氧化型低密度脂蛋白对小鼠腹腔巨噬细胞胆固醇蓄积的影响及可能机制

研究氧化型低密度脂蛋白对小鼠腹腔巨噬细胞胆固醇蓄积的影响 ,并探讨其与组织蛋白酶活性之间的关系。用 10 0mg/L的乙酰化低密度脂蛋白和氧化型低密度脂蛋白处理小鼠腹腔巨噬细胞 2 4h ,分别测定巨噬细胞胞浆和溶酶体中胆固醇的含量以及溶酶体中组织蛋白酶的活性。结果发现 ,乙酰化低密度脂蛋白和氧化型低密度脂蛋白均可引起细胞胆固醇含量增加 (分别为 2 2 .2± 0 .4 μg和 2 2 .5 5± 0 .15 μg比对照组的 7.0± 0 .4 μg ,P <0 .0 1) ,但蓄积部位和形式完全不同 ,前者蓄积部位主要在胞浆并以胆固醇酯为主 (胞浆与溶酶体分别为 18.9± 0 .4 μg和3.3± 0 .2 μg ,游离胆固醇与胆固醇酯分别为 0 .73± 0 .0 5 μg和 18.1± 0 .4 μg) ,后者主要在溶酶体并以游离胆固醇为主 (胞浆与溶酶体分别为 3.6 5± 0 .14 μg和 18.90± 0 .15 μg ,游离胆固醇与胆固醇酯分别为 14 .13± 0 .14 μg和 4 .77±0 .33μg) ;前者不引起溶酶体组织蛋白酶的活性改变和蛋白含量增加 (组织蛋白酶L和D分别为 99.5± 3.4和 2 8.0± 2 .4 ,对照组分别为 10 2 .3± 8.2和 2 7.3± 1.6 ,P >0 .0 5 ;蛋白含量为 8.8± 0 .4 μg ,对照组为 9.0± 0 .3μg,P >0 .0 5 ) ;后者则造成溶酶体组织蛋白酶活性的明显降低和蛋白蓄积 (组织?

氧化型低密度脂蛋白中不同氧化产物对小鼠腹腔巨噬细胞溶酶体胆固醇蓄积的影响

为研究氧化型低密度脂蛋白中不同氧化产物对小鼠腹腔巨噬细胞溶酶体胆固醇蓄积的影响。分别用1 0 0mg L的铜氧化的低密度脂蛋白和次氯酸钠氧化的低密度脂蛋白处理小鼠腹腔巨噬细胞 2 4h ,分别测定巨噬细胞溶酶体中胆固醇和总蛋白的含量以及溶酶体中组织蛋白酶L的活性。结果发现 ,铜氧化型低密度脂蛋白和次氯酸钠氧化型低密度脂蛋白均可引起总胆固醇和总蛋白在溶酶体蓄积 (实验组总胆固醇分别为 1 6 .90± 0 .1 5 μg和1 5 .1 1± 0 .5 4 μg ,对照组为 3.2 8± 0 .0 8μg ,P <0 .0 1 ;实验组总蛋白分别为 1 7.93± 1 .6 6 μg和 2 1 .0 0± 1 .6 8μg ,对照组为 1 3.39± 2 .6 4 μg ,P <0 .0 1 )。但蓄积的胆固醇类型有所不同 ,前者以游离胆固醇为主 (游离胆固醇为 1 4 .1 3± 0 .1 4μg ,胆固醇酯为 4 .77± 0 .33μg) ;后者则以胆固醇酯为主 (游离胆固醇为 5 .0 1± 0 .30 μg ,胆固醇酯为 1 0 .1 0± 0 .4 8μg)。铜氧化低密度脂蛋白可造成溶酶体组织蛋白酶L活性明显下降 (1 1 .1± 2 .3kau g比 73.2± 1 5 .0kau g ,P <0 .0 1 ) ,而次氯酸钠氧化低密度脂蛋白的作用不明显 (73.6± 9.5比 73.2± 1 5 .0 ,P >0 .0 5 )。以上结果提示 ,不同氧化产物引起溶酶体胆固醇蓄积的种类不同 ,而蛋白降解受阻可?

氧化型低密度脂蛋白对THP-1巨噬细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1表达的影响

观察氧化型低密度脂蛋白对THP 1巨噬细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1和胆固醇流出的影响。用液体闪烁计数器检测细胞内胆固醇流出 ,流式细胞术检测细胞的三磷酸腺苷结合盒转运体A1平均荧光强度。THP 1巨噬细胞与 5 0mg L氧化型低密度脂蛋白孵育不同时间即 6、12、2 4、4 8h ,油红O染色 ,显微镜下观察 ,可见细胞内脂滴由小而少逐渐地变为大而多 ,特别到 4 8h时非常明显地增多变大。油红O染色细胞计数分别为 2 6± 3个、30± 4个、4 3± 5个、5 4± 5个。 2 4h和 4 8h时分别与 6h时比较 ,油红O染色细胞明显增多 (P <0 .0 5 )。用 5 0mg L氧化型低密度脂蛋白孵育THP 1巨噬细胞不同时间即 6、12、2 4、4 8h ,测量胆固醇流出。结果显示氧化型低密度脂蛋白对THP 1巨噬细胞胆固醇流出的影响依时间不同而有所不同 ,在 6、12、2 4、4 8h时胆固醇流出分别为 2 .2 %、2 .9%、6 .3%、7.8% ,2 4h、4 8h时分别与 6h时比较 ,胆固醇流出明显增多 (P <0 .0 5 )。氧化型低密度脂蛋白使THP 1巨噬细胞的三磷酸腺苷结合盒转运体A1平均荧光强度从 6h时的 11.1增加到 4 8h的 32 .2。提示氧化型低密度脂蛋白可上调THP 1巨噬细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1的表达并增加胆固醇流出。

氧化型低密度脂蛋白对单核巨噬细胞株U937表达Siglec-1蛋白及分泌细胞因子的影响

目的探讨氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)的致动脉粥样硬化(AS)作用是否通过上调单核巨噬细胞表面Siglec-1的表达发挥作用。方法制备ox-LDL并用不同浓度刺激人巨噬细胞株U937,48h后收集细胞和培养上清液,分别用流式细胞仪和RT-PCR检测不同浓度ox-LDL刺激后Siglec-1蛋白和Siglec-1mRNA的表达水平,并用ELISA试剂盒测定培养上清液中MIP-1α、MCP-1和IL-8的浓度。结果与对照组相比,ox-LDL能刺激U937细胞表面Siglec-1蛋白和Siglec-1mRNA表达升高(P<0.01),培养上清液中MIP-1α、MCP-1和IL-8的表达升高(P<0.01),并呈浓度依赖性。结论ox-LDL的致AS作用可能部分是通过上调单核巨噬细胞表面Siglec-1蛋白表达而活化巨噬细胞,分泌细胞因子和趋化因子诱导更多巨噬细胞和淋巴细胞的活化参与粥样斑块中的炎症反应。

孤儿核受体Nur77对氧化型低密度脂蛋白诱导的小鼠巨噬细胞系分泌炎症因子的影响

目的观察孤儿核受体Nur77对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导小鼠巨噬细胞分泌炎症因子的影响。方法建立稳定转染GFP-Nur77质粒的小鼠巨噬细胞系RAW 264.7,并以稳定转染绿色荧光蛋白(GFP)基因的细胞系RAW 264.7作为对照。将转染的细胞与ox-LDL(40 mg/L)共同孵育24 h后,采用ELISA法检测炎症因子TNF-α、IFNγ-、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和IL-6的表达。结果经ox-LDL刺激后,不同质粒DNA转染的两种细胞中,IFNγ-、TNF-α、MMP-9和MCP-1的浓度均升高(P<0.05);但GFP-Nur77-RAW 264.7细胞的增长水平明显低于GFP-RAW 264.7细胞(P<0.05)。ox-LDL刺激前,GFP-RAW 264.7细胞分泌的4种炎症因子(TNF-α、IFN-γ、MMP-9和MCP-1)的浓度,分别为(19.00±1.69)ng/L、(99.10±3.09)ng/L、(0.14±0.02)ng/L和(23.96±3.57)ng/L;ox-LDL刺激后,分别上升为(27.22±0.38)ng/L、(549.90±1.81)ng/L、(0.45±0.06)ng/L和(49.31±3.66)ng/L。ox-LDL刺激前,GFP-Nur77-RAW 264.7和GFP-RAW 264.7细胞分泌的4种炎症因子的浓度无统计学的差异性。ox-LDL刺激后,4种炎症因子的浓度分别上升为(18.34±1.06)ng/L、(320.56±1.27)ng/L、(0.20±0.03)ng/L和(38.92±4.46)ng/L。而两种细胞(CTFP-Nur77-RAW 264.7细胞与GFP-RAW 264.7细胞)分泌IL-6的浓度未见显著差异。结论RAW 264.7细胞中Nur77表达的上调,能够显著减少ox-LDL诱导的炎症因子(IL-6除外)分泌,这可能是孤儿核受体Nur77心血管保护作用的重要机制之一。

激活视黄醇类X受体对氧化型低密度脂蛋白诱导小鼠巨噬细胞系RAW264.7凋亡的影响

目的探讨激活视黄醇类X受体对氧化型低密度脂蛋白诱导巨噬细胞凋亡的影响及其机制。方法小鼠巨噬细胞系RAW264.7经氧化型低密度脂蛋白处理24h诱导凋亡,同时观察给予视黄醇类X受体特异性配体9-cisRA或SR11237对氧化型低密度脂蛋白诱导凋亡的干预作用,MTT法检测细胞活力,流式细胞仪PI单染法和DAPI染色检测细胞凋亡,CM-H2DCFDA荧光探针测定细胞内活性氧浓度。结果RAW264.7细胞经氧化型低密度脂蛋白(100mg/L)处理24h后细胞活力较对照组下降约60,细胞凋亡百分率较对照组升高约75,10-8mol/L和10-7mol/L9-cisRA及10-7mol/LSR11237能够显著抑制氧化型低密度脂蛋白诱导引起的细胞活力下降和凋亡(P<0.05)。给予氧化型低密度脂蛋白(100mg/L)4h后细胞内活性氧水平显著升高约17倍以上,如联合给予9-cisRA(10-7mol/L)或SR11237(10-6mol/L),平均荧光强度分别下降约52和28,较氧化型低密度脂蛋白单独处理组有显著性差异(P<0.05)。结论激活视黄醇类X受体能够抑制氧化型低密度脂蛋白诱导巨噬细胞凋亡,其机制可能与减轻细胞氧化应激损伤有关。

葡萄糖和厄贝沙坦对单核巨噬细胞系凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体表达的影响

目的研究不同浓度葡萄糖和厄贝沙坦对人单核巨噬细胞系(THP-1)凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体mRNA及蛋白表达的影响,并探讨其可能的机制。方法 THP-1细胞经0.16μmol/L佛波酯诱导分化72 h后,将细胞分为对照组、不同浓度葡萄糖组(5、8、12和15 mmol/L)和厄贝沙坦干预组,葡萄糖组将不同浓度葡萄糖与诱导分化的巨噬细胞孵育24 h,厄贝沙坦干预组用厄贝沙坦预先孵育2 h后,再加入15 mmol/L葡萄糖共同孵育24 h。用荧光定量PCR和细胞酶联免疫法检测凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体mRNA和蛋白的表达。结果与对照组相比,5 mmol/L葡萄糖组凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体mRNA及蛋白表达差异无显著性(P>0.05),其余高糖组该受体mRNA和蛋白表达明显增加(P<0.05),并且其表达呈浓度依赖性;厄贝沙坦可显著抑制此作用,使该受体表达明显降低。结论高糖以浓度依赖方式上调凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体mRNA和蛋白的表达,这可能是导致动脉粥样硬化发生的机制之一;厄贝沙坦可显著抑制这一作用,可能在抗动脉粥样硬化中起作用。

丙酮酸乙酯对氧化型低密度脂蛋白刺激巨噬细胞炎性因子IL-1β表达的影响

目的研究丙酮酸乙酯(ethyl pyruvate,EP)对氧化型低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)作用下巨噬细胞炎性因子白介素1β(interleukin-1β,IL-1β)表达的影响。方法 THP-1细胞经佛波酯(100 ng/ml)诱导分化为巨噬细胞,分别与人ox-LDL(50 mg/L)及ox-LDL(50 mg/L)+EP(5 mmol/L)共培养6 h、12 h、24 h、48 h后提取细胞RNA,实时q PCR检测高迁移率族蛋白1(high mobility group box-1 protein,HMGB1)、Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)、IL-1β的表达水平。结果 HMGB1及TLR4在ox-LDL刺激后12 h开始升高,12 h、24 h、48 h刺激组HMGB1表达量分别是对照组的3.23、6.95、8.96倍。12 h、24 h、48 h刺激组TLR4表达量分别是对照组的3.35、5.65、5.98倍。丙酮酸乙酯能显著抑制ox-LDL刺激下巨噬细胞HMGB1、TLR4表达。12 h、24 h、48 h丙酮酸乙酯处理组相比刺激组HMGB1表达抑制率分别为64.4%、83.8%、77.5%。12 h、24 h、48 h丙酮酸乙酯处理组相比刺激组TLR4表达抑制率分别为54.9%、42.6%、65.6%。IL-1β在ox-LDL刺激下6 h开始升高,随着时间增长表达量升高。6 h、12 h、24 h、48 h刺激组IL-1β表达量分别是对照组的2.24、2.88、3.36、3.73倍。6 h、12 h、24 h、48 h丙酮酸乙酯处理组相比刺激组IL-1β表达抑制率分别为31.6%、48.6%、49.3%、51.2%。结论丙酮酸乙酯能够通过抑制ox-LDL刺激下巨噬细胞HMGB1及其受体TLR4的表达而抑制炎性因子IL-1β的表达。

氧化低密度脂蛋白对THP-1巨噬细胞CD36表达的影响

目的:观察氧化低密度脂蛋白(oxLDL)对THP-1巨噬细胞CD36表达和细胞胆固醇流入的影响,探讨CD36在巨噬细胞胆固醇流入中的作用。方法:用50 mg/L oxLDL分别孵育THP-1巨噬细胞不同时间(0、12、24、36和48 h),采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和W estern印迹分别检测CD36 mRNA和蛋白质的表达;用油红O染色观测细胞内脂质蓄积情况;用液体闪烁计数法检测[3H]胆固醇流入。结果:50mg/L oxLDL孵育THP-1巨噬细胞不同时间(0、12、24、36和48 h),THP-1巨噬细胞CD36 mRNA及蛋白质表达上调,油红O染色可见细胞内脂滴逐渐增加,液体闪烁计数发现THP-1巨噬细胞胆固醇流入增加,分别为23.5%、27.8%、39.7%、44.1%和49.7%。结论:oxLDL可使THP-1巨噬细胞CD36表达上调,并使细胞胆固醇流入增加。

氧化型极低密度脂蛋白诱导小鼠腹腔巨噬细胞凋亡

探讨氧化型极低密度脂蛋白诱导小鼠腹腔巨噬细胞凋亡的作用。应用低温超速离心法分离健康人血浆极低密度脂蛋白 ,用CuCl2氧化得到氧化型极低密度脂蛋白。琼脂糖凝胶电泳观察巨噬细胞凋亡DNA断裂“梯状”图谱 ;流式细胞仪和二苯胺法分别测定凋亡巨噬细胞百分率和DNA片断百分率 ;光镜观察凋亡巨噬细胞形态变化。结果发现 :①氧化型极低密度脂蛋白能诱导巨噬细胞发生凋亡及DNA断裂 ;②抗氧化剂二甲基硫脲能部分抑制氧化型极低密度脂蛋白诱导的DNA断裂 ;③核转录因子核因子κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐可完全抑制氧化型极低密度脂蛋白诱导的DNA断裂。提示氧化型极低密度脂蛋白诱导巨噬细胞凋亡可能是动脉粥样硬化形成机制之一 ;氧化型极低密度脂蛋白诱导巨噬细胞凋亡的作用可能与自由基和激活核因子κB有关。

18β-甘草次酸钠对小鼠腹腔巨噬细胞摄取氧化型低密度脂蛋白的影响及其作用机制研究

目的:观察18β-甘草次酸钠(β-SG)对体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞摄取氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:收集并培养小鼠腹腔巨噬细胞,分为对照组、oxLDL组及oxLDL+β-SG(1、10、100μmol/L)组,经oxLDL(除对照组外)作用后测定细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)、胆固醇酯(CE)含量,观察不同浓度β-SG对巨噬细胞摄取oxLDL的影响;同时,测定细胞内丙二醛(MDA)的含量和超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的活性。结果:oxLDL能显著增加巨噬细胞内TC、CE的含量,而预先加入β-SG的oxLDL组能剂量依赖性地抑制细胞内TC、CE含量的升高(P<0.01或P<0.05),FC各组无显著性差异(P>0.05);与oxLDL组比较,oxLDL+β-SG各组还能减少细胞内MDA含量,增加SOD和GSH-PX活性(P<0.01或P<0.05)。结论:β-SG能显著抑制体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞对oxLDL的摄取,此作用可能与其能提高巨噬细胞的抗氧化能力有关。

天然及氧化型极低密度脂蛋白诱导培养的人脐静脉内皮细胞表达巨噬细胞炎性蛋白1α

为探讨天然及氧化型极低密度脂蛋白能否诱导培养的人脐静脉内皮细胞表达巨噬细胞炎性蛋白 1α ,使内皮细胞分别暴露于上述脂蛋白后 ,用原位杂交、逆转录聚合酶链反应及免疫细胞化学法分别检测各组细胞的巨噬细胞炎性蛋白 1αmRNA和蛋白的表达。原位杂交发现 ,培养的内皮细胞能表达巨噬细胞炎性蛋白 1αmRNA ,两脂蛋白组内皮细胞的积分吸光度值明显高于对照组 (P <0 .0 1)。逆转录聚合酶链反应发现 ,两脂蛋白组内皮细胞的巨噬细胞炎性蛋白 1αmRNA的积分吸光度值分别为对照组的 15 .4倍和 14 .2倍。免疫细胞化学发现 ,两脂蛋白组内皮细胞胞浆的巨噬细胞炎性蛋白 1α蛋白表达 (棕色颗粒 )的积分吸光度值显著高于对照组 ,方差分析表明 ,组间差异有显著性意义 (P <0 .0 5 )。结果提示 ,天然及氧化型极低密度脂蛋白均可诱导培养的人脐静脉内皮细胞表达高水平的巨噬细胞炎性蛋白 1αmRNA和蛋白 。

重组人B型利钠肽抑制氧化低密度脂蛋白诱导的巨噬细胞氧化应激及炎症反应

目的探讨重组人B型利钠肽(rh BNP)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的巨噬细胞氧化应激和炎症反应的抑制作用。方法建立ox-LDL干预THP-1源巨噬细胞的模型,分为3组:对照组、100μg/ml ox-LDL组和100μg/ml ox-LDL+10-9mol/L rh BNP组。收集各组细胞,应用共聚焦显微镜测定细胞内活性氧(ROS)水平,采用逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)及生物化学法分别检测超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)基因的表达及活性,采用酶联免疫吸附法检测白细胞介素37(IL-37)的水平。结果与对照组相比,100μg/ml ox-LDL组的ROS水平升高(527. 30%±36. 20%比100. 00%±0. 00%),SOD mRNA的表达和活性降低[0. 53±0. 18比1. 00±0. 00;(256. 60±8. 20) U/ml比(355. 80±9. 58) U/ml],MDA mRNA的表达和含量升高[1. 59±0. 23比1. 00±0. 00;(29. 40±1. 68) nmol/ml比(5. 94±0. 51) nmol/ml],IL-37水平降低[(48. 05±3. 01) ng/L比(57. 82±2. 26) ng/L](均为P <0. 05);与100μg/ml ox-LDL组相比,100μg/ml ox-LDL+10-9mol/L rh BNP组的上述指标均有所改善[237. 30%±30. 62%,0. 90±0. 07,(310. 40±2. 97) U/ml,1. 14±0. 10,(20. 54±1. 55) nmol/ml,(53. 06±1. 87) ng/L,均为P <0. 05]。结论 rh BNP可能通过提高SOD表达及活性,上调IL-37水平,而抑制ox-LDL诱导的THP-1源巨噬细胞的氧化应激及炎症反应。

普罗布考下调氧化型低密度脂蛋白诱导THP-1巨噬细胞ATP结合盒转运体A1的表达

目的观察普罗布考对氧化型低密度脂蛋白诱导THP-1巨噬细胞ATP结合盒转运体A1表达的影响。方法用逆转录聚合酶链反应、免疫荧光分别检测ATP结合盒转运体A1mRNA水平和蛋白的表达。结果用氧化型低密度脂蛋白(100mg/L)分别孵育细胞0、12、24及48h,实验结果发现ATP结合盒转运体A1mRNA水平呈时序上调;用50μmol/L普罗布考预处理细胞4h,再用氧化型低密度脂蛋白孵育48h,普罗布考加氧化型低密度脂蛋白(100mg/L)处理组与氧化型低密度脂蛋白(100mg/L)处理组ATP结合盒转运体A1mRNA水平无明显差异,但免疫荧光检测发现普罗布考加氧化型低密度脂蛋白(100mg/L)处理组ATP结合盒转运体A1蛋白表达下调。结论普罗布考下调氧化型低密度脂蛋白诱导THP-1巨噬细胞ATP结合盒转运体A1蛋白的表达。

氧化型低密度脂蛋白诱导巨噬细胞炎症因子表达

目的:探讨氧化型低密度脂蛋白(Ox-LDL)对培养的人巨噬细胞表达巨噬细胞移动抑制因子(macrophagemigrationinhibitory factor,MIF)、肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor,TNF-α)和单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)mRNA水平的影响.

氧化型低密度脂蛋白调控MerTK受体表达抑制巨噬细胞对凋亡细胞的吞噬

目的研究氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)对巨噬细胞吞噬清除凋亡细胞的作用及其机制。方法 RAW264.7小鼠巨噬细胞随机分为对照组(无血清的DMEM培养液)、10μg/mL ox-LDL组(10μg/mL ox-LDL无血清DMEM培养液)和20μg/mLox-LDL组(20μg/mL ox-LDL无血清DMEM培养液),采用紫外光照射诱导RAW264.7小鼠巨噬细胞发生凋亡,流式细胞分析法检测RAW264.7小鼠巨噬细胞对凋亡细胞的吞噬指数,Western blotting和Real-Time PCR技术分别检测促吞噬受体MerTK蛋白和mRNA表达的变化。结果①孵育24 h后,10μg/mL ox-LDL组和20μg/mL ox-LDL组吞噬指数分别较对照组下降(4.7±2.8)%和(12.6±2.2)%,20μg/mL ox-LDL组显著小于对照组和10μg/mL ox-LDL组(P<0.05﹚。②孵育24 h后,10μg/mLox-LDL组和20μg/mL ox-LDL组MerTK蛋白表达灰度值分别较对照组下降(20.0±16.5)%和(47.0±15.4)%,20μg/mLox-LDL组显著小于对照组(P<0.05)。③孵育12 h后,10μg/mL ox-LDL组和20μg/mL ox-LDL组MerTK mRNA相对表达量分别较对照组减少(33.0±17.5)%和(60.0±10.0)%,10μg/mL ox-LDL组和20μg/mL ox-LDL组均显著小于对照组(P均<0.05)。结论 ox-LDL可抑制巨噬细胞对凋亡细胞的吞噬功能,其机制与抑制促吞噬受体MerTK的表达有关,这也可能是ox-LDL致动脉粥样硬化斑块不稳定和进展的机制之一。

β2GPI/aβ2GPI通过激活TLR4抑制THP-1巨噬细胞对氧化型低密度脂蛋白的摄取

目的探讨β2糖蛋白I/抗β2糖蛋白I抗体复合物(β2GPI/aβ2GPI)对巨噬细胞脂质摄取功能和B型清道夫受体CD36表达的影响,以及Toll样受体4(TLR4)在该过程中的作用。方法用100 ng/mL佛波酯(PMA)将THP-1人单核细胞诱导为THP-1巨噬细胞,通过形态学变化和1,1'-二十八烷基-3,3,3',3'-四甲基吲哚碳花菁高氯酸盐标记的氧化低密度脂蛋白(DiI-oxLDL)吞噬试验加以鉴定。用RPMI1640培养液、β2GPI、抗β2糖蛋白I抗体(aβ2GPI)和β2GPI/aβ2GPI处理THP-1巨噬细胞,实时荧光定量PCR和Western blot法检测TLR4 mRNA和蛋白水平。用RPMI1640培养液、氧化低密度脂蛋白(oxLDL)、oxLDL联合β2GPI/aβ2GPI和oxLDL联合LPS处理THP-1巨噬细胞,油红O染色观察胞内脂质积累,免疫荧光细胞化学染色法检测CD36的表达,实时荧光定量PCR检测CD36 mRNA水平,Western blot法检测CD36蛋白水平。利用TLR4阻断剂TAK-242(1μg/mL)预处理THP-1巨噬细胞,观察抑制TLR4对上述刺激下THP-1巨噬细胞脂质积累和CD36表达的影响。结果PMA处理后,THP-1细胞呈现巨噬细胞形态并具备脂质吞噬能力;与RPMI1640相比,β2GPI/aβ2GPI处理可显著增加THP-1巨噬细胞TLR4表达;与单独oxLDL处理相比,oxLDL联合β2GPI/aβ2GPI能够抑制THP-1巨噬细胞的脂质积累和CD36表达,阻断TLR4可以部分逆转这一现象。结论β2GPI/aβ2GPI能激活TLR4抑制巨噬细胞对oxLDL的摄取和CD36表达。

Caveolin-1在氧化型低密度脂蛋白诱导的巨噬细胞荷脂过程中的表达

目的观察Caveolin-1在氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的巨噬细胞荷脂过程中的表达变化,进而分析Caveolin-1在巨噬源性泡沫细胞形成过程中的作用。方法采用75 mg/L ox-LDL与RAW264.7细胞共同孵育不同时间,高效液相色谱法检测细胞内胆固醇含量的变化,建立巨噬细胞荷脂化模型;Western-blot检测Caveolin-1蛋白的表达改变。结果75 mg/L ox-LDL与RAW264.7细胞共同孵育48 h后,细胞内胆固醇酯/总胆固醇的比值上升至42.3%±5.9%,符合荷脂细胞特征。Caveolin-1的蛋白表达较0 h组明显减弱。结论ox-LDL诱导的RAW264.7巨噬细胞荷脂化过程中,Caveolin-1的表达下调。