液相色谱-串联质谱法同时测定人血浆中的还原型和氧化型辅酶Q10

目的建立一种快速、灵敏的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法用于同时测定人血浆中的还原型辅酶Q10(泛醇-10)和氧化型辅酶Q10(泛醌-10),并实现临床应用。方法血浆标本经甲醇沉淀蛋白,以辅酶Q9为内标,使用Kinetex C18(3.0×50 mm,2.6μm,100?)色谱柱等度洗脱进行柱分离。采用电喷雾离子源正离子化方式,以多反应监测方式进行质谱定量检测。考察该方法的特异性、标准曲线与定量下限、精密度与正确度、稳定性等。结果泛醇-10和泛醌-10的保留时间分别为1.07和1.81 min,单个样品分析时间为3.2 min。泛醇-10和泛醌-10分别在50~2000和1~100 ng/mL的线性范围内具有良好的线性关系,且定量下限均可达1 ng/mL。批内和批间精密度均≤9.7%,正确度为96.2%~103.9%,该方法具备较高的正确度和精密度。室温放置6 h、4~8℃冷藏5 d、-20℃冷冻放置30 d存放条件不影响对分析物浓度进行准确测定。结论该方法分析时间短,灵敏度较高,血浆用量少,适用于血浆标本中泛醇-10和泛醌-10的血药浓度监测及准确测定。

阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征及其相关高血压患者血浆还原型谷胱甘肽与氧化型谷胱甘肽和血清还原型辅酶Ⅱ与氧化型辅酶Ⅱ水平的变化

目的观察阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)及阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征相关高血压(OSAHAHT)患者血浆还原型谷胱甘肽(GSH)、氧化型谷胱甘肽(GSSG)及血清还原型辅酶Ⅱ(NADPH)、氧化型辅酶Ⅱ(NADP+)水平。探讨OSAHS患者氧化还原态的变化。方法选择OSAHS患者39例,其中无并发症的OSAHS患者20例,OSAHAHT患者19例,;健康对照组19例,应用比色法和酶联免疫吸附法测定血浆GSH、GSSG,血清NADPH、NADP+水平。结果3组受检者血浆GSH、GSSG及血清NADPH、NADP+水平比较,差异均有统计学意义(P<0.01),其中OSAHS患者与对照组比较,OSAHAHT与OSAHS患者组比较,血浆GSH/GSSG、血清NADPH/NADP+比值均降低(P<0.05),并且与反映睡眠呼吸暂停严重程度的指标均呈负相关(P<0.05)。结论OSAHS患者存在GSH/GSSG、NADPH/NADP+比值的变化,且与OSAHS的病情严重程度相关;氧化还原态的变化在OSAHAHT患者中更明显。

可见光直接光度法测定硫代氧化型辅酶

建立了可见光直接光度法测定硫代氧化型辅酶。方法为通过确定测定试剂中各组分最佳含量,建立了一种运用3а-HSD偶联的酶法光度法测定Thio-NAD＋。本法线性范围为0~2 mmol∕L,平均回收率为102.67%,批内变异系数（CV）和批间变异系数分别为1.50%~2.49%和2.44%~4.04%,线性回归方程和相关系数分别为Y=0.0467X＋0.0033,r=0.9985。本法具有选择性好、灵敏度高、测定简便等特点,能真实反映Thio-NAD＋浓度,对于提高Thio-NAD＋检测的效率、结果的准确性都具有重要意义。

麦尔多拉蓝作为电子介体的一次性血清酒精生物传感器

基于丝网印刷技术制备一次性碳电极，用Nation固定麦尔多拉蓝（MS）作为电子介体，通过交联法用戊二醛将乙醇脱氢酶和氧化型辅酶Ⅰ固定于Nation-MB修饰的电极上，制备一次性血酒精生物传感器。该传感器表现出良好的特异性、灵敏度和准确性。传感器响应电流与血清酒精浓度在2．0×10^-4～2．5×10^-3mol／L之间呈现良好的线性关系；检出限为1．3×10^-4mol／L，达到95％稳态响应时间不超过20s。探讨了pH、缓冲液、温度及干扰物质等对一次性血酒精生物传感器的影响。将传感器用于血清酒精实际样品的测定，取得了满意的结果。

Visfatin/PBEF/Nampt的研究进展

Visfatin是新发现的由内脏脂肪细胞分泌的一种脂肪细胞因子,可结合并激活胰岛素受体的非胰岛素结合部位,激活胰岛素受体信号通路,从而模拟胰岛素作用,降低机体血糖。这一因子还能够促进脂肪组织的分化、合成及积累。Visfatin cDNA序列与前B细胞克隆增强因子(PBEF)相同,Visfatin在细胞内尚发挥尼克酰胺磷酸核糖转移酶(Nampt)的作用,通过调节氧化型辅酶I(NAD)的生成从而调控Sirt1的活性,参与细胞的增殖、分化及调亡等过程。

一种测定乙醇脱氢酶活性的循环催化流动分析法

基于乙醇(EtOH)/乙醇脱氢酶(ADH)/氧化型辅酶I(NAD+)催化反应体系,建立了一种用于ADH活性测定的循环催化流动分析法(RCFA),并优选该测定体系的实验条件,得到如下参数:Tris-HCl缓冲液浓度(pH 8.9)为0.1 mol/L,EtOH的浓度为15.6 mol/L,NAD+浓度为9.0 mmol/L,ADH用量20μL/次,反应液流速为0.98 mL/min,反应液体积为2 mL;ADH的测定范围为0.6～50 U/L,检出限为0.14 U/L,相对标准偏差≤1.3%(n=11)。RCFA法具有测定过程简便、快速、自动化特点,能对ADH催化反应过程进行连续循环检测,可对ADH活性变化实现动态研究。RCFA法使反应液循环不但节省了大量的试剂和酶量、降低了测定成本,而且循环测定时不存在人为误差,提高了测定结果的准确度。

芯片毛细管电泳检测痕量酶活性的初步探讨

微芯片技术是基于微机电加工技术(MEMS)工艺,在芯片上完成电泳检测过程的新型技术.利用自制的微流控芯片及激光诱导荧光系统建立了痕量乳酸脱氢酶(LDH)活性的检测方法.以pH9.4,75mmol/L硼酸为芯片电泳缓冲液,9.73μmol/L乳酸钙为添加剂,整个电泳过程4min结束,利用该法测得LDH检测限(S/N=3)为6×10-3U/L,出峰时间和峰面积的相对标准偏差分别为5.32%和3.17%,该法操作过程简单,检测灵敏度高,在临床痕量酶检测中具有较好的应用前景.

血乳酸快速测定试剂盒的研制

根据乳酸与丙酮酸这一可逆反应，加入肼类化合物可除去丙酮酸，使反应顺向进行的特点，建立了以ＮＡＤＨ浓度来计算血乳酸浓度的方法。

基于脑内能量调节的人参对东莨菪碱致痴呆小鼠记忆障碍改善作用

目的:研究人参对东莨菪碱致痴呆小鼠学习记忆障碍改善的可能作用特点。方法:90只SPF级ICR小鼠经水迷宫筛选后随机分为6组,即空白对照组、模型对照组、阳性对照多奈哌齐3 mg/kg组、人参水煎液3. 21、1. 61、0. 8 g/kg剂量组。每天上午9点测体重后腹腔注射东莨菪碱造模,下午2点灌胃给药,连续16 d。实验结束时,经Morris水迷宫观察小鼠的学习记忆能力。处死动物,取脑,经HE和尼氏染色观察海马病理改变(n=6),同时ELISA法测定脑组织中ATP、H2O2、NADP、ACh、Ach E水平。结果:与空白对照组相比,模型对照组小鼠水迷宫穿越平台次数显著降低,H2O2、Ach E水平显著上升,ATP、ACh水平明显降低(P <0. 05或P <0. 01),海马神经元损伤较重,细胞排列紊乱;与模型对照组相比,多奈哌齐3 mg/kg、人参水煎液0. 8、1. 61、3. 21 g/kg给药后可使水迷宫穿越平台次数明显增加,H2O2、Ach E、NADP水平明显降低(P <0. 05或P <0. 01),海马神经元损伤有效改善,细胞排列整齐有序。结论:人参可以通过下调大脑内H2O2引起的氧化应激反应、调节胆碱能神经递质活性及修复海马神经元的损伤来改善痴呆小鼠的学习记忆障碍。