Fisetin对缺血再灌注肝脏氧化应激性损伤的保护作用

目的探讨3,3′4′7-四羟基黄酮(Fisetin)减轻缺血再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)肝脏氧化应激性损伤的作用及可能机制。方法18只C57BL/6雄性小鼠随机分为Sham组、I/R组和I/R+Fisetin组,各6只。I/R组和I/R+Fisetin组小鼠建立肝脏I/R模型,Sham组仅进行开关腹手术。I/R+Fisetin组小鼠经腹腔注射Fisetin 50 mg·kg-1提前1 h预处理;Sham组和I/R组小鼠术前不进行药物干预。检测3组小鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平;苏木精-伊红(HE)染色观察3组小鼠肝脏组织病理学变化;2′,7′-二氯荧光黄双乙酸盐(2,7-dichlorodi-hydrofluorescein diacetate,DCFH-DA)荧光探针法检测3组小鼠肝脏细胞活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)水平;试剂盒检测3组小鼠肝脏组织中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。结果小鼠肝脏再灌注6 h后,I/R+Fisetin组小鼠ALT、AST水平较I/R组下降[(108.85±25.73)IU·L^(-1) vs(213.45±49.51)IU·L^(-1);(194.72±45.32)IU·L^(-1) vs(422.55±99.30)IU·L^(-1)],差异有统计学意义(P<0.05)。I/R+Fisetin组小鼠肝脏组织内中性粒细胞浸润和肝脏坏死面积明显减少。I/R+Fisetin组肝脏组织细胞ROS水平(74158±17035)RFU·mgprot^(-1),低于I/R组(153096±35287)RFU·mgprot^(-1),差异有统计学意义(P<0.05)。I/R+Fisetin组小鼠肝脏组织MDA含量(6.287±1.444)nmol·mgprot^(-1),低于I/R组(12.781±3.086)nmol·mgprot^(-1),差异有统计学意义(P<0.05)。I/R+Fisetin组小鼠肝脏组织SOD和GSH-Px活性均较I/R组增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论Fisetin对I/R肝脏氧化应激性损伤的保护作用可能是通过诱导SOD、GSH-Px活性增加,降低ROS水平和MDA含量实现的。

热休克蛋白B1对大鼠心肌细胞氧化应激性损伤的作用

目的探讨线粒体在热休克蛋白 B1(HSPB1)抗氧化应激诱导的大鼠心肌细胞株 H9c2损伤中的作用。方法以培养的稳定高表达 HSPB1 H9c2(HSPB1细胞)和空载体转染的 H9c2(对照细胞)为模型,0～1000/μmol/L H_2O_2刺激2h,观察细胞形态学、线粒体内膜跨膜电位、内源性活性氧自由基(ROS)水平。结果 (1)HSPB1高表达显著减轻 H_2O_2诱导的细胞形态学的损伤变化;(2)HSPB1高表达显著减轻 H_2O_2诱导的线粒体跨膜电位丧失:0、75、150、300、500、1000μmol/LH_2O_2刺激后,HSPB1和对照细胞的跨膜电位分别为10.0±0.11和7.01±0.26,9.11±0.17和6.05±0.19,7.69±0.28和5.14±0.28,6.95±0.13和4.66±0.11,6.61±0.20和1.85±0.35,6.60±0.05和1.19±0.01,各组差异均有统计学意义(P<0.01);(3)HSPB1和对照细胞在0、75、150、300、500、1000μmol/L H_2O_2诱导后,内源性 ROS 水平分别为5527±248和5964±387、6719±336和8528±411、6469+160和7795±136、7042±12和7591±203、6148±208和6911±136、5468±546和6822±371,除0 μmol/L 外,其他各组差异均有统计学意义(P<0.05)。结论HSPB1高表达显著保护了大鼠心肌细胞因氧化应激诱导的形态学变化,这可能与稳定线粒体膜电位和抑制线粒体产生的 ROS 有关。

染料木素及大豆苷元调控线粒体介导的细胞凋亡减轻京尼平诱导的肝细胞损伤

目的:通过探究淡豆豉主要药效成分染料木素、大豆苷元对栀子致毒成分京尼平所致HepG2细胞损伤的保护作用,进一步揭示栀子与淡豆豉配伍减毒的机制。方法:采用250μmol/L京尼平建立HepG2细胞损伤模型,将不同浓度染料木素、大豆苷元(0.5~10)μmol/L与京尼平共孵育于HepG2细胞,测定细胞存活率及氧化应激水平(胞内锰-超氧化物歧化酶Mn-SOD、过氧化氢酶CAT活力,谷胱甘肽GSH含量及活性氧ROS水平);高内涵技术(high content screening,HCS)检测线粒体功能(线粒体膜电位mitochondrial membrane potential,MMP和细胞色素C水平)及细胞凋亡情况;Western Blot法检测线粒体凋亡通路蛋白Bcl-2、Bax、Bcl-xL、Bik、Caspase-3表达水平。结果:与正常对照组比较,模型对照组细胞存活率显著下降(P<0.01);Mn-SOD、CAT活力及GSH水平显著降低(P<0.01);ROS释放量显著增加(P<0.01);细胞色素C水平及细胞膜通透性显著增加、MMP显著降低、细胞核固缩、浓染及细胞数量显著下降(P<0.01);Bax、Bik、Caspase 3蛋白表达水平显著上调,Bcl-2、Bcl-xL蛋白表达显著下调(P<0.01)。与模型对照组相比,1、2.5、5、10μmol/L染料木素、大豆苷元可明显升高细胞存活率(P<0.05或P<0.01);2.5、5、10μmol/L染料木素、大豆苷元可明显升高细胞Mn-SOD活力及GSH含量,2.5、5、10μmol/L染料木素及5、10μmol/L大豆苷元可显著升高细胞CAT活力(P<0.05或P<0.01)。5μmol/L染料木素、5μmol/L大豆苷元、2.5μmol/L染料木素+2.5μmol/L大豆苷元可使ROS释放量显著减少,细胞色素C含量和细胞膜通透性下降,MMP上升,显著改善核固缩及核内染色质凝集等凋亡情况(P<0.05或P<0.01);且Bcl-2、Bcl-xL蛋白表达显著上调,Bax、Bik、Caspase-3蛋白表达显著下调(P<0.01)。结论:染料木素和大豆苷元可通过保护线粒体,减少线粒体介导的细胞凋亡显著改善京尼平诱发的肝细胞损伤,栀子与淡豆豉配伍减毒的机制与此相关。

Protective effects of Polygonatum sibiricum against CCl_(4)-induced acute liver injury in rats through oxidative stress and mitochondrial apoptotic pathways

In the present study,we aimed to investigate the hepatoprotective effect of Chinese herbal medicine Polygonatum sibiricum(PS).In this study,a rat acute liver injury(ALI)model was established by a single intraperitoneal injection of 50%CCl_(4) oil solution,and the rats were treated intragastrically with Polygonatum sibiricum aqueous extract(PSAE).The results showed that PSAE significantly decreased the serum levels of ALT,AST and ALP,increased the activities of glutathione(GSH)and superoxide dismutase(SOD),decreased malondialdehyde(MDA)activity in hepatic tissue,and decreased the reactive oxygen species(ROS)level in hepatocytes.The expressions of Nrf2,NQO-1,HO-1,Bcl-2,Bcl-x L mRNA,and HO-1 proteins were elevated,and the expression of p53 mRNA was decreased.In conclusion,PSAE exerted a powerful protective action against CCl_(4)-induced ALI in rats via effectively regulating the expressions of Nrf2-Keap1-ARE related genes and proteins,and inhibiting hepatocyte apoptosis.These outcomes provided evidence that PS had apparent hepatoprotective effect.