氚标记的Bcl-2反义核酸(F951)在小鼠体内的药代动力学实验研究

目的 研究一种新的氚标记的Bcl 2反义寡核苷酸 3H F95 1单次静脉注射后在小鼠体内的药代动力学过程。方法 用氚标记F95 1,用液闪仪检测放射性浓度 ,用 3P87软件判断房室模型 ,计算各种参数。用液闪仪检测3H F95 1在小鼠体内各器官中的分布浓度 ,检测给药后 72h内药物从小鼠尿和粪中排泄的量。结果 3H F95 1单次静脉注射后在小鼠体内的动力学过程符合二室模型 ,3种剂量时主要的参数血浆分布半衰期 (T1/ 2α)在 10～ 15min之间 ,消除半衰期 (T1/ 2 β)在 2～ 4 5h之间。3H F95 1在肾、肝、脾、骨髓中分布浓度高于其它器官 ,在心、肺、脑、肠、皮肤、脂肪、生殖腺中也有低水平的分布。3H F95 1主要经肾从尿中排泄 ,给药后 2 4h内的累积排泄量占给药量的 5 0 47%。3H F95 1从粪中排泄的量甚微。结论 3H F95

靶向Bcl-2、Bcl-xl、Mcl-1、Bcl-w、A1反义核酸抑制消化系肿瘤细胞增殖效果的差异

目的比较靶向Bcl-2、Bcl-xl、Mcl-1、Bcl-w、A1反义核酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASO)对消化系统肿瘤细胞(肝癌HepG2细胞、胃癌MGC-803细胞、结肠癌Lovo细胞)的增殖抑制作用和致凋亡作用的差异。方法分别合成靶向Bcl-2、Bcl-xl、Mcl-1、Bcl-w、A1的反义核酸和随机序列反义核酸(randomolig odeoxynucleotide,RODN),采用脂质体Li-pofectamineTM 2000转染细胞,WST法检测相同浓度的5种ASOs对肝癌HepG2细胞、胃癌MGC-803细胞、结肠癌Lovo细胞的增殖抑制作用和致凋亡作用。结果 Bcl-2、Bcl-xl、Mcl-1、Bcl-w、A1等5种ASOs中,不论是对细胞增殖抑制还是致凋亡作用,均以Bcl-xlASO、Mcl-1ASO的作用效果较好。结论在Bcl-2、Bcl-xl、Mcl-1、Bcl-w、A1等5种ASOs中,Bcl-xlASO、Mcl-1ASO可明显抑制消化系肿瘤细胞增殖,诱导细胞凋亡。

反义核酸抑制胃癌细胞Bcl-2表达

本文采用分子克隆技术成功地构建了反义核酸表达载体ｐＤＯＲ－Ｂｃｌ－２ ｃＤＮＡ。以奚质体介导法将重组反义核酸表达载体转染受体细胞ＳＧＣ７９０１，并Ｇ４１８筛选，从２×１０＾５细胞中筛选出大约１５０个抗性克隆，转导率大于１‰，随机挑选２个克隆继续筛选与扩增培养，获得了１株稳定的抗性细胞，从而建立了Ｂｃｌ－２表达阻断的胃癌细胞株，我们命名为７９０１ａｎＢｃｌ－２ｃｅｌｌｓ。通过Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹法、

bcl-2反义核酸提高白血病HL60细胞对米托蒽醌的敏感性

目的 探讨下调HL6 0细胞bcl 2基因表达对米托蒽醌 (MIT)细胞毒作用的影响。方法 将针对bcl 2基因编码区 141 147密码子的反义寡核苷酸 (ASODN)作用于HL6 0细胞 ,测定其mRNA表达 ,细胞生长 ,细胞凋亡。结果 12 5μmol/LASODN作用于HL6 0细胞 48h可以下调bcl 2mRNA表达 40 %。 0 5 μmol/LMIT作用于经ASODN预处理 48h的HL6 0细胞 5h ,5 0 9%的细胞发生凋亡 ,明显高于MIT单独作用诱导的细胞凋亡 (2 5 6 % ) ;当ASODN与 0 7nmol/LMIT共同作用时 ,细胞存活率 (4 8h)由MIT单独作用时的 73 7%降至 2 5 6 %。结论 bcl 2ASODN可下调bcl 2基因表达 ,促进细胞凋亡而增加MIT抗肿瘤作用。

bcl-2反义核酸对骨髓造血功能影响的实验研究

目的评价bcl-2反义硫代磷酸寡核酸(ASODN)对骨髓造血功能的影响。方法正常骨髓与含终浓度为10 mol/L的bcl-2 ASODN共培养12 h,以处理后的骨髓细胞为反义组;空白对照组除不加ASODN外处理与反义组相同。分别以2组骨髓细胞建立短期与长期培养体系,动态观察粒、单核系集落形成单位(CFU-GM)的形态和产率;培养结束时,非贴壁细胞以流式细胞仪检测CD34和bcl-2蛋白表达,并观察造血细胞和造血基质的生长态势。结果CFU-GM的形态和产率、CD34+细胞的bcl-2蛋白表达反义组均与空白对照组相近,造血细胞和造血基质的生长态势良好。结论在正常骨髓体外培养条件下,bcl-2 ASODN不影响骨髓细胞的造血功能,可能用于白血病骨髓的体外净化。

bcl-2反义肽核酸诱导HL-60 K562细胞凋亡

目的 探讨不同结构的反义药物对HL 60、K562细胞系生物学活性的影响。方法 应用细胞计数、细胞形态观察和流式细胞术观察并比较反义肽核酸和反义寡核苷酸对白血病细胞HL 60、K562生物学活性的影响。结果 1 0 μmol/L靶向bcl 2mRNA蛋白编码区的反义肽核酸能有效地抑制HL 60、K562细胞的生长、下调bcl 2蛋白的水平及诱导细胞凋亡。 1 0 μmol/L针对bcl 2mRNA同样靶点的反义肽核酸和寡核苷酸作用HL 60和K562细胞 72h ,反义肽核酸仍表现出较强的促细胞凋亡的作用 ,而反义寡核苷酸诱导细胞凋亡的作用则有所下降。结论 反义bcl 2肽核酸能诱导HL 60、K562细胞的凋亡 ,比反义寡核苷酸有更好的反义作用。

Survivin与bcl-2基因反义寡核酸联合对人乳腺癌裸鼠皮下移植瘤的治疗作用

目的本研究旨在探讨survivin与bcl-2基因反义寡脱氧核苷酸联合对人乳腺癌裸鼠皮下移植瘤的治疗作用。方法在BALB/c裸鼠上建立MCF-7乳腺癌细胞株模型,然后随机分成阴性对照组和5个实验组[分别为脂质体survivin正义脱氧寡核苷酸(SODN)组、脂质体bcl-2SODN组、脂质体survivin反义寡脱氧核苷酸(ASODN)组、脂质体bcl-2ASODN组、联合反义给药组]。检测裸鼠体重及肿瘤体积变化,计算抑瘤率及肿瘤缩小率。结果给药后,联合反义给药组的肿瘤体积抑瘤率为78.4%,肿瘤重量抑瘤率为75.3%,肿瘤缩小率为41.6%。在给药后,各组裸鼠体重变化无明显统计学差异(P>0.05)。结论survivin与bcl-2基因反义寡核酸联合在体内能明显抑制肿瘤生长。

Bcl-2反义核酸治疗Burkitt’s淋巴瘤裸鼠模型的研究

为了探讨Bcl 2反义核酸治疗Burkitt’s淋巴瘤 (BL)的疗效 ,将不含EB病毒的人类BL的细胞株—CA4 6移植到BAB C裸鼠体内 ,建立BL裸鼠模型 ,并将荷瘤裸鼠随机分为反义治疗 (A组 )、无义对照 (B组 )和空白对照 (C组 ) 3个组 ,每组 5只。A组注射Bcl 2反义核酸 ,B组注射无义寡核苷酸 ,C组不注射任何制剂 ;治疗剂量为 5mg·kg-1 ·d-1 ,给药方式为瘤内局部注射 ,每天注射 1次 ,连续给药 1 5d。结果显示 :A组肿瘤的生长明显受到抑制 ,其中 1只裸鼠的肿瘤消失 ,其余 4只的瘤块明显小于B组和C组。A组对C组的肿瘤抑制率为 89.5 % ;A组对B组的肿瘤抑制率为83.3% ,2者的抑制率无显著差异 (p >0 .0 5 ) ;而B组对C组的抑制率为 36 .9%与前 2者的抑制率差异非常显著 (p <0 .0 1 )。说明Bcl

Bcl-2反义核酸对SK-N-SH细胞增殖和凋亡的影响

目的研究Bcl-2反义核酸对人神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH的增殖和凋亡的作用。方法设Bcl-2反义核酸ASODN组、正义核酸SODN组、脂质体组及空白对照组。MTT法检测Bcl-2反义核酸对SK-N-SH细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡情况。结果 ASODN组72h细胞增殖抑制率达(68.24±2.41)%,较空白对照组差异显著(P<0.01);ASODN可使SK-N-SH细胞周期阻滞于G2/M期,72h细胞凋亡率达(23.25±2.34)%。结论 Bcl-2反义核酸可抑制SK-N-SH细胞增殖并诱导其发生凋亡。

整合素受体介导bcl-2反义核酸对人结肠癌细胞的靶向作用

目的:用聚乙烯亚胺-整合素配体复合物(PEI-RGD)介导的bcl-2反义核酸作用于结肠癌细胞caco-2,观察其对细胞的靶向作用。方法:用流式细胞仪测定细胞对荧光标记的反义核酸的摄取率和平均荧光强度,并在相差/光显微镜下观察摄入情况。结果:使用PEI-RGD介导的反义核酸与单独使用反义核酸的caco-2细胞摄入率和荧平均荧光强度存在明显差异(P<0.05)。与正常肝细胞LO2相比较,用PEI-RGD介导法显著提高结肠癌细胞caco-2对bcl-2反义核酸的摄入,且有统计学意义(P<0.05)。结论:阳离子复合物PEI-RGD可以增加caco-2对bcl-2反义核酸的摄入,具有靶向作用。

聚乙烯亚胺-整合素配体复合物介导bcl-2反义核酸对结肠癌细胞的作用

目的:观察聚乙烯亚胺(PEI) -整合素蛋白的配体(Arg -Gly -Asp ,RGD)介导的bcl - 2反义核酸(antisenseoligodeoxynucleotide ,ASODN)对结肠癌细胞caco - 2的作用效果。方法:将阳离子复合物jetPEI-RGD与bcl- 2反义核酸混合形成ASODN -PEI-RGD三聚体复合物,转染caco - 2细胞。用台盼蓝拒染法计数活细胞,观察ASODN -PEI-RGD对caco - 2细胞的生长抑制作用,用流式细胞仪检测细胞的亚二倍体百分率,Heochst332 5 8染色观察细胞凋亡。结果:与ASODN对照组和jetPEI-RGD对照组相比,ASODN -PEI -RGD能够明显抑制caco - 2细胞增殖和诱导细胞凋亡(P<0 0 5 ) ,呈剂量和时间-效应关系。ASODN -PEI-RGD作用4 8h ,荧光染色可见大量的caco - 2细胞核固缩、核碎裂。结论:jetPEI-RGD介导的bcl- 2反义核酸能抑制caco - 2细胞增殖和诱导细胞凋亡。

bcl-2基因反义核酸对HL-60和K562白血病细胞生存的影响

目的：探索ｂｃｌ－２基因反义核酸对白血病细胞生存的影响。方法：主要应用细胞培养和细胞克隆的方法，检测了ｂｃｌ－２基因反义核酸对ＨＬ－６０和Ｋ５６２白血病细胞系生存的影响。结果：ｂｃｌ－２基因反义核酸浓度在２～８μｍｏｌ／Ｌ和６～１２μｍｏｌ／Ｌ分别对ＨＬ－６０和Ｋ５６２细胞的生存有明显的抑制效应，呈剂量－效应关系，二者起效应时间均为第３ｄ；ｂｃｌ－２基因反义核酸浓度为４μｍｏｌ／Ｌ时，对ＨＬ－６０和Ｋ５６２细胞集落形成都有明显抑制效应。结论：ｂｃｌ－２基因反义核酸对白血病细胞生存有明显的影响。

Bcl-2基因反义核酸增强三氧化二砷对NB4细胞凋亡效应

目的 :研究和探索bcl- 2基因反义核酸 (bcl- 2ASODN)是否能提高三氧化二砷 (As2 O3 )对NB4白血病细胞的凋亡效应。方法 :采用微量细胞培养的方法 ,观察反义核酸、砷剂单独以及反义核酸、砷剂联合培养NB4细胞的生物效应和凋亡形态变化 ;用免疫组化的方法 ,结合流式细胞技术 ,测定NB4细胞的DNA和Bcl- 2蛋白的变化。结果 :As2 O3 (0 2 5 μmol/L) +bcl - 2ASODN(10 0 μmol/L)联合诱导NB4细胞凋亡作用显著强于单用As2 O3 (0 2 5μmol/L)或 bcl- 2ASODN(10 0 μmol/L) (P <0 0 1)。流式细胞仪检测显示 ,联合用药Bcl- 2蛋白表达亦明显少于反义核酸、砷剂单独给药组 (P <0 0 1)。结论 :bcl- 2基因反义核酸能明显提高和显著增强As2 O3 对NB4白血病细胞的致凋亡效应。

Bcl-2反义寡核苷酸增强阿糖胞苷诱导原代白血病细胞凋亡的研究

背景与目的:有研究证实,针对bcl-2mRNA翻译起始区和蛋白编码区的2个有效反义作用靶点的反义寡核苷酸能增强HL-60和K562细胞对阿糖胞苷(Ara-C)、柔红霉素、足叶乙甙的敏感性。本研究观察这两个新靶点的反义寡核苷酸对Ara-C诱导原代培养的急性白血病(AL)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)细胞凋亡的影响。方法:用细胞记数法观察细胞的生存情况;免疫荧光标记法通过流式细胞仪检测细胞Bcl-2蛋白水平;用姬姆萨染色法观察并用流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:靶向bcl-2mRNA翻译起始区与靶向蛋白编码区的两个反义寡核苷酸分别与Ara-C联合作用AL、CLL细胞48h,细胞的活性受到明显的抑制,分别同无关寡核苷酸(NS-ODN)联合Ara-C组、单用Ara-C组进行比较,差异有显著性(P<0.05)。这两个不同靶点的反义寡核苷酸分别与Ara-C联用均能明显下调AL、CLL细胞Bcl-2蛋白的表达,并且联合作用AL、CLL细胞48h的凋亡细胞百分率分别与NS-ODN联合Ara-C组、单用Ara-C组进行比较,差异有显著性(P<0.05)。与靶向bcl-2mRNA翻译起始区的反义寡核苷酸比较,靶向蛋白编码区的反义寡核苷酸提高AL细胞对Ara-C的敏感性作用要强些(P<0.05)。结论:针对bcl-2mRNA翻译起始区和蛋白编码区两个靶点的反义寡核苷酸能增强Ara-C诱导AL、CLL细胞的凋亡。

反义bcl-2基因转染对单核白血病细胞存活及化疗耐受能力的影响

目的 :探讨bcl 2反义核酸在单核白血病细胞系U937细胞中的作用 ,以丰富bcl 2及其反义核酸调控肿瘤细胞凋亡的资料。方法 :将反义bcl 2基因表达载体 pLXSN/as bcl 2转染于U937细胞 ,建立U937/as bcl 2细胞模型 ,利用流式细胞技术检测模型细胞bcl 2的表达水平 ;通过细胞计数观察模型细胞在正常培养条件下和有化疗药物Ara C或三尖杉酯碱存在时的生长和存活特性变化。结果 :①模型细胞的bcl 2蛋白表达水平明显下降。②模型细胞在正常培养条件下的生长和存活表型无明显改变。③在Ara C或三尖杉酯碱存在的情况下 ,模型细胞的存活率较对照细胞者明显下降。结论 :①单独反义bcl 2基因转染可明显抑制U937细胞bcl 2的表达 ,但对细胞在正常条件下的生长和存活表型无明显影响。②反义bcl 2基因转染可增加U937细胞对化疗药物的敏感性。

不同靶点的反义bcl-2寡核苷酸对白血病细胞足叶乙甙敏感性影响的研究

目的探讨针对bcl_2mRNA蛋白编码区的反义寡核苷酸对足叶乙甙诱导HL_60和K562细胞凋亡的影响。方法应用MTT法和流式细胞仪检测反义寡核苷酸与足叶乙甙联合作用的HL60和K562细胞中bcl_2蛋白表达和细胞凋亡及足叶乙甙IC50值。结果10μmol·L-1 反义寡核苷酸与足叶乙甙联用能明显抑制HL60和K562细胞中bcl_2蛋白表达和增强细胞对足叶乙甙诱导凋亡的敏感性 ,提高细胞的凋亡率 ;并且针对bcl_2mRNA蛋白编码区的反义寡核苷酸比针对bcl_2mRNA翻译起始区的反义寡核苷酸作用更强。结论针对bcl_2mR

Bcl-2反义寡核苷酸抑制视网膜色素上皮细胞增生的实验研究

目的 探讨不同浓度的Bcl 2反义寡核苷酸 (bcl 2AS ODN)对人视网膜色素上皮 (RPE)细胞增生活性的影响。方法 使用不同浓度 ( 0、15、3 0、45、60 μmol/L)的bcl 2AS ODN和bcl 2S ODN处理人RPE细胞 2 4h后 ,使用MTT、氚 -标记脱氧胸苷掺入试验 ( 3 H TdR)测定RPE细胞增生的抑制率及DNA合成抑制率 ;使用流式细胞仪检测其对RPE细胞周期的影响 ;使用免疫组织化学染色法检测不同浓度bcl 2AS ODN作用下的RPE细胞bcl 2的表达。结果 不同浓度bcl 2AS ODN处理过的RPE细胞的抑制率和DNA合成抑制率随bcl 2AS ODN浓度的增高而升高 ,bcl 2AS ODN将RPE细胞阻滞在G0 /G1期 ,免疫组化结果显示 :bcl 2AS ODN可抑制RPE细胞bcl 2的表达。结论 bcl 2AS ODN对RPE细胞的增生有抑制作用且呈浓度依赖性 ,这一结果有可能成为增生性玻璃体视网膜病变 (PVR)基因治疗的一个新靶点。

bcl-2反义药物的设计及其对白血病细胞生长的影响

目的 通过计算机模拟bcl 2基因的mRNA二级结构 ,优化反义药物设计。方法 用计算机程序Mfold软件模拟mRNA的二级结构后 ,筛选出不稳定的二级结构区域 ,进行反义药物设计 ;用实验评价所设计反义药物的生物效应 ,筛选出的bcl 2反义寡核苷酸对白血病细胞株HL 60、K5 62生物学活性的影响。结果 有 2个位点的反义寡核苷酸在计量为 10 μmol·L-1以上时 ,能明显抑制细胞的生长活性。结论 bcl

bcl-2反义寡核苷酸联合三氧化二砷对膀胱癌细胞生长的抑制作用

目的观察bcl-2反义寡核苷酸（antisense oligonucleotides，ASODN）与三氧化二砷（As2O3）对膀胱癌细胞生长的抑制作用，比较联合或单独用药的抑制效果。方法人工合成包含bcl-2翻译起始位点的ASODN及无义核酸（NSODN），以质脂体（Lipofectamine）作为载体转染T-24膀胱癌细胞株。分为对照组（加PBS）、反义组（ASODN 1μmoL/L）、无义组（NSODN 1μmoL/L）、As2O3组（2μmoL／L）、As2O3＋反义组（联合用药组：As2O3 1μmol／L，ASODN0．5μmol／L）。采用肿瘤细胞生长曲线、四氮唑蓝（MTT）实验和集落形成实验，观察药物对肿瘤细胞生长的抑制作用，流式细胞仪检测肿瘤细胞的凋亡情况。结果从细胞生长曲线看出，与对照组相比，联合用药组肿瘤细胞数减少了62．09％，反义组减少了31．04％，As2O3组减少了39．08％，无义组减少了21．84％。MTT实验，肿瘤细胞抑制率联合用药组为（86．11±7．35）％，As2O3组为（67．21±8．99）％，反义组为（50．23±5.46）％，无义组为（8．22±0．33）％，组间比较差异有统计学意义（F=180．2，P〈0．01）。半数抑制浓度（IC50）联合用药组为（0．98±0．12）μmol／L，As2O3组为（1．53±0．32）μmol／L。反义组的为（1．96±0．22）μmol／L，无义组为（4．33±0．33）μmol／L，组间比较差异有统计学意义（F=354.0，P〈0．01）。肿瘤细胞集落生存率联合用药组为53．76％，反义组为76．32％，As2O3组为75．25％，无义组为90．33％。肿瘤细胞凋亡率联合用药组为（22．66±1．66）％，组间比较均差异有统计学意义（F=232．15，P〈0．01）。结论Bcl-2反义寡核苷酸与As2O3联合应用可明显提高对膀胱癌细胞生长的抑制作用。