PM_(2.5)对哮喘小鼠气道重塑的作用机制研究

目的 探讨PM_(2.5)对卵清蛋白(OVA)诱导的哮喘小鼠气道重塑的影响,并分析其潜在机制。方法 将36只SPF级雌性BALB/c小鼠随机分为对照组、哮喘组、哮喘+PM_(2.5)组,每组12只。哮喘组、哮喘+PM_(2.5)组于第1、7、14天腹腔注射OVA致敏,第21~27天连续进行1%OVA雾化激发,每次30 min,共7次。其中哮喘+PM_(2.5)组每次于OVA激发前30 min给予100μg PM_(2.5)混悬液滴鼻干预。对照组用生理盐水处理。3组均在末次激发24 h后进行气道阻力检测,处死动物后收集小鼠肺泡灌洗液(BALF)及肺组织标本。通过HE、PAS和Masson染色分别评估小鼠肺部炎症、杯状细胞增生和胶原纤维沉积情况,免疫组织化学法检测肺组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;通过ELISA法检测小鼠BALF中白细胞介素-4(IL-4)和IL-5水平;通过Western blot法检测小鼠肺组织p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)/核因子-κB(NF-κB)信号通路相关蛋白表达。结果 与哮喘组比较,哮喘+PM_(2.5)组气道阻力及炎症评分升高,杯状细胞增多,胶原纤维增生明显,BALF中IL-4、IL-5水平也显著增高(P<0.05)。与哮喘组比较,哮喘+PM_(2.5)组肺组织中转化生长因子-β_(1)(1.25±0.17 vs 0.87±0.25)、p-p38 MAPK/p38 MAPK(1.24±0.24 vs 0.74±0.19)、p-NF-κB p65/NF-κB p65(1.02±0.14 vs 0.70±0.10)蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论 PM_(2.5)可通过激活p38 MAPK/NF-κB信号通路加重哮喘小鼠的气道重塑。

薯蓣皂苷通过p38MAPK/NF-κB通路对支气管哮喘幼鼠气道炎症及气道重塑的作用机制研究

目的观察薯蓣皂苷(Dio)对支气管哮喘(BA)幼鼠气道炎症及气道重塑的作用,并探讨可能机制。方法取40只BALB/c幼鼠,随机选取10只设为Control组,其余幼鼠建立BA模型,成功30只,随机分为BA组、Dio组、Dio联合anisomycin组,各10只。Dio组灌胃Dio 80 mg/kg,Dio联合anisomycin灌胃Dio 80 mg/kg后腹腔注射anisomycin 2 mg/kg,Control组、BA组灌胃、腹腔注射等体积生理盐水。每天1次,持续2周。检测肺功能指标;检测肺泡灌洗液(BALF)中炎症因子白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;Western blot法检测p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、p-p38 MAPK、核转录因子-κB(NF-κB)p65、p-NF-κB p65、细胞外信号调节激酶(ERK1/2)、p-ERK1/2蛋白表达。结果与BA组比较,Dio组肺容积(LV)、每分钟静息通气量(VE)增加,IL-1β、TNF-α水平降低(P<0.05);与Dio组比较,Dio联合anisomycin组LV、VE减少,IL-1β、TNF-α水平升高(P<0.05);与BA组比较,Dio组p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-NF-κB p65/NF-κB p65、p-ERK1/2/ERK1/2降低(P<0.05);与Dio组比较,Dio联合anisomycin组p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-NF-κB p65/NF-κB p65、p-ERK1/2/ERK1/2升高(P<0.05)。结论Dio可减轻BA幼鼠气道炎症反应,抑制气道重塑,可能与抑制p38MAPK/NF-κB信号通路有关。

平喘方对哮喘小鼠HMGB1/TLR4/NF⁃κB通路及IKKs、TGF-β1的影响

目的研究平喘方对哮喘小鼠高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)及气道重塑相关因子IκB激酶家族(IKK_(s))、转化生长因子-β1(TGF-β1)的影响。方法将32只雄性Balb/c小鼠随机分为空白组、模型组、地米组、平喘方组,每组8只。采用卵清白蛋白(OVA)联合氢氧化铝腹腔注射和5%OVA雾化吸入激发的方法建立哮喘模型,当日雾化结束1 h后灌胃给药14 d。各组于最后一次给药后收集小鼠血清、肺泡灌洗液(BALF)及肺组织。采用HE染色法观察小鼠肺组织病理改变,免疫组化染色法观察HMGB1、TLR4、NF-κB表达,ELISA法检测BALF及外周血中HMGB1、TLR4、TGF-β1、IKK_(s)含量,RT-PCR检测肺组织中HMGB1、TLR4、NF⁃κB及IKK_(s) mRNA表达,Western blot法检测肺组织中HMGB1、TLR4蛋白表达。结果与空白组比较,模型组气道重塑严重,HMGB1、TLR4及NF-κB表达明显增强,HMGB1、TLR4、TGF-β1及IKK_(s)含量升高(P<0.05),HMGB1、TLR4、NF⁃κB及IKK_(s) mRNA表达升高(P<0.05),HMGB1、TLR4蛋白表达升高(P<0.05)。与模型组比较,平喘方组气道重塑减轻,HMGB1、TLR4、TGF-β1及IKK_(s)含量均明显降低(P<0.05),HMGB1、TLR4、NF⁃κB及IKK_(s) mRNA表达降低(P<0.05),HMGB1、TLR4蛋白表达减少(P<0.05)。结论平喘方能降低HMGB1、TLR4、NF⁃κB及IKK_(s) mRNA表达,降低IKK_(s)和TGF-β1分泌,减少HMGB1、TLR4蛋白表达,减轻哮喘模型小鼠肺组织炎症,改善肺组织病理改变。

参黛清肠汤对溃疡性结肠炎小鼠肠道黏膜保护作用及机制探讨

目的观察参黛清肠汤对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)小鼠肠道黏膜的保护作用,并探讨其机制。方法55只C57BL/6小鼠以2.5%葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulfate,DSS)灌胃3个周期诱导建立UC模型,建模成功后随机分为5组,另10只C57BL/6小鼠记为正常组。美沙拉嗪组予以200 mg/kg小鼠体质量的美沙拉嗪溶于1 mL/100 g小鼠体质量生理盐水中灌胃,参黛清肠汤低、中、高剂量组分别予以15、30、60 mg/kg参黛清肠汤同法灌胃,模型组和正常组均予以等量生理盐水灌胃,1次/d,给药2周。干预后评价各组疾病活动指数(disease activity index,DAI)和肠道黏膜损伤指数(colonic mucosal damage index,CMDI);苏木素-伊红(HE)染色观察肠道黏膜病理改变;酶联免疫法检测肠道黏膜组织白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;实时反转录荧光聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质免疫印迹法(Western blotting,WB)分别检测肠道黏膜组织Ras同源基因家族A(RhoA)、Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1(ROCK-1)、Ras相关的C3肉毒素底物1(Rac-1)、p21激活激酶1(PAK-1)、核转录因子-κB(NF-κB)mRNA和蛋白表达。结果HE染色证实UC小鼠建模成功;模型组DAI和CMDI评分,肠道黏膜组织IL-1β、TNF-α含量,肠道黏膜组织RhoA、ROCK-1、NF-κB mRNA及蛋白表达均高于正常组(P<0.05),美沙拉嗪组和参黛清肠汤3剂量组均低于模型组(P<0.05),参黛清肠汤低剂量组均高于美沙拉嗪组(P<0.05),参黛清肠汤高剂量组均低于美沙拉嗪组(P<0.05),模型组肠道黏膜组织Rac-1、PAK-1 mRNA及蛋白表达均低于正常组(P<0.05),美沙拉嗪组和参黛清肠汤3剂量组均高于模型组(P<0.05),参黛清肠汤低剂量组均低于美沙拉嗪组(P<0.05),参黛清肠汤高剂量组均高于美沙拉嗪组(P<0.05),且参黛清肠汤中剂量组与美沙拉嗪组差异均无统计学意义(P>0.05)。模型组肠道黏膜组织病理改变严重,美沙拉嗪组和参黛清肠汤3剂量组病理改变均减轻,且参黛清肠汤高剂量组效果最佳。结论参黛清肠汤能减轻UC小鼠病变,保护肠道黏膜组织,减轻炎症损伤,推测与抑制RhoA/ROCK通路,下调RhoA、ROCK-1与NF-κB表达,上调Rac-1、PAK-1表达有关。