实验性高血氨对肝细胞钠-氢交换蛋白1型转运活性和细胞内pH值的影响

目的研究高血氨对肝细胞钠-氢交换蛋白1型转运活性和细胞内pH值的影响。方法采用5mmol/L NH4Cl处理HL-7702细胞24 h,构建高血氨肝细胞模型,采用细胞计数法、流式细胞法、BCECF-AM法和Western blot法测定细胞数量、凋亡率、细胞内pH值以及NHE1蛋白的转运活性和表达水平。结果高血氨肝细胞模型肝细胞内pH值下降,NHE1蛋白的转运活性和表达水平升高,肝细胞数量降低和凋亡率升高。结论高血氨导致的肝细胞损伤可能与降低肝细胞内pH值,激活NHE1蛋白有关。

钠氢交换蛋白1在胃癌中的表达及其对胃癌细胞增殖的影响

目的观察钠氢交换蛋白1(Na+/H+,exchanger 1,NHE1)在人胃癌组织和胃癌细胞中的表达变化,以及对SGC-7901胃癌细胞增殖的影响。方法采用实时逆转录聚合酶链式反应(real time PCR,RT-PCR)和免疫印迹(Western Bloting)技术检测比较NHE1在正常胃黏膜组织、胃癌组织、正常胃黏膜细胞株GES-1和胃癌细胞株SGC-7901中的表达;用不同浓度的NHE1特异性阻断剂[5-(N-乙基-N-异丙基)]阿米洛利[5-(N-ethyl-N-isopropyl)amiloride(EIPA)]处理胃癌SGC-7901细胞24h,MTT法检测其对SGC-7901细胞增殖的影响。结果 NHE1在人正常胃黏膜组织、胃癌组织、正常胃黏膜细胞和胃癌细胞中均有表达,但在人胃癌组织和SGC-7901胃癌细胞中,其mRNA和蛋白表达水平均明显增高(P<0.05);EIPA10μm/mL,20μm/mL,30μm/mL处理,均能抑制胃癌SGC-7901细胞的过度增殖(P<0.05),且呈现良好的剂量-效应关系。结论 NHE1mRNA和蛋白表达水平在胃癌中表达显著升高;NHE1特异性阻断剂EIPA能抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖,NHE1的改变可能与胃癌细胞的增殖密切相关。

糖基化终末产物对大鼠平滑肌细胞钠/氢交换蛋白1活性的影响

目的观察糖基化终末产物对大鼠血管平滑肌细胞钠/氢交换蛋白1活性的影响。方法采用组织贴块法原代培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞。用体外制备的外源性糖基化终末产物和血管平滑肌细胞共孵育24h,利用BCECF通过荧光分光光度计检测细胞上钠/氢交换蛋白1活性。结果不同浓度糖基化终末产物(1、5和10mg/L)与血管平滑肌细胞共孵24h后,能显著增强钠/氢交换蛋白1的活性,分别使钠/氢交换蛋白1的活性从0.66±0.05升高至0.71±0.03、0.80±0.07和0.88±0.06(P<0.05或P<0.01),使钠/氢交换蛋白1 mRNA表达从0.77±0.07分别升高至0.88±0.08、1.23±0.06和1.33±0.08(P<0.05或P<0.01);预先使用糖基化终末产物受体阻断剂5 mg/L,钠/氢交换蛋白1活性比糖基化终末产物处理组明显降低(0.68±0.04比0.90±0.05,P<0.05);使用不同浓度的丝裂原活化蛋白激酶阻断剂PD98059(1、10和25μmol/L),使钠/氢交换蛋白1活性从0.94±0.05分别降至0.86±0.06、0.74±0.05和0.66±0.07(P<0.05或P<0.01)。结论外源性糖基化终末产物能诱导血管平滑肌细胞上钠/氢交换蛋白1活化,其机制可能与糖基化终末产物激活糖基化终末产物受体,引起丝裂原活化蛋白激酶信号通路活化有关。

钠氢交换蛋白1与肿瘤耐药

化疗药物耐药逐渐成为肿瘤治疗的主要障碍。肿瘤耐药的发生机制主要包括药物的外排增加、DNA修复增强、凋亡受抑、上皮-间质转化以及肿瘤干细胞的存在。因此,迫切需要寻找新的生物标志物,通过逆转肿瘤的耐药性,从而增加化疗药物的疗效,以提高患者的总体生存率。钠氢交换蛋白(sodium-hydrogen exchanger 1, NHE1)在调控肿瘤细胞的增殖、凋亡和耐药中发挥重要作用,被认为是肿瘤治疗中调控耐药性的潜在靶标。本文简要介绍钠氢交换蛋白的结构和主要功能,重点阐述钠氢交换蛋白对肿瘤耐药的影响和调控机制,以及在肿瘤的发展、转移中的作用的研究进展。

钠氢交换蛋白1在肿瘤侵袭转移中的研究进展

恶性肿瘤是严重威胁人类健康的疾病,尽管现代医学技术不断进步,但肿瘤发病率、病死率仍居高不下。肿瘤发病机制目前仍不明确,侵袭、转移是其重要特性,也是患者治疗失败的主要原因,因此深入研究肿瘤侵袭、转移的机制对临床治疗大有裨益。钠氢交换蛋白1(NHE1)是广泛表达于哺乳动物细胞膜表面的离子转运体,近年来研究发现其在肿瘤细胞中过表达,通过改变肿瘤细胞内外p H、降解细胞外基质、改变细胞侵袭性结构等促进肿瘤的侵袭转移,并涉及多种细胞信号通路的改变。随着研究深入,NHE1将为肿瘤的治疗提供新策略。

钠/氢交换蛋白1在糖基化终末产物诱导大鼠胸主动脉平滑肌细胞表型转换中的作用

目的在体外培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞(VSMCs)模型上,观察钠/氢交换蛋白1(NHE1)选择性抑制剂cariporide对糖基化终末产物(AGEs)诱导VSMCs表型转化的作用并探讨相关机制。方法采用CCK8检测VSMCs细胞增殖,Transwell试验检测细胞迁移情况;BCECF荧光探针检测细胞内pH值及NHE1活性;Western blot检测NHE1、α-SMA、SM22α及OPN蛋白表达。结果NHE1选择性抑制剂cariporide及Rho激酶(ROCK)抑制剂Y-27632可显著拮抗AGEs诱导的VSMCsα-SMA、SM22α蛋白表达降低及OPN蛋白表达的增多,抑制VSMCs转换为合成表型(去分化表型),从而抑制AGEs诱导的VSMCs的增殖和迁移;同时Y-27632可显著抑制AGEs诱导的细胞内pH值升高,NHE1的活性及蛋白表达。结论该研究结果提示NHE1活化在AGEs诱导VSMCs表型转化中可能起重要作用,同时AGEs调节NHE1活化的机制可能与ROCK相关。

钠氢交换蛋白1在肿瘤侵袭转移中的作用

钠氢交换蛋白1(Na+/H+ex changer 1,NHE1)是存在于细胞膜表面的离子转运蛋白,他负责将细胞内H+与胞外Na+按照1∶1的比例进行交换来调控细胞内pH的动态平衡.在肿瘤细胞中,NHE1表达增加及活性增强,形成肿瘤细胞胞内碱性、胞外酸性的特殊微环境.NHE1和酸性的细胞外微环境在肿瘤细胞的侵袭过程中起着重要作用.NHE1还调节细胞伪足和侵袭性伪足(invadopodia)的形成,增强细胞的侵袭能力,两者共同促进肿瘤细胞的侵袭转移,因此对NHE1的深入研究有可能找到肿瘤治疗的新靶点.

钠/氢交换蛋白1与糖尿病血管并发症

糖尿病血管并发症（包括大血管病变和微血管病变）是糖尿病患者致残率和致死率居高不下的主要原因之一[1-3].糖尿病血管病变的发病机制复杂,迄今仍未阐明,日前认为是多种致病因素通过不同途径共同作用的结果.事实也证明,单纯控制血糖或纠正脂代谢紊乱难以有效制止糖尿病血管病变的发生与发展.因此,阐明精尿病诱发血管病变的机制,寻找关键靶点,进行多途径、多环节的联合干预,才是防治糖尿病血管病变的有效手段.

钠氢交换蛋白1抑制剂对脓毒症大鼠心脏损伤保护作用的实验研究

目的:观察钠氢交换蛋白1(NHE1)抑制剂对脓毒症大鼠心脏损伤的保护作用,并探讨其可能的机制。方法:常规方法建立大鼠脓毒症模型诱导心脏损伤。将SD大鼠随机分为对照组、脓毒症组和脓毒症治疗组,脓毒症治疗组大鼠注射钠氢交换蛋白1抑制剂卡立泊来德,于伤后12h检测左心室射血分数(LVEF)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CKMB)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、髓过氧化物酶(MPO)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)和丙二醛(MDA)水平。结果:脓毒症组大鼠心脏损伤高于对照组,表现为LVEF值的降低和LDH、CK、CK-MB值的升高;脓毒症治疗组大鼠较脓毒症组大鼠心脏损伤显著减轻,表现为LVEF值的升高、LDH、CK和CK-MB值的降低。脓毒症组大鼠TNF-α、IL-6、MPO、MDA水平高于对照组,差异有统计学意义;SOD、CAT和GPx水平低于对照组,差异有统计学意义;治疗组大鼠上述指标显著改善。结论:NHE1抑制显著减轻脓毒症诱导的心脏损伤,其部分机制可能是抑制了炎症反应和氧化应激。

钠氢交换蛋白1抑制剂对严重烧伤后多脏器损伤大鼠的保护作用研究

目的探讨钠氢交换蛋白1(NHE1)抑制剂对严重烧伤后全身多脏器功能损伤大鼠的保护作用,并探讨其潜在的机制。方法常规方法建立30%体表面积烫伤的大鼠模型。用NHE1抑制剂(卡立泊来德)干预后,通过观察组织病理学及炎症因子的改变来探讨NHE1在烧伤后多脏器损伤时所起的作用。结果 NHE1在烧伤后大量表达,而NHE1的抑制剂可显著减轻烧伤后心脏、肺脏、肾脏及小肠的损伤。同时NHE1抑制剂也可以降低肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、髓过氧化物酶(MPO)水平。结论 NHE1抑制剂显著减轻烧伤后大鼠多脏器损伤,其部分机制可能是抑制了组织的炎症反应。

抑制钠氢交换蛋白1促进低氧诱导的K562细胞分化

本研究主要探讨低氧微环境对慢性髓系白血病细胞系K562分化的影响及钠氢交换蛋白1(NHE1)在该过程中的作用。利用低氧模拟物CoCl2或于低氧(2%O2、5%CO2和93%N2)环境中培养K562细胞,应用激光共聚焦显微镜测定细胞内pH值(intracellular pH,pHi),瑞氏染色观察细胞形态,实时定量RT-PCR检测基因表达,Western blot技术检测MAPK磷酸化水平的改变。结果表明:与对照组相比,低氧培养的K562细胞表现出成熟相关的形态学改变,并伴随CCAAT/增强子结合蛋白(C/EBPα)的mRNA水平上调;特异性NHE1抑制剂Cariporide预处理能够促进低氧诱导的K562细胞分化,Cariporide处理后K562细胞的P38和ERK5蛋白激酶磷酸化水平显著增强。结论 :低氧及低氧模拟物能够诱导K562细胞系分化,抑制NHE1活性协同促进低氧诱导的K562细胞分化,其机制可能是通过增强细胞内MAPK蛋白激酶磷酸化水平促进分化。

钠氢交换蛋白1及其抑制剂的研究进展

钠氢交换蛋白1(NHE-1)是一种细胞膜蛋白,主要分布于人和哺乳动物的心肌细胞中,调控细胞内外离子交换。目前越来越多的基础研究证实,NHE-1在多种心血管疾病中,尤其是心力衰竭、心肌肥厚、冠心病等的发生、发展中起着重要作用。虽然近十余年来,多项针对NHE-1抑制剂的临床研究结果差强人意,但我们应从中归纳总结、辩证分析,以期寻找到其真正的临床意义。

钠氢交换蛋白1基因在体外对食管癌KYSE-70细胞增殖和侵袭作用的影响

目的:观察钠氢交换蛋白1(Na^+/H^+ exchanger 1,NHE-1)基因对食管癌KYSE-70细胞增殖和侵袭能力的影响。方法:采用实时荧光定量-PCR和蛋白质印迹法检测NHE-1mRNA及其蛋白在人食管癌EC-9706、KYSE-450、EC-1和KYSE-70细胞中的表达情况。将化学合成的靶向NHE-1的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)体外转染入KYSE-70细胞,实时荧光定量-PCR和蛋白质印迹法检测转染24、48和72h后KYSE-70细胞中NHE-1mRNA及其蛋白的表达,MTT和Boyden小室法检测KYSE-70细胞的增殖及侵袭能力。结果:NHE-1mRNA及其蛋白在KYSE-70细胞中高表达。与阴性对照(转染阴性对照siRNA)及空白对照(未转染的KYSE-70细胞)组相比,靶向NHE-1的siRNA可抑制KYSE-70细胞中NHE-1 mRNA及其蛋白的表达,差异具有统计学意义(P<0.05);与阴性对照组、空白对照组及NHE-1siRNA转染24h组比较,NHE-1siRNA转染48和72h后的KYSE-70细胞体外增殖能力和侵袭能力明显受到抑制,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:干扰NHE-1基因的表达可以抑制食管癌KYSE-70细胞的体外增殖和侵袭能力,NHE-1基因有望成为食管癌基因治疗的重要靶点。

钠-氢交换蛋白1反义表达载体对人肺腺癌细胞钠-氢交换蛋白1基因表达的影响及其意义

目的 探讨Na+ /H+ 交换蛋白 1(NHE 1)反义表达载体 (pNHE 1)对人肺癌细胞NHE 1基因的抑制作用及生物学效应。方法 实验细胞分为 3组 ,A5 4 9 pNHE 1组 (反义组 )、A5 4 9空载体组(空载体组 )、A5 4 9对照组 (A5 4 9组 )。采用阳离子脂质体使pNHE 1转染人肺腺癌A5 4 9细胞株。采用半定量逆转录 聚合酶链式反应 (RT PCR)法测定 3组细胞的NHE 1mRNA表达水平 ;用荧光法测定 3组细胞内pH(pHi)值 ;了解转染细胞增殖生长状况 ;用细胞凋亡原位检测法检测 3组细胞凋亡率。结果 在转染细胞基因组DNA中扩增出外源真核表达载体的DNA片段 ,证明转染成功。半定量RT PCR法证实反义组细胞的NHE 1mRNA表达水平 (0 4 2± 0 0 6 )显著低于A5 4 9组 (0 71± 0 0 8,P <0 0 1)和空载体组 (0 6 9± 0 16 ,P <0 0 1)。A5 4 9组细胞在培养 12、2 4和 4 8h后pHi值分别为 7 15 0±0 0 0 4、7 14 0± 0 0 0 7和 7 12 0± 0 0 0 8,反义组pHi值分别为 6 990± 0 0 0 5、6 84 0± 0 0 0 5和 6 75 0±0 0 0 5 ,两组差异均有极显著性 (P <0 0 1)。A5 4 9组、空载体组和反义组的细胞倍增时间分别为 3 2 0、3 2 8和 4 97d ,反义组细胞的增殖、生长明显慢于A5 4 9组及空载体组 (P <0 0 1)。反义组细胞凋亡率为 (2

亮氨酸拉链EF-hand结构域跨膜蛋白1、钠氢交换蛋白1和腺苷酸环化酶相关蛋白2在胃癌组织中的表达及对术后复发的预测价值

目的探讨亮氨酸拉链EF-hand结构域跨膜蛋白1(LETM1)、钠氢交换蛋白1(NHE-1)和腺苷酸环化酶相关蛋白2(CAP2)在胃癌组织中表达及对术后复发的预测价值。方法回顾性分析海门市人民医院2017年1月至2020年1月92例行外科手术治疗的早期胃癌患者的临床资料。根据术后6个月复发情况分为复发组(16例)和未复发组(76例)。采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测手术切除标本的癌组织和癌旁正常组织LETM1、NHE-1和CAP2 mRNA表达水平。采用多因素Logistic回归分析影响胃癌患者术后复发的独立危险因素;绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析LETM1、NHE-1和CAP2 mRNA预测复发的效能。绘制Kaplan-Meier生存曲线,分析不同LETM1、NHE-1和CAP2 mRNA表达水平患者的生存率。结果癌组织LETM1、NHE-1和CAP2 mRNA均明显高于癌旁组织(0.41±0.12比0.22±0.07、0.85±0.27比0.49±0.15和0.31±0.10比0.19±0.06),差异有统计学意义(P<0.01)。复发组N1期比例明显高于未复发组[9/16比22.37%(17/76)],差异有统计学意义(P<0.05);复发组癌组织LETM1、NHE-1和CAP2 mRNA明显高于未复发组(0.61±0.20比0.37±0.13、1.24±0.38比0.77±0.21和0.60±0.19比0.25±0.10),差异有统计学意义(P<0.01)。多因素Logistic回归分析结果显示,控制N分期后,LETM1、NHE-1和CAP2 mRNA仍是影响胃癌患者术后复发的独立危险因素(OR=1.52、3.11和1.21,95%CI 1.26~1.82、2.36~4.09和1.04~1.41,P<0.01)。ROC曲线分析结果显示,LETM1、NHE-1和CAP2 mRNA预测胃癌患者术后复发的曲线下面积(AUC)分别为0.768、0.802和0.850,各指标联合预测胃癌患者术后复发的AUC为0.965。以ROC曲线分析获得的截断值为分界,将患者分为LETM1 mRNA高表达(>0.54,30例)与低表达(≤0.54,62例)、NHE-1 mRNA高表达(>1.09,35例)与低表达(≤1.09,57例)、CAP2 mRNA高表达(>0.49,28例)与低表达(≤0.49,64例)。Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示,LETM1、NHE-1和CAP2 mRNA高表达患者生存率明显低于低表达患者(73.33%比98.39%、80.00%比96.49%和78.57%比95.31%),差异有统计学意义(χ^(2)=15.08、6.95和6.75,P<0.01)。结论LETM1、NHE-1和CAP2 mRNA与早期胃癌术后复发有关,检测三者表达有望为术后复发的预测提供一种新的策略。

钠氢交换蛋白1抑制剂对烧伤脓毒症大鼠肠道损伤的作用及其机制

目的观察钠氢交换蛋白1（NHE1）抑制剂对烧伤脓毒症大鼠肠道损伤的作用，并初步探讨其可能机制。方法取SD大鼠90只，按照随机数字表法分为对照组、单纯脓毒症组和NHE1抑制剂组，每组30只。单纯脓毒症组和NHE1抑制剂组大鼠背部建立20％TBSAⅢ度烫伤（下称烧伤）模型后，背部创面中心注射2×10^5CFU／mL的铜绿假单胞菌ATCC27853菌液50μL。烧伤脓毒症模型建立成功后，NHE1抑制剂组大鼠迅速腹腔注射0．1mmol／LNHE1抑制剂卡立泊来德0．4mg／kg，单纯脓毒症组大鼠注射同体积的生理盐水。对照组大鼠除不制作烧伤创面和接种细菌外，其余操作与单纯脓毒症组大鼠相同。烧伤脓毒症大鼠在伤后12h剖腹，于回肠远端注射0．1mol／L异硫氰酸荧光素（FITC）-葡聚糖200mL，30min后左心室采血，切取回肠末端组织。荧光分光光度计检测大鼠血清FITC-葡聚糖含量（样本数为10），HE染色观察肠道组织形态（样本数为10），ELISA法检测血清和肠道组织IL-6和TNF—α含量（样本数均为20），比色法检测血清和肠道组织髓过氧化物酶（MPO）活性（样本数均为20），蛋白质印迹法检测肠道组织NF-κB-p65蛋白表达及MAPK信号通路相关蛋白p38MAPK、细胞外信号调节激酶1／2（ERK1／2）以及c—Jun氨基末端激酶1／2（JNK1／2）磷酸化水平（样本数为4）。对照组大鼠于相同时相点同前采集标本进行相关检测。对数据行单因素方差分析、SNK检验。结果（1）单纯脓毒症组大鼠血清FITC-葡聚糖含量较对照组明显升高（P〈0．01），NHE1抑制剂组大鼠血清FITC-葡聚糖含量则较单纯脓毒症组显著降低（P〈0．01）。与对照组比较，单纯脓毒症组大鼠肠黏膜可见大量炎性细胞浸润、黏膜溃疡以及黏膜坏死；NHE1抑制剂组大鼠肠道损伤情况较单纯脓毒症组有显著好转。（2）单纯脓毒症组大鼠血清IL-6、TNF-α、MPO含量分别为（387±42）、（164．7±10．1）ng／mL及（7．5±1．5）U／mL，显著高于对照组的（75±17）、（13．1±6．5）ng／mL和（2．3±0．7）U／mL（P值均小于0．01）；NHE1抑制剂组大鼠血清IL-6、TNF—α、MPO含量分别为（176±37）、（64．9±9．3）ng／mL和（5．9±0．8）U／mL，均显著低于单纯脓毒症组（P值均小于0．01）。（3）单纯脓毒症组大鼠肠道组织IL-6、TNF—α、MPO含量分别为（190±13）、（172．8±29．7）ng／mL及（8．7±1．5）U／mL，显著高于对照组的（20±3）、（11．9±2．3）ng／mL和（2．9±0．3）U／mL（P值均小于0．01）；NHE1抑制剂组大鼠肠道组织IL-6、TNF-α、MPO含量分别为（35±6）、（45．2±6．1）ng／mL和（5．3±0．6）U／mL，均显著低于单纯脓毒症组（P值均小于0．01）。（4）单纯脓毒症组大鼠肠道组织NF—κB—p65蛋白表达量和p38MAPK、ERK1／2磷酸化水平显著高于对照组（P值均小于0．01），NHEI抑制剂组大鼠肠道组织NF-κB—p65蛋白表达量和p38MAPK磷酸化水平明显低于单纯脓毒症组（P值均小于0．01），3组大鼠肠道组织JNKl／2磷酸化水平无明显差异（P值均大于0．05）。结论抑制NHE1可显著减轻烧伤脓毒症诱导的大鼠肠道损伤，其机制可能为通过调控NF—κB及p38MAPK信号通路，抑制肠道炎症反应。

钠氢交换蛋白-1特异性抑制剂二甲基氨氯吡咪对HL-60/ADM细胞pHi变化及细胞增殖、凋亡的影响

为了探讨钠氢交换蛋白-1(NHE-1)抑制剂二甲基氨氯吡咪(DMA)对HL-60/ADM细胞pHi变化及细胞增殖、凋亡的影响,以敏感HL-60细胞为对照,用不同浓度的DMA干预后,荧光指示剂(BCECF/AM)检测法检测细胞内pHi,微量噻唑蓝法(MTT)检测细胞生长的抑制率,流式细胞术检测细胞周期变化,TUNEL法检测原位细胞凋亡,对比HL-60/ADM细胞与HL-60细胞之间的差异。结果显示:HL-60/ADM细胞内pHi较HL-60细胞显著升高;DMA作用下,HL-60/ADM细胞的pHi降低幅度、生长抑制率、细胞凋亡率均显著高于HL-60细胞;当DMA浓度100-150μmol/L时,HL-60/ADM细胞的G0/G1期细胞比率增加幅度、S期及G2/M期细胞比率降低幅度均高于HL-60细胞。结论:NHE-1特异性抑制剂DMA引起HL-60/ADM的pHi降低,可抑制细胞生长并诱导细胞凋亡;且DMA对HL-60/ADM细胞的生长抑制作用显著高于HL-60细胞。

卡立泊来德对缺血-再灌注大鼠肺组织钠氢交换蛋白-1表达及炎症损伤的影响

目的探讨缺血-再灌注(IR)对肺钠氢交换蛋白-1(NHE-1)表达的影响,及卡立泊来德(cariporide)预处理能否通过抑制NHE-1表达减轻肺组织的炎症损伤。方法 20枚离体灌注的大鼠肺随机分为四组:对照组(C组)、IR组、NHE-1激活剂LiCl预处理组(LiCl组)和cariporide预处理+缺血-再灌注组(CIR组)。再灌注结束后,免疫组化检测肺组织中NHE-1蛋白表达,HE染色观察肺组织病理学改变并行病理评分。结果与C组和CIR组比较,IR组和LiCl组NHE-1表达明显增加(P<0.05),CIR组和C组差异无统计学意义。IR组和LiCl组肺组织病理切片均观察到明显炎症损伤,病理评分明显高于C组和CIR组(P<0.05),CIR组病理评分和C组差异无统计学意义。结论离体的IR大鼠肺组织,NHE-1表达增加,选择性NHE-1抑制剂cariporide能减轻IR导致的肺组织炎症损伤。

抑制钠氢交换蛋白下调IL-8表达和促进p38磷酸化

我们前期的研究证明,抑制钠氢交换蛋白1(NHE1)可以减少VEGF表达从而抑制K562细胞诱导的血管生成。本研究探讨抑制NHE1后其他可能的血管生成因子变化及相关机制。用NHE1特异性抑制剂卡立泊来德10μmol/L处理K562细胞;蛋白芯片筛选NHE1抑制后血管生成因子的表达变化,实时定量PCR验证卡立泊来德处理后白介素-8(IL-8)的表达水平;构建K562稳定干扰NHE1细胞株,实时定量PCR验证干扰NHE1后IL-8的表达变化,Western blot检测卡立泊来德处理后细胞内p38磷酸化水平;p38抑制剂SB203580处理K562细胞,实时定量检测IL-8表达变化。蛋白芯片筛选结果显示,卡立泊来德处理后K562细胞中IL-8表达显著下调;实时定量结果进一步验证了这种抑制效应;卡立泊来德处理后p38磷酸化水平显著上调;卡立泊来德处理后加入SB203580抑制p38,IL-8表达可以部分恢复。结论:抑制NHE1可能通过促进p38磷酸化,下调促血管生成因子IL-8的表达。

禽白血病病毒J亚群感染鸡组织中细胞受体chNHE 1的表达分析

旨在研究鸡钠氢交换蛋白1(chicken sodium hydrogen exchanger isoform 1,chNHE1)在不同类型鸡组织内的表达情况,J亚群禽白血病病毒(subgroup J avian leukosis virus, ALV-J)的组织嗜性及ALV-J感染后组织chNHE1的mRNA变化情况。本研究利用qPCR技术,检测了商品肉鸡、商品蛋鸡和SPF鸡脏器内的chNHE1转录量,ALV-J感染鸡后各组织的病毒载量及组织chNHE1的转录量的变化。结果显示,chNHE1在3种类型鸡的心、肝、脾、肺、肾、盲肠扁桃体、胸腺和法氏囊中均能检测到,但转录量高低存在较大差异,其中,免疫器官内的chNHE1转录量相对较高;SPF鸡接种ALV-J后,心、脾、肾和盲肠扁桃体中的病毒载量相对较高,而肝、肺、胸腺和法氏囊中的病毒载量相对较低;ALV-J感染后,脾、肾和盲肠扁桃体中的chNHE1转录量明显上调,但心中的转录量与空白对照相比无明显变化。本研究分析了3种类型鸡chNHE1的组织转录特点及ALV-J感染对组织内chNHE1转录的影响,该研究结果为探究受体chNHE1的转录与ALV-J的组织嗜性的关系提供重要的理论依据。