热带假丝酵母菌ERG11基因突变与氟康唑耐药性的关系

目的探讨热带假丝酵母菌氟康唑作用的靶酶编码基因(ERG11)突变与耐药性的关系。方法根据ERG11序列设计引物,对氟康唑靶酶基因ERG11进行PCR扩增,DNA测序后对比分析耐药株与敏感株及标准株的碱基差异,确定耐药株基因一级结构上的突变点,并推测分析靶酶蛋白的氨基酸改变及与氟康唑耐药的关系。结果氟康唑敏感株的ERG11基因DNA序列与氟康唑敏感标准株ATCC750完全一致,耐药株出现+395、+513、+783处点突变,导致132位氨基酸改变。结论ERG11基因突变所编码的氨基酸改变与氟康唑耐药有关。

新型隐球菌氟康唑耐药株的筛选

对所收集的34株新型隐球菌临床分离株参照美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)推荐的M27～A方案,采用微量稀释法测定了氟康唑最低抑菌浓度(MIC),选出两株敏感株(MIC4μg/ml)HS17061、HS16532和一株标准株BLS109作为实验原始菌株,经在不同浓度氟康唑的培养基中连续传代培养处理,诱导产生耐药突变菌落。经传代培养,突变菌落氟康唑的耐药性是稳定的。

热带念珠菌对氟康唑耐药机制的初步研究

25株临床分离的热带念珠菌通过ATB FUNGUS 3试条分类为对氟康唑(FCA)敏感的菌株和耐药的菌株,使用ABI 7300荧光定量分析仪扩增外排基因CDR1、MDR1和靶酶基因ERG11,用2-ΔΔCT法计算相对表达量,应用Fisher确切概率法统计分析敏感菌株和耐药菌株的高表达率。结果显示MDR1和ERG11基因的高表达率差异有统计学意义(P<0.05),CDR1基因的高表达率差异无统计学意义(P>0.05)。热带念珠菌对FCA耐药与外排基因MDR1和靶酶基因ERG11的高表达相关。

白念珠菌CDR1基因上游调控序列与氟康唑耐药的关系初探

目的探讨白念珠菌耐药基因CDR1基因上游调控序列对氟康唑耐药的影响。方法分别抽提氟康唑耐药/敏感配对菌株DNA,通过特异性合成CDR1基因上游调控序列引物,分析该序列在氟康唑耐药/敏感配对菌株中是否存在基因突变。结果白念珠菌氟康唑耐药/敏感配对菌株中的CDR1基因上游调控序列未出现任何碱基突变和缺失。结论白念珠菌氟康唑耐药与CDR1基因上游调控序列是否突变无关。

光滑假丝酵母菌多效耐药1基因介导的氟康唑耐药机制研究进展

氟康唑耐药率和致死率呈现上升趋势,受到学者们越来越多的关注。光滑假丝酵母菌是临床念珠菌血症重要的致病菌种,多效耐药1(PDR1)基因功能获得性突变导致外排泵转运蛋白过表达,在光滑假丝酵母菌对氟康唑的耐药机制中发挥重要作用,但目前对PDR1调节机制及突变情况的了解并不全面。本文从光滑假丝酵母菌PDR1基因介导的氟康唑耐药机制、PDR1的调控机制及PDR1功能获得性突变对菌株毒力的影响三个方面,阐述光滑假丝酵母菌PDR1基因介导的氟康唑耐药机制。

2-氨基壬烷-6-甲氧基四氢萘盐酸盐体外抗氟康唑耐药白念珠菌活性研究

目的:考察2-氨基壬烷-6-甲氧基四氢萘盐酸盐(10b)对氟康唑耐药白念珠菌的体外抗菌活性。方法:采用美国临床和实验室标准协会(CLSI)推荐的微量液基稀释法考察10b对20株氟康唑耐药白念珠菌的抗菌活性。通过琼脂纸片扩散实验、时间生长曲线实验和MFC值测定,比较10b与酮康唑对氟康唑耐药白念珠菌SC5314R的体外抗真菌活性。通过罗丹明6G外排试验初步探讨10b可能的作用机制。结果:10b对氟康唑耐药白念珠菌的抗菌活性强于酮康唑,其作用机制可能与抑制药物流出泵外排功能有关。结论:10b化学结构新颖,对氟康唑耐药白念珠菌体外抗菌活性强大,值得深入探讨和研究。

热带念珠菌靶位酶基因变异与氟康唑耐药的关系

目的探讨热带念珠菌靶位酶(ERG11)基因的改变与氟康唑耐药的相关性。方法根据热带念珠菌ERG11基因序列设计引物,以标准株为对照,对临床分离的耐药株、剂量依赖株(S-DD)和敏感株进行靶位酶ERG11基因PCR扩增,测序之后比对分析标准株,耐药株、剂量依赖株和敏感株的序列差异,分析靶位酶基因改变与氟康唑耐药的相关性。结果热带假丝酵母氟康唑敏感株与敏感标准株序列一致;而S-DD株中出现T783C和G1362A沉默突变;耐药株中出现碱基序列T225C、C461T、G1362A等3种突变点,并导致丝氨酸(S)154苯丙氨酸(F)氨基酸突变。结论热带念珠菌靶位酶ERG11基因氨基酸序列的突变与氟康唑耐药有一定的相关性。

应用卡泊芬净治疗氟康唑耐药热带念珠菌尿路感染1例

艾滋病(AIDS)常合并机会性感染,在治疗机会性感染的过程中,少数病人因药物引发急性肾功能衰竭,从而增加了后续治疗的难度,尤其在并发氟康唑耐药的念珠菌尿路感染时,既要兼顾肾功能,又要取得疗效,此时抗真菌药物的选择尤为困难。近期本院1例艾滋病病人合并急性肾功能衰竭及多种机会性感染,住院期间并发氟康唑耐药热带念珠菌尿路感染,使用卡泊芬净抗真菌治疗有效,随访2个月未再复发。现将有关情况报告如下。

念珠菌耐药相关基因研究

目的研究耐氟康唑热带念珠菌临床株Fc 30的基因突变耐药机制。方法对氟康唑靶酶基因erg 11进行PCR扩增,DNA测序,对比分析临床耐药株与敏感株及标准株的靶酶基因DNA序列,确定耐药株基因一级结构上的突变点,并推测分析靶酶蛋白的氨基酸改变及与氟康唑耐药的相关性。结果氟康唑敏感株Fc 17的erg 11基因DNA序列与氟康唑敏感标准菌ATCC750完全一致,耐药株Fc 30出现+225、+264、+395、+461、+513处点突变,导致132、154位氨基酸突变。结论与敏感株相比,耐氟康唑热带念珠菌Fc30 erg11基因出现Y132F耐药相关突变。

热带念珠菌外排泵耐药的研究

目的研究耐氟康唑热带念珠菌临床株F c30的外排泵耐药机制。方法运用半定量RT-PCR技术研究外排泵基因m d r1 mRNA水平与耐药的相关性。结果耐药株F c30的m d r1基因mRNA灰度比值约为敏感株F c17的2.3倍。结论与敏感株相比,耐氟康唑热带念珠菌F c30外排泵基因m d r1过度表达与耐药相关。

基于协同氟康唑抗耐药真菌活性的小檗碱结构衍生化研究

前期研究发现小檗碱能显著提高氟康唑对耐药白念珠菌的敏感性,提示其具有协同氟康唑抗耐药真菌作用。通过结构修饰和改造等衍生化研究,可为研究其作用靶点和构效关系、提高成药性、获得新结构活性化合物提供依据。以13位引入苄基对小檗碱进行结构修饰;以胡椒乙胺为起始原料合成异喹啉类化合物,模拟打开小檗碱D环、保持其A、B、C、E环的方式,对小檗碱进行结构改造;对获得的化合物进行体外与氟康唑合用抗耐药白念珠菌活性测试。结果显示13-苄基取代小檗碱类衍生物1a^1e保持了协同氟康唑抗耐药白念珠菌的活性,提示可通过13位苄基取代的方式引入各种功能基团而不降低其活性。小檗碱结构改造类似物N-苄基异喹啉类衍生物活性总体不高,但化合物2b、2c、4b表现了一定的活性,说明其基本骨架D环可以打开,值得进一步优化研究。

体外氟康唑诱导光滑念珠菌和近平滑念珠菌耐药及相关机制研究

目的:研究光滑念珠菌和近平滑念珠菌对氟康唑耐药的易感性及其诱导耐药株的耐药机制。方法 :选取对氟康唑敏感的光滑念珠菌、近平滑念珠菌临床株各1株以及对氟康唑敏感的光滑念珠菌标准株ATCC2001、近平滑念珠菌标准株ATCC22019,利用浓度递增法,在体外用氟康唑诱导使其成为耐药株,采用实时定量PCR检测外排泵相关基因、其转录因子和靶酶编码基因表达,并对光滑念珠菌PDR1转录因子、近平滑念珠菌MRR1转录因子和ERG11基因进行PCR扩增和测序。结果 :光滑念珠菌较近平滑念珠菌更易被氟康唑诱导为耐药株,CDR1的过度表达为其主要的耐药机制,对PDR1转录因子测序后发现了新的突变位点Y932C、V847F。近平滑念珠菌诱导耐药株的MDR1表达显著增加,其MRR1转录因子中亦存在新的突变位点P295S、I799S。结论 :光滑念珠菌和近平滑念珠菌对氟康唑的耐药易感性不同,耐药机制也存在差异。新发现的转录因子突变位点有待验证其功能。

盐酸小檗碱与氟康唑联用对耐药白色念珠菌钙稳态的影响

目的探讨盐酸小檗碱(berberine hydrochloride,BBH)与氟康唑(fluconazole,FLC)联用对氟康唑耐药白色念珠菌(Candida albicans,CA)的协同抑菌作用及其对细胞内Ca2+稳态的影响。方法棋盘稀释法筛选对白色念珠菌耐药株具有协同抑制作用的最低浓度盐酸小檗碱与氟康唑组合,XTT减低法测定动态抑菌效果。采用倒置荧光显微镜和流式细胞术检测细胞内Ca2+内流情况,RT-qPCR技术检测Ca2+稳态关键基因的表达量,评价两药联用对耐药白色念珠菌Ca2+稳态的影响。试验设两组单用组及不加药(空白)组作对照。结果联合用药的部分抑菌浓度指数最小的药物浓度组合为盐酸小檗碱2μg/ml+氟康唑1μg/ml。两药联用组在0~48h内动态抑菌效果显著优于两药单用组和空白对照组(P<0.05),两药联用具有协同作用(FICI<0.5)。联用组、盐酸小檗碱单用组处理后白色念珠菌细胞内Ca2+内流现象明显,且联用组细胞内Ca2+浓度均比盐酸小檗碱单用组和氟康唑单用组分别高1.07-2、1.17-8.39倍(P<0.05),但氟康唑单用组与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。联用组和盐酸小檗碱单用组液泡钙通道YVC1基因上调,氟康唑单用组YVC1基因下调,联用组YVC1基因表达量比盐酸小檗碱单用组和氟康唑单用组分别高1.62、6.47倍(P<0.05)。联用组和盐酸小檗碱单用组液泡钙泵PMC1基因下调,氟康唑单用组PMC1基因上调,联用组和盐酸小檗碱单用组PMC1基因的表达量比氟康唑单用组分别低80.86%和80.59%(P<0.05)。结论盐酸小檗碱与氟康唑联用对氟康唑耐药白色念珠菌具有协同抑菌作用,盐酸小檗碱可能通过影响白色念珠菌液泡膜上的钙离子调节器Pmc1p和Yvc1p促进质膜内Ca2+内流,破坏钙离子稳态,从而增加耐药株对氟康唑药物的敏感性。

没食子酸联合氟康唑抗耐药非白念珠菌作用的体外试验

目的:研究没食子酸与氟康唑联用对耐药光滑念珠菌和克柔念珠菌的体外抗真菌活性。方法:采用棋盘微量稀释法测定没食子酸与氟康唑单用及联用对耐药光滑念珠菌和克柔念珠菌的抗真菌作用,以部分抑菌浓度指数(FICI)评价其联用效果;并以CG2、CK8为目标菌株,采用时间-杀菌曲线进行验证;通过测定没食子酸对耐药株生物膜形成早期黏附性的影响,初步探讨药物联合抗真菌耐药的作用。结果:联用时8~16μg·m L-1没食子酸能将氟康唑的MIC值降为单用时的1/4~1/8,FICI值为0.375,呈现较好的协同作用,且量效关系呈正相关。时间-杀菌曲线表明,与氟康唑单用相比,没食子酸与氟康唑联用24 h时,CG2、CK8菌株CFU的lg值分别下降了2.1个单位和2.25个单位,均表现为协同作用。另外,研究发现没食子酸对生物膜形成的早期黏附有明显的抑制作用。结论:没食子酸与氟康唑联用对耐药光滑念珠菌和克柔念珠菌的浮游菌表现出体外协同抗真菌作用,且没食子酸能够明显抑制非白色念珠菌生物膜形成的早期黏附。

皱叶重楼根茎的化学成分及抗菌活性研究

藜芦科植物皱叶重楼目前仅分布于我国云南省,其化学成分尚未被系统地研究。该研究通过多种柱色谱方法及半制备高效液相等分离手段,从皱叶重楼根茎的乙醇提取物中分离鉴定了9个化合物,分别为pariposide G(1)、cerin(2)、豆甾-4-烯-3-酮(3)、β-蜕皮激素(4)、麦冬皂苷C′(5)、甲基原纤细薯蓣皂苷(6)、纤细薯蓣皂苷(7)、重楼皂苷H(8)、parisyunnanoside G(9)。其中化合物1为新化合物,化合物1~9均为首次从该植物中分离得到。对所有化合物的抗细菌和真菌活性进行了评价,实验结果表明麦冬皂苷C′对白色念珠菌[MIC90=(4.68±0.01)μmol·L^(-1)]和白色念珠菌氟康唑耐药株[MIC90=(4.66±0.02)μmol·L^(-1)]有较强的抑制作用。