内质网应激与氧化应激在肺纤维化中的作用及中药丹芍化纤胶囊对它的影响

目的:观察内质网应激标志蛋白GRP78和氧化应激指标在博来霉素诱导的肺纤维化中的变化及中药丹芍化纤胶囊对它的影响。方法:选取SD大鼠30只,随机分为正常对照组(正常组)、肺纤维化模型组(模型组)和丹芍化纤胶囊治疗组(丹芍组),每组各10只。正常对照组气管内滴注生理盐水,模型组和丹芍组气管内一次性灌注博来霉素5 mg/kg诱导肺纤维化,丹芍组于造模第2天给予丹芍化纤胶囊混悬液灌胃0.8 g/(kg.d)治疗,正常组及模型组则给予等量生理盐水灌胃。实验第28天称大鼠体重,处死各组大鼠,称肺湿重并收集肺组织,行HE和Masson染色观察肺组织病理变化;比色法检测肺组织MDA及SOD变化;采用免疫组织化学方法检测肺组织中GRP78蛋白的表达情况。结果:①与正常组比较,模型组大鼠肺组织中MDA含量及GRP78表达明显升高,而SOD酶活性则显著下降。②与模型组比较,丹芍组大鼠肺组织中MDA含量及GRP78蛋白表达明显降低,但仍较正常组高;SOD酶活性显著回升,但未恢复正常水平。结论:丹芍化纤胶囊可在一定程度上减轻博来霉素诱导的肺泡炎症反应及肺纤维化进展,对肺纤维化具有一定的治疗作用。丹芍化纤胶囊对肺纤维化的干预机制可能与丹芍化纤胶囊提高肺组织SOD酶活性,对抗氧化应激以及抑制肺组织中GRP78的表达,减轻内质网应激反应有关。

氧化应激与内质网应激在大鼠实验性肝纤维化中的作用

目的:观察大鼠实验性肝纤维化过程中内质网应激标志蛋白GRP78和氧化应激指标SOD及MDA的表达变化。方法:选取Wistar大鼠20只,随机分为正常对照组及肝纤维化模型组,每组各10只。肝纤维化模型组采用皮下注射40%CCl4植物油溶液制备肝纤维化动物模型,正常对照组皮下注射等量植物油,造模时间为8周。实验结束时称大鼠体重,处死各组大鼠,称肝脏湿重并收集肝组织,行HE染色观察肝组织病理变化;比色法检测肝组织MDA及SOD变化;采用免疫组织化学的方法检测肝组织中GRP78蛋白的表达情况。结果:与正常组比较,模型组大鼠肝组织中MDA含量及GRP78表达明显升高,而SOD酶活性则显著下降,与对照组比较有显著性差异(P<0.01)。结论:氧化应激和内质网应激可能参与了大鼠实验性肝纤维化的形成过程。

β-羟基丁酸通过抑制大脑神经炎症和氧化应激改善小鼠PTSD样行为

目的:探讨β-羟基丁酸(β-hydroxybutyrate,BHB)对单一连续应激(single prolonged stress,SPS)诱导的小鼠创伤后应激障碍(posttraumatic stress disorder,PTSD)样行为的影响及可能机制。方法:利用C57BL6/J小鼠构建PTSD模型,通过条件恐惧反射(fear conditioning response,FCR)、高架十字迷宫(elevated plus maze,EPM)、旷场检测(open field test,OFT)等行为学实验评价BHB对SPS小鼠PTSD样行为的影响,应用大脑炎症因子、氧化-硝基化因子、脑原性生长因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)检测等方法评价BHB干预SPS小鼠PTSD样行为的可能机制。结果:(1)以300 mg/kg和600 mg/kg进行为期12 d的BHB处理能改善由SPS诱导的小鼠PTSD样行为,包括抑制:由SPS引起的小鼠在背景性和提示性FCR实验中的凝滞不动时间增加,由SPS引起的小鼠在EMP检测中开放臂进入次数和逗留时间的减少,及由SPS引起的小鼠在OFT检测中的中心区域逗留时间和活动距离的减少。(2)BHB慢性处理(600 mg/kg,12 d)不影响SPS小鼠自主活动。(3)BHB慢性处理(600 mg/kg,12 d)能抑制由SPS引起的小鼠海马和前额皮层白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)等炎性介质的水平升高。(4)BHB慢性处理(600 mg/kg,12 d)能抑制由SPS引起的小鼠海马和前额皮层中反映氧化-硝基化应激因子的变化,包括抑制:由SPS引起的小鼠海马和前额皮层谷胱甘肽(glutathione,GSH)减少及由SPS引起的小鼠海马和前额皮层丙二醛(malondialdehyde,MDA)和亚硝酸盐增加。(5)BHB慢性处理(600 mg/kg,12 d)能抑制由SPS引起的小鼠海马和前额皮层BDNF水平下降。结论:BHB具有缓解SPS小鼠PTSD样行为的作用,其机制可能与其抑制大脑神经炎症反应和氧化-硝基化应激有关。

硝化应激参与介导缺血性脑损伤的研究进展

硝化应激(nitrosative stress)指机体对活性氮族(reactive nitrogen species,RNS)的高应激性,主要表现为病理过程中过氧亚硝基阴离子(peroxynitrite,ONOO-)过量生成,从而诱发细胞内蛋白质酪氨酸硝基化等分子事件,并最终导致细胞损伤或凋亡级联反应。缺血性脑损伤病理过程中,硝化应激稳态失衡与血脑屏障及神经血管单元破坏密切关联,近年来以抗硝化应激来进行神经血管保护的药物研究受到关注。通过减少ONOO-生成和清除过多的ONOO-来对抗硝化应激损伤将有可能成为防治缺血性脑血管病的策略之一。

蛋白质硝基化修饰在心力衰竭发生发展中的作用

硝基化应激是指由一氧化氮或由其衍生的活性氮(RNS)与活性氧(ROS)联合发生的生物化学反应。在应激状态下,机体产生高浓度的超氧阴离子(O 2-)与一氧化氮,二者反应可生成过氧亚硝酸盐,使蛋白质酪氨酸残基发生硝基化修饰,生成3-硝基酪氨酸(3-NT)。3-NT通常用来反映蛋白质硝基化修饰的水平。蓄积的3-NT导致DNA损伤,引起细胞死亡,损害心脏结构,进而造成心脏功能障碍。心力衰竭是心血管疾病终末阶段出现的临床综合征,发病原因多样,具有发病率高、预后差的特点,是全世界范围内重要的公共卫生问题之一。在心力衰竭病理过程中,心脏的硝基化应激水平明显升高,大量蛋白质发生硝基化修饰,3-NT生成随之增加。本文对蛋白质硝基化修饰在心力衰竭发生发展中的作用做一综述。

一氧化氮间接作用机制的研究进展

NO本身并无直接的毒性作用 ,相反 ,它在体内常发挥生理或保护作用。而“NO的毒性作用” ,主要是由于大量诱生的NO与体内同时大量产生的O- 2 等活性氧类反应 ,生成ONOO- 或N2 O3 等一系列物质 ,由二者分别介导氧化损伤或亚硝基化损伤 ,因而是NO的间接作用。而NO的间接作用到底是通过ONOO- 还是N2 O3 途径来介导 ,取决于NO与O- 2 的局部相对浓度。若NO与O- 2 的局部浓度几乎相等 ,则生成ONOO- ,由ONOO- 来介导 ;而若NO的浓度高出O- 2 浓度较多 ,则主要生成N2 O3 ,由N2 O3

Keap1蛋白硝基化修饰参与脑缺血后血管内皮细胞损伤机制研究

目的：目前研究认为脑微血管内皮细胞发生硝化应激损伤作为脑血管病病理过程中的早期重要事件之一，参与了血脑屏障结构和功能的破坏，从而最终导致神经血管单元损伤。本研究旨在探讨脑缺血病理过程中硝化应激介导Keap1／Nrf2抗氧化失衡参与脑血管内皮细胞缺血损伤内在关联机制。

内质网应激与氧化应激在百草枯致大鼠肺纤维化中的作用及沙苑子总黄酮的影响

肺纤维化（pulmonary fibrosis）是由多种致病因素导致肺损伤后出现的一种严重并发症，目前对其发病机制尚未完全明确，常常因弥漫性肺泡炎症、肺成纤维细胞增殖及细胞外基质过度沉积引起严重的临床症状。

口服二苯胂酸在小鼠小脑蒲肯野细胞诱发氧化和氮化应激

为了研究口服化学战剂降解产物二苯胂酸(DPA)导致小脑功能异常与诱发小鼠小脑蒲肯野细胞氧化和氮化应激之间的关系,利用硫代巴比妥酸反应物(TBARS)法和免疫组织化学方法检测脑组织丙二醛(MDA)和3-硝基酪氨酸(3-NT)的变化情况.同时,通过在体外合成3价DPA的模型化合物二苯胂酸碘(DPI),并用Western-blot检测3-NT的生成.研究发现,在小鼠一次口服15mg.kg-1DPA以及连续5d口服5mg.kg-1DPA的情况下,小脑组织TBARS上升,蒲肯野细胞MDA和3-NT染色阳性.体外实验检测到DPI和NO反应可以生成3-NT,这表明DPA会导致小鼠小脑功能异常,这与其在体内代谢过程中产生的砷相关活性物质在小脑蒲肯野细胞诱发氧化和氮化应激密切有关.

NOXs在肝纤维化中的作用机制研究

还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase,NOXs)在肝纤维化中,有助于活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)的产生,进而介导内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)的发生及IRE1α-XBP1(inositol-requiring enzyme 1 alpha,IRE1α;X-box binding protein 1,XBP1)信号通路的激活。ROS是指分子氧(O_2)单电子还原后生成的化学性质更为活跃的一类氧代谢产物及其衍生物,包括超氧阴离子(O_2^-)、羟自由基(·OH)、过氧化氢(H_2O_2)以及次氯酸根离子(OCl^-)等。它们可以与生物体内大量分子,包括无机分子、蛋白、脂质、碳水化合物和核酸广泛互作,介导氧化还原修饰,引起脂质过氧化,进而引起肝细胞损伤。另可作为第二信使影响包括肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)在内的各种细胞的信号转导,导致HSC的异常活化和增殖,分泌大量胞外基质(extracellular matrix,ECM),进而促使肝细胞凋亡并诱发肝纤维化。该文将对近年来NOXs在肝纤维化中的作用机制研究作一综述,旨在为抗肝纤维化的研究提供新的视角和治疗靶标。

4-PBA治疗单侧肾输尿管结扎小鼠肾脏纤维化的机制探讨

目的:观察4-苯基丁酸(4-PBA)对肾纤维化的疗效与机制。方法:雄性C57BL/6J小鼠行单侧输尿管梗阻(UUO)手术后分成2组(UUO组与4-PBA组),4-PBA组给予4-PBA(300 mg/kg)灌胃。大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)给予4-PBA和TGF-β处理。Western blot检测Fibronectin、p47phox、CollagenⅣ和GRP78蛋白的表达量。结果:天狼星红染色结果显示,4-PBA减轻UUO模型小鼠的胶原沉积,Western blot显示,相较于UUO组,4-PBA治疗组肾皮质Fibronectin、CollagenⅣ和GRP78蛋白表达降低(P<0.05)。在NRK-52E细胞,TGF-β剂量依赖性增加Fibronectin和GRP78蛋白表达量,4-PBA(2 mmol/L)减轻TGF-β(10 ng/mL)诱导的Fibronectin、p47phox、CollagenⅣ和GRP78蛋白高表达(P<0.05)。结论:4-PBA可通过减轻内质网应激和氧化应激来治疗肾纤维化。

糖尿病视网膜病变发病机制及潜在治疗靶点研究最新进展

糖尿病(DM)的患病率在全球范围内不断增加,DM的高发促使糖尿病视网膜病变(DR)患者数量激增,DR目前已成为工作年龄人群视力损害和失明的主要原因。DR的进行性发展,涉及许多分子、生物化学机制,而且各种机制之间相互作用,共同影响着视网膜血管及细胞的内环境稳态。随着对DR发病机制的深入研究,越来越多的分子靶点被发现。通过研究DR的发病机制,从中寻找潜在的治疗靶点,对于DR的早期预防、治疗以及防止疾病进一步进展,具有重大临床意义。本文对近年来DR的发病机制及潜在治疗靶点的研究进展进行简要综述。

益气活血颗粒抗肝纤维化的分子机制研究

【目的】探讨益气活血颗粒对大鼠肝纤维化的治疗作用及机制。【方法】将60只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、异甘草酸镁组、益气活血颗粒组及罗格列酮组、益气活血颗粒+罗格列酮组[后2组仅进行过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)蛋白检测],每组10只。除正常组,其他各组大鼠采用四氯化碳(CCl_(4))法诱导构建肝纤维化模型。对应治疗10周后,苏木素-伊红(HE)染色法观察肝组织病理变化,采用放射免疫分析法检测血清肝纤维化指标透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)和Ⅳ型胶原(CⅣ)水平,采用末端脱氧核苷酸标记(TUNEL)法检测肝细胞凋亡,应用试剂盒检测肝组织中氧化应激相关指标超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)水平,Western Blot法检测肝组织内质网应激相关指标葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、肌醇需求酶1α(IRE1α)、活化转录因子6(ATF6)蛋白表达,免疫组织化学法检测肝组织PPARγ蛋白阳性表达。【结果】与正常组比较,模型组可见明显肝纤维化病理改变,HA、PCⅢ、CⅣ水平显著升高(P<0.05),SOD、GSH活性显著降低(P<0.05),MDA含量显著增加(P<0.05),肝细胞凋亡率升高(P<0.05),GRP78、PERK、IRE1α、ATF6蛋白表达水平升高(P<0.05),PPARγ蛋白阳性表达水平降低(P<0.05);与模型组比较,益气活血颗粒组和异甘草酸镁组大鼠肝纤维化病理得到明显改善,HA、PCⅢ、CⅣ水平显著降低(P<0.05),SOD、GSH活性显著升高(P<0.05),MDA含量显著减少(P<0.05),肝细胞凋亡率降低(P<0.05),GRP78、PERK、IRE1α、ATF6蛋白表达水平降低(P<0.05),PPARγ蛋白阳性表达水平升高(P<0.05);益气活血颗粒组上述各指标的作用效果均优于异甘草酸镁组(均P<0.05)。其中在PPARγ指标方面,益气活血颗粒+罗格列酮组其蛋白阳性表达水平高于罗格列酮组(P<0.05)。【结论】益气活血颗粒可显著改善CCl_(4)诱导的大鼠肝纤维化,其机制与抑制氧化应激、内质网应激反应及促进PPARγ活化,进而减轻肝细胞凋亡有关,体现了“扶正祛瘀”治则。

百草枯中毒大鼠肺纤维化与内质网应激的关系

目的探讨百草枯（PQ）中毒后大鼠发生肺纤维化与内质网应激的关系。方法将100只雄性sD大鼠按随机数字表法分为对照组（10只）和染毒组（90只），20％PQ溶液灌胃染毒后2、6、12、24、48、72、96、168、336h处死动物取肺组织，苏木素-伊红（HE）染色和Masson染色观察肺组织病理学变化；免疫组化检测糖调节蛋白78（GRP78）表达；测定肺组织丙二醛（MDA）含量；提取肺组织总蛋白，用蛋白质免疫印迹试验（Westernblotting）检测α-平滑肌肌动蛋白（d-SMA）和GRP78的蛋白表达。结果HE及Masson染色结果提示染毒组出现肺组织炎性细胞浸润和胶原纤维沉积，随中毒时间延长，肺纤维化逐渐加重。染毒后2hMDA水平及α-SMA、GRP78蛋白表达均较对照组明显升高[MDA（nmol／mg）：1．38±0．18比0．85±0．05，α-SMA：0．23±0．01比0．14±0．03，GRP78：0．72±0．02比0．37±0．06，P〈0．05或P〈0．01]，随时间延长，MDA水平及α-SMA蛋白表达逐步升高，GRP78蛋白表达于染毒72h后显著下降。结论PQ中毒大鼠肺内质网应激标志性蛋白GRP78和成纤维细胞表型标志物α-SMA均增高，提示内质网应激在PQ中毒引起的肺纤维中发挥重要作用。

纳米颗粒物呼吸暴露致心血管系统损伤的硝化应激作用及可能机制

纳米材料和大气颗粒物对环境与健康的影响是公众关注的焦点,也是生物医学领域的研究热点。纳米颗粒物主要是指粒径在100 nm以下的粒子,包括人工合成的纳米材料(1~100 nm)和自然环境中的空气动力学直径在100 nm以下的超细颗粒物。硝化应激(nitrosative stress)指机体对活性氮簇(reactive nitrogen species,RNS)的高应激性,主要表现为病理过程中过氧亚硝基阴离子(peroxynitrite,ONOO^-)过量生成,从而诱发细胞内蛋白质酪氨酸硝基化等,并最终导致细胞损伤。纳米颗粒物呼吸暴露诱导心血管系统损伤过程中,硝化应激稳态失衡与纳米颗粒穿透气血屏障进入血液循环密切关联,通过减少ONOO^-生成和清除过多的ONOO^-来拮抗硝化应激损伤将有可能成为防治空气颗粒物污染诱导心血管疾病发生发展的策略之一。

糖尿病视网膜病变发病机制及潜在治疗研究进展

随着人们生活方式以及饮食结构的改变,糖尿病逐渐成为全球公共卫生问题。世界卫生组织报道最新的全球糖尿病患者多达4.22亿人,预计到2040年将达6.42亿人,而中国糖尿病患者数将位居世界第一。糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)是糖尿病最常见的眼部并发症,常发生在1型糖尿病患者患病5 a内以及所有的2型糖尿病患者患病20 a后,已成为全球主要致盲原因。如何阻止或减缓DR进展,将成为全球防控可致盲眼病的关键。本文对DR早期的发病机制及目前潜在的治疗策略进行简要综述,以期有助于相关领域的进一步研究和寻找更多有效的DR防治方法。

单宁酸对糖尿病大鼠肾组织和肾小球系膜细胞培养上清中8-OHdG及3-NT含量的影响

目的:观察单宁酸(TA)对糖尿病(DM)模型大鼠肾脏形态和功能的影响,并从氧化应激、亚硝基化应激角度探讨单宁酸改善作用的机制。方法:6周龄健康雄性Wistar大鼠68只,随机选取8只作为正常对照组,其余60只给予高糖高脂饲料喂养4周后以链脲佐菌素(STZ)按52 mg/kg体重单次腹腔注射制造糖尿病大鼠模型,造模成功的大鼠进一步随机分为模型组、氨基胍(Aminoguanidine,AG)组、单宁酸低剂量组、单宁酸高剂量组。氨基胍组及单宁酸低高剂量组分别腹腔注射AG[40 mg/(kg·d)]及单宁酸[20及30 mg/(kg·d)],正常对照组和模型组给予生理盐水[30 mg/(kg·d)],10周后处死大鼠取材。HE染色观察DM大鼠肾脏形态学变化,进行肾脏功能相关生化指标检测,ELISA法检测各组大鼠肾组织匀浆8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)及3-硝基酪氨酸(3-NT)含量;同时体外培养肾小球系膜细胞,分别用高浓度葡萄糖(30 mmol/L)及AGEs(250 mg/L)处理,同时用不同浓度单宁酸(10、20、40及80μmol/L)进行干预,设立相应对照组,培养48 h后留取培养上清,ELISA法检测细胞各条件培养基中8-OHdG及3-NT的含量。结果:单宁酸可有效改善DM大鼠肾脏病理改变及改善肾功能。DM模型大鼠肾组织匀浆中以及高糖及AGEs作用下GMC培养上清中8-OHdG及3-NT的含量均显著增多。单宁酸可减少DM大鼠肾组织及高糖、AGEs作用下GMC培养上清中8-OHdG及3-NT的含量。结论:单宁酸可能通过降低肾脏氧化应激、亚硝基化应激机制从而改善糖尿病大鼠肾脏结构和功能的损害。

梓醇减轻心肌缺血/再灌注损伤及机制

目的:观察梓醇是否可减轻急性心肌缺血/再灌注(MI/R)损伤。方法:建立大鼠MI/R模型,随机给予生理盐水和梓醇预处理,全程检测大鼠的心脏功能。再灌注末检测大鼠心肌梗死(MI)面积、心肌细胞凋亡指数、血清肌酸激酶和乳酸脱氢酶的活性、心肌组织过氧亚硝基阴离子(ONOO-)、一氧化氮(NO)、超氧化物及超氧化物歧化酶(SOD)的含量。结果:梓醇预处理可明显改善心脏功能,减少心肌梗死面积和心肌细胞的凋亡与坏死(均P<0.05)。同时,ONOO-和超氧化物的产生也显著减少(P<0.05);NO和SOD的含量显著增加(均P<0.05)。缺血前给予ONOO-清除剂尿酸(UA)显著减少ONOO-生成及MI范围(P<0.05),但不能额外增强梓醇降低ONOO-及减小MI范围的效应(MI/R+梓醇+UA组vs.MI/R+梓醇组)。结论:梓醇可抑制ONOO-形成,从而减轻MI/R损伤,其机制可能与增加NO水平及减少超氧化物生成有关。

神经酰胺代谢紊乱在非酒精性脂肪性肝病发生发展中的作用

非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是目前全球广泛流行的一种慢性肝脏疾病。脂代谢紊乱是NAFLD的主要病理特征,与脂代谢紊乱密切相关的胰岛素抵抗、内质网应激、线粒体氧化应激、炎症反应、纤维化等共同参与NAFLD的病理过程。神经酰胺是构成真核细胞生物膜的重要脂质。NAFLD常伴随肝脏总神经酰胺水平发生改变。神经酰胺代谢紊乱可推动NAFLD的发生发展,不同类型神经酰胺在NAFLD发生发展中的作用可能存在差异,改善神经酰胺代谢有望成为NAFLD防治的新策略。

剪切型X盒结合蛋白1在单侧输尿管结扎小鼠肾间质纤维化中的作用（英文）

剪切型X盒结合蛋白1(spliced X-box binding protein 1,XBP1S)是内质网应激关键信号分子。有研究表明XBP1S在肾脏系膜细胞具有抗氧化应激和抗凋亡作用,而氧化应激是肾纤维化发生发展重要因素。缬沙坦(valsartan)具有改善肾纤维化作用。本研究旨在探讨valsartan能否通过XBP1S进而影响肾间质纤维化发展。C57BL/6J小鼠行左侧输尿管结扎(unilateral ureteral obstruction,UUO)制作肾纤维化模型,valsartan组于造模前1 d起每天给予valsartan(20 mg/kg)灌胃,UUO组和对照组给予等容积生理盐水灌胃,于手术后第7天处死动物,取左侧肾。HE、Masson和天狼星红(Sirius red)染色观察肾间质纤维化;免疫组化染色观察XBP1S在肾间质表达;Western blot检测XBP1S、纤维连接蛋白(fibronectin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、BAX和BCL2蛋白水平;实时荧光定量PCR检测NADPH氧化酶亚基p47-phox与p67-phox m RNA水平。结果显示,与对照组相比,UUO组XBP1S蛋白水平明显降低,valsartan明显升高UUO小鼠XBP1S蛋白水平;HE、Masson和Sirius red染色结果显示valsartan明显改善UUO小鼠肾间质纤维化;Western blot结果显示valsartan明显降低UUO小鼠fibronectin、BAX/BCL2、α-SMA蛋白水平。实时荧光定量PCR结果显示:UUO组p47-phox与p67-phox m RNA水平明显较对照组升高,相比较于UUO组,valsartan明显降低UUO小鼠p47-phox与p67-phox m RNA水平。以上结果提示,XBP1S蛋白水平下调与UUO模型的肾间质纤维化有关,其机制可能与XBP1S抗氧化应激相关。