动物可食性组织中甲砜霉素、氟苯尼考胺及氟苯尼考残留的测定

建立高效液相色谱法测定动物可食性组织中氟苯尼考、氟苯尼考胺和甲砜霉素残留量。试样经过乙腈-乙酸乙酯-氨水(体积比5∶15∶80)混合提取液提取,4%氯化钠溶液和正己烷液分配净化,再经HLB固相萃取柱净化,高效液相色谱仪测定,外标法定量。结果表明,甲砜霉素在25~5000 ng/mL、氟苯尼考胺和氟苯尼考在5~500 ng/mL浓度范围内呈现良好的线性关系,甲砜霉素检测限为10μg/kg,氟苯尼考及氟苯尼考胺检测限为2.0μg/kg,回收率均值为73.6%~91.2%,批内、批间RSD值均小于20%。本方法专属性强,灵敏度高,适用于动物可食性组织中甲砜霉素、氟苯尼考胺及氟苯尼考残留的测定。

氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺在肉鸡中残留消除规律

目的评估氟苯尼考(florfenicol,FF)及其代谢物氟苯尼考胺(florfenicol amine,FFA)在不同品种肉鸡中的残留消除规律。方法选用AA肉鸡、WOD168肉鸡(快速型)、雪山鸡和狼山鸡(慢速型)为试验对象,于出栏前3周开始按FF 25 mg/kg体重饮水给药,连用5 d,于停药后1、3、5、7、10、14 d采集肌肉、肝脏、肾脏、皮脂,检测其中的FF和FFA残留量,并利用WT1.4软件计算休药期。结果FF及其代谢物FFA可迅速残留于肉鸡肌肉、肝脏、肾脏和皮脂中,残留物以FF为主。停药后第1 d残留量达到峰值,肾脏组织中的残留量最大;停药后第3 d,各组织中FF和FFA的残留量进入快速消除期,均低于最大残留限量值;停药后第14 d已基本消除完全。AA肉鸡、WOD168肉鸡、雪山鸡和狼山鸡休药期分别至少为3.22、3.82、4.49和4.32 d。结论FF在慢速型肉鸡体内的休药期要长于快速型肉鸡,但都小于5 d。

蛋鸡产蛋前用药后氟苯尼考在鸡蛋中的残留代谢规律研究

【目的】旨在研究蛋鸡产蛋前用药后氟苯尼考在鸡蛋中的残留代谢规律,探明其在蛋鸡产蛋前的休药时间,为指导鸡蛋的安全生产提供科学依据。【方法】以378只健康的罗曼粉壳蛋鸡为试验对象,对蛋鸡产蛋前进行氟苯尼考混饲给药,采集鸡蛋样品,采用液相色谱-串联质谱对鸡蛋样品中的氟苯尼考和氟苯尼考胺残留量进行定量分析,利用代谢残留模型和休药期软件(WT 1.4)计算出氟苯尼考在蛋鸡产蛋前用药的休药时间。【结果】蛋鸡产蛋前使用氟苯尼考后,鸡蛋中氟苯尼考和氟苯尼考胺残留量随用药时间增加逐渐增大,到停药第1天时,药物残留量达到峰值,约为307.64μg/kg;然后随着停药时间的增加而逐渐下降。至停药第10天,鸡蛋中药物残留总量降至10μg/kg以下;至停药第12天,残留量降至检出限以下。利用残留消除规律模型和WT1.4软件计算的氟苯尼考在蛋鸡产蛋前的休药时间分别是9.70 d和10.26 d。验证试验结果显示,停药第9天后,所有鸡蛋样品中药物残留量均降至10μg/kg以下,结合休药期计算结果,建议氟苯尼考在蛋鸡开产期前用药的安全间隔期为10 d。而试验期间鸡群从第1枚鸡蛋生产到理论开产期的时间间隔为32 d。【结论】由于蛋鸡在理论开产期前产蛋的不规律性,为保障消费者的健康,建议将蛋鸡产蛋前使用氟苯尼考粉后的休药时间定为理论开产期前的42 d。

氟苯尼考在泰和乌鸡可食性组织中残留消除规律研究

为研究氟苯尼考可溶性粉在泰和乌鸡体内可食性组织的残留变化规律,试验选择64只110日龄健康泰和乌鸡(公母各半),按推荐剂量0.5 g可溶性氟苯尼考粉/L饮用水连续给药5 d。在停药后第0.16、1、3、5、7、9、12、15天随机屠宰4只公鸡和4只母鸡,分别采集肌肉、肝脏、肾脏、皮脂样本,采用超高效液相色谱-串联质谱联用法测定组织中氟苯尼考和氟苯尼考胺残留量,并利用WT1.4软件计算氟苯尼考在泰和乌鸡体内的休药期。结果显示,氟苯尼考和氟苯尼考胺在泰和乌鸡肌肉、肝脏、肾脏组织内残留消除较为迅速,而在皮脂组织消除相对缓慢;氟苯尼考可溶性粉在泰和乌鸡肌肉、肝脏、肾脏、皮脂中的休药时间分别为4.36 d、0.00 d、0.00 d、9.81 d。研究表明,为保证泰和乌鸡产品质量安全,氟苯尼考在泰和乌鸡体内的推荐休药期应大于10 d。

时间分辨荧光免疫法快速测定禽蛋中氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺

目的建立时间分辨荧光免疫分析法同时快速检测禽蛋中氟苯尼考、氟苯尼考胺的分析方法。方法采用乙腈对禽蛋中氟苯尼考和氟苯尼考胺进行提取,并用二氯乙酸酐将提取液中的氟苯尼考胺衍生化为氟苯尼考,最后用时间分辨荧光免疫分析技术对氟苯尼考总量进行快速检测。结果衍生试剂二氯乙酸酐体积分数为3%时,氟苯尼考胺生成氟苯尼考含量最高,副产物最少。氟苯尼考及氟苯尼考胺检出限为10μg/kg。灵敏度、特异性和相对准确度为100%,假阴性率和假阳性率均为0%。另外,采用本研究建立的时间分辨荧光免疫分析技术对市售禽蛋样品进行检测,其结果与食品安全国家标准检测结果基本一致。结论本方法前处理简单、快速,检测成本低、结果准确可靠,适合基层日常监管,重大活动食品安全的现场快速筛查、快速检测,提高检测效率。

液质联用检测鱼肉中氟苯尼考和氟苯尼考胺的残留量

建立同时测定鱼肉中氟苯尼考和氟苯尼考胺的液质联用检测方法(HPLC-MS/MS)。样品采用碱性乙酸乙酯提取,正己烷脱脂,电喷雾离子源正负模式切换,多反应监测(MRM),内标法定量。检出限分别为氟苯尼考1μg/kg,氟苯尼考胺5μg/kg。低、中、高3水平的加标回收率在87.0%～110.4%之间,相对标准偏差均小于6.2%。该方法前处理简便快速,分s析速度快,灵敏度高。

鱼肌肉中氟苯尼考和氟苯尼考胺残留的高效液相色谱检测

建立了同时检测鱼肌肉组织中氟苯尼考和氟苯尼考胺残留的高效液相色谱检测法。以水和丙酮为提取溶液，Oasis MCX固相萃取柱为净化柱，采用Inertsil ODS-3（5μm，250mm×4．6mmi．d．）反相色谱柱，以A液（0．02mol／L庚烷磺酸钠-0．025mol／L磷酸钠溶液，二者体积比68：32，pH3．85）与B液（含1mL／L三乙胺的甲醇溶液）为流动相，梯度洗脱，紫外检测器225nm处检测。结果显示，在10～1000μg／kg浓度范围内，线性关系良好；加标回收率为75．9％～82．8％，日内变异系数为2．1％～5．8％，日间变异系数为4．7％～7．7％；氟苯尼考胺和氟苯尼考的检测限分别为5μg／kg和10μg／kg，定量限分别为10μg／kg和20μg／kg。结果表明，所建立的检测方法具有灵敏、准确、简便、快速的特点，适于同时检测鱼肌肉中氟苯尼考和氟苯尼考胺的残留。

水产品中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考、氟苯尼考胺多残留的同时测定-GC/MS法

采用气相色谱-质谱法建立基质加标标准曲线,对中国对虾、大菱鲆、鲫鱼、鳗鱼、蟹、甲鱼6种主要养殖水产品肌肉组织中氯霉素类药物:氯霉素(CAP)、甲砜霉素(TAP)、氟苯尼考(FF)及其代谢物氟苯尼考胺(FFA)的多残留同时进行检测。结果显示,CAP在2–200 ng/ml浓度范围内,线性关系良好;TAP、FF和FFA在5–200 ng/ml浓度范围内,线性关系良好,其相关系数均大于0.990。加标回收率在76.4%–94.3%之间,相对标准偏差在5.7%–13.9%之间。检出限:CAP为0.2μg/kg,TAP、FF和FFA均为1.0μg/kg。定量限:CAP为0.5μg/kg,TAP、FF和FFA均为3.0μg/kg。研究表明,该方法具有准确、高效、灵敏、特异性强的特点,可以满足水产品中CAP、TAP、FF和FFA多残留的同时检测的要求。

水产品中氟苯尼考和氟苯尼考胺的高效液相色谱荧光法同时测定

建立了水产品中氟苯尼考和氟苯尼考胺同时检测的高效液相色谱荧光法，以乙腈-磷酸二氢钠溶液（0.01mol／L，含0.005mol／L十二烷基硫酸钠和0.10％三乙胺）（体积比2：3）为流动相，流速为0.6mL／min，荧光检测激发波长为225nm，发射波长为280nm。本方法氟苯尼考在10-10000μg／L，氟苯尼考胺在2-2000μg／L范围内与峰面积呈线性相关，相关系数分别为1和0.9999。当空白样品中氟本尼考添加水平为20-200μ/kg，氟苯尼考胺添加水平为4-50μ/k时，该方法的回收率为79％-91％，相对标准偏差为3．66％-6．21％，检出限分别为5μg／kg和1μg／kg。

氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺在鸡肌肉中的残留消除规律

本试验旨在研究氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺在鸡肌肉中的残留消除规律。鸡肌肉样品经丙酮、二氯甲烷提取,饱和正己烷脱脂,氮吹仪吹干浓缩后,以乙腈-磷酸二氢钠溶液(0.01mol.L-1,含0.005mol.L-1十二烷基硫酸钠和0.1%三乙胺)(体积比35∶65)为流动相,流速为1.0mL.min-1,在激发波长225nm、发射波长285nm处用高效液相色谱荧光检测器检测。结果:测得鸡肌肉中氟苯尼考、氟苯尼考胺的检测限分别为1.5和0.5μg.kg-1(S/N=3)、定量限分别为5和2μg.kg-1(S/N=10)。各试验组京海黄鸡分别按体质量以25.0、50.0和100.0mg.kg-1.d-1剂量给药,每天1次,连续5d内服给药后,休药第1天时,鸡肌肉中氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺的残留量均达到峰值,且残留量随给药剂量的增大而增大,随休药期的延长而降低。休药第7天时,鸡肌肉中氟苯尼考及其代谢产物氟苯尼考胺的总残留量均低于MRLs(100μg.kg-1);休药第11天时,鸡肌肉中氟苯尼考及其代谢产物氟苯尼考胺的总残留量均低于检测限;氟苯尼考、氟苯尼考胺在鸡肌肉中的残留量及其总残留量均与给药剂量呈正相关。

氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺在斑点叉尾体内的残留消除规律

研究不同水温(18℃和28℃)下,氟苯尼考(Florfenicol,FF)及其代谢物氟苯尼考胺(Florfenicol Amine,FFA)在斑点叉尾体内残留消除规律。以含氟苯尼考4 g/kg的饲料按10 mg/kg鱼体质量连续强饲斑点叉尾(Ictalurus puncta-tus)3 d,于停药后第1天2、天3、天5、天7、天9、天分别将斑点叉尾处死后取肌肉、肝脏、皮肤、肾脏4种组织。采用反相高效液相色谱紫外检测法测定斑点叉尾组织中氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺。结果表明,不同水温下相同组织,相同水温下不同组织中氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺的消除速率快慢不一(差异显著P<0.05)。氟苯尼考和氟苯尼考胺之和作为标示残留物的指示值,高水温时标示残留物(总量)在斑点叉尾体内消除的更快。与其他组织相比标示残留物(总量)在肾脏中的消除最慢,因此,建议将肾脏作为标示残留物(总量)在斑点叉尾体内残留的靶组织。在18℃和28℃时,若规定标示残留物(总量)在肾脏中以300μg/kg为最高残留限量(maximum residue limit,MRL),建议休药期分别为234℃.d和224℃.d。本研究旨为不同水温条件下制定该药的休药期提供理论依据。

水温和药物剂量对德国镜鲤体内氟苯尼考和氟苯尼考胺残留的影响

在实验室条件下,研究了不同水温(16、26℃)和不同药物剂量[15、45 mg/kg(鱼体质量)]下,氟苯尼考(FF)及其代谢物氟苯尼考胺(FFa)在德国镜鲤Cyprinus carpio mirror体内的残留消除规律。试验采用混饲口灌给药,在16、26℃水温条件下,以15 mg/kg(鱼体质量)剂量给药;在26℃水温条件下,以15、45 mg/kg(鱼体质量)剂量给药,于给药后0.5、1、2、4、6、8、12、24、72、120、168、216、264 h分别取鱼体肌肉、肝胰脏和肾脏组织,采用高效液相色谱荧光检测法测定鱼体各组织中FF和FFa的含量。结果表明:鱼体各组织中的FF和FFa,高温组较低温组消除快,高剂量组较低剂量组消除慢;高水温(26℃)下,用药后168 h时鱼体肌肉中的FF检测不出,而FFa浓度为36.3μg/kg,低水温(16℃)下,用药后264 h时鱼体肌肉中的FF浓度为23μg/kg,而FFa浓度为49μg/kg;低剂量组在用药后168 h时,鱼体肌肉中的FF和FFa的浓度之和为36μg/kg,而高剂量组在用药后264 h时,鱼体肌肉中的FF和FFa的浓度之和为59μg/kg;药物在德国镜鲤各组织中的消除顺序依次为肌肉>肝胰脏>肾脏。

氟苯尼考及氟苯尼考胺在克氏原螯虾体内药物代谢动力学

研究不同给药方式下,氟苯尼考及其代谢产物氟苯尼考胺在克氏原螯虾体内的药动学特征。在水温为(21±1)℃条件下,分别给予20 mg/kg体重单剂量血窦注射或50 mg/kg体重单剂量口灌给药,并于0.083、0.25、0.5、1、2、3、4、6、8、12、18、24和36h时间点采集血淋巴,运用反相色谱法检测血淋巴中氟苯尼考及氟苯尼考胺的浓度,采用3p97软件的非房室模型统计矩方法分析药时数据。结果表明:血窦给药后,氟苯尼考的消除半衰期(t1/2)、表观分布容积[Vd(ss)]、总体清除率(CL)分别为8.26h、14.43 L/kg、1.21 L/kg.h,氟苯尼考胺消除半衰期和代谢率(MR)分别为20.28h、9.3%;口灌给药后,氟苯尼考达峰浓度(Cmax)、达峰时间(Tmax)、消除半衰期、生物利用度(F)分别为2.49 mg/kg、1.0h、10.01h、21.6%,氟苯尼考胺的消除半衰期和代谢率分别为16.0h、37.5%。氟苯尼考在克氏原螯虾体内的消除比氟苯尼考胺快,并能广泛地分布于身体各组织中;氟苯尼考在胃肠中吸收迅速,但其生物利用度不高,代谢率低。

鱼组织中氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺的检测

建立了斑点叉尾鱼回（Ictalurus punctatus）体内各组织中氟苯尼考及氟苯尼考胺的检测方法。组织中加入磷酸盐缓冲液,丙酮提取,加入CH2Cl2分层,弃去上层水相,正己烷脱脂等样品处理过程;V（乙腈）∶V（0.01 mol/L NaH2PO4）（含0.005 mol/L十二烷基硫酸钠和0.10%三乙胺）=2∶3溶液为流动相,紫外检测波长为225 nm。方法在0.01-10.00 mg/L浓度范围内呈线性关系,相关系数r=0.9997。平均回收率为76.00%-92.04%,相对标准偏差为0.41%-9.2%,氟苯尼考和氟苯尼考胺在血浆、肌肉、皮肤的检出限分别为30、25μg/L,20、15μg/kg,50、50μg/kg。方法适用于氟苯尼考在鱼体内药代动力学研究和氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺在鱼体肌肉和皮肤组织中残留量的同时检测。

氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺在鸡蛋中的残留消除规律

本试验旨在研究氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺在鸡蛋中的残留消除规律。预防组和治疗组蛋鸡分别按体质量以15和30 mg/kg剂量预拌料方式给予氟苯尼考粉药物,连续5 d,分别收集给药期和停药后第1、2、3、5、7、10、12、15、18天的各组鸡蛋,测定全蛋、蛋黄和蛋清中氟苯尼考和氟苯尼考胺的残留量。结果表明:全蛋、蛋清和蛋黄中氟苯尼考和氟苯尼考胺的检出限均为2μg/kg,定量限均为5μg/kg。鸡蛋样品在氟苯尼考添加水平为1.0~5.0μg/kg时平均回收率为78.9%~105.0%,日内精密度为2.22%~4.22%,日间精密度为4.22%~6.54%。停药后,氟苯尼考在预防组和治疗组蛋清中的残留量峰值(520.70、797.12μg/kg)高于蛋黄(285.96、442.40μg/kg),氟苯尼考胺在蛋黄中的残留量峰值(218.40、646.14μg/kg)高于蛋清(87.36、36.89μg/kg),氟苯尼考和氟苯尼考胺在蛋清中的消除速率均快于蛋黄。氟苯尼考和氟苯尼考胺残留量及其总残留量与给药剂量呈正相关,蛋黄中以氟苯尼考和氟苯尼考胺残留为主,蛋清中主要是氟苯尼考残留。不同剂量组蛋黄中氟苯尼考残留时间为18 d。

高效液相色谱荧光检测法同时检测鸡蛋中氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺残留

建立了高效液相色谱荧光检测法同时检测鸡蛋中氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺残留的方法。鸡蛋经碱性乙酸乙酯提取,饱和正己烷脱脂,氮吹仪吹干浓缩后用流动相溶解。用Lichrospher C18柱,以乙腈-磷酸二氢钠溶液(0.01 mol/L,含0.005 mol/L十二烷基硫酸钠和0.1%三乙胺)(35:65,v/v)为流动相,在激发波长224 nm、发射波长285 nm处用荧光检测器检测。氟苯尼考在0.01～10.0 mg/L、氟苯尼考胺在0.002 5～2.5 mg/L浓度范围内,本方法线性关系良好,相关系数分别为0.99 97和0.999 8。当添加水平氟苯尼考为15～500μg/kg、氟苯尼考胺为5～500μg/kg时,该方法平均回收率分别为87.41%～92.29%和89.01%～95.15%,相对标准偏差分别为3.51%～5.36%和4.28%～5.72%;检测限分别为1.5μg/kg和0.5μg/kg(S/N=3);定量限分别为5μg/kg和2μg/kg(S/N=10)。该方法简便、快速、灵敏度高,可同时检测鸡蛋中氟苯尼考和氟苯尼考胺的残留。

鸡蛋中氟苯尼考和氟苯尼考胺残留的检测技术研究

用高效液相色谱法检测鸡蛋中氟苯尼考和氟苯尼考胺的残留,鸡蛋样品经乙酸乙酯提取、正己烷脱脂、氧化铝柱净化、提取物蒸发浓缩至干、流动相溶解、微孔过滤,进行HPLC分析。结果表明:用该方法测得氟苯尼考和氟苯尼考胺的最低检测限值皆为5 ng/g,氟苯尼考回收率为81.0%～92.3%,氟苯尼考胺回收率为78.0%～85.3%,能够满足鸡蛋中氟苯尼考和氟苯尼考胺残留量检测技术要求。

超高效液相色谱-串联质谱法测定鸡肉、鸡蛋中氟苯尼考和氟苯尼考胺残留

目的建立超高效液相色谱-串联质谱准确测定鸡肉、鸡蛋中氟苯尼考和氟苯尼考胺残留的分析方法。方法鸡肉和鸡蛋样品加入D5-氯霉素内标,经氨化乙酸乙酯混合溶液超声离心提取,提取液减压蒸馏浓缩后,C18固相萃取柱净化处理,采用超高效液相色谱-串联质谱法对氟苯尼考和氟苯尼考胺同时进行检测。结果氟苯尼考线性范围为0.2~20μg/L,检出限为1.0μg/kg,定量限为3.0μg/kg,方法回收率为88.0%~108.0%,相对标准偏差为4.7%~6.4%;氟苯尼考胺线性范围为0.2~20μg/L,检出限为1.0μg/kg,定量限为3.0μg/kg,方法回收率为76.0%~93.1%,相对标准偏差为4.1%~7.2%。结论本方法精确、重现性好,适用于鸡肉、鸡蛋中氟苯尼考和氟苯尼考胺残留量的测定。

水产品中甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺酶联免疫多残留测定

将氟苯尼考胺与载体蛋白相连作为抗原免疫动物,获得抗甲砜霉素等药物的抗体,建立了水产品中甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺残留的ELISA检测方法。结果显示,人工抗原中氟苯尼考胺与蛋白质分子的结合比约为12∶1,血清效价达到1∶2000倍以上,50%抑制浓度(IC50)为3μg/L左右,3种酰胺醇类药物交叉反应率在30%～156%之间,鱼和虾肌肉组织中的检测限分别为6.3μg/kg和6.1μg/kg,在鱼和虾肌肉组织中三种药物的回收率在40%～120%之间,检测范围为0.2～125μg/L。该方法可同时测定甲砜霉素、氟苯尼考及其标示残留物氟苯尼考胺等3种化合物残留量。方法灵敏度、精密度和准确度均能满足兽药残留筛选检测要求。

高效液相色谱法检测克氏原螯虾组织中氟苯尼考及氟苯尼考胺

建立了克氏原螯虾（Procambarus clarkii）血淋巴、肌肉、肝胰脏中氟苯尼考及氟苯尼考胺的高效液相色谱检测方法。采用Agilent Eclipse XDB-C18（250mm×4.6 mmi.d,5μm）反相色谱柱,以A液（乙腈）：B液（0.04 mol/L NaH2PO4、0.004 mol/L十二烷基硫酸钠和0.10%三乙胺）（体积比为30∶70）为流动相,225 nm紫外检测波长完成分析。结果显示：本方法在0.025~20 mg/L范围内浓度与峰面积呈良好的线性关系;组织的加标回收率为78.8%~94.2%,相对标准偏差小于8.16%,氟苯尼考在血淋巴、肌肉、肝胰脏的检出限分别为0.01 mg/L、0.02 mg/kg、0.03 mg/kg,氟苯尼考胺则为0.015 mg/L、0.03 mg/kg、0.05 mg/kg。