CD44通过影响猪流行性腹泻病毒复制调节钠氢交换体3活性

本研究旨在研究CD44(cluster of differentiation 44)对感染猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)的猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)中钠氢交换体3(NHE3)表达及膜转移的影响。以IPEC-J2为细胞模型,采用RT-qPCR和Western blot检测感染PEDV后不同时间点IPEC-J2细胞中NHE3和PEDV N表达量变化;转染质粒调控IPEC-J2中CD44表达后,采用TCID50和Western blot检测PEDV感染后不同时间点PEDV复制水平和NHE3蛋白表达变化,采用火焰原子吸收法检测IPEC-J2细胞内外Na^(+)浓度变化。转录组数据和细胞试验结果显示,与对照组相比,PEDV感染后IPEC-J2细胞中CD44蛋白表达水平和mRNA表达量均呈上调趋势,24~48 h内上升显著(P<0.05),而PEDV N蛋白表达水平在12~48 h内则呈显著下降趋势(P<0.05)。此外,CD44重组质粒转染试验结果显示,与PEDV感染组相比,过表达CD44后感染PEDV组细胞中病毒滴度和PEDV N蛋白表达水平显著降低(P<0.05),而干扰CD44后感染PEDV组细胞中病毒滴度和PEDV N蛋白表达水平则显著上升(P<0.05)。以上结果表明,高表达CD44具有抑制PEDV复制的作用,干扰CD44后PEDV复制增多。同时,为研究PEDV感染情况下,CD44是否参与了IPEC-J2细胞中NHE3表达的调节,采用Western blot和火焰原子吸收法检测了调节CD44后膜NHE3蛋白的表达水平和细胞内外Na^(+)浓度。结果表明,过表达CD44显著促进了膜NHE3蛋白的表达和活性(P<0.05),细胞内外Na^(+)浓度逐渐恢复正常水平。相反,干扰CD44显著降低了膜NHE3蛋白的表达和活性(P<0.05),细胞内外Na^(+)浓度呈现失衡状态。结果提示,CD44可能是缓解PEDV引发仔猪腹泻的潜在治疗靶点,它通过抑制IPEC-J2细胞中PEDV的复制来增加转移至质膜上的NHE3数量,从而维持细胞内外Na^(+)运转平衡。

二氢嘧啶酶样蛋白3在肿瘤中的表达

二氢嘧啶酶样蛋白3(dihydropyrimidinase-like 3,DPYSL3)又称塌陷反应调节蛋白4(collapse response mediator protein 4,CRMP4),是一种在神经系统中高表达的胞质磷蛋白。其不仅参与细胞伪足中肌动蛋白的组成,也用于组装细胞骨架,还与细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程有关,这些特性可能与肿瘤增殖与转移功能有关。近年来有研究表明,DPYSL3参与多种癌细胞的增殖与侵袭过程,例如前列腺癌、膀胱癌、胃癌与肝癌等。然而,DPYSL3在不同肿瘤中的表达与预后存在明显的异质性。因此,进行DPYSL3在肿瘤表达水平的研究有望成为在不同肿瘤恶性程度与诊断过程中的生物标志物,从而提高肿瘤诊断率与患者预后水平。本文对DPYSL3在不同肿瘤中的表达、生物学功能及其对肿瘤的诊断、治疗及预后价值进行总结与探索,为肿瘤研究提供新思路。

C_(3)加氢反应器及丙烯塔系统的优化

随着全球经济快速发展,市场对丙烯的需求量逐渐增加。在实际生产过程中,如何保证丙烯质量,提高产品产量,已成为人们所关注的问题。文中针对乙烯装置C_(3)加氢反应器及丙烯精馏塔系统运行中出现的反应器催化剂活性较低,床层温升未得到科学控制,丙烯塔压力及回流量不稳定等现象,造成丙烯损失大、丙烯产品质量波动等问题,根据以往操作经验,利用装置大负荷标定期间,对反应器床层温度、压力,丙烯塔再沸器入出口温差等重要工艺参数进行优化调整,实现装置稳定运行,增产丙烯。

刺五加甘油醛3-磷酸脱氢酶基因的鉴定与分析

刺五加(Eleutherococcussenticosus)为我国名贵中药,甘油醛3-磷酸脱氢酶(GAPDH)参与光合作用和能量代谢,可能对药用活性成分合成有着重要影响。为了深入理解刺五加的生物学机制,本研究使用ExPASy、TBtools、MEGA11和EasyCodeML等工具对刺五加的GAPDH基因家族进行鉴定和分析。共得到26条GAPDH基因,其编码蛋白普遍呈中性且具有较好的脂溶性,主要分布于细胞质和叶绿体。蛋白结构中,α螺旋占多数,推测其起主要作用。系统发育分析发现26条GAPDH基因可分为三大分支,基因结构中包含较多外显子,推测拥有更加丰富的多肽加工机制以实现不同的生物学功能。基因在染色体上均匀分布,共线性分析得到17个染色体间共线性基因对。压力选择分析显示相关基因受到负选择压力,保守基序高度相似,在进化过程中的高度保守。蛋白互作网络发现GAPDH与多个蛋白关系密切。这些结果揭示了GAPDH在刺五加光合作用、能量代谢和次生代谢等方面的重要性和功能多样性,为深入理解刺五加的生物学机制提供了有力支持。

6-氟-4-羟基-3-氧代-3,4-二氢喹喔啉-1(2 H)-羧酸叔丁酯的合成、晶体结构及抗肿瘤活性研究

喹喔啉类化合物由于具有显著的生物活性而被广泛应用于医药、化工领域,特别是抗癌药物研发领域。本文通过四步反应法首次合成了6-氟-4-羟基-3-氧代-3,4-二氢喹喔啉-1(2 H)-羧酸叔丁酯,经溶液结晶法获得其单晶体。晶体学分析表明,该化合物属单斜晶系,空间群C2/c,晶胞常数a=1.28663(10)nm,b=2.25249(17)nm,c=1.01564(7)nm,Z=8,ρ_(c)=1.359 g·cm^(-3),R=0.0538,R_(w)=0.1406。在B3LYP/6-311+G(2d,p)模式下使用密度泛函理论(DFT)计算了该化合物的最佳结构,与X射线单晶衍射确定的晶体结构基本一致。抗肿瘤活性研究表明其有良好的抗肿瘤作用。此外,通过DFT计算了分子的静电势和前沿分子轨道。

中华大蟾蜍甾醇-4α-羧酸酯-3-脱氢酶基因的克隆、表达与生物信息学分析

目的为获得中华大蟾蜍甾醇-4α-羧酸酯-3-脱氢酶(NSDHL)以便于研究其功能,本文建立了该重组蛋白原核表达方法。方法以中华大蟾蜍耳后腺总RNA为模板,采用RT-PCR技术克隆中华大蟾蜍NSDHL基因(Bbg-NSDHL),对Bbg-NSDHL基因进行生物信息学分析,并以大肠埃希菌为宿主菌,采用pCOLD-TF表达载体,构建Bbg-NSDHL原核表达系统,优化诱导表达条件。结果Bbg-NSDHL cDNA全长1521 bp,开放阅读框长1038 bp,编码345个氨基酸,所表达蛋白分子量为38.6 kD,理论等电点为8.70,分子式为C_(1756)H_(2729)N_(455)O_(495)S_(14)。Bbg-NSDHL具有核苷二磷酸糖差向异构酶结构域和短链脱氢酶/还原酶超家族结构域,在270-292处存在1个明显的跨膜区。Bbg-NSDHL单体由5个α-螺旋和9个β-折叠组成。系统进化分析表明,Bbg-NSDHL与两栖动物的NSDHL聚为一类,与哺乳动物遗传距离较远。Rosetta菌株为Bbg-NSDHL重组蛋白表达适合宿主,最佳诱导条件为15℃条件下,细菌生长至OD_(600)值为1.0时,加入0.1 mmol/L的IPTG诱导24 h。去除Bbg-NSDHL跨膜区截短表达可显著提升Bbg-NSDHL重组蛋白表达量。结论本研究首次获得了中华大蟾蜍NSDHL cDNA全长序列,并建立了Bbg-NSDHL原核表达系统,为进一步研究该基因在中华大蟾蜍蟾毒配基类成分生物合成中的作用奠定了基础。

2,3-二氢喹唑啉-4(1H)-酮类衍生物的合成研究进展

概述了水溶剂、有机溶剂、离子液体、无溶剂、乙醇/水溶剂中合成2,3-二氢喹唑啉-4(1H)-酮衍生物的研究进展,主要包括以邻氨基苯甲酰胺、醛(或酮)为基础原料的合成途径和以靛红酸酐、胺或铵盐化合物、醛(或酮)为基础原料的合成途径;并从催化剂性能、反应温度、反应时间、目标产物收率、底物适应用性范围等方面对各合成方法进行简述和比较。

微小隐孢子虫甘油醛-3-磷酸脱氢酶的定位及活性检测

本研究以微小隐孢子虫甘油醛-3-磷酸脱氢酶(Cryptosporidium parvum glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,CpGAPDH)为对象,研究其亚细胞定位和酶动力学特征。设计特异性抗原多肽并免疫家兔,获得多克隆抗体,利用亲和纯化法获特异性抗体;经Western blot方法验证该抗体特异性,再通过间接免疫荧光法(IFA)进行蛋白定位。通过原核表达获得GST重组蛋白(GST-CpGAPDH),基于GAPDH的酶促反应利用辅酶NAD(H)或NADP(H)为电子受体或供体的原理,通过吸光度比色法监测反应中NAD(H)/NADP(H)的增加或减少鉴定其酶活性。结果显示,成功获得并纯化抗CpGAPDH抗体;Western blot分析显示该抗体可识别条带大小为40 kDa;IFA结果表明该蛋白主要分布于子孢子胞浆内,部分呈现颗粒状。利用重组蛋白确定了CpGAPDH的酶活性;在两种辅酶中,CpGAPDH更倾向于使用NAD(H)进行酶活反应。结果表明,本研究确定了CpGAPDH在虫体细胞的定位及酶活性检测,为进一步研究其生物学功能奠定了基础。

冠心病患者经皮冠状动脉介入术相关造影剂急性肾损害的影响因素分析及KIM-1、NGAL、NHE3的预测价值

目的探究冠状动脉粥样硬化性心脏病(以下简称冠心病)患者经皮冠状动脉介入术(PCI)相关造影剂急性肾损害(CIAKI)的影响因素,并分析尿液中肾损伤分子-1(KIM-1)、中性粒细胞明胶酶相关脂质结合蛋白(NGAL)、钠/氢交换蛋白3(NHE3)预测CIAKI发生的价值。方法回顾性分析2021年7月—2022年6月在齐齐哈尔医学院附属第一医院行PCI的142例冠心病患者的病历资料,根据患者术后是否发生CIAKI,分为CIAKI组和非CIAKI组。分析影响PCI术后发生CIAKI的因素,评估PCI前后KIM-1差值、NGAL差值及NHE3差值对PCI术后发生CIAKI的预测价值。结果142例行PCI的冠心病患者中发生CIAKI 25例(17.61%)。CIAKI组糖尿病占比及造影剂使用剂量高于非CIAKI组(P<0.05),术前GFR水平低于非CIAKI组(P<0.05)。CIAKI组手术前后尿KIM-1、NGAL及NHE3的差值均高于非CIAKI组(P<0.05)。多因素逐步Logistic回归分析结果显示:糖尿病[OR=3.350(95%CI:1.145,9.802)]、造影剂使用剂量[OR=3.377(95%CI:1.154,9.880)]、KIM-1差值[OR=4.958(95%CI:1.695,14.506)]、NGAL差值[OR=4.446(95%CI:1.519,13.008)]、NHE3差值[OR=4.446(95%CI:1.519,3.008)]是冠心病患者PCI术后发生CIAKI的危险因素(P<0.05);GFR[OR=0.262(95%CI:0.089,0.765)]是冠心病患者PCI术后发生CIAKI的保护因素(P<0.05)。受试者工作特征曲线分析结果表明,KIM-1差值、NGAL差值、NHE3差值单一及联合预测冠心病患者PCI术后发生CIAKI的敏感性为75.32%(95%CI:0.594,0.831)、68.59%(95%CI:0.537,0.762)、62.77%(95%CI:0.514,0.735)、80.93%(95%CI:0.629,0.924),特异性为74.01%(95%CI:0.583,0.826)、83.16%(95%CI:0.652,0.941)、78.92%(95%CI:0.603,0.875)、81.15%(95%CI:0.638,0.945),曲线下面积为0.743、0.748、0.762和0.837,联合诊断效能最高。结论糖尿病、GFR、造影剂使用剂量和PCI前后KIM-1、NGAL、NHE3的变化影响CIAKI的发生,PCI前后KIM-1差值、NGAL差值及NHE3差值联合预测CIAKI的效能较好。

结直肠癌组织PHGDH、APOL3表达及临床预后价值

目的研究结直肠癌(CRC)中3-磷酸甘油酸脱氢酶(PHGDH)、载脂蛋白L3(APOL3)表达,分析两者对CRC患者的预后评估价值。方法回顾性收集2018年3月—2021年2月首都医科大学大兴教学医院消化内科收治的CRC患者112例临床资料。采用实时荧光定量PCR(qPCR)和免疫组织化学法检测癌组织及癌旁组织中PHGDH、APOL3 mRNA和蛋白表达;Kaplan-Meier法分析PHGDH、APOL3 mRNA表达对CRC患者生存预后的影响;Cox回归分析CRC预后的影响因素;受试者工作特征(ROC)曲线评价PHGDH、APOL3 mRNA表达水平对CRC患者预后的评估价值。结果CRC患者癌组织中PHGDH mRNA相对表达量高于癌旁组织,APOL3 mRNA相对表达量低于癌旁组织(t/P=52.982/<0.001,35.679/<0.001);CRC患者癌组织中PHGDH、APOL3蛋白阳性率分别为78.10%(90/112)、8.57%(10/112),与癌旁组织的7.62%(8/112)、76.19%(88/112)比较,差异有统计学意义(χ^(2)/P=123.722/<0.001,110.367/<0.001);TNM分期Ⅲ期、有淋巴结转移的CRC癌组织中PHGDH mRNA表达水平高于TNM分期Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移,而APOL3 mRNA表达水平低于TNM分期Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移(PHGDH:t/P=52.268/<0.001,51.315/<0.001;APOL3:t/P=15.873/<0.001,14.769/<0.001)。PHGDH mRNA高表达组3年总生存率为50.00%(26/52),低于低表达组的73.33%(44/60)(Log rankχ^(2)=4.169,P=0.041);APOL3 mRNA低表达组3年总生存率为46.30%(25/54),低于高表达组的77.59%(45/58)(Log rankχ^(2)=10.650,P=0.001)。TNM分期Ⅲ期、淋巴结转移、PHGDH mRNA高为影响CRC患者预后的独立危险因素[OR(95%CI)=1.465(1.172~1.832),1.501(1.159~1.944),1.384(1.088~1.761)],APOL3 mRNA高为独立保护因素[OR(95%CI)=0.775(0.617~0.924)];PHGDH、APOL3 mRNA表达水平及二者联合评估CRC患者预后的曲线下面积(AUC)分别为0.830、0.816、0.922,二者联合的AUC大于PHGDH、APOL3 mRNA表达水平单独评估(Z=4.482、4.130,P均<0.001)。结论CRC中PHGDH表达上调,APOL3表达下调,在CRC中均发挥重要的促癌作用,联合检测PHGDH、APOL3的表达有助于评估CRC的预后。

2-甲基-3-[4,5-二氢异噁唑]-4-甲磺酰基苯甲酸液相色谱分析

建立了2-甲基-3-[4,5-二氢异噁唑]-4-甲磺酰基苯甲酸液相色谱分析方法,以C 18为填充物的不锈钢柱和可变波长紫外检测器,以乙腈、磷酸水溶液(pH值=3)体积比为40∶60为流动相,在270 nm波长下,采用高效液相色谱外标法,以梯度洗脱程序对试样中的2-甲基-3-[4,5-二氢异噁唑]-4-甲磺酰基苯甲酸进行高效液相色谱分离和分析,结果表明,在试验条件下,2-甲基-3-[4,5-二氢异噁唑]-4-甲磺酰基苯甲酸的质量浓度与其相应响应值之间的线性相关系数(R^(2))为0.9999,标准偏差为0.28,变异系数为0.28%,平均回收率为98.0%,可以满足2-甲基-3-[4,5-二氢异噁唑]-4-甲磺酰基苯甲酸的定性和定量分析,结果呈现性好。

3-三氟甲基-5,6,7,8-四氢-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪盐酸盐的合成工艺研究

以三氟乙酰肼和乙酰氯为起始原料,经5步反应合成了西他列汀的关键中间体3-三氟甲基-5,6,7,8-四氢-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪盐酸盐,并对反应条件进行了优化,优化条件下总收率超过55.0%,纯度高于99.5%,所有单一杂质含量控制在0.1%以内。

表面包覆镍处理La_(0.67)Mg_(0.33)Ni_(2.5)Co_(0.5)贮氢合金电极的电化学性能

研究了表面包覆Ni-P对PuNi3型贮氢合金La0.67Mg0.33Ni2.5Co0.5电极的电化学性能的影响。结果表明:包覆镍处理改善了贮氢合金电极的循环稳定性。线性极化扫描和电化学阻抗谱等分析结果表明,包覆后合金电极的极限电流密度(Il),交换电流密度(I0)以及电化学阻抗均有较好的改善,说明电荷转移和氢的扩散能力得到提高。经25次电化学循环后的电极合金金相观察和分析表明,包覆Ni-P处理没有有效抑制其粉化,这与该类型贮氢合金电化学吸氢时氢化物膨胀较大有关。

1-芳基-1,4-二氢-3-芳酰肼基甲酰基-6-甲基-4-哒嗪酮的合成及对黄瓜子叶生根作用的构效关系研究

合成了一系列的 1 芳基 1,4 二氢 3 芳酰肼基甲酰基 6 甲基 4 哒嗪酮类化合物 ,并用离体黄瓜子叶生根法测试其生物活性 ,生测结果表明 ,所有的化合物均显示出一定的生物活性 ,并且芳环上的取代基对活性有重要影响 .采用化合物的物理化学参数及化合物促进黄瓜子叶生根的活性 ,进行了结构与活性定量关系研究 ,建立了较好的结构与活性的相关式 ,化合物的亲脂性和取代基的电性对化合物的生物活性具有重要的影响 .研究结果对 3 芳酰肼基甲酰基 4 哒嗪酮类化合物的改性或新类似物的合成具有指导意义 .

AB_3型贮氢合金材料的研究进展

AB3型贮氢合金(A=稀土元素、Ca、Y或Mg,B=Ni、Al、Mn、Co、Fe等过渡族元素)是替代以LaNi5为代表的AB5型贮氢合金的重要候选材料之一。本文介绍了AB3型贮氢合金及其氢化物的结构特性,综述了国内外有关AB3型合金的开发、应用和研究进展,并指出需要解决的问题及发展方向。

网格蛋白内吞途径在轮状病毒感染对Caco-2细胞钠氢交换蛋白3调控中的作用

目的研究轮状病毒(RV)感染对表达钠氢交换蛋白3(Na^+-H^+exchanger 3,NHE3)的Caco-2细胞表面NHE3蛋白水平和生物活性的影响及其调控机制。方法构建表达NHE3的Caco-2细胞模型,分为对照组(CTL组)、RV组、网格蛋白(clathrin)拮抗剂氯丙嗪(CPZ)组和CPZ+RV组,采用BCECF-AM法和细胞表面NHE3生物素化法测定Na^+-H^+交换活性和细胞表面NHE3水平,Western blot法测定细胞clathrin水平。结果与CTL组相比,RV感染可引起细胞Na^+-H^+交换活性以及细胞表面NHE3水平明显降低,此抑制作用不能被clathrin拮抗剂CPZ完全抵消,此外RV感染可引起clathrin水平升高,这一作用也可被CPZ取消。结论 RV感染对NHE3水平及生物活性的调控与clathrin依赖性内吞途径有一定关系,但也可能还受到其他内吞途径的影响。

大白栓菌中3-氢化松苓酸B含量的测定

目的:建立高效液相色谱法测定大白栓菌及人工培养物中3-氢化松苓酸B的含量;方法:采用高效液相色谱法测定,色谱柱YMC-Pack AQ C18,250×4.6 mm,5μm,流动相乙腈-水(95∶5),流速1.0 mL/min,柱温25℃,检测波长214 nm;结果:大白栓菌中3-氢化松苓酸B的含量为5.71%,人工培养物中3-氢化松苓酸B的含量为0.53%,3-氢化松苓酸B在20～240 mg.L-1呈良好的线性关系(R=0.9999),平均回收率为99.2%(RSD=3.0).结论:采用高效液相色谱法测定大白栓菌中3-氢化松苓酸B的含量简便快速,结果可靠,可用于大白栓菌的质量控制.

6-[4-(4′-吡啶)氨基苯]-4,5-二氢-3(2H)哒嗪酮抗兔和大鼠失血性休克效应及初步机理

目的 研究新型钙增敏强心剂 6 [4 (4′ 吡啶 )氨基苯 ] 4 ,5 二氢 3(2H)哒嗪酮 (MCI 15 4 )抗失血性休克效应并探讨其初步机理。方法 以改良Wigger法 ,即股动脉放血并维持血压 5 .33kPa 2h建立失血性休克动物模型 ,观察MCI 15 4对失血性休克大鼠 12、2 4和 4 8h存活率的影响 ;以彩色频谱多普勒观察MCI 15 4对失血性休克家兔心脏射血分数、每搏输出量及肝动脉、肠系膜上动脉、右肾动脉平均血流量和血流阻力指数的影响。结果 MCI 15 4组休克大鼠 12、2 4和 4 8h存活率分别为 17/ 2 0、15 / 2 0和13/ 2 0 ,明显高于生理盐水组的 11/ 2 0、8/ 2 0、4 / 2 0 ;MCI 15 4治疗后 2h ,能显著降低休克家兔肝、肾动脉血流阻力指数 ;治疗后 4h能明显增加休克家兔心脏射血分数、每搏输出量及肠系膜上动脉、肾动脉血流量 ,显著降低肝动脉血流阻力指数。结论 MCI 15 4有较满意的抗失血性休克效应 ,其机理可能与增强休克动物心脏功能和增加主要器官血流量有关。

快淬对La_(0.67)Mg_(0.33)(NiCo)_3贮氢合金电化学性能的影响

测试了AB3型贮氢合金L a0.67M g0.33(N iCo)3铸态与快淬态的电化学性能,用XRD和SEM测试了合金的微观结构,研究了快淬对AB3型贮氢合金电化学性能的影响。结果表明,快淬使合金的放电容量降低,对合金的活化性能没有明显影响;快淬降低了合金的容量衰减率,提高了合金的循环寿命,其主要原因是快淬使合金的晶粒显著细化。铸态和快淬态合金均具有多相结构,包括斜六面体的(L a,M g)N i3相,六方的L aN i5相及少量的L aN i2相。快淬使合金中的L aN i2相含量增加,这是快淬使合金放电容量下降的一个主要原因。

化学酶法合成光学纯(S)-1,2,3,4-四氢喹啉-3-羧酸的研究

采用化学酶法以消旋体苯丙氨酸和多聚甲醛为起始原料,用氢溴酸作为催化剂,经Pictet Spengler反应、酯化、脂酶催化水解等过程合成了光学纯的(S)-1,2,3,4-四氢喹啉-3-羧酸(Tic)。对Pictet Spengler反应和脂酶催化水解进行了工艺优化。Pictet Spengler反应的最佳条件是:n(苯丙氨酸)∶n(多聚甲醛)∶n(HBr)=1∶1 4∶8 8(HBr使用其40%质量分数的水溶液),反应温度为60℃,消旋体Tic收率为87 1%。脂酶催化水解的最适宜条件是反应温度为30℃,酶和底物的质量比为0 2,pH值为7 5,可得到光学收率e.e%>99%、化学收率49.1%的(S)-Tic。