的表达和GSDMD-NT/FL-GSDMD与GSDME-NT/FL-GSDME的比值,差异均具有统计学意义(P<0.01)。此外,平喘颗粒能够显著上调细胞中miR-29a-3p和METTL3的表达水平,促进miR-29a-3p的m^(6)A修饰水平,与模型组相比差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论:平喘颗粒主要通过METTL3增强miR-29a-3p的m^(6)A修饰水平,抑制气道上皮细胞泛凋亡,改善气道炎症。

基于上皮细胞-间充质转化的搜风愈喘方调控哮喘大鼠气道重塑的机制研究

目的探讨搜风愈喘方通过调控上皮细胞-间充质转化(EMT)抑制哮喘气道重塑的作用机制。方法将60只大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、地塞米松组及搜风愈喘方高、中、低剂量组,每组10只。除正常对照组外,其余各组均采用卵清白蛋白(OVA)注射和雾化复制哮喘大鼠模型。各组大鼠给予相应药物灌胃21 d后处死大鼠,苏木素-伊红(HE)染色,观察肺组织病理形态学变化;透射电镜观察大鼠肺组织中上皮细胞超微结构情况;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中的转化生长因子β1(TGF-β1)、白细胞介素17(IL-17)的含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测肺组织匀浆中TGF-β1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和N-钙黏蛋白(N-cadherin)的mRNA表达。蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测肺组织中TGF-β1、α-SMA、E-cadherin、N-cadherin蛋白表达水平。结果与正常对照组比较,模型对照组大鼠血清中TGF-β1、IL-17含量明显升高(P<0.01),肺组织中TGF-β1、α-SMA和N-cadherin mRNA和蛋白表达明显上调(P<0.01),E-cadherin mRNA和蛋白表达明显下调(P<0.01);HE染色显示气道壁及肺泡壁增厚,视野内可见大量炎症细胞浸润,炎症评分明显升高(P<0.01);透射电镜显示肺组织中上皮细胞水肿程度严重,胞内基质局部溶解、变淡,细胞器肿胀明显。与模型对照组比较,地塞米松组和搜风愈喘方各剂量组大鼠血清中TGF-β1、IL-17含量明显降低(P<0.05,P<0.01),TGF-β1、α-SMA和N-cadherin mRNA和蛋白表达明显下调(P<0.05,P<0.01),E-cadherin mRNA和蛋白表达明显上调(P<0.05,P<0.01);肺组织炎症细胞浸润减轻,支气管壁及肺泡壁增厚程度减轻,地塞米松组和搜风愈喘方高剂量组炎症评分降低(P<0.05);超微结构显示上皮细胞水肿程度明显减轻,细胞膜完整,胞内基质均匀,细胞器大多轻微肿胀。结论搜风愈喘方可降低TGF-β1水平,从而改善肺组织EMT,达到防治哮喘气道重塑的目的。

脂多糖对气道上皮细胞损伤后炎性因子的影响

目的 探讨脂多糖(LPS)对气道上皮细胞(BEAS-2B)损伤后炎性细胞因子分泌的调控作用。方法 采用LPS诱导BEAS-2B发生炎性损伤,于刺激后3、6、12和24 h收集细胞上清液,ELISA法测定细胞上清液中IL-8、IL-6、IL-17、IL-1β、胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)、IL-13、IL-33和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)水平,硝酸还原法检测细胞上清液中NO水平。结果 与正常组相比,LPS可促进BEAS-2B细胞中IL-8、IL-6、IL-17和MCP-1分泌,且诱导3、6、12和24 h时均能使IL-8、IL-6、IL-17和MCP-1因子水平显著增加,但不同因子分泌达峰时间不一致;此外,LPS对BEAS-2B细胞IL-1β、TSLP、IL-13、IL-33和NO分泌无显著刺激作用。结论 LPS刺激的BEAS-2B细胞损伤模型适用于IL-8、IL-6、IL-17和MCP-1因子调节相关的机制研究。

NaNO_(2)对HDM预处理的气道上皮细胞氧化损伤的影响及其机制

目的探究NaNO_(2)对经屋尘螨(house dust mite,HDM)预处理的人支气管上皮细胞氧化损伤的影响及其机制。方法体外培养人支气管上皮细胞16HBE,经HDM预处理后用不同浓度NaNO_(2)染毒处理,CCK-8检测细胞存活率,确定NaNO_(2)最适浓度及处理时间;将细胞接种于6孔板中随机分为3组(n=3):正常对照组、HDM组(HDM预处理)、NaNO_(2)组(HDM预处理后进行NaNO_(2)染毒处理)。Western blot和RT-PCR检测各组细胞Krüppel样锌指转录因子2(Krüppel-like transcription factors 2,KLF2)、低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)和Notch1的表达水平;ELISA法检测细胞炎症因子白介素-6(interleukin-6,IL-6)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)的表达水平;荧光探针法检测细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;微量法测定丙二醛(malondialdehyde,MDA)与谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量。结果CCK-8实验确定NaNO_(2)最适干预方式为500μmol/L处理24 h。与正常对照组比较,HDM组KLF2蛋白和mRNA水平减少,HIF-1α蛋白和mRNA水平(P<0.01)、Notch1的蛋白(P<0.05)、mRNA水平和ROS含量升高(P<0.01),MDA、TNF-α和IL-6含量均增高,GSH含量降低(P<0.05);与HDM组比较,NaNO_(2)组KLF2蛋白和mRNA水平明显减少,HIF-1α蛋白和mRNA水平(P<0.01)、Notch1的蛋白(P<0.05)和mRNA水平、ROS含量显著升高(P<0.01),MDA(P<0.05)、TNF-α(P<0.001)和IL-6含量显著增高,GSH含量明显减少(P<0.05)。结论NaNO_(2)可能通过调控KLF2的表达加重HDM诱导的人支气管上皮细胞氧化应激损伤。

抑制Rho/ROCK通路对气道平滑肌细胞增殖与迁移的影响及相关机制

目的研究抑制Ras同源基因(Ras homolog gene,Rho)/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(Rhoassociated coiled-coil forming protein kinase,ROCK)通路对心肌素(myocardin,MYOCD)参与的气道平滑肌细胞增殖与迁移的影响及分子机制。方法体外构建腺病毒载体Ad-ZsGreen-shRNA-hROCK1感染人气道平滑肌细胞,将细胞随机分为4组:ROCK1基因沉默对照(shNC)组、shNC+花生四烯酸(arachidonic acid,AA;Rho/ROCK通路激活剂)组、ROCK1基因沉默(shROCK1)组、shROCK1+AA组(各组n=3)。采用实时荧光定量聚合酶链反应法、Western blot法检测ROCK1、MYOCD mRNA和蛋白表达水平,ELISA法检测球状肌动蛋白和丝状肌动蛋白水平,免疫荧光染色法及细胞划痕实验检测细胞增殖及迁移情况。结果与shNC+AA组相比,shROCK1+AA组ROCK1、MYOCD mRNA和蛋白表达水平降低,球状肌动蛋白、丝状肌动蛋白表达降低,细胞增殖、细胞迁移能力降低(P<0.05)。结论抑制Rho/ROCK通路致气道平滑肌细胞增殖及迁移能力受抑,其机制可能与MYOCD的下调有关.

噻托溴铵调控MAPK/NF-κB信号通路对气道平滑肌细胞增殖的影响及机制研究

目的探究噻托溴铵通过MAPK/NF-κB信号通路对哮喘的影响及其潜在的机制。方法用10 ng·mL^(-1)血小板衍生生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)-BB和不同浓度(0、5、10、20、50μmol·L^(-1))噻托溴铵处理气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cells,ASMCs),并通过CCK-8实验、克隆形成实验、划痕愈合实验和Transwell法分析ASMCs细胞增殖、迁移和侵袭;Western blot分析MMP2、MMP9、calponin和α-SMA的蛋白水平;Western blot检测MAPK/NF-κB信号通路的水平。结果噻托溴铵抑制PDGF-BB诱导的ASMCs的增殖、迁移和侵袭(P<0.05)。噻托溴铵调节ASMCs的表型转变(P<0.05)。噻托溴铵可以抑制PDGF-BB诱导的MAPK/NF-κB信号通路激活,降低p-38、p-JNK、p-ERK、p-p65、p-NF-κB的表达(P<0.05)。结论噻托溴铵可以通过阻断MAPK/NF-κB信号转导抑制ASMCs的增殖和迁移。推测噻托溴铵可以作为一种治疗哮喘的有前途的药物。

气道上皮细胞氧化应激损伤的分子机制研究进展

氧化应激造成的气道上皮细胞损伤与众多慢性呼吸系统疾病如哮喘、慢阻肺等相关。正常情况下细胞中的酶促和非酶促抗氧化剂将活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)维持在低水平并使其发挥信号调节的生理作用,而当ROS的过量产生和/或抗氧化反应受损导致氧化还原失衡(称为氧化应激),将导致细胞信号通路失调和组织损伤,成为包括哮喘在内的慢性气道疾病的致病因素。本文在阅读文献的基础上,综述提出气道上皮细胞氧化应激损伤主要由ROS损伤、炎症激发、细胞衰老以及凋亡等因素引起。这些损伤机制共同作用,相互交联,在细胞内形成复杂的信号网络,进一步加剧了氧化应激损伤的程度。深入了解气道上皮细胞氧化应激损伤的分子机制对于慢性气道疾病的有效防治具有重要的意义。

自噬与哮喘中气道平滑肌细胞表型转化关系的研究进展

支气管哮喘是常见的呼吸道疾病,发病机制尚未完全阐明。气道重塑作为哮喘的关键特征之一,在哮喘早期即可发生。气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cell,ASMC)是哮喘气道重塑的关键靶细胞,其表型从正常收缩型向增殖/合成型转化是气道重塑的重要特征之一。ASMC具有可塑性,其表型可受多种因素调节。自噬作为真核细胞生物的一种防御性保守生物过程,近年来被证实可通过调节ASMC的表型参与气道重塑。本文针对哮喘中自噬对ASMC表型的调控机制进行综述,以期对未来研究有所启发。

机械通气诱导气道塌陷中气道平滑肌细胞力学行为异常的研究进展

机械通气为呼吸危重症患者提供生命支持,但也引起致命的肺损伤(ventilator induced lung injury,VILI),后者因病理机制不明一直是呼吸与危重症学科的重大难题。近年的研究发现,一方面VILI伴随同一气道多点塌陷现象,但这一现象很难用传统塌陷模型加以解释。另一方面,机械通气条件下气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cells,ASMC)发生力学行为异常并伴随Piezo1表达变化和内质网应激等现象。这些现象显示,机械通气导致ASMC的力学行为异常与气道多点塌陷以及VILI密切相关。但要从细胞力学角度解释机械通气导致气道塌陷和VILI的机制,还需要系统深入地研究机械通气条件下ASMC力学行为变化规律与气道塌陷和肺损伤的相互关系及其力-化学信号耦合过程。本文综述了近期有关机械通气条件下气道塌陷现象、机械通气相关高拉伸对ASMC力学行为的调控及力-化学信号耦合机制等方面的研究进展,以期为进一步探索ASMC力学行为异常在VILI病理机制中的作用、有效防治VILI的新药干预靶点,以及临床优化的机械通气策略等提供重要的参考依据和启发性的研究思路。

间充质干细胞来源外泌体对HDM刺激的气道上皮细胞炎症及EMT的影响

目的:探究间充质干细胞来源外泌体(MSC-EXO)对屋尘螨(HDM)刺激的气道上皮细胞炎症及上皮-间质转化(EMT)的影响。方法:从人脐带中分离MSCs(hUCMSCs),经过分选和鉴定后分离提取MSC-EXO。透射电镜和Western blot检测外泌体形态及标志蛋白CD63、CD81、TSG101表达。将MSC-EXO与HDM刺激的16HBE细胞共培养后,观察细胞形态变化;MTT检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡率;qRT-PCR检测细胞炎症因子TNF-α和IL-6 mRNA水平;荧光探针法检测细胞活性氧(ROS)水平;Western blot检测EMT相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(VIM)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达。结果:hUCMSC中CD73、CD90和CD105表达呈阳性,CD34、CD45和HLA-DR表达呈阴性;电子透射显微镜下MSC-EXO呈囊泡状,直径30~200 nm,表达CD63、CD81、TSG101。与对照组相比,HDM组16HBE细胞变长、变尖呈长梭形,细胞凋亡率、ROS、TNF-α和IL-6 mRNA水平、N-cadherin、VIM、α-SMA表达显著升高,E-cadherin表达显著降低(P<0.05);与HDM组相比,50、100μg/ml EXO组细胞形态接近正常细胞,细胞凋亡率、ROS、TNF-α和IL-6 mRNA水平、N-cadherin、VIM、α-SMA表达明显降低,E-cadherin表达明显升高(P<0.05)。结论:MSC-EXO可减轻HDM诱导的气道上皮细胞炎症,抑制EMT过程。

金银花提取物对哮喘模型小鼠气道平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨金银花提取物对哮喘小鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖和凋亡的影响,阐明其相关的作用机制。方法:构建小鼠哮喘模型,分离原代ASMCs并进行鉴定。采用白细胞介素4(IL-4)诱导巨噬细胞RAW264.7 M2极化并进行鉴定。RAW264.7细胞分为对照组及低、中和高剂量金银花提取物组,对照组诱导RAW264.7细胞M2极化后与ASMCs共培养,低、中和高剂量金银花提取物组分别用不同浓度(50、100和200 mg·L^(-1))金银花提取物处理RAW264.7细胞1 h,再用60μg·L^(-1)IL-4处理6 h,随后将ASMCs与RAW264.7细胞共培养24 h。流式细胞术检测各组RAW264.7细胞中巨噬细胞表面标记蛋白CD86和CD206阳性细胞百分率,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组ASMCs培养上清液中白细胞介素10(IL-10)水平,MTT法检测各组ASMCs增殖活性,流式细胞术检测各组ASMCs凋亡率。结果:细胞形态表现和免疫荧光染色结果证明所提取的细胞为ASMCs。RAW264.7细胞M2极化鉴定结果显示已诱导成为M2巨噬细胞。与对照组比较,低、中和高剂量金银花提取物组RAW264.7细胞中CD86阳性细胞百分率明显升高(P<0.05),CD206阳性细胞百分率明显降低(P<0.05),ASMCs培养上清液中IL-10水平和ASMCs增殖活性明显降低(P<0.05),ASMCs凋亡率明显升高(P<0.05);与低剂量金银花提取物组比较,中和高剂量金银花提取物组RAW264.7细胞中CD86阳性细胞百分率明显升高(P<0.05),CD206阳性细胞百分率明显降低(P<0.05),ASMCs培养上清液中IL-10水平和AMSC增殖活性明显降低(P<0.05),ASMCs凋亡率明显升高(P<0.05);与中剂量金银花提取物组比较,高剂量金银花提取物组RAW264.7细胞中CD86阳性细胞百分率明显升高(P<0.05),CD206阳性细胞百分率明显降低(P<0.05),ASMCs培养上清液中IL-10水平和ASMCs增殖活性明显降低(P<0.05),ASMCs凋亡率明显升高(P<0.05)。结论:金银花提取物可通过抑制巨噬细胞M2极化进而抑制哮喘小鼠ASMCs细胞增殖并促进其凋亡。

阿司匹林对慢性阻塞性肺疾病大鼠气道平滑肌细胞增殖和凋亡的影响及机制

目的探讨阿司匹林对慢性阻塞性肺疾病大鼠气道平滑肌细胞增殖和凋亡的影响。方法选取30只SD大鼠作为研究对象,随机取10只作为对照组,其余20只建立慢性阻塞性肺疾病大鼠模型,造模成功后随机均分为模型组及阿司匹林组,阿司匹林组给予100 mg/kg的阿司匹林灌胃,对照组与模型组给予等量生理盐水灌胃,连续30 d;灌胃结束后,提取大鼠肺组织进行苏木精-伊红(HE)染色法观察肺组织受损情况,采用Western blot实验检测其凋亡蛋白B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)、BCL2-Associated X的蛋白质(Bax)的表达;取大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs),采用MTT检测细胞活力、Western blot实验检测增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2及Bax的表达,采用流式细胞术检测细胞凋亡水平。结果HE染色结果证明阿司匹林对肺部气道平滑肌组织具有较好的保护作用;MTT检测发现阿司匹林可以抑制慢性阻塞性肺疾病大鼠ASMCs细胞的增殖能力;Western blot实验发现模型组ASMCs中PCNA蛋白表达水平较对照组升高,阿司匹林组ASMCs中PCNA蛋白表达水平较模型组降低(P<0.05);流式细胞术和Western blot实验证明,模型组ASMCs中Bcl-2/Bax比值较对照组升高,阿司匹林组ASMCs中Bcl-2/Bax比值较模型组降低(P<0.05)。结论阿司匹林可以抑制慢性阻塞性肺疾病大鼠气道平滑肌的增殖并诱导细胞凋亡,还可改善气道重塑以达到延缓慢性阻塞性肺疾病的病程。

miRNA-218通过靶向BRD4对香烟烟雾提取物诱导的COPD气道上皮细胞凋亡的调控作用

目的探讨miR-218通过靶向BRD4对香烟烟雾提取物(CSE)诱导的慢性阻塞性肺疾病(COPD)时气道上皮细胞凋亡的调控作用。方法将人肺支气管上皮细胞BEAS-2B分为正常对照(NC)组、CSE组、miR-NC+CSE组、miR-218+CSE组、si-NC+CSE组、si-BRD4+CSE组、miR-218+pcDNA-NC+CSE组和miR-218+pcDNA-BRD4+CSE组。通过对不同组细胞中miRNA、蛋白及炎症因子的检测和双荧光素酶报告基因实验共同验证miR-218对BRD4的靶向作用。结果与NC组比较,CSE组BEAS-2B细胞miR-218表达降低,细胞凋亡率、BRD4、Cleaved-caspase-3、IL-6和TGF-β1表达显著增加(均P<0.05)。与miR-NC+CS组比较,miR-218+CSE组BEAS-2B细胞凋亡率、Cleaved-caspase-3、IL-6和TGF-β1表达显著降低(均P<0.05);与si-NC+CSE组比较,si-BRD4+CSE组上述指标表达显著降低(P<0.05);与miR-218+pcDNA-NC+CSE组比较,miR-218+pcDNA-BRD4+CSE组上述指标表达显著增加(P<0.05)。结论miR-218通过靶向BRD4可抑制CSE诱导的气道上皮细胞凋亡,miR-218可能是慢性阻塞性肺疾病的潜在治疗靶点。