含氟甲喹残留的鳗鲡肉糜自然基体标准样品的制备

为了获得与实际检测样品完全一致的检测质量控制样品,研制了含氟甲喹的自然基体鳗鲡肉糜标准样品。在模拟人工养殖的自然条件下适量施用氟甲喹药物,采集符合预期水平(氟甲喹含量为5～10μg/kg)的阳性材料。取带皮的阳性肌肉均质,过10目筛网。样品用尼龙/聚丙烯(PA/CPP)耐蒸煮复合膜袋包装,经C o60-γ射线12kG y剂量的辐照灭菌;经均匀性检验、稳定性检验、中国合格评定国家认可委员会认可实验室液相色谱-串联质谱法检测协同定值。所建立的制备方法为含药物残留的鳗鲡肉糜的自然基体标准样品的实验室制备提供了一种选择。

氟甲喹单克隆抗体制备、鉴定及间接竞争酶联免疫吸附分析法

以氟甲喹(FLU)为原料,合成4个碳原子手臂的半抗原(FLUABA),采用活泼酯法与牛血清白蛋白(BSA)偶联制备免疫抗原,通过免疫Balb/c小鼠及细胞融合,获得1株稳定分泌抗氟甲喹单克隆抗体的杂交瘤细胞株DB6-E7,其抗体亚类为IgG1,亲和力常数(KA)为8.19×108L/mol。将氟甲喹、FLUABA及6个碳原子手臂的半抗原FLUACA分别与卵清白蛋白(OVA)偶联作为包被抗原,研究异源包被对间接竞争ELISA灵敏度的影响。结果表明,异源包被可显著提高ELISA方法的灵敏度。基于最佳异源包被(FLU-OVA)的酶联免疫吸附分析法的IC50为26.33μg/L,检出限为4μg/L,定量检测范围为8.0～114μg/L(IC20～IC80)。与喹诺酮类药物及结构类似物几乎不存在交叉反应,特异性高。此方法可满足畜禽产品中氟甲喹残留的快速筛查。

高效液相色谱法同时测定水体中的环丙沙星和氟甲喹

为了满足实验室测试和野外测试需要,也为其他学者研究不同抗生素之间的相互作用提供相关的资料,本研究选用环丙沙星(CIP)和氟甲喹(FLU)作为代表,建立了一种简单、稳定、易普及的高效液相色谱法用于同时快速测定水体中两种氟喹诺酮类抗生素的含量,并讨论了不同流动相及其比例和水样中几种常见阴、阳离子(Ca2+、Mg2+、Fe3+、Al3+、SO24-和HCO3-)对抗生素测定的影响。结果表明:三乙胺对改善柱效有明显效果;低浓度离子对测试影响不大,但Fe3+和Al3+可能与固定相的表面羟基或测试组分发生配合作用,造成基线不稳。实验结果对其他研究者对于流动相的选择与优化具有借鉴意义。

噁喹酸和氟甲喹在鳗鱼体内的药代动力学研究

研究了单次血管注射喹酸(Oxolinicacid)和氟甲喹(Flumequine)后,在鳗鱼(Muraenesoxcinereus)体内的代谢规律及残留情况。采用高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS)法进行喹酸和氟甲喹的检测,检测低限(LOD)1ng/ml;定量限(LOQ)5ng/ml。喹酸和氟甲喹的代谢过程均可以用一级代谢二室模型来描述,喹酸的分布半衰期:0·18h,消除半衰期:14·84h,总体清除率0·07L/kg·h;氟甲喹的分布半衰期:0·19h,消除半衰期:9·38h,总体清除率0·07L/kg·h。两种药物在鳗鱼体内都有很强的“首过效应”,易在胆汁中积累;给药72h后,喹酸和氟甲喹在可食用组织肌肉中的残留量分别为36·1ng/g和21·8ng/g,低于目前国外要求的最高残留量50ng/g和75ng/g。

高效液相色谱法测定鳗鱼中氟甲喹和噁喹酸的残留量

建立了高效液相色谱-荧光检测器法测定鳗鱼中氟甲喹和噁喹酸残留量的方法。用乙腈萃取鳗鱼样品中氟甲喹和噁喹酸残留物。色谱柱采用C8Luna，柱温为35℃，激发波长和发射波长分别为312nm和369nm，流动相为0．01mol/L草酸：乙腈=65：35（V/V）。氟甲喹和噁喹酸标准曲线在线性范围1～100ng/mL时呈良好线性关系。对带皮的鳗鱼肉进行3种浓度的回收率测定。实验结果表明，回收率80％～110％，变异系数≤10％。氟甲喹的检测限为2．5μg／kg，定量下限为5μg／kg；噁喹酸的检测限为1μg／kg，定量下限为2μg／kg。整个提取过程步骤简单，易于操作，可以满足世界各国目前对出口水产品检测的限量要求。

反相高效液相色谱法测定海水鱼组织中的氟甲喹残留

建立了测定美国红鱼和鲈鱼血浆、肌肉和肝脏组织中氟甲喹含量的反相高效液相色谱(RT-HPLC)法。方法以乙腈-四氢呋喃-0.02mol/L H3PO4=16:12:72(体积比)为流动相,C18柱,流速为1.2mL/min,紫外检测波长为324nm。氟甲喹在0.05～10μg/mL范围内呈线性关系,相关系数为0.9999。采用二氯甲烷提取美国红鱼、鲈鱼肌肉和肝脏组织中氟甲喹,并在40℃浓缩进样。结果表明,氟甲喹在美国红鱼和鲈鱼三种组织中的平均回收率为分别85.88%～92.78%和84.05%～91.09%,相对标准偏差分别为3.85%～4.27%和2.81%～3.97%。氟甲喹在血浆中的检出限为0.05μg/mL,肌肉和肝脏组织中检出限为0.02μg/g。该方法操作简单,重现性好,适合于海水鱼血浆、肌肉、肝脏等生物样品中氟甲喹含量的分析。

氟甲喹在罗非鱼体内的消除规律研究

水温29～31℃时，对奥尼罗非鱼（尼罗罗非鱼♀×奥利亚罗非鱼♂）单次灌服10 mg/kg氟甲喹后3、6、12、24、48、72、96、120、144、168 h采集罗非鱼的肌肉和皮肤组织样品，研究氟甲喹在罗非鱼体内的消除规律和残留。组织样品经过提取、净化，以反相高效液相色谱荧光检测法测定。结果表明，氟甲喹在肌肉和皮肤组织中吸收迅速，达峰时间为9 h ，氟甲喹含量为（750．9±148．4）μg/kg。氟甲喹在肌肉和皮肤组织中消除缓慢，消除半衰期为48．46 h。在最高残留限量500μg/kg下，氟甲喹在罗非鱼体内的休药期为95 h。

氟甲喹对异育银鲫细胞色素CYP450主要药酶的影响

在分析了氟甲喹腹腔注射后对异育银鲫(Carassius auratus gibelio)主要药酶活性影响的基础上,从蛋白表达和mRNA转录水平探究了氟甲喹对CYP1A(EROD)的诱导机制。以氟甲喹剂量35mg/kg一次性腹腔注射异育银鲫24h后,肝微粒体的7-乙氧基异吩唑酮-O-脱乙基酶(EROD)活性为54.33pmol/(mg·min),显著高于对照组的34.00 pmol/(mg·min)(P<0.01),而红霉素-N-脱甲基酶(ERND)[177.98 pmol/(mg·min)]、氨基比林-N-脱甲基酶(APD)[934.40 pmol/(mg·min)]及7-乙氧基香豆素-O-脱乙基酶(ECOD)[9.84 pmol/(mg·min)]与对照组[分别为140.90 pmol/(mg·min)]、850.71pmol/(mg·min)和8.93 pmol/(mg·min)]相比无显著性差异;除肾组织中ERND活性高于肝脏外,其他CYP亚型药酶活性(APD、EROD和ECOD)均以肝组织中最高。Western-blotting印迹表明,实验组肝脏中CYP1A蛋白含量明显高于对照组,与酶活(EROD)相符合;而肾、肠中没有检测到特异性条带。半定量RT-PCR结果显示,CYP1A mRNA在肝、肾和肠均有表达,但实验组与对照组并无明显差异。体外实验中,不同浓度的氟甲喹与微粒体共孵育,未见EROD活性与浓度、时间的依赖关系。综上推测,氟甲喹对鲫鱼肝CYP1A的诱导是在翻译后水平,可能是加强蛋白的稳定性。本研究旨在为氟甲喹在鱼类中的合理应用提供科学依据。

氟甲喹在中华鳖日本品系组织中的残留代谢规律研究

建立了中华鳖日本品系组织中氟甲喹的高效液相色谱-串联质谱检测方法,研究了氟甲喹药饵多次给药后在中华鳖日本品系体内的残留代谢规律.在(25.0±1.5)℃下,采用纯度不小于98%的氟甲喹和规格为(250±50)g的中华鳖日本品系180尾,混饲投喂12mg/kg体重药饵,给药7d.在停药后的第1,2,4,8,16,28,48,72,96,120,144,168,240,360h分别取其血液、肌肉、肝脏和肾脏样品进行残留代谢规律的研究.结果表明氟甲喹在中华鳖日本品系的血液、肝脏、肌肉和肾脏组织中均有残留,最高峰值均出现在停药后2h,质量分数分别为2715.0,2 000.0,1 095.3,281.0μg/kg;其t1/2α分别为1.015,0.629,0.719h,0.212h,t1/2β分别为49.636,52.234,42.817,46.657h,动力学方程分别为:C血液=2 674.136×e-0.683t+1 410.516×e-0.014 0t,C肝胰腺=2429.647×e-1.103t+1 280.742×e-0.013 3t,C肌肉=946.592×e-0.964t+770.039×e-0.016 2t,C肾脏=0.487×e-3.275t+224.740×e-0.014 9t.说明氟甲喹在中华鳖日本品系体内吸收迅速,在各组织中残留量及消除速度差别较大,建议休药期为10d以上.

基于生理药动学模型计算氟甲喹在家兔体内的药动学参数

为阐明氟甲喹(FLU)在家兔体内的吸收、分布、代谢和排泄特点,为家兔疾病治疗中应用FLU提供合理的给药方案,通过文献检索获得了家兔的生理学和解剖学参数,之后建立了一个包含10个隔室在内的血流限速型生理药动学模型。模型中包含了FLU的口服给药、胃肠道吸收及肝脏代谢模块。利用该模型成功模拟了家兔单次灌胃FLU(15mg/kg)后各组织中的浓度,预测了FLU的血浆浓度。通过对该血浆浓度-时间数据的进一步分析(房室分析和非房室分析),获得了灌胃给药后FLU在家兔体内的药动学参数。结果表明,灌胃给药后,FLU在家兔体内吸收迅速,分布广泛,消除迅速。

氟甲喹在大菱鲆体内的药代动力学研究

为探讨氟甲喹在大菱鲆体内的药代动力学特征,在水温14~17℃条件下,以20 mg/kg的剂量静脉注射和口服氟甲喹,分别于给药后15、30 min和1、2、4、6、8、12、16、24、36、48、72、96 h采血及各组织,利用高效液相色谱法测定血浆和各组织中的氟甲喹含量,采用DAS 2.0药动学软件中统计矩方法分析药代动力学参数。结果显示,静注给药后,血浆中氟甲喹的表观分布容积为5.46L/kg,消除半衰期为56.93 h,曲线下面积、生物利用度分别为220.32 h·mg/L、100%;口服给药后,血浆中氟甲喹的曲线下面积、生物利用度分别为95.85 h·mg/L和43.51%,达峰时间为16 h,表观分布容积为4.21 L/kg,消除半衰期为14.12 h。结果表明,静注和口服氟甲喹在大菱鲆体内组织分布均较广,但静注消除慢,口服吸收差、消除快。口服给药后,血浆中氟甲喹浓度在24 h内高于对常见病菌的抑菌浓度,因此,每天以20 mg/kg的剂量给药1次,可对常见细菌疾病起到较好防治效果。

高效液相色谱法检测多种动物组织中噁喹酸和氟甲喹残留量的研究

建立了猪、牛、羊的肌肉、脂肪、肝脏和肾脏四种组织中嗯喹酸、氟甲喹残留量检测的高效液相色谱法。试样经磷酸盐缓冲溶液提取,C18固相萃取柱浓缩净化,用高效液相色谱分析,荧光检测器检测,外标法定量。动物组织中嗯喹酸和氟甲喹的检测限为10μg/kg,定量限为20μg/kg。嗯喹酸、氟甲喹在3-500 ng/mL范围内呈良好的线性关系。在20-300μg/kg的浓度添加水平上,其平均回收率为63%-100%,批内、批间的相对标准偏差均小于15%。

氟甲喹胶体金免疫层析试纸条研究

选择氟甲喹(FLU)作为目标物,制备能够特异性识别氟甲喹的多克隆抗体,建立氟甲喹的胶体金标记免疫层析分析方法。胶体金颗粒的粒径为20 nm;金标抗体连接的最佳p H值为8.5、最适抗体量为20μg/m L;捕获抗体的包被浓度为0.5 mg/m L,二抗1∶200倍稀释,选择Milllipore HF135s硝酸纤维膜作为固相载体,金标抗体1∶10稀释喷涂到金标垫上;在最优条件下组装试纸条,将金标抗体铺在结合释放垫上的组装方式其方法检出限为20μg/L;选择鸡肉、牛肉、猪肉、鱼肉、虾肉、猪肝和牛奶7种实际样品进行添加回收试验,样品检出限为50μg/L。

中华绒螯蟹体内氟甲喹的残留消除研究

采用超高效液相色谱—串联质谱法,研究了不同养殖条件下氟甲喹在中华绒螯蟹体内的残留消除规律。结果表明,休药15 d后各组中华绒螯蟹体内的氟甲喹残留量均低于我国现行限量标准150μg/kg,太湖开放型水域中试验蟹的残留低于仪器检测限。各组试验蟹体内的氟甲喹残留衰减消除速率总体表现为:在室外开放水域中的消除速率快于室内水体,Ⅴ期幼蟹的衰减消除速率快于扣蟹,28℃温度条件下的消除速率快于22℃。

噁喹酸、氟甲喹在鸡组织中残留量的检测方法研究

用荧光检测的高效液相色谱法同时检测鸡组织中E喹酸、氟甲喹的残留量。用1mol/L磷酸二氢钾溶液作为提取液，过C18固相萃取柱净化、浓缩。HPLC条件：荧光检测器，激发波长325nm；发射波长369nm。流动相：0.02mol/L磷酸－乙腈－四氢呋喃（69：16：15）。E喹酸、氟甲喹标准曲线线性范围在10－500ng/mL。对不同组织的3种浓度进行回收率测定，其回收率在61％－92％之间，变异系数在15％以内。E喹酸、氟甲喹的检测灵敏度为20ng/g。

胶体金标免疫固相膜检测动物性食品中氟甲喹

氟甲喹(flumequine,FLU)是动物专用的抗生素,滥用或超标使用会造成动物性食品中的残留问题,对人类健康造成危害。以活泼酯法制备氟甲喹完全抗原,免疫新西兰大耳白兔获得抗血清,通过间接竞争酶联免疫法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定抗血清的效价和亲和性,效价为1∶12 800,纯化后抗体的IC50达到0.055 ng/mL。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,并用于标记FLU多克隆抗体制备免疫金。以硝酸纤维素膜为固相载体,包被上包被原和酶标二抗作为检测线和控制线,优化检测条件:封闭液为5%脱脂乳、酶标二抗稀释40倍、包被量1.0μg、免疫金稀释度1∶5(体积比)、金标抗体与待测溶液混合比例1∶5(体积比)。在最优条件下,制成FLU胶体金标记免疫固相膜,最低检出限达40μg/L。建立的胶体金标记固相膜免疫检测方法适于大量样品的快速定性筛查。

鸡蛋和牛奶中噁喹酸、氟甲喹残留的检测方法研究

建立了高效液相色谱-荧光检测器法测定鸡蛋和牛奶中噁喹酸和氟甲喹残留量的方法。用1%甲酸乙腈提取样品中噁喹酸和氟甲喹残留;HPLC条件:C18色谱柱,流动相为0.02 mol/L磷酸溶液-乙腈-四氢呋喃(68∶16∶16);检测波长:激发波长325 nm,发射波长369 nm。结果显示,噁喹酸和氟甲喹在3～500 ng/mL浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系。在10～100 ng/g的浓度添加水平上,其回收率为73%～94%,批内、批间的相对标准偏差均小于12%。

噁喹酸、氟甲喹在鱼组织中残留量的检测方法研究

用高效液相色谱法，荧光检测器，同时检测鱼组织中恶喹酸，氟甲喹的残留量。用乙酸乙和为提取液，匀浆，离心，浓缩。HPLC条件：荧光检测器，激发波长325nm，发射波长369nm。流动相：0.02mol/L磷酸＋乙腈＋四氢呋喃（69＋16＋15）。恶喹酸，氟甲喹标准曲线线生范围10－500ng/mL，对带皮的鱼肉组织，进行3种浓度的回收率测定，其回收率在80％－10％之间，变异系数在11％以内，恶喹酸，氟甲喹的检测灵敏度为20ng/g。

氟甲喹对大鼠的致畸性试验

以５００、２５０及１２５ｍｇ／ｋｇ体重３个剂量氟甲喹分别对孕鼠灌胃给药，高剂量氟甲喹可显著影响胎鼠生长发育，致使胎鼠发生畸形。

用紫外分光光度法测定氟甲喹含量

作者应用ＮａＯＨ（０．１ｍｏｌ／Ｌ）为溶液溶解氟甲喹可溶性粉，并以紫外分光光度法测定其含量，结果与容量法无显著性差异。