氧化型低密度脂蛋白IgG型免疫复合物的检测及临床应用

目的 探讨血清氧化修饰型低密度脂蛋白免疫复合物 (OX LDL IC)的检测方法及其在动脉粥样硬化发病机制中的作用。方法 取纯化单克隆抗OX LDL抗体包被反应板以识别循环免疫复合物中的抗原部分 ,以羊抗人IgG酶结合物识别循环免疫复合物中的抗体部分 ,采用ELISA检测 90例不同类型冠心病患者血清中OX LDL IC水平 ,并进行统计学分析。结果 冠心病各组患者血清OX LDL IC水平均明显高于对照组 ,并表现出随病情加重而逐渐增加的趋势。结论 OX LDL IC的形成增强了OX LDL致动脉粥样硬化的能力 。

氧化型低密度脂蛋白自身抗体及其免疫复合物与冠心病的相关性

目的 :探讨氧化型低密度脂蛋白 (ox- LDL )自身抗体及其免疫复合物与冠心病之间的关系。方法 :应用酶联免疫法对 6 1例确诊的冠心病患者、116例高血压患者和 12 3例健康对照组进行血清 ox- LDL自身抗体及其循环免疫复合物的检测 ,并同步测定 ox- LDL和血脂水平。结果 :冠心病患者自身抗体 Ig G[2 1.4 8(17.5 8～ 2 9.0 1) ]U/L和 Ig M[4 .71(3.88～ 7.0 6 ) ]U/ L以及 ox- L DL [0 .87(0 .4 4～ 1.0 8) ]mg/ L均显著高于高血压组 [15 .93(11.12～2 2 .2 6 ) U/ L、2 .5 4 (1.17～ 5 .0 5 ) U/ L、0 .32 (0 .16～ 0 .6 1) mg/ L ]和健康对照组 [11.12 (4.70～ 16 .5 7) U/ L、1.6 1(0 .6 0～ 3.0 3) U/ L、0 .2 3(0 .12～ 0 .36 ) mg/ L],P均 <0 .0 0 1,而循环免疫复合物 [2 .6 3(1.6 9～ 5 .90 ) U/ L ]显著低于高血压组 [15 .71(6 .2 5～ 2 8.74 ) U/ L]和健康对照组 [12 .5 4 (8.2 8～ 2 3.90 ) U/ L ],P均 <0 .0 0 1。ox- LDL与其自身抗体之间的关系在各组之间存在不一致性。结论 :ox- LDL自身抗体与循环免疫复合物在冠心病患者中的变化可能与ox- L DL及其自身抗体在冠状动脉硬化进程中发挥作用有关。

血浆氧化型低密度脂蛋白水平与低密度脂蛋白循环免疫复合物的相关性

为探讨血浆氧化型低密度脂蛋白水平与低密度脂蛋白循环免疫复合物间关系。分别建立了以抗人IgG为包被抗体、酶标抗载脂蛋白B为检测抗体的低密度脂蛋白循环免疫复合物酶联免疫吸附试验;以抗氧化型低密度脂蛋白为包被抗体、酶标抗载脂蛋白B为检测抗体的氧化型低密度脂蛋白酶联免疫吸附试验。同时测定60例冠心病患者及50例对照人群低密度脂蛋白循环免疫复合物、氧化型低密度脂蛋白水平并进行相关性分析。结果发现,冠心病患者甘油三酯、脂蛋白(a)和载脂蛋白B水平均显著升高;高密度脂蛋白胆固醇和载脂蛋白AI水平降低;且低密度脂蛋白循环免疫复合物(2.74±0.73比1.38±0.78,P<0.001)、氧化型低密度脂蛋白水平(595.5±194.8比440.3±175.0μg/L,P<0.001)均显著升高。低密度脂蛋白循环免疫复合物水平分别同血浆总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、脂蛋白(a)及载脂蛋白B正相关;同载脂蛋白AⅠ负相关。氧化型低密度脂蛋白水平亦分别同血浆总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、脂蛋白(a)及载脂蛋白B正相关。氧化型低密度脂蛋白水平与低密度脂蛋白循环免疫复合物亦呈正相关(r=0.313,p<0.005)。结果提示,氧化型低密度脂蛋白及循环免疫复合物升高是动脉粥样硬化发生的危险因素。

2型糖尿病患者低密度脂蛋白免疫复合物升高与大血管病变的关系

目的探讨2型糖尿病患者低密度脂蛋白免疫复合物与大血管病变的关系。方法随机选择102例2型糖尿病患者:54例伴大血管病变(DM-MA组),48例无大血管病变(DM-MN组),ELISA法测定低密度脂蛋白免疫复合物血清(LDL-ICs)浓度。结果①血清LDL-ICs组间比较:DM-MA组[(78.31±17.53)AU]LDL-ICs较DM-NM组(38.16±5.34)AU显著升高(均P<0.05)。②血清LDL-ICs浓度与其他因素的直线相关回归分析:LDL-ICs与血清BMI、HbA1c、SBP、TC、DBP、TG浓度之间呈现显著正相关性(r值分别为:0.71、0.70、0.66、0.58、0.43和0.37,P<0.05);与血清HDL-C浓度之间呈现显著负相关(r=-0.76,P<0.05);与血清LDL-C浓度之间无明显的相关性(r=0.05,P>0.05)。结论2型糖尿病大血管病变患者的血清LDL-ICs水平显著升高。在2型糖尿病患者中,LDL-ICs与LDL-C之间无显著相关性,而与血清TG、TC、HDL-C、HbA1c之间呈现显著相关性。

β_2-糖蛋白Ⅰ/氧化型低密度脂蛋白复合物的研究进展

β2-糖蛋白Ⅰ与氧化型低密度脂蛋白结合形成2β-糖蛋白Ⅰ/氧化型低密度脂蛋白复合物,它在体内存在与否和高氧化应激状态、炎症有关。自身免疫性疾病以及一些伴有心血管病变的有慢性炎性反应的疾病患者血清β2-糖蛋白Ⅰ/氧化型低密度脂蛋白复合物水平明显升高,自身免疫性疾病患者血清中还可检测到复合物自身抗体的存在。体外实验显示,β2-糖蛋白Ⅰ/氧化型低密度脂蛋白复合物与其自身抗体形成的免疫复合物,通过Fcγ受体途径被巨噬细胞摄取,这可能是导致氧化型低密度脂蛋白被巨噬细胞摄取的主要路径之一。

低密度脂蛋白免疫复合物与2型糖尿病合并冠心病的关系

目的探讨血清低密度脂蛋白免疫复合物(LDL-ICs)在2型糖尿病合并冠心病(DM-CHD)中的作用。方法测定60例2型糖尿病患者和30例正常对照者的LDL-ICs水平,采用酶联免疫吸附法测定。结果DM-CHD组血清LDL-ICs为70.24 AU±12.37 AU与正常对照(NC)组27.56 AU±9.48 AU相比增高明显(P<0.001);较2型糖尿病无冠心病(DM)组45.44 AU±12.32AU亦增高(P<0.05)。2型糖尿病患者LDL-ICs浓度与其他因素的直线相关回归分析显示:LDL-ICs与糖化血红蛋白(HbA1c)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)浓度之间呈显著正相关(r值分别为0.70、0.58、0.37,P<0.05);与血清高密度脂蛋白(HDL-C)浓度之间呈现显著负相关(r=-0.76,P<0.05)。结论2型糖尿病伴有冠心病的患者,血清LDL-ICs显著升高。在2型糖尿病患者中,LDL-ICs与TG、TC、HDL-C、HbA1c之间呈现显著相关性。LDL-ICs可能是糖尿病冠心病的危险因素。

氧化型低密度脂蛋白/β2糖蛋白I/抗β2糖蛋白I抗体复合物促进人脐静脉内皮细胞活性氧生成并诱导其凋亡

目的探讨氧化型低密度脂蛋白/β2糖蛋白I/抗β2糖蛋白I抗体(oxLDL/β2GPI/aβ2GPI)复合物对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡的影响以及ROS活性氧(ROS)在其中的作用。方法分别用β2GPI、 aβ2GPI、β2GPI/aβ2GPI复合物、 oxLDL、 oxLDL/β2GPI复合物、 oxLDL/β2GPI/兔IgG(R-IgG)复合物、 oxLDL/β2GPI/aβ2GPI复合物刺激HUVEC,利用Western blot法检测凋亡相关蛋白BAX、 Bcl2和裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)的蛋白水平;异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双标记结合流式细胞术检测细胞凋亡率、二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)标记结合流式细胞术检测细胞ROS水平; CCK-8法检测各处理组对HUVEC活力的影响;采用抗氧化剂罗布麻宁(apocynin)或二苯基碘氯化物(DPI)预处理后观察ROS水平的改变以及对oxLDL/β2GPI/aβ2GPI复合物诱导的HUVEC凋亡的影响。结果 oxLDL/β2GPI/aβ2GPI复合物能显著降低HUVEC的活力,增加细胞BAX、 c-caspase-3蛋白水平,降低Bcl2蛋白水平,促进HUVEC凋亡; oxLDL/β2GPI/aβ2GPI复合物引起细胞ROS水平升高,抗氧化剂处理后,细胞内ROS水平降低,细胞凋亡减少。结论 oxLDL/β2GPI/aβ2GPI复合物可以通过提高ROS来诱导HUVEC凋亡。

血清高敏C反应蛋白和氧化型低密度脂蛋白自身IgG抗体可作为急性冠脉综合征的预后指标

目的探讨急性冠脉综合征(ACS)患者血清高敏C反应蛋白(hs CRP)和氧化型低密度脂蛋白自身IgG(ox LDL-IgG)水平变化及其与ACS患者预后的相关性。方法分别采用夹心ELISA和间接ELISA检测79例发病6 h以内的ACS患者和40例对照组血清hs CRP与ox LDL-IgG的水平,研究二者在ACS早期的变化规律。对ACS患者随访2年,记录心血管不良事件的发生例数,探讨hs CRP和ox LDL-IgG与ACS患者预后的相关性。结果与对照组相比,ACS组血清hs CRP水平显著升高,ACS组血清ox LDL-IgG反应指数也明显升高。血清hs CRP与ox LDL-IgG水平高的ACS患者2年内不良事件的发生率明显高于血清hs CRP与ox LDL-IgG水平低的患者。结论 ACS患者血清hs CRP与ox LDL-IgG的水平可作为判定ACS患者预后的指标。

人参皂苷Rb_1对氧化型低密度脂蛋白诱导的人单核细胞源树突状细胞免疫成熟的影响

目的研究中药单体人参皂苷Rb1(ginsenoside Rb1,GRb1)对氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,OX-LDL)诱导的人单核细胞源树突状细胞(dendritic cells,DCs)免疫成熟的影响。方法 采用免疫磁珠法分离人外周血CD14+单核细胞,诱导分化为未成熟DCs,随机分为磷酸盐缓冲液(PBS)组、GRb1组、环格列酮组、OX-LDL组、GRb1预处理加OX-LDL组、环格列酮预处理加OX-LDL组。流式细胞仪检测DCs表型(CD40、CD1a和HLA-DR)和吞噬功能变化,酶联免疫吸附法检测细胞培养上清细胞因子白细胞介素12(IL-12)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)浓度变化。结果 与OX-LDL组比较,GRb1预处理加OX-LDL组DCs表面分子CD40(67.40±1.62vs.145.69±14.86)、CD1a(79.64±3.04vs.159.89±6.09)和HLA-DR(46.43±2.85vs.99.33±17.11)的表达显著降低(P<0.01),DCs的吞噬功能明显提高[(88.13±1.06)%vs.(25.90±5.77)%,P<0.01],细胞培养上清液IL-12[(88.65±5.59)ng/Lvs.(716.69±36.35)ng/L]和TNF-α[(133.27±11.98)ng/Lvs.(968.10±36.42)ng/L]水平明显下降(P<0.01)。与OX-LDL组比较,环格列酮预处理加OX-LDL组DCs表面分子表达和炎症细胞因子分泌也明显降低(P<0.01),DCs吞噬功能也明显增强,但与GRb1预处理组比较无明显性差异(P>0.05)。结论 GRb1可明显抑制OX-LDL诱导的DCs的免疫成熟,与西药环格列酮具有相似的功效。

健脾祛痰化瘀方对氧化型低密度脂蛋白诱导血管细胞信号分子钙离子和蛋白激酶C表达的影响

为了探讨健脾祛痰化瘀方在抗氧化型低密度脂蛋白致动脉粥样硬化中对信号转导分子钙离子和蛋白激酶C的影响 ,分别以健脾祛痰化瘀方—沥水调脂胶囊含药血清 (浓度分别为 5 %、10 %和 2 0 % )、氧化型低密度脂蛋白 (10 0mg L)处理人脐静脉内皮细胞和人脐动脉平滑肌细胞 ,以流式细胞仪检测两种细胞胞质游离钙离子浓度 ,以液体闪烁仪检测平滑肌细胞胞膜蛋白激酶C活性。结果发现 ,沥水调脂胶囊含药血清对氧化型低密度脂蛋白引起的内皮细胞、平滑肌细胞胞质游离钙离子浓度升高及平滑肌细胞胞膜蛋白激酶C活性升高有明显的抑制作用 ,其中 2 0 %含药血清作用最为明显。结果提示 ,健脾祛痰化瘀方可能通过调节钙离子、蛋白激酶C两种信号传递分子的变化起抗氧化作用 ,进而抑制内皮细胞凋亡及平滑肌细胞增殖 ,达到阻止动脉粥样硬化发生的作用。

普罗布考对氧化型低密度脂蛋白诱导的人树突状细胞免疫功能成熟的影响及作用机制

目的观察药物普罗布考及血红素加氧酶1小干扰RNA(HO-1 siRNA)干扰后对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人单核细胞源性树突状细胞(DCs)免疫功能的影响,探讨普罗布考抗动脉粥样硬化的潜在机制。方法分离人外周血单核细胞,加入rhGM-CSF和IL-4促其分化为未成熟DC,随机分不同组别于予普罗布考(50 mg/L),低密度脂蛋白(LDL)或ox-LDL 50mg/L干预后,流式细胞术检测DC表型平均荧光强度(MFI)值,FITC-Dextran检测DCs吞噬功能,ELISA检测细胞培养上清液细胞因子(IL-4,TNF-α)浓度,Western blot分析STAT1、phosphoTyr 701 STAT1、HO-1的表达情况。结果 (1)ox-LDL干预组DCs的MFI值(CD1a、CD40、CD86、HLA-DR)显著升高,吞噬功能减弱,促炎因子TNF-α升高,抗炎因子IL-4降低;普罗布考干预组较未干预前MFI值均有降低,吞噬功能升高,TNF-α降低,IL-4升高,差值以ox-LDL干预组最显著(P均<0.05)。(2)HO-1 siRNA干扰后普罗布考组较单纯普罗布考干预组MFI值升高,吞噬功能减弱,TNF-α升高,IL-4降低(P<0.05);Westernblot提示HO-1 siRNA干扰后DCs内Stat1表达减弱,STAT1701磷酸化表达增强。结论 ox-LDL是DCs免疫功能成熟的重要刺激因素,而普罗布考对ox-LDL诱导的DC的免疫成熟有一定的抑制作用,且与HO-1、STAT1/CIITA信号转导通路有相关性,提示这可能是其抗动脉粥样硬化的潜在机制。

动脉粥样硬化兔血管血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1表达及雷米普利的干预作用

目的探讨血管紧张素转化酶抑制剂对动脉粥样硬化家兔血管血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1表达的影响。方法以家兔动脉粥样硬化模型为研究对象,采用免疫组织化学和逆转录聚合酶链反应方法评价动脉粥样硬化家兔血管血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1蛋白和信使核糖核酸表达及口服雷米普利的干预效应。结果高脂组血管血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1蛋白和信使核糖核酸表达均显著增加,雷米普利组血管血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1蛋白和信使核糖核酸表达水平较高脂组显著下降(P均<0.05)。结论结果提示,服用雷米普利可明显抑制动脉粥样硬化病变血管血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1蛋白和信使核糖核酸表达,从而可能在动脉粥样硬化的预防中起重要作用。

脂多糖和氧化型低密度脂蛋白协同促进人内皮细胞表达细胞间黏附分子-1

目的探讨脂多糖(LPS)和氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)是否诱导培养的人脐静脉内皮细胞表达(HU-VEC)细胞间黏附分子-1(ICAM-1)mRNA以及p38蛋白激酶是否参与此过程。方法将生长至汇合的HUVEC分为对照组、LPS组、LPS+SB203580组、ox-LDL组、HUVEC+SB203580组、LPS+ox-LDL组。采用原位杂交检测其细胞间黏附分子-1 mRNA的表达。用免疫细胞化学法检测正常对照组、脂多糖组和氧化型低密度脂蛋白组p38蛋白激酶蛋白的表达。结果培养的HUVEC能表达较低水平的ICAM-1 mRNA。原位杂交显示各实验组的ICAM-1 mRNA明显高于对照组(P<0.01)。免疫细胞化学显示,p38蛋白激酶蛋白在对照组的细胞核阳性表达率为8.3%,当HUVEC暴露于LPS或ox-LDL后,细胞核阳性表达率升至38.5%或48.6%。结论LPS和ox-LDL能诱导HUVEC表达ICAM-1 mRNA,p38蛋白激酶可能参与了该过程。

β2GPI/aβ2GPI通过激活TLR4抑制THP-1巨噬细胞对氧化型低密度脂蛋白的摄取

目的探讨β2糖蛋白I/抗β2糖蛋白I抗体复合物(β2GPI/aβ2GPI)对巨噬细胞脂质摄取功能和B型清道夫受体CD36表达的影响,以及Toll样受体4(TLR4)在该过程中的作用。方法用100 ng/mL佛波酯(PMA)将THP-1人单核细胞诱导为THP-1巨噬细胞,通过形态学变化和1,1'-二十八烷基-3,3,3',3'-四甲基吲哚碳花菁高氯酸盐标记的氧化低密度脂蛋白(DiI-oxLDL)吞噬试验加以鉴定。用RPMI1640培养液、β2GPI、抗β2糖蛋白I抗体(aβ2GPI)和β2GPI/aβ2GPI处理THP-1巨噬细胞,实时荧光定量PCR和Western blot法检测TLR4 mRNA和蛋白水平。用RPMI1640培养液、氧化低密度脂蛋白(oxLDL)、oxLDL联合β2GPI/aβ2GPI和oxLDL联合LPS处理THP-1巨噬细胞,油红O染色观察胞内脂质积累,免疫荧光细胞化学染色法检测CD36的表达,实时荧光定量PCR检测CD36 mRNA水平,Western blot法检测CD36蛋白水平。利用TLR4阻断剂TAK-242(1μg/mL)预处理THP-1巨噬细胞,观察抑制TLR4对上述刺激下THP-1巨噬细胞脂质积累和CD36表达的影响。结果PMA处理后,THP-1细胞呈现巨噬细胞形态并具备脂质吞噬能力;与RPMI1640相比,β2GPI/aβ2GPI处理可显著增加THP-1巨噬细胞TLR4表达;与单独oxLDL处理相比,oxLDL联合β2GPI/aβ2GPI能够抑制THP-1巨噬细胞的脂质积累和CD36表达,阻断TLR4可以部分逆转这一现象。结论β2GPI/aβ2GPI能激活TLR4抑制巨噬细胞对oxLDL的摄取和CD36表达。

氧化型低密度脂蛋白作用下丘脑-垂体条件培养基对内皮细胞丙二醛代谢和NOS表达的影响

目的 :观察氧化型低密度脂蛋白 (ox LDL)作用下丘脑垂体后条件培养液对内皮细胞丙二醛 (MDA)代谢和NOS表达的变化 ,探讨下丘脑血管中枢对动脉粥样硬化形成的影响。方法 :按ox LDL诱导下丘脑 垂体 (ox HP)条件培养液 ,培养正常及受损内皮细胞。收集上清液检测MDA含量 ,细胞用免疫细胞化学法检测NOS表达。结果 :( 1 )MDA含量 :实验组对正常内皮细胞下调 ;而对受损内皮细胞ox H和ox HP组的下调作用明显减弱。 ( 2 )NOS表达 :ox H和ox HP组对正常内皮细胞上调 ;对受损内皮细胞下调。结论 :ox LDL作用下丘脑垂体后条件培养液对正常内皮细胞起抗损伤作用和保护调节作用 ;对受损内皮细胞的抗损伤作用和保护机制减弱。

氧化型低密度脂蛋白自身抗体与老年高血压患者的相关性探讨

目的 探讨氧化型低密度脂蛋白 (ox L DL )自身抗体与老年高血压病患者之间的关系。方法 应用酶联免疫法检测 1 1 9例年龄≥ 60岁 (老年组 )和 81例年龄 <60岁 (非老年组 )高血压患者循环血中 ox LDL自身抗体 ,并同步测定 ox LDL、血脂水平。结果 老年组高血压患者血清自身抗体 Ig G(2 3.1 5± 2 .91 ) U/ L显著高于非老年组 (1 0 .2 1± 1 .1 1 ) U/ L,P<0 .0 5;血浆 ox LDL (44.96± 4.39) mg/ L与非老年组 (39.32± 4.49) mg/ L无显著性差别 (P>0 .0 5) ;且自身抗体 Ig M在两组间 (4.56± 0 .67) U/ L、(7.71± 4.43) U/ L无显著性差别 ,P>0 .0 5;Ig G型自身抗体与 ox L DL 及血甘油三酯、总胆固醇均无相关性。结论 ox LDL自身抗体 Ig G在老年高血压病患者中明显升高 ,可能与动脉粥样硬化有关 ,但与 ox LDL及血甘油三酯、总胆固醇无明显相关。

氧化型低密度脂蛋白诱导小鼠巨噬细胞系RAW264．7向树突样细胞形态分化

目的:探讨氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)能否诱导成熟的巨噬细胞转化为树突状细胞。方法:小鼠巨噬细胞系RAW264．7经oxLDL干预后,相差显微镜动态观察细胞形态变化,流式细胞仪检测细胞表面标志物。结果:oxLDL诱导48h后RAW264．7细胞发生树突样细胞形态改变,并表达与树突状细胞免疫成熟和激活有关的细胞表面标志物,CD40、CD86、CD83、MHC ClassⅡ和CD1d分别上调约70％、90％、88％、76％和67％。oxLDL的作用具有剂量依赖性和时间依赖性,在10μg／ml浓度下诱导48 h最佳。结论:oxLDL能够诱导成熟的巨噬细胞分化为树突状细胞,可能加剧动脉粥样硬化炎症和免疫反应。

冠心病患者血清抗氧化型低密度脂蛋白抗体水平与临床表现的关系

目的 探讨冠心病患者外周血抗氧化型低密度脂蛋白抗体水平的临床意义.方法 研究对象按照临床表现分为稳定型心绞痛组、不稳定型心绞痛组、急性心肌梗死组和对照组.酶联免疫吸附法测定血清中IgG型抗氧化型低密度脂蛋白抗体水平.Gemini评分对患者的冠状动脉狭窄程度进行定量测定.结果 冠心病患者抗氧化型低密度脂蛋白抗体水平显著高于对照组,以急性冠状动脉综合征患者尤为显著,抗氧化型低密度脂蛋白抗体升高具有延迟效应,以入院后7～10天的水平最高,各组之间的差异明显.冠心痛患者冠状动脉狭窄程度在各组之间差异无显著性.抗氧化型低密度脂蛋白抗体水平与冠状动脉狭窄程度之间无显著相关性.结论 抗氧化型低密度脂蛋白抗体水平在不同冠心病临床类型之间存在显著差异,提示自身免疫在动脉粥样硬化疾病的转归中发挥重要作用.抗氧化型低密度脂蛋白抗体有望成为独立于冠状动脉狭窄程度外的评估动脉粥样硬化风险的指标.